Laboratuarda araştırma SH Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG HA 3125/3-2, 3125/4-2 DFG HA) ve Eğitim ve Araştırma Federal Bakanlığı (Bmbf) Tıbbi Enfeksiyon Genomics (FKZ 0315828A) hibe tarafından desteklenmiştir.

Burada anlatılan hayvan enfeksiyon deneyleri kurallar ve omurgalı hayvanların kullanımı için düzenlemeler yerel ve uluslararası (Laboratuar Hayvan Bilimi Konfederasyonu (FELASA) Federasyonu örneğin, Avrupa Sağlık Hukuku) ile sıkı göre yapılmalıdır. Deneyleri yerel etik kurulu ve Kurumsal Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmış olması gerekir. S ile Tüm deneyler laboratuar veya hayvan enfeksiyonlarda pneumoniae Sınıf II Biyogüvenlik Kurulu yapılmaktadır. 1.. Biyoluminesen Pneumocococi ve Bulaşıcı Stok hazırlanması <ol><li> 80 ° C de (ağ / hac) maya ekstresi ve bakımı için,% 20 gliserol bir nihai konsantrasyon% 1 ile takviye Todd-Hewitt lapası içindeki stok kültürleri pnömokok hazırlayın </li><li> Kan agar plakası üzerine, derin dondurulmuş bir stok kültürünün pnömokok küçük bir miktar Plate ve% 5 CO2 içinde 37 ° C&#39;de 10 saat boyunca bakteri inkübe edin. TO, kan agar plaka genomuna luxABCDE gen kasetinin transpozon sokulması için, kanamisin (150 ug / ml) halinde uygun bir antibiyotik içerir. </li><li> 10 saat arasında bir süre için bir yeni kan agar plakası üzerine yeni bir koloni Alt yetiştirmek. </li><li> THY ortam% 10 (v / v) ısı (56 ° C &#39;de 30 dakika) etkisizleştirilmiş fetal sığır serumu (FBS) ile takviye edilmiş olan pnömokok ve OD 0,05-0,07 600 de başlangıç ​​kültürü inoküle. </li><li> Kültür OD 0,35-0,40 600 ulaşıncaya kadar 37 ° C&#39;de çalkalanarak ve% 5 CO2 olmadan pnömokok inkübe edin. Büyüme 3-4 saat arasında sürer. </li><li> 10 dakika boyunca 3750 x g ve% 0.5 FBS ile takviye edilmiş fosfat tamponlu tuzlu su pH 7.4 (PBS) içinde yeniden süspanse biyolüminesans pnömokok santrifüjleme ile hasat pnömokokkinin. </li><li> PBS/10% FBS içinde istenen konsantrasyona inokulum ayarlayın. Enfeksiyon dozu, kullanılan pnömokok gerilme ve mikrofon genetik arka plan bağlıdıre. S ile burun outbred CD-1 fareleri enfekte etmek için pneumoniae D39 Enfeksiyon dozu 90 Units hiyaluronidaz ile takviye edilmiş 20 ul bir süspansiyon içinde 1 x 10 7 CFU ayarlanmalıdır lux. Bu otolitik tetikler, çünkü sallamak veya vorteks pnömokokki etmeyin. </li><li> % 5 CO2 içinde 37 ° C&#39;de gece boyunca büyüme sonrası kan agar ve kolonilerin sayımı üzerine 10 kat seri dilüsyonları kaplama ile inokulum konsantrasyonunun kontrol edin. </li><li> Bir optik görüntüleme sistemi kullanılarak ışıldaması ölçülerek pnömokok inokulum biyo-kontrol edin. </li></ol> 2. Bioluminescent Pnömokok ile burun içi ve intraperitoneal Farelerin enfeksiyonu <ol><li> Akut pnömoni ve sepsis model için 7-10 hafta çağında kadın outbred fareler kullanın. Bu farelerin ağırlığı 20-30 g arasında olmalıdır. </li><li> Ketamin ve ksilazin intraperitonal enjeksiyonu ile farelerin anestezisi. Karışımı 1.0 mg hazırlanması100 ul steril% 0.9 ve 0.1 mg ketamin xylazine 20 g bir vücut ağırlığına sahip fareler için (w / v) sodyum klorit ilave edildi. Bu, ketamin / kg vücut ağırlığı ve 50 mg ksilazin boyunca 5 mg / kg vücut ağırlığı dozunda ile tutarlıdır. Doğrusu, anestezik enjeksiyondan önce fareler tartın. </li><li> Intraperitoneal boşluğuna karışımı enjekte edilir ve anestezik hareket ve hayvanlar uyuşturulur kadar geri kafese hayvanları yerleştirin. Farelerin Solunum çok yavaş ve düzenli olacak. Fareler bakteri süspansiyonu intranazal aşılama ve soluma, dolayısıyla aşı kaybı hapşırma ve neden olmaz, böylece tam olarak uyuşturulur olması gerekir. Bu onların kuyruk sonunda fareyi sıkarak değerlendirilebilir; tamamen uyuşturulur fare yanıt yoksun olacaktır. </li><li> Yavaşça uyuşturulur fareyi alıp dik burun (Şekil 1) ile parmak ve başparmak arasında fareyi tutun. </li><li> Uzun dar ipuçları (Jel Yükleyici ile bir pipet kullanınİpuçları) ve fare 26-29 burun (10 ul / burun) üzerine birden fazla küçük damlacıklar biyolüminesens pnömokok bırakın. Fare istemsiz bakteri nefes olacaktır. Dik fare 1-2 dakika tutun ve fare hapşırma veya inokülumu tutar mı gözlemleyin. </li><li> Gerçek zamanlı olarak izlemek için enfeksiyon, sırasıyla, D39 ve gerilme TIGR4, 1 x 10 7 ya da 7.5 x 10 7, pnömokokkinin bir enfeksiyon dozu ile burun içinden 7-10 haftalık CD-1 fareler, Infect. Dokuda herhangi bir emme olmaksızın sistemi için tespit limiti, yaklaşık 1 x 10 6-ışıldar bakteridir. </li><li> Enfekte fareler intraperitoneal (İP) değerlendirmek ve sepsis fare enfeksiyon modelinde, pnömokokkinin biyoimaj ölümcüllüğe. D39 suşu 100 ul 5 x 10 3 CFU kullanın ve gerginlik TIGR4 1 x 10 4. IP yolu kullanırken Fareler anestezi değildir. </li><li> PBS ile kontrol farelere inoküle. <img alt="Şekil 1" fo:content-width fo = &quot;5in:&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51174/51174fig1highres.jpg&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51174/51174fig1.jpg&quot; width = &quot;500px&quot; /&gt; Şekil 1. S ile CD-1 mice intranazal enfeksiyonu pneumoniae. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51174/51174fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li></ol> 3. Görüntüleme Sistemi kullanarak Akciğer ve Kan içine Pnömokok Yaygınlaştırma görselleştirme Bir in vivo görüntüleme sistemi kullanılarak gerçek zamanlı olarak dişi CD1 Dışarıda gelişen farelerin burun içi enfeksiyondan sonra, pnömokokkinin görüntü dağıtılması. <ol><li> Görüntüleme sistemi açın ve preconfigurated bilgisayarda bulunan görüntü analiz yazılımı başlatmak. </li><li> Görüntüleme sistemi otomatik olarak başlatılır ve CCD kamerası thermoelectrically aktif edilmeden önce 90 ° C&#39;ye soğutulur. </li><li> Ayarları ve gruplaması ölçülen farelerin sayısı bağlıdıraynı anda ve bioluminescent sinyal gücüne bağlıdır. Hayvanların ışıldaması izlemek için görünüm (FOV) alanında değişkendir ve büyütme göğüs gibi hayvanın tek bir fare veya parçalar ölçmek için beş fareler ölçmek için 22.5 sm bir FOV arasında değişir, ve 3.9 cm&#39;lik bir FOV ya da baş. </li><li> Rutin 1 dakika, binning orta derecede, ve 22.5 cm bir FOV (set D) bir pozlama süresi kullanın. Öncelikle, ışıldayan görüntüleme modu seçin ve ardından görüntüleme parametrelerini ayarlamak. </li><li> Sinyalin emisyonu bakteri suşu ve ikinci fare suşu ve fare pigment bağlıdır. Örneğin, C57BL / 6 fareleri kullanırken bu farelerde pnömoni gelişimini görüntüleme avantajlı olabilir ki, farelerin göğüs tıraş. </li><li> Görüntü önceden seçilmiş zaman aralıklarında fareler bulaşmış. En fazla 8-12 saat arasında bir zaman aralıklarında akut pnömoni modelinde, farelerin biyo-ölçün. Observi tarafından da enfekte farelerin refah izleyinOnların görünüm, davranış ve kilo kaybı belirlenmesini ng. </li><li> Önce bölme içindeki ölçümler için görüntüleme ekipmanının anestezi sisteminin narkotik odasındaki fareler anestezi. Izofluran ve oksijen karışımı teneffüs başlatın ve fareler yavaş yavaş ve düzenli olarak nefes kadar bekleyin. </li><li> Sistemin görüntüleme odasına anestezi hayvanları yerleştirin ve yatar pozisyonda fareler tutun. Bölmenin olacak sonra görüntü murin solunum yolu üstündeki CCD kamerası. </li><li> Anestezik solunmasını izin tüpleri içine kendi burun hayvanları yerleştirin. </li><li> Bir gaz boru vasıtasıyla görüntüleme haznesine Isoflurane giriş anesteziyi muhafaza etmek üzere bırakılır. </li><li> Odasının üstüne CCD kamerayı etkinleştirmek için ve görüntüleme yazılımı biyolüminesan optik görüntüleme, basın &quot;Al&#39;ı&quot; başlatmak için. Hemen kapalı bir odada, farelerin bir fotoğrafıdır ekranda belirir. Bir dakika beklemeden sonra<html> biyoışıldama verilerin bir kaplamasını ölçümü ve fotoğraf gösterilir. </li><li> Görüntü bindirmesi yazılım penceresinde göründükten sonra anestezi durdurmak ve geri kafesler içine fareler koydu. </li><li> Fareler kurtarma için izlenir. <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51174/51174fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51174/51174fig2.jpg" width="500px" /> Şekil 2,. Anestezi ve inkübasyon odası içinde anestezi inkübasyon odası ile. A) IVIS Spectrum görüntüleme sistemi. B) IVIS anestezi sistemi. C) Fare sırasıyla IVIS anestezi ve IVIS Spectrum sistemi kullanarak Bio-ışıldar pnömokok ile enfekte edilen farelerin izlenmesi onların burun anestezi teneffüs ile IVIS Spektrum Görüntüleme odasının içinde bulunan. D) Fare._blank &quot;&gt; büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın. </li></ol> 4. Bioluminescent S. ile Enfekte Farelerde ışıldama Kantitasyonu ve Değerlendirilmesi pneumoniae <ol><li> Görüntü analiz yazılımı kullanılarak toplam foton emisyonu (foton / saniye) miktarının farelerin ya da bir fare, seçilen bölgenin biyoışıldama yoğunluklarını belirler. </li><li> Bir grafik hazırlamak için bir Excel veri sayfasında sağlanan foton emisyon değerleri kullanın. Veri varyasyonu genelde gruplandırılmış fareler içinde yüksek olduğu için, farklı pnömokok suşları ile enfekte olmuş farelerde farkları göstermek için bir kutu bıyık grafik oluşturmak. </li><li> Farelerde başına fotonlar veya seçilen alanın parlaklık ortalamasının (fotonlar / sn / cm 2 / sr) gibi alternatif sonuçları sağlar. </li><li> Foton modunda ROI (bölge-faiz) ölçüm verileri nicel gelen farklı in vivo görüntüleme sistemlerinde farklı arasında mukayese edilebilirparlaklık birimlerde ölçümler otomatik olarak hesaba kamera ayarlarını (örneğin entegrasyon süresi, gruplaması, f / stop ve görüş alanı) almak beri ra ayarları. </li></ol>

<ol>
	<li>Niederman, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+adults+with+community-acquired+pneumonia.+Diagnosis,+assessment+of+severity,+antimicrobial+therapy,+and+prevention.">Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).</li><li>WHO, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+disease:+2004+update.">The global burden of disease: 2004 update.</a> World Health Organization. , (2008).</li><li>Bogaert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonisation+by+Streptococcus+pneumoniae+and+Staphylococcus+aureus+in+healthy+children.">Colonisation by Streptococcus pneumoniae and Staphylococcus aureus in healthy children.</a> Lancet. 363, 1871-1872 (2004).</li><li>Gamez, G., Hammerschmidt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combat+pneumococcal+infections:+adhesins+as+candidates+for+protein-based+vaccine+development.">Combat pneumococcal infections: adhesins as candidates for protein-based vaccine development.</a> Curr. Drug Targets. 13, 323-337 (2012).</li><li>Mook-Kanamori, B. B., Geldhoff, M., vander Poll, T., Dvan de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+pathophysiology+of+pneumococcal+meningitis.">Pathogenesis and pathophysiology of pneumococcal meningitis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 24, 557-591 (2011).</li><li>Musher, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+contagious+are+common+respiratory+tract+infections.">How contagious are common respiratory tract infections.</a> N. Engl. J. Med. 348, 1256-1266 (2003).</li><li>Brueggemann, A. B., Pai, R., Crook, D. W., Beall, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccine+escape+recombinants+emerge+after+pneumococcal+vaccination+in+the+United+States.">Vaccine escape recombinants emerge after pneumococcal vaccination in the United States.</a> PLoS Pathog. 3, (2007).</li><li>Munoz-Almagro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+invasive+pneumococcal+disease+caused+by+nonvaccine+serotypes+in+the+era+of+7-valent+conjugate+vaccine.">Emergence of invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes in the era of 7-valent conjugate vaccine.</a> Clin. Infect. Dis. 46, 174-182 (2008).</li><li>Whitney, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+conjugate+pneumococcal+vaccines.">Impact of conjugate pneumococcal vaccines.</a> Pediatr. Infect. Dis. J. 24, 729-730 (2005).</li><li>Whitney, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+in+invasive+pneumococcal+disease+after+the+introduction+of+protein-polysaccharide+conjugate+vaccine.">Decline in invasive pneumococcal disease after the introduction of protein-polysaccharide conjugate vaccine.</a> N. Engl. J. Med. 348, 1737-1746 (2003).</li><li>Lynch, J. P., Zhanel, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptococcus+pneumoniae:+epidemiology+and+risk+factors,+evolution+of+antimicrobial+resistance,+and+impact+of+vaccines.">Streptococcus pneumoniae: epidemiology and risk factors, evolution of antimicrobial resistance, and impact of vaccines.</a> Curr. Opin. Pulm. Med. 16, 217-225 (2010).</li><li>Singleton, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+pneumococcal+disease+caused+by+nonvaccine+serotypes+among+Alaska+native+children+with+high+levels+of+7-valent+pneumococcal+conjugate+vaccine+coverage.">Invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes among Alaska native children with high levels of 7-valent pneumococcal conjugate vaccine coverage.</a> JAMA. 297, 1784-1792 (2007).</li><li>Dockrell, D. H., Whyte, M. K., Mitchell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumococcal+pneumonia:+mechanisms+of+infection+and+resolution.">Pneumococcal pneumonia: mechanisms of infection and resolution.</a> Chest. 142, 482-491 (2012).</li><li>Lieberman, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+bacterial+evolution+within+multiple+patients+identifies+candidate+pathogenicity+genes.">Parallel bacterial evolution within multiple patients identifies candidate pathogenicity genes.</a> Nat. Genet. 43, 1275-1280 (2011).</li><li>Yang, J., Tauschek, M., Robins-Browne, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+bacterial+virulence+by+AraC-like+regulators+that+respond+to+chemical+signals.">Control of bacterial virulence by AraC-like regulators that respond to chemical signals.</a> Trends Microbiol. 19, 128-135 (2011).</li><li>Young, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+dynamics+of+Staphylococcus+aureus+during+progression+from+carriage+to+disease.">Evolutionary dynamics of Staphylococcus aureus during progression from carriage to disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 4550-4555 (2012).</li><li>Kadioglu, A., Weiser, J. N., Paton, J. C., Andrew, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+Streptococcus+pneumoniae+virulence+factors+in+host+respiratory+colonization+and+disease.">The role of Streptococcus pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease.</a> Nat. Rev. Microbiol. 6, 288-301 (2008).</li><li>Voss, S., Gamez, G., Hammerschmidt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+pneumococcal+microbial+surface+components+recognizing+adhesive+matrix+molecules+on+colonization.">Impact of pneumococcal microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules on colonization.</a> Mol. Oral Microbiol. 27, 246-256 (2012).</li><li>Koppe, U., Suttorp, N., Opitz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+Streptococcus+pneumoniae+by+the+innate+immune+system.">Recognition of Streptococcus pneumoniae by the innate immune system.</a> Cell. Microbiol. 14, 460-466 (2012).</li><li>Paterson, G. K., Mitchell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+and+the+pneumococcus.">Innate immunity and the pneumococcus.</a> Microbiology. 152, 285-293 (2006).</li><li>Gerber, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+Streptococcus+pneumoniae+meningitis+mimicking+several+features+of+human+disease.">A mouse model of Streptococcus pneumoniae meningitis mimicking several features of human disease.</a> Acta Neuropathol. 101, 499-508 (2001).</li><li>Gingles, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+genetic+resistance+in+invasive+pneumococcal+infection:+identification+and+study+of+susceptibility+and+resistance+in+inbred+mouse+strains.">Role of genetic resistance in invasive pneumococcal infection: identification and study of susceptibility and resistance in inbred mouse strains.</a> Infect. Immun. 69, 426-434 (2001).</li><li>Holmes, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pavA+gene+of+Streptococcus+pneumoniae+encodes+a+fibronectin-binding+protein+that+is+essential+for+virulence.">The pavA gene of Streptococcus pneumoniae encodes a fibronectin-binding protein that is essential for virulence.</a> Mol. Microbiol. 41, 1395-1408 (2001).</li><li>Koedel, U., Klein, M., Pfister, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+understandings+on+the+pathophysiology+of+bacterial+meningitis.">New understandings on the pathophysiology of bacterial meningitis.</a> Curr. Opin. Infect. Dis. 23, 217-223 (2010).</li><li>Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+pneumococcal+pneumonia.">Murine model of pneumococcal pneumonia.</a> Methods Mol. Biol. 602, 405-410 (2010).</li><li>Hartel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+glutamine+transporters+on+pneumococcal+fitness+under+infection-related+conditions.">Impact of glutamine transporters on pneumococcal fitness under infection-related conditions.</a> Infect. Immun. 79, 44-58 (2011).</li><li>Hermans, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+streptococcal+lipoprotein+rotamase+A+(SlrA)+is+a+functional+peptidyl-prolyl+isomerase+involved+in+pneumococcal+colonization.">The streptococcal lipoprotein rotamase A (SlrA) is a functional peptidyl-prolyl isomerase involved in pneumococcal colonization.</a> J. Biol. Chem. 281, 968-976 (2006).</li><li>Jensch, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PavB+is+a+surface-exposed+adhesin+of+Streptococcus+pneumoniae+contributing+to+nasopharyngeal+colonization+and+airways+infections.">PavB is a surface-exposed adhesin of Streptococcus pneumoniae contributing to nasopharyngeal colonization and airways infections.</a> Mol. Microbiol. 77, 22-43 (2010).</li><li>Kadioglu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumococcal+protein+PavA+is+important+for+nasopharyngeal+carriage+and+development+of+sepsis.">Pneumococcal protein PavA is important for nasopharyngeal carriage and development of sepsis.</a> Mol. Oral Microbiol. 25, 50-60 (2010).</li><li>Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis.">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J. Infect. Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li><li>Francis, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+pneumococcal+infections+in+the+lungs+of+live+mice+using+bioluminescent+Streptococcus+pneumoniae+transformed+with+a+novel+gram-positive+lux+transposon.">Visualizing pneumococcal infections in the lungs of live mice using bioluminescent Streptococcus pneumoniae transformed with a novel gram-positive lux transposon.</a> Infect. Immun. 69, 3350-3358 (2001).</li><li>Basavanna, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+methionine+acquisition+and+synthesis+on+Streptococcus+pneumoniae+growth+and+virulence.">The effects of methionine acquisition and synthesis on Streptococcus pneumoniae growth and virulence.</a> PLoS One. 8, (2013).</li><li>Hartel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+central+carbon+metabolism+of+Streptococcus+pneumoniae+by+isotopologue+profiling.">Characterization of central carbon metabolism of Streptococcus pneumoniae by isotopologue profiling.</a> J. Biol. Chem. 287, 4260-4274 (2012).</li><li>Hammerschmidt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+host+immune+regulator+factor+H+interacts+via+two+contact+sites+with+the+PspC+protein+of+Streptococcus+pneumoniae+and+mediates+adhesion+to+host+epithelial+cells.">The host immune regulator factor H interacts via two contact sites with the PspC protein of Streptococcus pneumoniae and mediates adhesion to host epithelial cells.</a> J. Immunol. 178, 5848-5858 (2007).</li><li>Voss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choline-binding+protein+PspC+of+Streptococcus+pneumoniae+interacts+with+the+C-terminal+heparin-binding+domain+of+vitronectin.">The choline-binding protein PspC of Streptococcus pneumoniae interacts with the C-terminal heparin-binding domain of vitronectin.</a> J. Biol. Chem. , (2013).</li><li>Cartwright, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumococcal+disease+in+western+Europe:+burden+of+disease,+antibiotic+resistance+and+management.">Pneumococcal disease in western Europe: burden of disease, antibiotic resistance and management.</a> Eur. J. Pediatr. 161, 188-195 (2002).</li><li>vander Linden, M., Al-Lahham, A., Nicklas, W., Reinert, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+pneumococcal+isolates+from+pets+and+laboratory+animals.">Molecular characterization of pneumococcal isolates from pets and laboratory animals.</a> PLoS One. 4, (2009).</li><li>Brehm, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+of+the+adenine+methylase+gene+of+the+Streptococcus+faecalis+plasmid+pAM+beta+1.">Sequence of the adenine methylase gene of the Streptococcus faecalis plasmid pAM beta 1.</a> Nucleic Acids Res. 15, 3177 (1987).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

<html> Hayvanlarda yapılan tüm deneyler, yerel yönetimler ve etik komisyonları tarafından onaylanmış olması gerekir. In vivo enfeksiyon deneylerde, enfekte hayvanların çeşitli ev sahibi niş bakteri yükü çeşitli zaman noktalarında Enfeksiyondan tespit edilmelidir. Bu deney koşulları altında, hayvanlara önce kan, nazofarenks, bronchoalvelar lavaj, ya da akciğer, dalak ve beyin gibi organlardan bakterilerin izolasyonu için feda edilmesi gerekir. Ev sahibi niş başına bakteri sayısını hes...

Virüsler veya bakterilerin neden olduğu solunum yolu enfeksiyonları, dünyadaki tüm ölüm yaklaşık üçte birini neden dünya çapında en sık görülen toplum kökenli veya klinik sorunlardan biri olmaya devam etmektedir. Anahtar bakteri türleri arasında Haemophilus influenzae ve Streptococcus pneumoniae 2 &#39;dir. Bununla birlikte, bu bakteri türleri normal olarak doğal solunum yolları florasının bilinen bileşenleridir. Böylece bakteri taşıma invazif hastalık ve bağışıklık durumu veya bireylerin yatkınlıklar bağlı olarak belirli risk aynı zamanda. Asemptomatik kolonizasyon invazif hastalık tetiklenir. Streptococcus pneumoniae toplum kökenli pnömoni (TKP) ve insanlarda bakteriyemi en yaygın nedenlerinden birinin önde gelen patojen olduğunu. Sağlıklı bireylerde S. pneumoniae (pnömokok) genellikle patojenik bakteriler ile karşı karşıya, üst solunum yolu, asemptomatik ve zararsız kolonizerleridirama aynı zamanda Haemophilus spp patojenler ile kalıcı floranın. veya Staphylococcus aureus ve insan bağışıklık savunma sisteminin ilk satırı. Taşıyıcılık oranları küçük çocuklarda yüksek olduğu (% 37) ve 3-5 (% 58) kalabalık gündüz bakım merkezleri içinde bile yüksek. Genç nüfus ve yaşlı, taşıyıcıları ve nazofarenks sekresyonları 6 aerosol iletimi yoluyla pnömokokkustan alma, konjuge pnömokok aşıları (yetişkinlerde, çocuklarda ve 23-valan polisakkarid PPSV23 içinde PCV10 veya PCV13) birini kullanarak yüksek risk gruplarına ve aşılama ait Amerika Birleşik Devletleri (ABD) ve birçok Avrupa ülkesinde 4 önerilir. PCVS çocuklarda en yaygın serotipini kapsarken PPSV23, yetişkinlerde böylece verimli invazif pnömokok hastalıkları (IPD) önlenmesinde ABD ve Avrupa&#39;da bakteremik pnömokok hastalıkları,% 90 ~ sorumludur serotiplerini kapsar. Sonuç olarak, IPD nedeniyle aşı türleri (VT) için gdrm vardıryüksek virulans potansiyeli ve antibiyotik direnç göstererek CED ama nonvaccine serotipleri 4,7-12 ortaya çıkmıştır. Rezervuar olarak nazofarenks zararlı lokal enfeksiyonlara başlatılması sinüs veya orta kulağına yaymak pnömokoklar için başlangıç ​​noktasıdır. Hayatı tehdit eden bir CAP 4,13 sonuçlanan bronşlara ve akciğere solunum yoluyla direkt olarak yayılan Daha da önemlisi, pnömokokkinin. Akciğer enfeksiyonları genellikle bu şekilde kana yaymak için patojen etkinleştirme ve IPD neden doku ve bariyer imha ile eşlik eder. TKP ve IPD&#39;nin olaylar bağışıklığı baskılanmış kişilerde yaş veya 4,13 en uç en yüksek bulunmaktadır. Yüksek zehirlilik ile bir patojene bir commensal gelen dönüşüm sorumlu koşullar tartışma sürüyor. Ancak, daha yüksek virülans ve antibiyotik direnç artışı ile birlikte konakçı duyarlılık ve evrimsel değişikliklerden uyum yanı sıra PNE üzerinde önemli bir etkiye sahip olduğu önerilmiştirumococcal enfeksiyonlar 14-16. Patojen epitel hücreleri mukozal yakın temas aracılık adezinlerin çokluğu ile donatılmıştır. Hava yolu mukus üstesinden sonra, konukçu hücrelere pnömokokkal yapışmayı hücresel reseptörler ile yüzeye maruz kalan adezinlerin doğrudan etkileşimler yoluyla ve molekül 4,17,18 köprü gibi hücre dışı matris bileşenleri veya serum proteinleri istismar tarafından kolaylaştırılır. Gibi çok yönlü patojenler pnömokoklar da ana bağışıklık savunma mekanizmaları kaçırma katılan faktörler ile donatılmıştır. Ayrıca, bu tür sırasıyla akciğer, kan ve beyin omurilik sıvısı (CSF), 5,17,19,20 gibi çeşitli konak çevrelerde uyum kapasitesine sahiptir. Patogenezi ve enflamatuar yanıtları ana bakteri faktörlerin etkisi pnömoni, bakteremi hayvan modellerinde incelenmiştir veya 21-25 menenjit. Bir insan patojen olmasına rağmen, bu modeller bizpnömokok doku tropizminin, virülans mekanizmaları veya pnömokok aşısı adayların korunabilirliğini deşifre ll-kurmuştur. Kendilenmiş fare suşlarının genetik arka pneumococci için duyarlılık belirler. CBA / Ca ve SJL farenin pnömokokal enfeksiyonlara 22 karşı daha duyarlı iken burun pnömokok ile enfekte olmuş BALB / c fareleri, dirençli olduğu bulunmuştur. Bu, insanlarda genetik arka plan ve ana savunma mekanizmalarına benzer enfeksiyonun sonucunu belirlemek, anlamına gelir. Bu nedenle, daha fazla çaba pnömokokal enfeksiyonlara karşı daha az duyarlı farelerin genomuna loci direnci çözmek için gereklidir. Bulgular in vivo virülans protokollere değişikliklere yol açmıştır. Bunun yerine sık sık geçmişte kullanılan doğal BALB / c farelerde, son derece duyarlı CD-1/MF1 outbred fare suşları bugünlerde sık sık kayıp fonksiyon-pnömokok virülansa veya uygunluk 26-28 faktörlerin etkisini incelemek için kullanılır. Dahası, kullanılabilirliğiBio-ışıldar pneumococci ve optik görüntüleme teknikleri enfeksiyonların gerçek zamanlı biyoluminesans bio sağlar. Pnömokok olarak optimize luxABCDE gen kaseti (plazmid pAUL-A Tn 4001 luxABCDE Km r) transposon mutagenez ile kromozomun tek bir entegrasyon alanı içine eklenir edilmiştir. Bioluminescent pnömokok hastalık oluşturma ya da spor faktörleri ve başka 26,28-31 bir anatomik yerinden itibaren translokasyona eksikliği olan pnömokok mutantların zayıflama değerlendirmek için kullanılmıştır. Burada bir murin pnömoni veya sepsis modelinde pnömokok enfeksiyonlarının bio için bir protokol sağlamaktır. Burun içine veya intraperitoneal olarak enfekte olan farelerde amplifikasyonu ve biyolüminesans pnömokokkinin yayma kolay bir şekilde farklı zaman noktalarında bir optik görüntüleme sistemi ile aynı hayvan kullanılarak zaman içinde izlenebilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="985">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Todd Hewitt broth</td>
			<td style="width:280px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:129px;">X936.1</td>
			<td style="width:280px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast extract</td>
			<td style="width:280px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:129px;">2363.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Blood agar plates</td>
			<td style="width:280px;">Oxoid, Wesel, Germany</td>
			<td style="width:129px;">PB5039A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kanamycin</td>
			<td style="width:280px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:129px;">T832.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Erythromycin</td>
			<td style="width:280px;">Sigma-Aldrich,Taufkirchen, Germany</td>
			<td style="width:129px;">E6376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:280px;">PAA Laboratories, Coelbe, Germany</td>
			<td style="width:129px;">A11-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">CD-1 mice, female</td>
			<td style="width:280px;">Charles River, Sulzfeld, Germany</td>
			<td style="width:129px;">CD1SIFE06W08W</td>
			<td>female CD-1 mice, six to eight weeks old</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamin 500mg, Curamed injection solution</td>
			<td>Schwabe-Curamed, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Rompun 2%, injection solution</td>
			<td>Bayer Animal Health, Monheim, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD Plastipak 1 ml syringes</td>
			<td>Becton Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td style="width:129px;">300015</td>
			<td>sterile Luer-Lok&#8482; syringes with needle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Gel Loader Tips</td>
			<td style="width:280px;">peqlab</td>
			<td style="width:129px;">81-13790</td>
			<td>M&#181;ltiFlex&#8482; Tips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Hyaluronidase</td>
			<td style="width:280px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:129px;">H3884-100mg</td>
			<td>Hyaluronidase Type IV-S from Bovine test</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Oxygen</td>
			<td style="width:280px;">Air Liquide, D&#252;sseldorf, Germany</td>
			<td style="width:129px;">M1001L50R2A001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Isofluoran</td>
			<td style="width:280px;">Baxter, Unterschlei&#223;heim, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">pGEM-T Easy</td>
			<td style="width:280px;">Promega, Mannheim, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Oligonucleotides </td>
			<td style="width:280px;">Eurofins MWG, Ebersberg, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Qiaprep Spin Midiprep Kit </td>
			<td style="width:280px;">Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td style="width:129px;">27104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:296px;">PCR DNA purification kit</td>
			<td style="width:280px;">Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td style="width:129px;">28106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:296px;">Equipment</td>
			<td style="width:280px;"> </td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">Living Image 4.1 software</td>
			<td style="width:280px;">Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">XGI-8 Gas Anesthesia System</td>
			<td style="width:280px;">Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">IVIS Spectrum Imaging System </td>
			<td style="width:280px;">Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Biophotometer</td>
			<td style="width:280px;">Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

following in real time the impact of pneumococcal virulence factors in an acute mouse pneumonia model using bioluminescent bacteria

Pnömoni geliştirilmesinde önemli sağlık sorunları ve sanayileşmiş ülkelerden biridir ve önemli morbidite ve mortalite ile ilişkilidir. Bu hastalık bilgisi, yoğun bakım üniteleri (YBÜ) kullanılabilirliği ve güçlü antimikrobiyal ajanların ve etkili aşıların kullanımı ilerlemelere rağmen, ölüm oranları 1 yüksek kalır. Streptococcus pneumoniae toplum kökenli pnömoni önde gelen patojen (CAP) &#39;dir ve insanlarda bakteremi en yaygın nedenlerinden biridir. Bu patojen yüzey-açık adhesinler ve pnömoni ve invasif pnömokok hastalığının (IPD) katkıda hastalık oluşturma faktörlerinin bir usul ve araçları ile donatılmıştır. Bakteriyel spor veya hastalık oluşturma faktörlerinin in vivo rolünün değerlendirilmesi S. çözmek için büyük önem taşımaktadır pneumoniae patojenik mekanizmalar. Pnömoni, bakteriyemi ve menenjit fare modelleri Değişik at pnömokok faktörlerin etkisini belirlemek için kullanılmaktadırenfeksiyon aşamaları ferent. Burada burun içi veya biyolüminesens bakteri ile karın içi enfeksiyonlar sonrasında farelerde gerçek-zamanlı pnömokok yayılmasında izlemek için bir protokol açıklar. Sonuçlar, bir görüntüleme sistemi ile beraberindeki analiz yazılımı kullanılarak görüntülenmiştir ve değerlendirilebilir alt solunum yolu ve kandaki çarpma ve pnömokok yayılmasını göstermektedir.

Metioninin edinimi ve alımı ev sahibi niş 32,33 olarak formunu korumak pnömokokkinin için merkezi öneme sahiptir. Metionin ABC taşıyıcı lipoprotein spd _ 0151 gen (TIGR4: sp_0149) tarafından D39 kodlanmış ve MetQ 32 atadı. Pnömokok daha metionin biyosentezi enzimleri (: -; TIGR4 Sp_0585 - Sp_0586, Mete ve metF Spd_0511 Spd_0510 D39) üretirler. Kimyasal olarak tanımlanmış bir ortam içinde metioninin eksikliği pnömokok ve benzeri, metionin 32,33</...

Watch this Scientific Journal Video about Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria at JoVE.com

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Streptococcus pneumoniae ciddi toplum kökenli pnömoni ve dünya çapında 2 milyondan fazla kişinin ölümünden sorumludur neden lider patojen olduğunu. Spor ya da virülans karıştığı bakteriyel faktörlerin etkisi biyolüminesens bakterileri kullanarak akut fare pnömoni veya bakteriyemi modelinde gerçek zamanlı olarak izlenebilir.

Biyoluminesen Bakteriler Kullanılarak Gerçek Zamanda Bir Akut Fare Pnömoni Modelinde Pnömokok virulans faktörlerinin etkisi aşağıdaki

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

following-real-time-impact-pneumococcal-virulence-factors-an-acute

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

14.9K Görüntüleme.  University of Greifswald.  Streptococcus pneumoniae ciddi toplum kökenli pnömoni ve dünya çapında 2 milyondan fazla kişinin ölümünden sorumludur neden lider patojen olduğunu. Spor ya da virülans karıştığı bakteriyel faktörlerin etkisi biyolüminesens bakterileri kullanarak akut fare pnömoni veya bakteriyemi modelinde gerçek zamanlı olarak izlenebilir. 

Video: Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of infection with influenza virus alone. Instead, most individuals are thought to have succumbed to a secondary bacterial infection, predominately caused by the bacterium Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). The synergistic relationship between infections caused by influenza virus and the pneumococcus has subsequently been observed during the 1957 Asian influenza virus pandemic, as well as during seasonal outbreaks of the virus (reviewed in 1, 2). Here, we describe a protocol used to investigate the mechanism(s) that may be involved in increased morbidity as a result of concurrent influenza A virus and S. pneumoniae infection. We have developed an infant murine model to reliably and reproducibly demonstrate the effects of influenza virus infection of mice colonised with S. pneumoniae. Using this protocol, we have provided the first insight into the kinetics of pneumococcal transmission between co-housed, neonatal mice using in vivo imaging 3.

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

A concurrent infection with influenza A virus is one of the factors implicated in the induction of invasive pneumococcal disease during asymptomatic Streptococcus pneumoniae carriage. Here we describe a mixed infection method using infant mice to investigate the synergism between these two respiratory pathogens.

Yılları arasında sinerjistik Araştırma Bioluminescent Görüntüleme kullanma Streptococcus pneumoniae Bebek Fare ve İnfluenza A Virüsü

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a prerequisite for pneumococcal infections such as pneumonia and otitis media. In vitro adherence assays can be used to study the attachment of pneumococci to epithelial cell monolayers and to investigate potential interventions, such as the use of probiotics, to inhibit pneumococcal&#160;colonization.&#160;The protocol described here is used to investigate the effects of the probiotic Streptococcus salivarius on the adherence of pneumococci to the human epithelial cell line CCL-23 (sometimes referred to as HEp-2 cells). The assay involves three main steps: 1) preparation of epithelial and bacterial cells, 2) addition of bacteria to epithelial cell monolayers, and 3) detection of adherent pneumococci by viable counts (serial dilution and plating) or quantitative real-time PCR (qPCR). This technique is relatively straightforward and does not require specialized equipment other than a tissue culture setup. The assay can be used to test other probiotic species and/or potential inhibitors of pneumococcal colonization and can be easily modified to address other scientific questions regarding pneumococcal adherence and invasion.

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

In vitro adherence assays can be used to study the attachment of Streptococcus pneumoniae to epithelial cell monolayers and to investigate potential interventions such as the use of probiotics for inhibiting pneumococcal colonization.

Bir kullanma Pnömokok Kolonizasyon üzerinde Probiyotiklerin Etkileri incelenmesi<em&gt; In Vitro</em&gt; Yapışma Deneyi

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal epidemiology, capsular serotyping can provide useful information for vaccine efficacy and impact studies.&#160;The Quellung reaction is the gold standard method for pneumococcal capsular serotyping. The method involves testing a pneumococcal cell suspension with pooled and specific antisera directed against the capsular polysaccharide. The antigen-antibody reactions are observed microscopically. The protocol has three main steps: 1) preparation of a bacterial cell suspension, 2) mixing of cells and antisera on a glass slide, and 3) reading the Quellung reaction using a microscope. The Quellung reaction is reasonably simple to perform and can be applied wherever a suitable microscope and antisera are available.

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

The Quellung reaction is the gold standard technique for serotyping Streptococcus pneumoniae. This technique utilizes a microscope and specific pneumococcal antisera and is commonly used in reference and research laboratories worldwide.

Of kapsül Serotipleme<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Kapsül şişme deneyi kullanarak Reaksiyon

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter lesions in inflammatory demyelinating disorders like multiple sclerosis (MS). In these disorders, mainly CD8+ T-cells of putative specificity for myelin- and oligodendrocyte-related antigens are found, so that neuronal apoptosis in grey matter lesions may be a collateral effect of these cells. Different types of animal models are established to study the underlying mechanisms of the mentioned pathophysiological processes. However, although they mimic some aspects of MS, it is impossible to dissect the exact mechanism and time course of &#8216;&#8216;collateral&#8217;&#8217; neuronal cell death. To address this course, here we show a protocol to study the mechanisms and time response of neuronal damage following an oligodendrocyte-directed CD8+ T cell attack. To target only the myelin sheath and the oligodendrocytes, in vitro activated oligodendrocyte-specific CD8+ T-cells are transferred into acutely isolated brain slices. After a defined incubation period, myelin and neuronal damage can be analysed in different regions of interest. Potential applications and limitations of this model will be discussed.

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

To address mechanisms of demyelination and neuronal apoptosis in cortical lesions of inflammatory demyelinating disorders, different animal models are used. We here describe an ex vivo approach by using oligodendrocyte-specific CD8+ T-cells on brain slices, resulting in oligodendroglial and neuronal death. Potential applications and limitations of the model are discussed.

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Akut Beyin Dilimleri bir Oligodendrosit yönelik T-Hücre Saldırı Modeli

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a signaling pathway. The method is based, on the one hand, on the inducible expression of a specific protein to initiate a signaling event at a defined and predetermined step in the selected signaling cascade. Concomitant expression, on the other hand, of the gene of interest then allows the investigator to evaluate if the activity of the expressed target protein is located upstream or downstream of the initiated signaling event, depending on the readout of the signaling pathway that is obtained. Here, the apoptotic cascade was selected as a defined signaling pathway to demonstrate protocol functionality. Pathogenic bacteria, such as Coxiella burnetii, translocate effector proteins that interfere with host cell death induction in the host cell to ensure bacterial survival in the cell and to promote their dissemination in the organism. The C. burnetii effector protein CaeB effectively inhibits host cell death after induction of apoptosis with UV-light or with staurosporine. To narrow down at which step CaeB interferes with the propagation of the apoptotic signal, selected proteins with well-characterized pro-apoptotic activity were expressed transiently in a doxycycline-inducible manner. If CaeB acts upstream of these proteins, apoptosis will proceed unhindered. If CaeB acts downstream, cell death will be inhibited. The test proteins selected were Bax, which acts at the level of the mitochondria, and caspase 3, which is the major executioner protease. CaeB interferes with cell death induced by Bax expression, but not by caspase 3 expression. CaeB, thus, interacts with the apoptotic cascade between these two proteins.

The method described here is used to induce the apoptotic signaling cascade at defined steps in order to dissect the activity of an anti-apoptotic bacterial effector protein. This method can also be used for inducible expression of pro-apoptotic or toxic proteins, or for dissecting interference with other signaling pathways.

Bir uyarılabilir İfade Sistemi uygulamak Hücre içi Sinyali ile Bakteriyel Virulans Faktörler Girişim Eğitim için

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human diseases have been reported to be associated with four species of bacteria: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii, and Aeromonas caviae. The model organism Caenorhabditis elegans is a bacterivore that provides an excellent infection model by which to study the bacterial pathogenesis of Aeromonas. Here, we introduce three different experiments to study Aeromonas infection using a C. elegans model, including survival, liquid toxicity, and muscle necrosis assays. The results of the three methods determining the virulence of Aeromonas were consistent. A. dhakensis was shown to be the most toxic among the 4 major Aeromonas species causing clinical infections. These methods are shown to be a convenient way to evaluate the toxicity among and within Aeromonas species and contribute to our understanding of the pathogenesis of Aeromonas infection.

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Here, we introduce three different experiments to study Aeromonas infection in C. elegans. Using these convenient methods, it is easy to evaluate the toxicity among and within Aeromonas species.

Virülans ve Aeromonas enfeksiyon Caenorhabditis elegans modelindeki patogenezinde değerlendirilmesi

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human ...

Imaging of In Situ Interferon Gamma Production in the Mouse Spleen following Listeria monocytogenes Infection

Cytokines are small proteins secreted by cells, mediating cell-cell communications that are crucial for effective immune responses. One characteristic of cytokines is their pleiotropism, as they are produced by and can affect a multitude of cell types. As such, it is important to understand not only which cells are producing cytokines, but also in which environment they do so, in order to define more specific therapeutics. Here, we describe a method to visualize cytokine production in situ following bacterial infection. This technique relies on imaging cytokine-producing cells in their native environment by confocal microscopy. To do so, tissue sections are stained for markers of multiple cell types together with a cytokine stain. Key to this method, cytokine secretion is blocked directly in vivo before harvesting the tissue of interest, allowing for detection of the cytokine that accumulated inside the producing cells. The advantages of this method are multiple. First, the microenvironment in which cytokines are produced is preserved, which could ultimately inform on the signals required for cytokine production and the cells affected by those cytokines. In addition, this method gives an indication of the location of the cytokine production in vivo, as it does not rely on artificial in vitro re-stimulation of the producing cells. However, it is not possible to simultaneously analyze cytokine downstream signaling in cells that receive the cytokine. Similarly, the cytokine signals observed correspond&#160;only to the time-window during which cytokine secretion was blocked. While we describe the visualization of the cytokine Interferon (IFN) gamma in the spleen following mouse infection by the intracellular bacteria Listeria monocytogenes, this method could potentially be adapted to the visualization of any cytokine in most organs.

Imaging of In Situ Interferon Gamma Production in the Mouse Spleen following Listeria monocytogenes Infection

Here, we describe a simple confocal imaging method to visualize the in situ localization of cells secreting the cytokine Interferon gamma in murine secondary lymphoid organs. This protocol can be extended for the visualization of other cytokines in diverse tissues.

Listeria monocytogenes enfeksiyonu sonrasında Mouse dalağında In situ Interferon gama üretiminin görüntülenmesi

Cytokines are small proteins secreted by cells, mediating cell-cell communications that are crucial for effective immune responses. One characteristic of ...

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of these products are naturally produced by the organisms, other products require genetic engineering of the organism to increase the yields of production. Avirulent strains of Escherichia coli have traditionally been the preferred bacterial species for producing biopharmaceuticals; however, some products are difficult for E. coli to produce. Thus, avirulent strains of other bacterial species could provide useful alternatives for production of some commercial products. Pseudomonas aeruginosa is a common and well-studied Gram-negative bacterium that could provide a suitable alternative to E. coli. However, P. aeruginosa is an opportunistic human pathogen. Here, we detail a procedure that can be used to generate nonpathogenic strains of P. aeruginosa through sequential genomic deletions using the pEX100T-NotI plasmid. The main advantage of this method is to produce a marker-free strain. This method may be used to generate highly attenuated P. aeruginosa strains for the production of commercial products, or to design strains for other specific uses. We also describe a simple and reproducible mouse model of bacterial systemic infection via intraperitoneal injection of validated test strains to test the attenuation of the genetically engineered strain in comparison to the FDA-approved BL21 strain of E. coli.

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Here, we describe a simple and reproducible protocol of mouse model of infection to evaluate the attenuation of the genetically modified strains of Pseudomonas aeruginosa in comparison to the United States Food and Drug Administration (FDA)-approved Escherichia coli for commercial applications.

Pseudomonas aeruginosa In-Frame Gen Silme Mutantlar Üretimi ve Enfeksiyon Basit Bir Fare Modelinde Virülans Zayıflama sıiçin Test

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of ...

Real-Time Quantification of Reactive Oxygen Species in Neutrophils Infected with Meningitic Escherichia Coli

Escherichia coli (E. coli) is the most common Gram-negative bacteria causing neonatal meningitis. The occurrence of bacteremia and bacterial penetration through the blood-brain barrier are indispensable steps for the development of E. coli meningitis. Reactive oxygen species (ROS) represent the major bactericidal mechanisms of neutrophils to destroy the invaded pathogens. In this protocol, the time-dependent intracellular ROS production in neutrophils infected with meningitic E. coli was quantified using fluorescent ROS probes detected by a real-time fluorescence microplate reader. This method may also be applied to the assessment of ROS production in mammalian cells during pathogen-host interactions.

Real-Time Quantification of Reactive Oxygen Species in Neutrophils Infected with Meningitic Escherichia Coli

Escherichia coli is the leading cause of neonatal Gram-negative bacterial meningitis. During the bacterial infection, reactive oxygen species produced by neutrophils play a major bactericidal role. Here we introduce a method to detect the reactive oxygen species in neutrophils in response to meningitis E. coli.

Meningitik Escherichia Coli ile Enfekte Olan Nötrofillerde Reaktif Oksijen Türlerinin Gerçek Zamanlı Nicelemesi

Escherichia coli (E. coli) is the most common Gram-negative bacteria causing neonatal meningitis. The occurrence of bacteremia and bacterial penetration ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a large proportion of the infecting bacteria form biofilms within airway sputum. Pa biofilms isolated from CF sputum have been shown to grow in small, dense aggregates of ~10-1,000 cells that are spatially organized and exhibit clinically relevant phenotypes such as antimicrobial tolerance. One of the biggest challenges to studying how Pa aggregates respond to the changing sputum environment is the lack of nutritionally relevant and robust systems that promote aggregate formation. Using a synthetic CF sputum medium (SCFM2), the life history of Pa aggregates can be observed using confocal laser scanning microscopy (CLSM) and image analysis at the resolution of a single cell. This in vitro system allows the observation of thousands of aggregates of varying size in real time, three dimensions, and at the micron scale. At the individual and population levels, having the ability to group aggregates by phenotype and position facilitates the observation of aggregates at different developmental stages and their response to changes in the microenvironment, such as antibiotic treatment, to be differentiated with precision.

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Synthetic cystic fibrosis sputum medium (SCFM2) can be utilized in combination with both confocal laser scanning microscopy and fluorescence-activated cell sorting to observe bacterial aggregates at high resolution. This paper details methods to assess aggregate populations during antimicrobial treatment as a platform for future studies.

Pseudomonas aeruginosa Enfeksiyon Modelinin Gerçek Zamanlı Değerlendirilmesi için Araçlar

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...