Yazarlar hayvan ameliyatları ile yardım için Kim Yates, Eileen Franklin ve Rebecca Tjepkema (Hayvan Bakım ve Veterinerlik Hizmetleri, Ottawa Üniversitesi) teşekkür etmek istiyorum. Lee-Hwa Tai bir Fonds de recherche sante Quebec Bursu tarafından desteklenmektedir. Rebecca Auer Lider&#39;in Fırsat Grant - Bu çalışma Kanada Kanser Topluluğu Araştırma Enstitüsü Yenilik Grant, Araştırma ve Geliştirme Erken Araştırmacı Ödülü Ontario Bakanlığı, Yenilik ve Kanadalı Vakfı faaliyet hibe tarafından desteklenmiştir.

1.. In vitro olarak tümör 4T1 hücreleri korumak <ol><li> Bitmiş DMEM içinde kültür 4T1 modifiye edilmemiş tümör hücreleri (DMEM,% 10 FBS, 1 x penisilin / streptomisin yok), 10 cm doku kültür plakaları içinde. 37 ° C,% 5 CO2 doku kültürü inkübatöründe inkübe edin. </li><li> Bölünmüş kültürleri 2-3 kez / hafta. Optimum yaşayabilirliği Hücreler% 80 izdiham aşmamalıdır korumak için. Kültürler&gt; 1 ay boyunca in vitro pasajlanmışlardır edilmiş ise bu daha erken pasajlanır hücrelerden daha malignite ve metastatik potansiyel azalır gibi in vivo primer tümörleri kurulması için hücreler kullanmayın. </li></ol> 2. Enjeksiyon için Hasat 4T1 Tümör Hücreleri <ol><li> Bir Pasteur pipeti kullanılarak doku kültürü plakasının aspire kültür ortamı. </li><li> 2 ml EDTA ihtiva eden steril PBS 1x 10 ml ilave edilir. PBS çözeltisi, 37 ° C&#39;de, 5-7 dakika boyunca% 5 CO2 doku kültürü inkübatöründe de bir plaka içerisinde inkübe olsun. </li><li> Plaka, r Hasat PBS çözümçözeltisi ile plaka 2-3x insing, 15 ml konik tüp aktarın. </li><li> Bir tezgah üstü santrifüj içinde 4 ° C&#39;de 500 x g&#39;de 5 dakika için, hücreler santrifüj. </li><li> Süpernatan aspire ve serumsuz DMEM hücre pelletini. </li><li> Bir hücre sayacı kullanarak hücre konsantrasyonunu belirleyin. </li><li> Buz üzerinde enjeksiyon yeri ve hücreler için 6 cells/500 ul (1x10 5 s/50 ul (1x10 için serum içermeyen ortam ile hücrelerin seyreltin. </li></ol> 3. 4T1 hücreleri ile tümör enjekte Mice Gerçekleştirilen tüm hayvan çalışmaları kadavradan enjeksiyonları ya da tümör implantlar alan tüm hayvanlar için Ottawa önerilerin Üniversitesi Hayvan Bakımı Veteriner Hizmetleri, kurumsal kurallarına uygun idi. <ol><li> Buprenorfin (0.05 mg / kg), ağrı yönetimi için ameliyattan önce 1 saat ile deri altından fareler davranın. </li><li> Tetikleyebilecek ve enjeksiyon süresi boyunca% 2.5 izofluran ile anestezi altında fare korumaktion. Refleks tepki algılamak için fare Kapkaççı çimdik. Hiçbiri tespit edilirse, etkili anestezi seviyeleri ulaşılır. Yağlayıcı madde bundan sonra steril göz kornea kurumasını önlemek için uygulanır. </li><li> 30 G yükleyin ½ hücreleri süspansiyon tam 50 ul &quot;Ultra-ince&quot; Şırınga içinde. , Tüm hava kabarcıkları hava kabarcıklarını çıkarmak için şırınganın yan dokunarak şırınga sütundan çıkarılır emin olun. </li><li> Ventral yüzü (anestezi altında) fare yerleştirin. </li><li> Bir alkol çubukla kullanarak enjeksiyon bölgesini temizleyin ve 4 meme yağ yastığı içine yatay ve doğrudan iğne tanıtmak, yavaş yavaş şırınga hacminin dağıtımı. </li><li> Olası sızıntıyı temizlemek için pamuklu çubuk kullanın. </li><li> Fareler anestezi kurtarmak için izin verin. </li><li> Buprenorfin ağrı yönetimi uygulanabilir sc 2 gün süre ile her 8 saat için (0.05 mg / kg) koruyun. </li></ol> 4. BALB / c Fare Rulman 4T1 Tümör Perioperatif Tedavi Yönetme <ol><li> 13 gün sonrası tümör hücre enjeksiyonu de, harici bir kumpas kullanılarak primer tümör ölçmek. Çap pergeli ile en büyük uzunlamasına çapı (boy) ve en büyük enine çapı (en) ölçün. Modifiye edilmiş elipsoid formülü tümör hacmi hesaplamak için kullanılır (tümör hacmi = 1/2 (uzunluk, genişlik 2) </li><li> 13 gün sonrası tümör hücre enjeksiyonu anda, primer tümör yaklaşık 1 cm 3 ölçmek gerekir. Bu tümör ölçümü elde edildiğinde, perioperatif tedavi reaktifi hazırlayın. </li><li> Onkolitiktir virüs bir perioperatif dönemde yönetebileceğiniz bir yenilikçi tedavi edilir. Enjeksiyondan önce buz üzerinde 1x steril PBS ve yerine onkolitik virüs (1x10 9 PFU / 1 ml) hazırlayın. </li><li> Güvenli ve yer fareintravenöz kuyruk ven enjeksiyon için süzgeç içine. </li><li> Yavaşça lateral kuyruk damarları görselleştirmek için ılık musluk suyu fare kuyruğu ısı. </li><li> 27 G Yük ½ &quot;İnsülin Şırınga&quot; in Onkolitik virüs tedavisi tam 100 ul. Tüm hava kabarcıkları şırınga sütununda kaldırılır emin olun. </li><li> Lateral kuyruk damarlar birine 1x10 8 PFU/100 ul / fare fare ile enjekte edilir. İğne uygun bir yan damar içine takılırsa şırınga karartıcı zaman, hiçbir direnç keçe olmalıdır. </li></ol> 5. Primer tümör ve karın sol nefrektomi komple rezeksiyonu <ol><li> 14 gün sonrası tümör hücre enjeksiyonu anda, Ottawa Hayvan Bakım ve Veteriner Servisi Üniversitesi onaylanan protokollerde aşağıdaki rutin perioperatif başlatmak. Buprenorfin (0.05 mg / kg), ağrı yönetimi için ameliyattan önce 1 saat ile deri altından fareler davranın. Neden ve ameliyat sırasında% 2.5 izofluran kullanılarak anestezi korumak. Under koşulları ve steril cerrahi aletler kullanarak sterilize, cerrahi alan traş ve kotarılmış. Hayvanlar ameliyat öncesi deri altı sıvıları ve göz yağ tatbik edilmektedir. </li><li> Yavaşça ve tamamen meme yağ pedi birincil 4T1 tümör kaldırmak için, küçük bir kesik (1-2 cm uzunluğunda) olun. </li><li> 02-03 Eylül mm zımba ile kesi kapatın. </li><li> Fare ventral orta hat boyunca deri ve deri altı tabakası ile kesim tarafından karın Açığa. </li><li> Fare peritonunu erişmek için linea alba (3-4 cm) bir kesi olun. </li><li> Tarafına örten bağırsakları hareket ettirerek karın sol iç tarafını ortaya. Bağırsaklar tuzlu ıslatılmış steril gazlı bez ile nemli tutulur emin olun. </li><li> Cerrahi forseps bir künt çifti kullanarak, yavaşça sol böbrek kavramak. </li><li> Bir döngü içine bağlı bir 3-0 balmumu kaplı örgülü ipek sütür kullanılarak, sol böbrek hilusu Arter ve 3 cerrahi knot ile sabitleyin. Surgi ile sol böbreğical makas. </li><li> Yeterli hemostaz elde emin olmak için dikkatlice dikiş kravat inceleyin. </li><li> 9 mm zımba kullanarak 5-0 örgülü emilebilir, ardından zımba cilt katmanı kullanarak sürekli bir döngü dikiş ile cilt altı katmanı kapatın. 5,2-5,10 10 dk / hayvan gerektiren gereken adımlar. </li><li> Buprenorfin ağrı yönetimi uygulanabilir sc 2 gün süre ile her 8 saat için (0.05 mg / kg) koruyun. </li></ol> 6. Euthanizing Fareler ve İşleme ve Akciğer Tümör Yükü Kantitasyonu <ol><li> 4T1 tümör enjeksiyonundan sonrası 28 günde, Ottawa Üniversitesi Hayvan Bakım ve Veterinerlik Hizmetleri protokole göre fareler euthanize. </li><li> % 70 etanol ile fareyi aşağı Sprey. </li><li> Sadece göğüs kafesinin altında bir makas ile ilk kesi olun. </li><li> Fare göğüs boşluğunun ventral orta hat boyunca deri ve deri altı tabakasının içinden keserek göğüs Açığa. </li><li> NE her tarafı yukarı deri ve doku ile yanal kesiler yapmakfare ck. </li><li> Akciğerler üstünde ve altında bağ dokusu kırpma sırasında hafifçe akciğer tutarak akciğerleri parçalara ayır. </li><li> Hammaddesi,% 10 tamponlu formalin içine yerleştirmek, sonra kalıntı kan temizlemek için soğuk PBS akciğer ekstre edilmiştir. </li><li> Tümör metastaz değerlendirilmesi için her akciğeri fotoğraf. Tümör yükü ölçümü için akciğerlere tartılır. </li></ol>

<ol>
	<li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+postoperative+metastatic+disease+by+inhibiting+surgery-induced+dysfunction+in+natural+killer+cells.">Preventing postoperative metastatic disease by inhibiting surgery-induced dysfunction in natural killer cells.</a> Cancer Res. 73, 97-107 (2013).</li><li>Seth, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+Stress+Promotes+the+Development+of+Cancer+Metastases+by+a+Coagulation-Dependent+Mechanism+Involving+Natural+Killer+Cells+in+a+Murine+Model.">Surgical Stress Promotes the Development of Cancer Metastases by a Coagulation-Dependent Mechanism Involving Natural Killer Cells in a Murine Model.</a> Ann. Surg. , (2012).</li><li>Shakhar, G., Ben-Eliyahu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+prophylactic+measures+against+postoperative+immunosuppression:+could+they+reduce+recurrence+rates+in+oncological+patients.">Potential prophylactic measures against postoperative immunosuppression: could they reduce recurrence rates in oncological patients.</a> Ann. Surg. Oncol. 10, 972-992 (2003).</li><li>Shiromizu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+laparotomy+and+laparoscopy+on+the+establishment+of+lung+metastasis+in+a+murine+model.">Effect of laparotomy and laparoscopy on the establishment of lung metastasis in a murine model.</a> Surgery. 128, 799-805 (2000).</li><li>Tsuchiya, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+surgical+stress+promotes+tumor+metastasis.">Increased surgical stress promotes tumor metastasis.</a> Surgery. 133, 547-555 (2003).</li><li>Lanier, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NK+cell+recognition.">NK cell recognition.</a> Annu. Rev. Immunol. 23, 225-274 (2005).</li><li>Espi, A., Arenas, J., Garcia-Granero, E., Marti, E., Lledo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+curative+surgery+on+natural+killer+cell+activity+in+colorectal+cancer.">Relationship of curative surgery on natural killer cell activity in colorectal cancer.</a> Dis. Colon Rectum. 39, 429-434 (1996).</li><li>Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+surgical+stress+impairment+of+human+perioperative+natural+killer+cell+cytotoxicity.">Mechanism of surgical stress impairment of human perioperative natural killer cell cytotoxicity.</a> Arch. Surg. 126, 338-342 (1991).</li><li>Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+stress+impairs+natural+killer+cell+programming+of+tumor+for+lysis+in+patients+with+sarcomas+and+other+solid+tumors.">Surgical stress impairs natural killer cell programming of tumor for lysis in patients with sarcomas and other solid tumors.</a> Cancer. 70, 2192-2202 (1992).</li><li>Ben-Eliyahu, S., Page, G. G., Yirmiya, R., Shakhar, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+stress+and+surgical+interventions+promote+tumor+development+by+suppressing+natural+killer+cell+activity.">Evidence that stress and surgical interventions promote tumor development by suppressing natural killer cell activity.</a> Int. J. Cancer. 80, 880-888 (1999).</li><li>Page, G. G., Blakely, W. P., Ben-Eliyahu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+postoperative+pain+is+a+mediator+of+the+tumor-promoting+effects+of+surgery+in+rats.">Evidence that postoperative pain is a mediator of the tumor-promoting effects of surgery in rats.</a> Pain. 90, 191-199 (2001).</li><li>Glasner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+survival+rates+in+two+models+of+spontaneous+postoperative+metastasis+in+mice+by+combined+administration+of+a+beta-adrenergic+antagonist+and+a+cyclooxygenase-2+inhibitor.">Improving survival rates in two models of spontaneous postoperative metastasis in mice by combined administration of a beta-adrenergic antagonist and a cyclooxygenase-2 inhibitor.</a> J. Immunol. 184, 2449-2457 (2010).</li><li>Benish, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+use+of+beta-blockers+and+COX-2+inhibitors+may+improve+immune+competence+and+reduce+the+risk+of+tumor+metastasis.">Perioperative use of beta-blockers and COX-2 inhibitors may improve immune competence and reduce the risk of tumor metastasis.</a> Ann. Surg. Oncol. 15, 2042-2052 (2008).</li><li>Goldfarb, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+postoperative+immune+status+and+resistance+to+cancer+metastasis:+a+combined+perioperative+approach+of+immunostimulation+and+prevention+of+excessive+surgical+stress+responses.">Improving postoperative immune status and resistance to cancer metastasis: a combined perioperative approach of immunostimulation and prevention of excessive surgical stress responses.</a> Ann. Surg. 253, 798-810 (2011).</li><li>Tartter, P. I., Steinberg, B., Barron, D. M., Martinelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prognostic+significance+of+natural+killer+cytotoxicity+in+patients+with+colorectal+cancer.">The prognostic significance of natural killer cytotoxicity in patients with colorectal cancer.</a> Arch. Surg. 122, 1264-1268 (1987).</li><li>Fujisawa, T., Yamaguchi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+tumor+killing+activity+as+a+prognostic+factor+in+primary+resected+nonsmall+cell+carcinoma+of+the+lung.">Autologous tumor killing activity as a prognostic factor in primary resected nonsmall cell carcinoma of the lung.</a> Cancer. 79, 474-481 (1997).</li><li>Guillot, B., Bessis, D., Dereure, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucocutaneous+side+effects+of+antineoplastic+chemotherapy.">Mucocutaneous side effects of antineoplastic chemotherapy.</a> Expert Opin. Drug Saf. 3, 579-587 (2004).</li><li>Deehan, D. J., Heys, S. D., Ashby, J., Eremin, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-2+(IL-2)+augments+host+cellular+immune+reactivity+in+the+perioperative+period+in+patients+with+malignant+disease.">Interleukin-2 (IL-2) augments host cellular immune reactivity in the perioperative period in patients with malignant disease.</a> Eur. J. Surg. Oncol. 21, 16-22 (1995).</li><li>Houvenaeghel, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+feasibility+of+perioperative+treatment+with+interferon-alpha+2a+in+advanced+cancers.">Tolerance and feasibility of perioperative treatment with interferon-alpha 2a in advanced cancers.</a> Int. Surg. 82, 165-169 (1997).</li><li>Klatte, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+immunomodulation+with+interleukin-2+in+patients+with+renal+cell+carcinoma:+results+of+a+controlled+phase+II+trial.">Perioperative immunomodulation with interleukin-2 in patients with renal cell carcinoma: results of a controlled phase II trial.</a> Br. J. Cancer. 95, 1167-1173 (2006).</li><li>Oosterling, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+IFN-alpha+to+avoid+surgically+induced+immune+suppression+in+colorectal+cancer+patients.">Perioperative IFN-alpha to avoid surgically induced immune suppression in colorectal cancer patients.</a> Histol. Histopathol. 21, 753-760 (2006).</li><li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+influenza+vaccination+reduces+post-operative+metastatic+disease+by+reversing+surgery-induced+dysfunction+in+natural+killer+cells.">Perioperative influenza vaccination reduces post-operative metastatic disease by reversing surgery-induced dysfunction in natural killer cells.</a> Clin Cancer Res. , (2013).</li></ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkarlarını beyan.

Cerrahi rezeksiyon lokalize katı malignitesi olan hastalar için tedavinin dayanak noktası. Hatta tam rezeksiyon ile, birçok hasta metastatik nüks geliştirmek ve sonuçta hastalık nedeniyle ölmektedir. Ameliyattan hemen sonra ameliyat sonrası dönem NK hücresi bastırma ile büyük ölçüde modüle kanser metastaz oluşumu, için ideal bir ortam sağlar. Buna rağmen, büyük ölçüde göz ardı edilir bir terapötik pencere kalır. Postoperatif metastazı önlemeyi amaçlayan hiçbir standart perioperatif anti-kanser tedavileri bulunmamaktadır. Mevcut sorun, böylece mikrometastatik hastalığın kurulmasını engelleyen perioperatif dönemde NK hücrelerini aktive edecek, güvenli ve umut verici tedavilerin tespit etmektir. Bu tedaviler titizlikle preklinik hayvan modellerinde güvenlik ve etkinlik için karakterize ve sonra düşünceli tasarlanmış klinik çalışmalarda tercüme edilmelidir. Birincil oranıcerrahi stres bir fare tümör modeli geliştirme nale cerrahi sonrası bağışıklık bastırma ve metastatik yayılım mekanizmalarını keşfetmek ve primer tümörü çıkarmak için ameliyat geçiren, kanser hastalarında gelecekteki kullanım için potansiyeli olan yenilikçi immünoterapiler değerlendirmektir. Bu amacı gerçekleştirmek için, cerrahi stres ile birleştiğinde bir 4T1 kemirgen meme kanseri modeli geliştirilmiştir. 4T1 hücre çizgisi bir kemirgen &quot;meme kanseri&quot; olsa da, bu hücre hattı kullanmak için neden bize gerçekçi kanseri modelinde cerrahi stresin etkilerini değerlendirmek olanak spontan metastaz uyarlık olduğunu. Bu bağlamda, malignite gerçek köken metastatik potansiyelini ve tümör biyolojisi daha az önemlidir. Bizim modelin ikinci önemli bileşeni yakın insan kanser ameliyatı andıran bir hayvan cerrahi işlemin gelişmedir. 1 cm 3 ulaşır sonra bu hayvan cerrahi stres modelinde, birincil 4T1 meme tümör eksize edilir. Çünküİnsan kanser hastalarında cerrahi önemli bir bağışıklık bastırma, &quot;ameliyat stres&quot; tedavi gruplarında açık bir karın nefrektomi içeren ek gerçekleştirilir. Insanlarda daha geleneksel tümör rezeksiyonu ile karşılaştırır gibi, tam bir sol nefrektomi invaziv kolorektal kanseri, yumurtalık kanseri, böbrek kanseri, pankreas kanseri, akciğer ve yemek borusu cerrahisi dahil olmak üzere katı maligniteler için cerrahi tedavi çok sayıda türleri, çok karşılaştırılabilir kanseri. Buna ek olarak, biz laparotomi + nefrektomi nedeniyle perioperatif meydana derin fizyolojik değişiklikler, yeterince en sağlam malinitelerin invaziv cerrahi sonrası ortaya ezici fizyolojik değişiklikleri üretir iddia ediyorum. Aşırı cerrahi stres ve ölümlülük, anestezi süresi ve cerrahi yol ve ameliyat sırasında vücut ısısını korumak olabilir perioperatif faktörleri kontrol etmek için tam olarak tanımlanır. Tüm bu parametreler tam bir yürütülürd insan kanser hastalarında rutin perioperatif ayna bizim cerrahi protokolde tanımlanmış. Perioperatif tedavi zamanlaması perioperatif kurtarma modeli için ek bir önemli bileşenidir. 4T1 tümör taşıyan farelere önce influenza aşısının 3 rejimleri ile muamele edilmiştir: Neoadjuvant (ameliyattan önce 5 gün verilir), ameliyat sırasında (cerrahi aynı günde verilir) ve cerrahi gününde verilen perioperatif + dozlu (bunu takiben de 2 Ek doz) 5 gün arayla verilmedi. Dikkate değer, aşı tedavisi 3 modları anlamlı akciğer metastazları, 22 azalmıştır. Ancak, influenza aşısı en etkili bir şekilde tek bir doz, düşük metastaz olarak perioperatif olarak verilir. Topluca, bu deneyler metastatik sürecine müdahale için dar bir terapötik pencere olarak hemen perioperatif dönemin önemini vurgulamak. Böyle oncoly gibi yenilikçi immunoterapilerin perioperatiftik virüs aşıları ve münhasıran araştırma grubu ile sınırlı kalmıştır. Bu yeni onkolitik ORF ve ineklerdeki çiçek hastalığı virüsleri, perioperatif uygulanması hayvan modellerinde 1 &#39;de ameliyat sonrası NK hücresi bastırma ters ilk defa burada gösterilmektedir. Daha da önemlisi, bağışıklık fonksiyonunun bu kurtarma metastaz postoperatif oluşumunda bir azalma ile ilişkilidir. Insan çalışmalarında, ameliyat sonrası kanser cerrahi hastalarının NK hücre toksisitesini azalmıştı ve perioperatif OV belirgin kanser hastalarında 1 NK hücre aktivitesini artırır. Ticari olarak temin edilebilen profilaktik aşılar kullanılarak, perioperatif influenza aşısı yönetim önemli ölçüde tümör metastazı azalır ve klinik öncesi modellerde tümör NK hücre sitotoksisitesini iyileştirdiğini göstermektedir. İnsan çalışmalarda, influenza aşısı önemli Sağlıklı insan donörlerden ve kanser hastalarında cerrahi 22&#39;de NK hücre aktivitesini geliştirdi. Birçok yaklaşımlar Canc azaltmak için kullanılırKemoterapi ve radyasyon, ancak bu tedavilerin de dahil olmak üzere er nüks genellikle (neoadjuvan) önce veya (adjuvan) cerrahi sonrası aylar hafta uygulanır. Bu alanda yapılan araştırmalar erken postoperatif dönemi uzun vadeli tümör nüks oranlarının belirlenmesinde kritik olduğunu göstermektedir. Bu nedenle, bu kritik dönemde immunoterapilerin şeklinde klinik müdahaleler önemli uzun vadeli faydalar olabilir. Spontan akciğer metastazı ve cerrahi stres bir fare modeli kullanılarak çalışmalarımız yeni tedaviler keşfetmek ve kanser cerrahisi hastalarında perioperatif immünosupresyonu önlemek ve böylece de kanser nüks oranlarını azaltmak için kendi potansiyelini belirlemek için eşsiz bir fırsat sunmaktadır.

Cerrahi solid tümörlerin küratif kanser tedavisinde önemli bir bileşeni olduğunu, ama tam rezeksiyon rağmen, birçok hasta metastatik nüks geliştirmek ve sonuçta hastalık nedeniyle ölmektedir. Giderek, ameliyat sonrası süre, kan pıhtılaşması, büyüme faktörleri serbest bırakılması, ve bağışıklık kaybı da dahil olmak üzere cerrahi fizyolojik stres tepkisi, bir sonucu olarak, metastaz gelişimi için önemli bir zaman olarak kabul edilmektedir. Bizim grup 1,2 ve diğerleri 3-5 ameliyattan hemen sonraki süre metastaz oluşumu için benzersiz bir zaman duyarlı olduğunu göstermiştir. Cerrahi prometastatic etkilerinden sorumlu en önemli mekanizmalardan biri, doğal katil (NK) hücreler, 1-3 ameliyat sonrası işlev bozukluğudur. NK hücreleri, tümör büyümesi ve metastaz 6 kontrolünde dahil olan doğuştan gelen bağışıklık sistemi sitotoksik lenfositlerdir. Ameliyat sonrası NK hücre fonksiyon bozukluğu i belgelenmiştirn insan hasta 1,7-9 ve hayvan modellerinde hem de 1,10,11. Insan çalışmalarında, perioperatif dönemde düşük NK aktivitesi kanser nüksü ve mortalite 15,16 daha yüksek bir oranı ile ilişkili iken ameliyat sonrası NK hücre bastırma, spontan ve implante metastaz 1,11-14 hayvan modellerinde artmış metastaz ile ilişkilidir. Buna rağmen, özellikle hemen kanser cerrahisi sonrası meydana prometastatic değişiklikleri ele hiçbir kanser tedavileri şu anda var. Perioperatif süresi metastatik sürecine müdahale için hangi bir terapötik fırsat penceresi temsil eder. Bu tür sitotoksik kemoterapi gibi geleneksel kanser tedavileri, büyük cerrahi sonrası iyileşme 17 hastalara tatbik edilmesi için çok toksik olarak kabul edilir olsa da, bağışıklık tedavileri perioperatif uygulama için ideal adaylardır. Rekombinant IL-2 ve IFN-Î ³ perioperatif kullanımı i araştırılmıştırn Erken evre ameliyat sonrası NK hücre baskılanmasını önlemek ve progresyonsuz sağkalım 18-21 geliştirmek için kendi potansiyelini gösteren klinik çalışmalar. Ne yazık ki, daha da geliştirilmesi büyük bir ameliyat 17 ile birleştirilir, bu non-spesifik sitokin tedavinin tolere tarafından engellenmiştir. Virüsler de NK hücrelerinin güçlü özel olmayan aktivatörleridir. Araştırmamız daha önce bu yeni anti-kanser onkolitik virüs (OV) ve bu influenza aşısı gibi aşılar viral replikasyon yapmayan olarak taklit eden virüsler, ameliyat öncesi uygulama ameliyat kaynaklı NK hücre faaliyetinin bozukluğu, inhibe etmek ve metastatik hastalık 1,22 azaltmak olduğunu göstermiştir. Bu yazıda anlatılan cerrahi modeli ameliyattan sonra tümör hücrelerinin yayılmasını ve büyüme ile ilgili mekanizmaların anlayışımızı kolaylaştırdı ve bize perioperatif dönemde uygulanabilir yeni hedefli tedaviler keşfetmek için izin verdi. Bu amacı gerçekleştirmek için, bir hayvangelişen cerrahi stres ve spontan metastaz tomar modeli. Kendiliğinden akciğerler, özellikle birden fazla uzak siteler için birinci meme bezinden metastaz edebiliyoruz - modeli fare meme karsinoma tümörü (4T1 BALB / c) &#39;nin kullanımını sağlar. 0. günde, göğüs kanseri hücreleri, fare meme yağ tabanına implante edilir. 14. gün, tümör implantasyonu olarak, primer meme tümör tam bir rezeksiyon bütün hayvanlarda gerçekleştirilir. Hayvanların bir alt karın nefrektomi şeklinde ek cerrahi stres alır. 28. günde, akciğer tümörü nodüller ameliyatla vurguladı ve karşılaştırıldığında hiçbir cerrahi kontrol fareler izole ve ölçülür. Kanser ve cerrahi bu hayvan modelinde, kanser metastazları üzerine cerrahinin etkileri incelenmiştir ediliyor ve viral bazlı bağışıklık uyarıcılar kopyalayan ve replikasyon gibi yenilikçi imünoterapiler, perioperatif yönetim etkinliği ilk kez test edilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="647">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:111px;">Corning Cell-Gro</td>
			<td style="width:153px;">10-013-CV</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Inactivated Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:111px;">HyClone</td>
			<td style="width:153px;">SH30396.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1X sterile Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:111px;">Corning cell gro</td>
			<td style="width:153px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:111px;">Chiron, Guelph</td>
			<td style="width:153px;">RXN309968</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isofluorane</td>
			<td style="width:111px;">Baxter Corp</td>
			<td>1001936040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1/2 ultra-fine syringe</td>
			<td style="width:111px;">Terumo</td>
			<td>30 Gauge, SS05M3009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9mm staples</td>
			<td style="width:111px;">Braintree</td>
			<td style="width:153px;">ACS BX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">5-0 braided absorbable suture</td>
			<td style="width:111px;">Covidien</td>
			<td style="width:153px;">UL-202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">3-0 wax braided silk suture</td>
			<td style="width:111px;">Covidien</td>
			<td style="width:153px;">S-194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:111px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">SF100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4T1 tumor cells</td>
			<td style="width:111px;">ATCC</td>
			<td style="width:153px;">CRL-2539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">BALB/c</td>
			<td style="width:111px;">Charles Rivers Labs</td>
			<td style="width:153px;">Strain Code:028</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies

Cerrahi rezeksiyon çok kanserli hastalar için önemli bir tedavi, ancak ameliyat bağışıklık sistemi bozukluğu neden olur ve bu, hayvan modellerinde ve kanserli hastalarda metastatik hastalık gelişimi ile bağlantılı olmuştur. Grubumuzun ve diğerlerinden preklinik çalışma doğuştan gelen bağışıklık fonksiyonu, postoperatif dönemde özellikle NK hücreleri derin bastırılmasını gösterdi ve bu ameliyat sonrasında metastaz gelişmiş gelişiminde önemli bir rol oynar. Nispeten az sayıda hayvan çalışmaları ve klinik çalışmalar karakterize ve kanser cerrahisi zararlı etkilerini tersine odaklanmıştır. Kendiliğinden metastaz yapan tümörlerin ve cerrahi stres sıkı bir hayvan modelini kullanarak, akciğer metastaz gelişimi, kanser cerrahi iyileştirme gösterilmiştir. Bu modelde, 4T1 göğüs kanseri hücreleri, fare meme yağ tabanına implante edilir. 14. gün, tümör implantasyonu olarak, primer meme tümör tam bir rezeksiyon performe olduğuTüm hayvanlarda d. Hayvanların bir alt karın nefrektomi şeklinde ek cerrahi stres alır. 28. günde, akciğer tümör nodülleri nicelendirilir. Immünoterapi hemen ameliyat öncesi verildiğinde, ameliyat sonrası metastaz gelişimini önlemiş bağışıklık hücrelerinin derin bir aktivasyon tespit edildi. 4T1 göğüs tümör cerrahisi modeli tümör metastaz abdominal cerrahi stres etkilerinin simülasyonu için sağlar, diğer tümör türleri uygulanabilirliği test edilmesi gerekmektedir. Mevcut sorun preklinik fare modellerinde güvenli ve umut verici immünoterapiler belirlemek ve metastatik hastalığın tekrarını önlemek için kanser cerrahisi hastalara verilecek uygulanabilir perioperatif tedavilerin içine çevirmek için.

Akciğer metastaz dramatik geliştirilmesi ile sonuçlanan bir cerrahi stres tekrarlanabilir fare modeli geliştirilmiştir. Gün 28 görevde 4T1 tümör aşılama (ve 14 gün tümör rezeksiyonu + / yayınlamak - abdominal nefrektomi), akciğerler hasat ve metastaz için görüntülenmiştir. Cerrahi açıkça akciğer fotoğrafların (Şekil 1A), akciğer nodüllerin sayımı (Şekil 1 B) ve akciğer ağırlığı (Şekil 1 C) ile gösterildiği gibi, tedavi edilmemiş fareler ile karşılaştırıldığında akciğer metastaz miktarını artırır. Onkolitiktir virüs ve inaktif influenza aşısı kopyalayan preoperatif uygulamasının önemli ölçüde kanser cerrahisi prometastatic etkilerini (Şekil 1A-C) kurtarır. NK hücreleri, metastaz sonrası aşı tedavisi önlenmesinde bir aracı rolü olmadığını belirlemek için, NK hücreleri, farmasötik olarak tümör metastazı modelinde anti-asiolo-GM-1 ile tüketildi. NK yokluğundaHücreler, biz perioperatif immünoterapilerin terapötik etkisinin bir ortadan kaldırma (Şekil 2A ve 2B) görülmektedir. Bu veriler cerrahi stres modelinde tümör metastaz giderme temel olarak NK hücrelerinin onkolitik virüs grip aşısı aktivasyon ve takip eden NK aracılı tümör lizis aracılık olduğunu göstermektedir. Daha fazla onkolitik virüs grip aşısı perioperatif uygulanmasından sonra NK hücresi fonksiyonunu karakterize etmek için, ex vivo NK hücre öldürme değerlendirildi. Kısaca, bir araya getirilmiş ve kriteri DX5 + NK hücrelerinin splenositlerinden cerrahi stresli ve kontrol fare izole edilmiştir. Bunlar, bir gama sayacı ile yüzer krom Yayım ölçülmesi ile takip oranları, hedef farklı efektör, krom etiketli YAC-1 hedef hücrelere birlikte 4 saat boyunca kültüre edilmiştir. Onkolitik virüs ve iltihaplanma perioperatif uygulanmasından sonra NK öldürmenin önemli bir iyileşme yanı sıra NK hücre sitotoksisite belirgin bir cerrahi kaynaklı kusuruenza aşı, tek başına cerrahi ile karşılaştırıldığında (Şekil 2C ve 2D) gözlenmiştir. Birlikte ele alındığında bu sonuçlar, ameliyat NK hücresi bastırma başarılı bir şekilde tedavi edilebilir ve metastatik hastalık yeni immünostimülatör tedaviler ile azalttığını göstermektedir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1.jpg" /> Şekil 1. Akciğer metastazı temsil akciğerlerin (A) fotoğraflar, (B), akciğer tümörü sayım ile belirtilen tedavi gruplarının 28. günde 4T1 akciğer tümör metastazı. Değerlendirilmesi cerrahi kaynaklı geliştirme karşı perioperatif tedavi olarak yeni anti-kanser onkolitik virüs ve influenza aşısı nodüller ve (C) akciğer ağırlıkları. Veriler, bitiş ile 3 benzer bir deneyi temsil etmektedir, n = 5-10/group (*, p = 0.01; **, p &lt;0.0001;<html> ns) anlamlı değil. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2.jpg" /> Şekil 2. Cerrahi stres NK hücrelerini bozarak akciğer tümör metastazı arttırır. (A, B) akciğer tümör metastazı miktarının yeni cerrahi ameliyat ile tedavi fareler vurgulamıştır. (C, D) cerrahi olarak saflaştırılmış DX5 + NK hücrelerinin yeteneği stresli ve tümör hücrelerini öldürmek için muamele edilmemiş kontrol eder. T oranları: Belirtilen E için üç kopya halindeki gözlerin krom salınım - (SD + /) veriler ortalama yüzdesi olarak gösterildi. . Veriler 3 &#39;e benzer deneyler n = 4-5/group (, **, p &lt;0.005; ns, anlamlı değil *, p = 0.01) arasında temsilcisi/ Www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies at JoVE.c

A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Cerrahi stres bir fare tümör modeli postoperatif immün baskılanması metastatik hastalık teşvik nasıl keşfetmek ve ımmunostımulator perioperatif tedavilerin değerlendirilmesi için kullanılır.

Ameliyat sonrası Immunosupressjon&#39;un ve Mekanizmaları keşfedin ve Roman Perioperatif İmmünoterapiler Değerlendirmesinde Cerrahi Stres Fare Tümör Modeli

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to ...

a-mouse-tumor-model-surgical-stress-to-explore-mechanisms

Research

JoVE Journal

Medicine

29.8K Görüntüleme.  Ottawa Hospital Research Institute.  Cerrahi stres bir fare tümör modeli postoperatif immün baskılanması metastatik hastalık teşvik nasıl keşfetmek ve ımmunostımulator perioperatif tedavilerin değerlendirilmesi için kullanılır. 

Video: A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined by current drug efficacy tests and the efficacy on patients. Thus, novel and reliable methods for evaluating drug efficacy are warranted in pre-clinical phase. In vitro culture of tumor tissues, including cell lines, has substantial phenotypic, genetic, and epigenetic alterations of cancer cells caused by artificial environment of cell culture, which may not reflect the biology of original tumors in situ. Xenograft models with the immunodeficient mice also have limitations, i.e., the lack of immune system and interspecies genetic and epigenetic discrepancies in microenvironment. Here, we demonstrate a novel method using the surgical specimens of malignant glioma as undissociated tumor blocks to evaluate treatment effects. To validate this method, data with the current first-line chemotherapeutic agent, temozolomide (TMZ), are described.


We used the freshly-removed surgical specimen of malignant glioma for our experiments. We performed intratumoral injection of TMZ or other drug candidates, followed by incubation and analysis on surgical specimens. Here, we sought to establish a tumor tissue explant method as a platform to determine the efficacy of novel anti-cancer therapies so that we may be able to overcome, at least, some of the current limitations and fill the existing gap between the current experimental data and the efficacy on an actual patient's tumor. This method may have the potential to accelerate identifying novel chemotherapeutic agents for solid cancer treatment.

Here, we established a method for drug efficacy testing with surgical specimens of brain tumors, termed &#x201C;tumor explant method&#x201D;. With this method, we can evaluate drug efficacy without breaking the microenvironment of solid tumors. To validate reliability of this method, we describe representative data with our glioma specimen treated with the current first-line chemotherapeutic agent, temozolomide.

Cerrahi Örneklerinin tümör eksplantlarındaki Roman Anti-Kanser İlaç Geliştirme Yöntemi


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

Tıp

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

Normotermik Kardiyak Arrest ve Kardiyopulmoner Resusitasyon: İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our understanding of the mechanisms underlying parkinsonian symptoms, since it recapitulates the changes in basal ganglia circuitry and pharmacology observed in parkinsonian patients1-4. However, the precise cellular and molecular changes occurring at cortico-striatal synapses of the output pathways within the striatum, which is the major input region of the basal ganglia remain elusive, and this is believed to be site where pathological abnormalities underlying parkinsonian symptoms arise3,5.
In PD, understanding the mechanisms underlying changes in basal ganglia circuitry following degeneration of the nigro-striatal pathway has been greatly advanced by the development of bacterial artificial chromosome (BAC) mice over-expressing green fluorescent proteins driven by promoters specific for the two striatal output pathways (direct pathway: eGFP-D1; indirect pathway: eGFP-D2 and eGFP-A2a)8, allowing them to be studied in isolation. For example, recent studies have suggested that there are pathological changes in synaptic plasticity in parkinsonian mice9,10. However, these studies utilised juvenile mice and acute models of parkinsonism. It is unclear whether the changes described in adult rats with stable 6-OHDA lesions also occur in these models. Other groups have attempted to generate a stable unilaterally-lesioned 6-OHDA adult mouse model of PD by lesioning the medial forebrain bundle (MFB), unfortunately, the mortality rate in this study was extremely high, with only 14% surviving the surgery for 21 days or longer11. More recent studies have generated intra-nigral lesions with both a low mortality rate &gt;80% loss of dopaminergic neurons, however expression of L-DOPA induced dyskinesia11,12,13,14 was variable in these studies. Another well established mouse model of PD is the MPTP-lesioned mouse15. Whilst this model has proven useful in the assessment of potential neuroprotective agents16, it is less suitable for understanding mechanisms underlying symptoms of PD, as this model often fails to induce motor deficits, and shows a wide variability in the extent of lesion17, 18.
Here we have developed a stable unilateral 6-OHDA-lesioned mouse model of PD by direct administration of 6-OHDA into the MFB, which consistently causes &gt;95% loss of striatal dopamine (as measured by HPLC), as well as producing the behavioural imbalances observed in the well characterised unilateral 6-OHDA-lesioned rat model of PD. This newly developed mouse model of PD will prove a valuable tool in understanding the mechanisms underlying generation of parkinsonian symptoms.

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson&#039;s Disease

A protocol for performing unilateral 6-OHDA lesions of the medial forebrain bundle in mice is described. This method has a low mortality rate (13.3 %) with 89% of the surviving animals showing &#62;95% loss of striatal dopamine and 90.63&#177;-4.02 % ipsiversive rotational bias towards the side of the lesion.

Parkinson Hastalığının tek taraflı lezyonlanmıştır 6-OHDA Mouse Model Geliştirme

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several techniques, including infusion of exogenous bacterial toxin (endotoxemia) or bacteria (bacteremia), as well as surgical perforation of the cecum by cecal ligation and puncture (CLP)1-3. CLP allows bacteria spillage and fecal contamination of the peritoneal cavity, mimicking the human clinical disease of perforated appendicitis or diverticulitis. The severity of sepsis, as reflected by the eventual mortality rates, can be controlled surgically by varying the size of the needle used for cecal puncture2. In animals, CLP induces similar, biphasic hemodynamic cardiovascular, metabolic, and immunological responses as observed during the clinical course of human sepsis3. Thus, the CLP model is considered as one of the most clinically relevant models for experimental sepsis1-3.
Various animal models have been used to elucidate the intricate mechanisms underlying the pathogenesis of experimental sepsis. The lethal consequence of sepsis is attributable partly to an excessive accumulation of early cytokines (such as TNF, IL-1 and IFN-&gamma;)4-6 and late proinflammatory mediators (e.g., HMGB1)7. Compared with early proinflammatory cytokines, late-acting mediators have a wider therapeutic window for clinical applications. For instance, delayed administration of HMGB1-neutralizing antibodies beginning 24 hours after CLP, still rescued mice from lethality8,9, establishing HMGB1 as a late mediator of lethal sepsis. The discovery of HMGB1 as a late-acting mediator has initiated a new field of investigation for the development of sepsis therapies using Traditional Chinese Herbal Medicine. In this paper, we describe a procedure of CLP-induced sepsis, and its usage in screening herbal medicine for HMGB1-targeting therapies.

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection, and can be simulated by a surgical technique termed cecal ligation and puncture (CLP). Here we describe a method to use CLP-induced animal model to screen medicinal herbs for therapeutic agents.

Roman Bitkisel Tedaviler Değerlendirmek için Sepsis Hayvan Modeli kullanımı

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and acquired diseases. Apart from congenital or inherited abnormalities with the requirement for long-term expression of the delivered gene, several non-inherited perinatal conditions, where short-term gene expression or pharmacological intervention is sufficient to achieve therapeutic effects, are considered as potential future indications for this kind of approach. Candidate diseases for the application of short-term prenatal therapy could be the transient neonatal deficiency of surfactant protein B causing neonatal respiratory distress syndrome1,2 or hyperoxic injuries of the neonatal lung3. Candidate diseases for permanent therapeutic correction are Cystic Fibrosis (CF)4, genetic variants of surfactant deficiencies5 and &alpha;1-antitrypsin deficiency6.
Generally, an important advantage of prenatal gene therapy is the ability to start therapeutic intervention early in development, at or even prior to clinical manifestations in the patient, thus preventing irreparable damage to the individual. In addition, fetal organs have an increased cell proliferation rate as compared to adult organs, which could allow a more efficient gene or stem cell transfer into the fetus. Furthermore, in utero gene delivery is performed when the individual's immune system is not completely mature. Therefore, transplantation of heterologous cells or supplementation of a non-functional or absent protein with a correct version should not cause immune sensitization to the cell, vector or transgene product, which has recently been proven to be the case with both cellular and genetic therapies7.
In the present study, we investigated the potential to directly target the fetal trachea in a mouse model. This procedure is in use in larger animal models such as rabbits and sheep8, and even in a clinical setting9, but has to date not been performed before in a mouse model. When studying the potential of fetal gene therapy for genetic diseases such as CF, the mouse model is very useful as a first proof-of-concept because of the wide availability of different transgenic mouse strains, the well documented embryogenesis and fetal development, less stringent ethical regulations, short gestation and the large litter size.
Different access routes have been described to target the fetal rodent lung, including intra-amniotic injection10-12, (ultrasound-guided) intrapulmonary injection13,14 and intravenous administration into the yolk sac vessels15,16 or umbilical vein17. Our novel surgical procedure enables researchers to inject the agent of choice directly into the fetal mouse trachea which allows for a more efficient delivery to the airways than existing techniques18.

We developed a novel surgical approach for intratracheal administration of bioactive agents into the mouse fetus. The delivery route is more efficient in targeting the fetal mouse lungs than the commonly used intra-amniotic injection. This procedure has to date not been described in a mouse model.

Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

Yeni Bir Yüksek çözünürlüklü<em&gt; In vivo</emTümör Büyüme ve Tedavi için İntrakranial Yapıların Dinamik Tepki Eğitim&gt; Görüntüleme Tekniği

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

Meme Kanseri Bir Roman Transgenik Fare Modeli: Adenovirüs-Kretasedekine ile epiteli Hedefleme ile Metastatik Meme Kanseri Başlatma

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer metastasis. Indeed, the number of CTCs correlates with tumor size. Here, a detailed description is provided of a methodology for isolation and propagation of CTCs from a syngeneic mouse model of hepatocellular carcinoma (HCC) which allows for downstream analysis of potentially important molecular mechanisms of solid organ tumor metastasis. This method is efficient and reproducible. It is a non-invasive technique and, therefore, has potential to replace the invasive biopsy of tissues from humans which may be associated with complications. Therefore, the method discussed here allows for the isolation and propagation of CTCs from whole blood samples such that they can be examined and characterized. This has potential for future adaptation for clinical applications such as diagnosis, and personalized targeted therapy.

Circulating tumor cells (CTCs) have been shown to play an important role in tumor metastasis. Here, a method for the isolation and propagation of CTCs from the whole blood of a syngeneic mouse tumor model of hepatocellular carcinoma (HCC) metastasis is described.

Fare Kanser Modeli Tümör Hücreleri Sirkülasyon İzolasyonu ve Yayılım

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the exact pathophysiology remains unknown. In order to unravel the pathophysiology a murine model of AVF-failure was developed in which the configuration of the anastomosis resembles the preferred situation in the clinical setting. A model was described in which an AVF is created by connecting the venous end of the branch of the external jugular vein to the side of the common carotid artery using interrupted sutures. At a histological level, we observed progressive stenotic intimal lesions in the venous outflow tract that is also seen in failed human AVFs. Although this procedure can be technically challenging due to the small dimensions of the animal, we were able to achieve a surgical success rate of 97% after sufficient training. The key advantage of a murine model is the availability of transgenic animals. In view of the different proposed mechanisms that are responsible for AVF failure, disabling genes that might play a role in vascular remodeling can help us to unravel the complex pathophysiology of AVF failure.

Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

Arteriovenöz Fistül Yetersizliğinin A Novel Fare Modeli: Detay Cerrahi Prosedür

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an otherwise dynamic system, and successive phases are easily overlooked or misinterpreted. Live-cell imaging and time-lapse microscopy, in which living cells can be followed for hours or even days in a more or less continuous fashion, are therefore very informative. The protocol described here allows for the investigation of the fate of chemotherapeutic nanoparticles after the delivery of doxorubicin (dox) in living cells. Dox is an intercalating agent that must be released from its nanocarrier to become biologically active. In spite of its clinical registration for more than two decades, its uptake, breakdown, and drug release are still not fully understood. This article explores the hypothesis that lipid-based nanoparticles are taken up by the tumor cells and are slowly degraded. Released dox is then translocated to the nucleus. To prevent fixation artifacts, live-cell imaging and time-lapse microscopy, described in this experimental procedure, can be applied.

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Live-cell imaging is a powerful tool to visualize dynamic processes. The examination of fixed cells provides only static pictures, which can lead to misinterpretation and confusion about the process. This work presents a method to study uptake, drug release, and intracellular localization of liposomal nanoparticles in living cells.

Vitro Lipid tabanlı nano tanecikleri tarafından canlı hücre Chemotherapeutics keşfetmek için Imaging teslim kullanma

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...