Deneysel ve klinik kanıtlar karaciğer iskemi reperfüzyonu kanser hücreleri dolaşan ve mikrometastatik hastalığın büyümesini metastatik foci oluşumunu artırabilir göstermektedir. Bu tekrarlanabilir murine modeli hem metastazların kurulması hem de karaciğer içinde önceden var olan tümörün büyümesinin ilgili çalışmasına izin verir. Karaciğer cerrahisi, kanama, ve septik şok tüm karaciğer iskemi reperfüzyonu ile ilişkili ve metastatik hastalığın büyümesini etkileyebilir.
Bu teknikler, iskemi reperfüzyonunun klinik ortamda tümör büyümesi üzerindeki zararlı etkisini daha iyi teşhis etmek ve önlemek amacıyla bu fenomenin incelenmesine olanak sağlamaktadır. Anestezi sekiz ila 12 haftalık erkek C57 siyah 6 fare de parmak sıkışma yanıt eksikliği doğruladıktan sonra, bir povione-iyot scrub ile maruz karın duvarı cilt dezenfekte ve cildi kaldırmak için dişli forseps kullanın. Cerrahi bir neşter kullanarak, deride bir orta hat kesi yapmak ve karın içeriğini ortaya çıkarmak için üç santimetrelik orta hat kesi oluşturulmasını kolaylaştırmak için karın kası ve periton kaldırın.
Kesi her iki tarafında ve xiphoid süreci altında bir hemostat yerleştirdikten sonra, çekin ve karın uzatmak için kuyruk aşağı bant ve ayırmak ve pankreas yağ dokusundan dalak ortaya çıkarmak için altı inç steril pamuk ucu aplikatör kullanın. Sonra, herhangi bir hücre kümeleri ayrıştırmak ve 28-gauge iğne ile donatılmış bir 0.5 mililitrelik insülin şırınga içine hücreleri yüklemek ilgi kanser hücresi süspansiyon girdap. Yavaş ve dikkatli bir şekilde dalak ucuna hücrelerin 100 mikrolitre enjekte, enjeksiyon sırasında dalak stabilize etmek için nazik basınç eklerken periton boşluğuna olası tümör dökülmesini absorbe etmek için iğne delinmesi yan bitişik bir pamuk ucu yerleştirerek.
Başarılı bir enjeksiyon karaciğer renginde bir değişiklik ile belirgin olacaktır. Tüm hücreler teslim edildiğinde, pbs batırılmış steril gazlı bez bir parça diseksiyon alanı üzerinde yerleştirin ve kanser hücrelerinin sistem içinde dolaşmak için izin vermek için 15 dakika boyunca bir ısıtma yastığı üzerine fare yerleştirin. Bir iskemi ve reperfüzyon yaralanması neden olmak için, portal ven maruz bırakmak ve bir diseksiyon mikroskop altında fare yerleştirmek için yavaşça boşluktan bağırsak taşımak için iki nemlendirilmiş pamuk ipuçları kullanın.
Ortanca ve sol lateral karaciğer loblarını diyaframa karşı kaldırın. Kenetleme için yeterli alan oluşturmak için medyan lob ve sağ lateral lob arasında küçük bir nemli pamuklu bez yerleştirin ve dikkatle portal triad arkasında bir damar dilatör forseps geçmek ve damar dilator forseps kullanarak, arkasında geçmek ve portal triad kaldırmak için 4-0 polipropilen sütür 10 santimetrelik bir parça kullanın. Portal triad'daki tüm yapıları tıkamak için sol ve ortanca karaciğer loblarına mikrovasküler bir kıskaç yerleştirmek için kilitli bir mikro-serrifine kelepçe aplikatör kullanın.
Beyazlatma gözlendiğinde, 4-0 polipropilen sütür ve küçük pamuk lu bezi çıkarın ve dikkatle karın boşluğuna bağırsak dönmek. PBS-ıslatılmış gazlı bez yeni bir parça ile karın duvarı kapağı ve buharlaştırıcı kaybı en aza indirmek için plastik şal ile gazlı bez kapağı. Daha sonra fareyi 60 dakika boyunca ısıtma yastığına geri yerleştirin.
Iskemik aralık boyunca, sağ medial soluk beyazlatma görselleştirmek, sol medial, ve lateral loblar iskemi yaralanma kanıtonaylamak için. Yaralanma süresinin sonunda kelepçeyi çıkarın. Bir splenektomi yapmak için, dikkatle pürüzsüz forseps ile dalak kaldırın ve aşırı kanamayı önlemek için dalak kan damarları cauterize için bir el kateter cihazı kullanın.
Dalağını çıkarmak için küretkar kısımdaki damarları aktarın ve kas ve deri kesilerini çift katmanlı dikiş deseni yle kapatmak için hemen 4-0 polipropilen sütür kullanın. Daha sonra fareyi tam iyileşme ye ne kadar izleyerek ev kafesine geri yerleştirin. Cerrahi stres karaciğer içinde önceden kurulmuş mikrometazların miktarını önemli ölçüde artırır.
Bu fark iskemi reperfüzyonundan iki hafta sonra iskemi olmayan reperfüzyonlu farelere göre gözlenir. Karaciğer iskemi reperfüzyonu ve tümör hücre enjeksiyonu oda sıcaklığı ve hücre canlılığı etkilenebilir, bu yüzden bu değişkenleri kontrol etmek için dikkat edin. Bu teknik, cerrahi stres ve karaciğer hasarının metastatik hastalığın büyümesi üzerindeki etkilerinin araştırılmasını kolaylaştırır.
Bu araştırmacılar daha iyi cerrahi kaynaklı tümör büyüme fenomeni anlamak için yardımcı olacaktır.
