Biz el yazması okumak için C. Park teşekkür ederim. Bu çalışma Ödül sayısı K01AR061434 ve DP&#39;ye bir Lösemi ve Lenfoma Derneği Bursu Ödülü (5127-09) altında NIAMS tarafından desteklenen ve içeriği CPL ve DTS için Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe değil sadece yazarların sorumluluğundadır ve yok edildi mutlaka Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

1.. Fareler ve Önkoşullama Not: Tüm fareler patojen-serbest koşullarda muhafaza ve tüm protokolleri Massachusetts Genel Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Tüm cerrahi otoklava steril ekipman kullanılarak steril koşullarda yapılmalıdır. MX1-Cre 15, Rosa26-loxp-stop-loxp-EYFP (Rosa-YFP), ve Rosa26-loxp-stop-loxp-tdTomato (Rosa-Domates) idi Jackson Laboratories&#39;den satın alınmıştır. Osteokalsin-GFP farenin Henry Kronenberg tarafından temin edildi. In vivo OSPC göç ve çoğalması kantitatif analiz için, MX1-Cre + Rosa-YFP + (tek renk-muhabir) fareler kullanıldı. Osteokalsin + olgun osteoblast onların farklılaşma daha ayrıntılı izleme için, kullanılan trigenic MX1-Cre + Rosa-Domates + Ocn-GFP +fareler. <ol><li> , In vivo MX1 + hücreleri etiketlemek steril PBS çözeltisi içinde Poliinosinik-polisitidilik asit (PIPC, 2.5 mg / ml) hazırlamak ve 20 MX1-Cre + raportör fare g intraperitonal kez 10 gün boyunca her gün için 200 ul enjekte etmek için. </li><li> Ikamet MX1 + hematopoietik hücrelerin ortadan kaldırılması için, 9.5 Gy tek bir doz ile ışın tedavisi fareler. Intravenöz 16 ışınlama, transplant vahşi tip kemik iliği hücreleri (1x10 6 hücre / fare) 24 saat sonra. Not: MX1-uyarılabilir hücreler hematopoietik hücrelerin ve hematopoietik türetilmiş osteoklastlar, MX1 + hematopoietik hücrelerin ortadan kaldırılması MX1 + osteojenik hücrelerin görüntü kalitesini geliştirir ve kantitatif içerir beri. </li><li> Kemik iliği nakli sonrasında donör iliği hücrelerinin başarılı iskânından elde edilmesi amacıyla 4-6 hafta boyunca hayvanlar monitör. </li></ol> 2. Mohazirligi kullanın <ol><li> , IACUC onaylı bir prosedür kullanılarak, ketamin / ksilazin (100 mg / kg, xylazine 12 mg / kg vücut ağırlığı), 50 ul intraperitonal enjeksiyon ile fare anestezisi. Not: Etki süresi, ketamin / ksilazin ek bir doz ile uzatılabilir. </li><li> Fare tam ayak ve / veya kuyruk tutam yanıt eksikliği ile anestezi olup olmadığını belirleyin. Fare anestezi zaman (İsteğe bağlı), bantlama ile burun üzerinde izofluran gaz maskesi güvenli. Hayvan tam sedasyon sağlamak için izofluran seviyesini ayarlayın. </li><li> Bir elektrik düzenleyici veya küçük makas kullanarak saçınızı Clip. Saç parçaları çıkarın ve% 70 alkollü pamukla maruz kalan cildi sterilize. Kornea dehidratasyonu önlemek için göz yaşartıcı jeli uygulayın. </li></ol> 3.. Mikrokırık Yaralanma <ol><li> Hayvan tam sedasyon sağlandıktan sonra, kafa derisi cilt açmak için bir tek ters L şeklinde bir kesi yapmak. Kısaca, bir birinci enine bir kesi (en az 1 cm) starti yapmakBaşka kulağına bir kulaktan ng. 60 ° ~ ~ açın ve uzak burnundan 2-3 mm kadar burun doğru kesilirken devam ediyor. Not: Bu kesi yansıması için, alanı üzerinde yara dokularının oluşmasını önler. </li><li> Forseps ile yanlara doğru çekerek cilt kapaklarını ayırın. Her iki frontal kemik ve sagital ve koronal sütür kesişme açıkça maruz olmalıdır. </li><li> Kalan tüm kıllar ortadan kalkıncaya kadar steril PBS ve steril gazlı bez ya da pamuklu çubukla hafifçe silinerek ile temizlenerek açık yüzeyini temizleyin. </li><li> Kalvaryumda mikro çatlaklar oluşturmak için, bir elinizle fare kafası ve başka bir el ile bir 30 G iğne tutun. Hafif basınç ile 30 G iğne ucu takarak ve hareket bükerek sagital ve koronal sütür kavşak yakınında sol frontal kemik üzerinde bir mikro-delinme (&lt;1 mm derinlikte ~ 0.2 mm çapında bir yara) olun. Dikkat: Böylece, bleedi en aza indirmek, beyin içine nüfuz iğne önlemek için çok önemlidirng ve doku hasarı. </li><li> Daha büyük bir iğne (20 veya 25 G) moduna geçmek ve iğne (~ 0.5 mm çap) çevirerek lastik deliği genişletmek. </li><li> Kontralateral frontal kemik ikinci patlağı oluşturmak için adım 3,3-3,5 tekrarlayın. </li><li> Kanama durana kadar PBS sürekli düşmesi ile yaralanan noktalar silin. Not: kırık sitelerinde Kanama uygun görüntüleme ile engel ve skar oluşumu neden olacaktır. </li><li> Kurumasını önlemek için kafatası üzerinde steril fizyolojik tuzlu su çözeltisi ya da% 2 METHOCEL bir damla uygulanır. Not: görüntü netliğini azaltacak, kafatası yüzey kurumasına izin vermeyin. Bu alanı kapsayacak şekilde jel veya tuz yeterli bir miktarda kullanmak önemlidir. </li></ol> 4. Intravital Görüntüleme <ol><li> (İsteğe bağlı) görüntüleme önce, bir farenin kan damarları görselleştirmek için bir damar boya ile enjekte edilir. Uygun olmayan bir Qtracker 705 80 m seyreltildi (50 mM borat tamponu içinde 2 uM çözelti) ile 20 ul, retro-orbital enjektePBS l. Reaktif atıkları en aza indirmek için bir insülin şırınga kullanın. Sinyal yeterince parlak değilse, ilave miktarlarda gerekli olabilir. </li><li> Tarayıcı açın. Not: Bir çokgen tabanlı lazer tarayıcı bir video hızında eşzamanlı çoklu kanal görüntü alma (saniyede 30 kare) sağlar. Video hız tarama canlı hayvan görüntüleme için çok önemlidir. </li><li> (: Safir lazer Femto saniye titanyum) çoklu foton lazer açın. 880 nm dalga boyunu ayarlayın ve kemiğin ikinci harmonik nesil görüntüleme (440 nm) için gücünü ayarlamak. GFP ve tdTomato uyarma, 491 nm ve 561 nm katı hal lazerleri açın. </li><li> PMT Her bir sinyal için (photomultiplier tüp) dedektörleri açın (ikinci harmonik üretimi için 435 ± 20 nm band geçiren filtre, GFP için 528 ± 19 nm band geçiren filtre ve tdTomato için 590 ± 20.) (İsteğe bağlı) Qtracker 705 sinyalini algılamak için bir 695 ± 27.5 nm bant geçiren filtre ile 638 nm helyum-neon lazer ve bir PMT kullanın. </li><li> PlacBir XYZ-eksen motorize mikroskop sahnede hayvan e. (Bu hayvan kaybı riskini azaltır) vücut ısısını korumaya yardımcı bir elektrikli ısıtma pedi ile en rahat pozisyonda fare tutun. Görüntüleme sırasında hareketini en aza indirmek ve mümkün olduğunca yatay görüntülü alan tutmak için fare tutmak için bant kullanın. </li><li> Kurumasını önlemek için kafatası sıcak% 2 metilselüloz jel ya da fizyolojik tuzlu su çözeltisi içinde bir damla uygulanır. Görüntüleme alanında bir cam kapak koyun. Calvaria taramak için (0.9 NA ile 30x su daldırma objektif) bir düşük büyütme lensi kullanın. </li><li> XYZ-eksen kontrolörü kullanarak kemiklerden SHG sinyalini algılayarak calvaria yüzeyini bulmak ve bu sagital sütür ve koronal sütür arasındaki kesişme gibi çok önemli bir dönüm noktası konumunu tanımlamak. Jlalınır ve XYZ koordinatlarını kaydetmek. </li><li> SHG ve floresan sinyallerini gözlemleyerek yaralanma konumu aramak için devam ediyor. </li><li> Yaralanma siteler veya bölge o zamanf ilgi bulunan, ilgi konusu hücrelerden SHG ve floresan sinyalleri içeren en iyi odak düzlemi, bir görüntü elde. Kaydet XYZ koordinatları ve sagital ve koronal sütür kesiştiği için mesafe görüntüleme sonraki tur için kendi hassas konum tanımlamak için. </li><li> Kırığı yaralanma 3D hücresel ve kemik yapıları toplamak için Z-yığınlar tarafından görüntü kaydı - Endosteal kemik yüzeyinden ~ 100 mikron derinliğinde (2 5 mikron aralığı). Yaralanma bir tarafının görüntüleme tamamlanmasından sonra, bir sonraki yaralanma siteleri için görüntüleme işlemini tekrarlayın. </li></ol> 5.. Mesaj Operasyon Prosedürleri <ol><li> Görüntüleme sonra kafatası metilselüloz jel kaldırmak için steril tuz çözeltisi ile görüntüleme sitesi yıkayın. Steril pamuklu çubuk kullanarak, yüzeyde üçlü antibiyotik merhem küçük bir miktar uygulanır. Deri kanatlar örtün ve cerrahi sütür tekniği ile saç derisini yeniden kapatın. Bu bir hipoalerjenik dikiş ipliği (emilebilir Polyglactin su ile yapılabilirTure) ve 5-0 boy dikiş iğnesi. Dikkat: İyi dikiş tekniği skar oluşumunu en aza indirir. </li><li> / Kg buprenorfin, 48 saat boyunca her 12 saatte ameliyat sonrası 0.05-0.1 mg IP enjeksiyonu ile tüm hayvanları tedavi. Onlar yeterli bilince geri kazanana kadar sıcak bir kurtarma odasına hayvanları tutmak. 3 ila 5 gün sonra, dikiş yeniden ve kırık iyileşmesi sırasında hücresel değişiklik izlemek için Intravital görüntüleme adımları tekrarlayın. </li></ol>

<ol>
	<li>Harada, S., Rodan, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+osteoblast+function+and+regulation+of+bone+mass.">Control of osteoblast function and regulation of bone mass.</a> Nature. 423, 349-355 (2003).</li><li>Manolagas, S. C., Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+old+means+to+bone.">What old means to bone.</a> Trends Endocrinol Metab. 21, 369-374 (2010).</li><li>Khosla, S., Riggs, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+age-related+bone+loss+and+osteoporosis.">Pathophysiology of age-related bone loss and osteoporosis.</a> Endocrinol Metab Clin North Am. 34, 1015-1030 (2005).</li><li>Friedenstein, A. J., Chailakhyan, R. K., Latsinik, N. V., Panasyuk, A. F., Keiliss-Borok, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+cells+responsible+for+transferring+the+microenvironment+of+the+hemopoietic+tissues.+Cloning+in+vitro+and+retransplantation+in+vivo.">Stromal cells responsible for transferring the microenvironment of the hemopoietic tissues. Cloning in vitro and retransplantation in vivo.</a> Transplantation. 17, 331-340 (1974).</li><li>Mendez-Ferrer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+and+haematopoietic+stem+cells+form+a+unique+bone+marrow+niche.">Mesenchymal and haematopoietic stem cells form a unique bone marrow niche.</a> Nature. 466, 829-834 (2010).</li><li>Park, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+Bone+Marrow+MSCs+Are+Dynamic,+Fate-Restricted+Participants+in+Bone+Maintenance+and+Regeneration.">Endogenous Bone Marrow MSCs Are Dynamic, Fate-Restricted Participants in Bone Maintenance and Regeneration.</a> Cell Stem Cell. 10, 259-272 (2012).</li><li>Schindeler, A., McDonald, M. M., Bokko, P., Little, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+remodeling+during+fracture+repair:+The+cellular+picture.">Bone remodeling during fracture repair: The cellular picture.</a> Semin Cell Dev Biol. 19, 459-466 (2008).</li><li>Holstein, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapamycin+affects+early+fracture+healing+in+mice.">Rapamycin affects early fracture healing in mice.</a> Br J Pharmacol. 154, 1055-1062 (2008).</li><li>Maes, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoblast+precursors,+but+not+mature+osteoblasts,+move+into+developing+and+fractured+bones+along+with+invading+blood+vessels.">Osteoblast precursors, but not mature osteoblasts, move into developing and fractured bones along with invading blood vessels.</a> Dev Cell. 19, 329-344 (2010).</li><li>Grcevic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+fate+mapping+identifies+mesenchymal+progenitor+cells.">In vivo fate mapping identifies mesenchymal progenitor cells.</a> Stem Cells. 30, 187-196 (2012).</li><li>O'Neill, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-computed+tomography+assessment+of+the+progression+of+fracture+healing+in+mice.">Micro-computed tomography assessment of the progression of fracture healing in mice.</a> Bone. 50, 1357-1367 (2012).</li><li>Kovar, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near-infrared-labeled+tetracycline+derivative+is+an+effective+marker+of+bone+deposition+in+mice.">Near-infrared-labeled tetracycline derivative is an effective marker of bone deposition in mice.</a> Anal Biochem. 416, 167-173 (2011).</li><li>Mayer-Kuckuk, P., Boskey, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+promotes+progress+in+orthopedic+research.">Molecular imaging promotes progress in orthopedic research.</a> Bone. 39, 965-977 (2006).</li><li>Lo Celso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-animal+tracking+of+individual+haematopoietic+stem/progenitor+cells+in+their+niche.">Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche.</a> Nature. 457, 92-96 (2009).</li><li>Kuhn, R., Schwenk, F., Aguet, M., Rajewsky, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+gene+targeting+in+mice.">Inducible gene targeting in mice.</a> Science. 269, 1427-1429 (1995).</li><li>Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+bone+marrow+transplantation+(BMT):+providing+optimal+veterinary+and+husbandry+care+to+irradiated+mice+in+BMT+studies.">Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 48, 11-22 (2009).</li><li>Tu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osterix+overexpression+in+mesenchymal+stem+cells+stimulates+healing+of+critical-sized+defects+in+murine+calvarial+bone.">Osterix overexpression in mesenchymal stem cells stimulates healing of critical-sized defects in murine calvarial bone.</a> Tissue Eng. 13, 2431-2440 (2007).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali İlgi olmadığını beyan ederim.

Iskelet kök hücrelerin düzenlenmesi kemik rejenerasyonu elde etmek için daha iyi yöntemler tanımlanması için büyük önem olabilir. Hücresel düzeyde nicel ve sıralı görüntüleme teknik açıdan zorlayıcı olmuştur. Fare uzun kemik kırığı modeli yaygın olarak kullanılan ve biyomekanik çalışmalar 17 için uygun olmasına rağmen, derin doku konumu, düzensiz kırık boyutu, yumuşak doku hasarı ve stabilize fiksatör uygulama sıralı Intravital görüntüleme sınırlıdır. Burada, ...

Dejeneratif kemik hastalıkları ve osteoporotik kırık riski yüksek yol yaşa bağlı kemik kaybı halk sağlığı 1 önemli bir sorun haline gelmiştir. Kemik bakım kemik oluşturucu osteoblastlar ve kemik erimesi ile ilgili osteoklastı tarafından kontrol edilir. Kemik oluşturan hücreler kusurlar, yaşa bağlı kemik kaybı, dejeneratif kemik hastalıkları 2,3 bir ana nedenidir. Kapsamlı araştırma kırık iyileşme iyileştirilmesi odaklanmış olsa da, güvenilir ilaçların keşfi dejeneratif kemik hastalıkları tedavi ve osteoporotik kırıkların zayıflığını tersine çevirmek için önemli bir sorun olmaya devam etmek. Böylece, kemik rejenerasyonu ve onarımı, kemik oluşturan hücreler ve onların denetim mekanizmalarının kaynağını inceleyerek iskelet yenilenmesini artırmak ve kemik kaybı hastalıkları tersine çevirmek için yeni bir fikir verir. Kemik iliğinde multipotent mezenkimal hücrelerin varlığı clonogenic popülasyonlarının tanımlanması göre önerilmiştir ki farklı olabilirOsteogenik içine sokularak, adipogenic ve kondrojenik soylar ex vivo 4.. Son zamanlarda birçok çalışma iskelet / mezenkimal kök hücreler (DGM / MKH) osteoblast bir doğal kaynaktır ve kemik döngüsü, yeniden ve kırık onarımı 5,6 için kritik olduğunu bildirdi . Buna ek olarak, bizim soy izleme çalışması olgun osteoblastlar beklenmedik bir şekilde kısa yarı ömrü (~ 60 gün) var ve sürekli olarak normal homeostatik ve kırık tamiri koşullarda 6 hem kendi kök / progenitör hücreler tarafından doldurulan olduğunu ortaya çıkardı. Bununla birlikte, in vivo kök hücre kimliği ve ne kadar bu gibi hücreler yaralanma parçalanması ve kemik oluşturan hücreler, belirsiz arz tepki. Bu nedenle, fizyolojik şartlar altında göç, çoğalmasını ve endojen DGM&#39;ler / MKH&#39;lerin farklılaşmasını analiz edebilir bir yöntem geliştirmek için önemlidir. Kırık onarımı karmaşık bir dizi ile düzenlenen bir çok selüler ve dinamik bir süreçtirsitokinler ve büyüme faktörleri 7. Kırık çalışmaları için en popüler yaklaşım, uzun kemik kırığı olan bir hayvan modeli kullanmak ve kemik kesit ve imünoflöresan teknikleri 8-10 tarafından kemikleri analiz etmektir. Bu onarım işlemi mikro CT 11, yakın kızıl ötesi floresan 12 ve 13 kemilüminesans görüntüleme de dahil olmak üzere birden fazla görüntüleme teknikleri ile izlenebilir. Bununla birlikte, her bir teknik belirli sınırlamaları vardır ve in vivo olarak hücresel düzeyde DGM / MSC fonksiyonu izlemek için etkili bir yolu olmuştur. Son zamanlarda, konfokal / iki foton İntra vital mikroskopik geliştirilen ve hayvanlara 14, canlı da tek hücreli çözünürlükte kemik iliği mikro-bağlamında nakledilen kanser hücreleri ve hematopoietik kök hücreleri tespit etmek için kullanılmıştır. Soy izleme modelleri bir dizi ile bu teknolojiyi birleştirerek, osteojenik kök / progenitör hücreler genetik geçici ac ile işaretlenmiş olabilir tanımlamak başardıkmyxovirus direnç -1 (MX1) promoteri ve MX1 kaynaklı progenitörlerin tivasyon zaman içinde olgun osteoblastların çoğunluğu koruyabilir ama yetişkin fare 6 kondrositlerin nesil katılmazlar. Buna ek olarak, MX1 etiketli OSPCs kırık iyileşmesi 6 yeni osteoblastların çoğunluğu kaynağı olduğunu gösterdi. Burada, osteo-dizi izleme modelleri ve intravital mikroskopi kullanılarak, bir protokol kırık onarımında MX1 + osteojenik kök / projenitör hücrelerin in vivo kinetiklerini belirlemek için sağlanır. Bu protokol kırık siteleri içine osteojenik kök / atalarıdır tehcir ve erken onarım süreci osteoprogenitör genişleme kantitatif ölçümünü izlemek için sıralı görüntüleme sunar. Bu yaklaşım, kemik onarım iyileştirmek için tedavi adayların değerlendirilmesi dahil olmak üzere birden bağlamlarda yararlı olabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="829">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">C57BL/6J (H-2b)</td>
			<td style="width:140px;">Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME)</td>
			<td style="width:195px;">000664</td>
			<td style="width:279px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ketamine Hydrochloride Injection</td>
			<td style="width:140px;">Bionichepharma</td>
			<td style="width:195px;">67457-001-10</td>
			<td>&#160;Vial size: 10 ml (50 mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine Sterile Solution</td>
			<td style="width:140px;">Lloyd Inc.</td>
			<td style="width:195px;">NADA# 139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Buprenorphine Hl</td>
			<td style="width:140px;">BEDFORD LAB</td>
			<td style="width:195px;">NDC 55390-100-10</td>
			<td>Vial: 0.3 mg/ml, Doses: 0.05-0.1 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DPBS, 1X</td>
			<td style="width:140px;">CORNING cellgro</td>
			<td style="width:195px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Alcohol Prep Pads (70% Isopropyl alcohol)</td>
			<td style="width:140px;">Kendall WEBCOL</td>
			<td style="width:195px;">5110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fine Surgical Scissor</td>
			<td style="width:140px;">F.S.T</td>
			<td style="width:195px;">14568-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Extra fine Forceps</td>
			<td style="width:140px;">F.S.T</td>
			<td style="width:195px;">11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">VICRYL*Plus Suture</td>
			<td style="width:140px;">Ethicon</td>
			<td style="width:195px;">VCP490G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Qtracker 705 non-targeted quantum dot</td>
			<td style="width:140px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:195px;">Q21061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Methocel 2%</td>
			<td style="width:140px;">OmmiVision</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">pIpC (Polyinosinic-polycytidylic acid)&#160;&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Sigma</td>
			<td style="width:195px;">P0913-50MG</td>
			<td>100 &#956;l (2.5 mg/ml in PBS) for 10 g of mouse</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mai Tai Tunable Ultrafast Lasers</td>
			<td style="width:140px;">Spectra Physics</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dual Calypso 491 + 532 nm DPSS laser</td>
			<td style="width:140px;">Cobolt AB</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Radius-635 HeNe laser</td>
			<td style="width:140px;">Coherent</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sequential in vivo imaging of osteogenic stem/progenitor cells during fracture repair

Kemik sürekli devrediyor ve yüksek rejeneratif yaralanma takip ediyor. Osteojenik kök / progenitor hücreler uzun zaman var olduğu öne sürülmüştür, ancak bu hücrelerin in vivo gösteri ancak son zamanlarda elde edilmiştir. Burada, in vivo görüntüleme teknikleri, endojen osteojenik kök / progenitör hücrelerin rolünü (OSPCs) ve kemik tamir kendi soyu araştırmak için temin edilmiştir. Modelleri ve kalvarial kemik uyarılan mesafeli mikro Intravital görüntüleme izleme osteo-soy hücre kullanarak, OSPCs doğrudan erken onarım sürecinde kritik olaylar meydana geldiği yaralanma sonrası ilk birkaç gün boyunca görülebilir. Yaralanma siteleri sırayla OSPCs, yaralanma taşınmaya sayısındaki artış ve kemik oluşturan osteoblastlar farklılaştığı ortaya görüntülü olabilir. Bu yöntemler kemik rejenerasyonu ve onarımı için kök hücre-içsel ve dışsal moleküler düzenleyicilerin rolünü araştıran bir araç sunuyoruz.

<html> Stabilize uzun kemik kırığı modeli kırık çalışmalarda popüler olmuştur. Ancak, uzun kemik kırığı veya büyük modeller birden fazla doku hasarına neden olabilir ve bu nedenle, kemik hücre fonksiyonu kantitatif ölçümü bir sınırlama var. Biz iğne delme (Şekil 1A-1C) ile kalvarial frontal kemiklerin üzerinde bir minimal invaziv yaralanma (dura mater içine az veya hiç işgali ile en az 1 mm çap) geliştirdi. Bu kemik (diğer dokuların müdahalesi olmadan net yaralı kemik...

Watch this Scientific Journal Video about Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair at JoVE.com

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Kırık iyileşmesi kemik progenitör fonksiyonunun kantitatif ölçümü yüksek çözünürlüklü seri görüntüleme teknolojisini gerektirir. Burada, protokoller görseli sırayla ve kemik kırığı tamir sürecinde endojen osteojenik kök / progenitör hücrelerin hareketi, çoğalması ve farklılaşması ölçmek için intravital mikroskopisi ve osteo-dizi izleme kullanarak verilmiştir.

Ardışık<em&gt; In vivo</em&gt; Kırık Onarım sırasında Osteojenik Kök / Progenitör Hücrelerinin Görüntüleme

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

sequential-vivo-imaging-osteogenic-stemprogenitor-cells-during

Research

JoVE Journal

Medicine

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

10.4K Görüntüleme.  Harvard Stem Cell Institute.  Kırık iyileşmesi kemik progenitör fonksiyonunun kantitatif ölçümü yüksek çözünürlüklü seri görüntüleme teknolojisini gerektirir. Burada, protokoller görseli sırayla ve kemik kırığı tamir sürecinde endojen osteojenik kök / progenitör hücrelerin hareketi, çoğalması ve farklılaşması ölçmek için intravital mikroskopisi ve osteo-dizi izleme kullanarak verilmiştir. 

Video: Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate since the advent of in vivo bioluminescent imaging technologies 1-3. Indeed, the ability to locate and quantify tumor growth longitudinally in a single cohort of animals to completion of the study as opposed to sacrificing individual groups of animals at specific assay times has revolutionized how researchers investigate breast cancer metastasis. Unfortunately, current methodologies preclude the real-time assessment of critical changes that transpire in cell signaling systems as breast cancer cells (i) evolve within primary tumors, (ii) disseminate throughout the body, and (iii) reinitiate proliferative programs at sites of a metastatic lesion. However, recent advancements in bioluminescent imaging now make it possible to simultaneously quantify specific spatiotemporal changes in gene expression as a function of tumor development and metastatic progression via the use of dual substrate luminescence reactions. To do so, researchers take advantage for two light-producing luciferase enzymes isolated from the firefly (Photinus pyralis) and sea pansy (Renilla reniformis), both of which react to mutually exclusive substrates that previously facilitated their wide-spread use in in vitro cell-based reporter gene assays 4. Here we demonstrate the in vivo utility of these two enzymes such that one luminescence reaction specifically marks the size and location of a developing tumor, while the second luminescent reaction serves as a means to visualize the activation status of specific signaling systems during distinct stages of tumor and metastasis development. Thus, the objectives of this study are two-fold. First, we will describe the steps necessary to construct dual bioluminescent reporter cell lines, as well as those needed to facilitate their use in visualizing the spatiotemporal regulation of gene expression during specific steps of the metastatic cascade. Using the 4T1 model of breast cancer metastasis, we show that the in vivo activity of a synthetic Smad Binding Element (SBE) promoter was decreased dramatically in pulmonary metastasis as compared to that measured in the primary tumor 4-6. Recently, breast cancer metastasis was shown to be regulated by changes within the primary tumor microenvironment and reactive stroma, including those occurring in fibroblasts and infiltrating immune cells 7-9. Thus, our second objective will be to demonstrate the utility of dual bioluminescent techniques in monitoring the growth and localization of two unique cell populations harbored within a single animal during breast cancer growth and metastasis.

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

Herein we describe the methods to construct, visualize, and quantify the bioluminescent reactions of both firefly and renilla luciferase enzymes expressed in metastatic breast cancer cells during their growth and metastasis in vivo.

Vivo Çift Yüzey Bioluminescent Imaging&#39;de

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Tıp

3D-Neuronavigation In Vivo Through a Patient's Brain During a Spontaneous Migraine Headache

A growing body of research, generated primarily from MRI-based studies, shows that migraine appears to occur, and possibly endure, due to the alteration of specific neural processes in the central nervous system. However, information is lacking on the molecular impact of these changes, especially on the endogenous opioid system during migraine headaches, and neuronavigation through these changes has never been done. This study aimed to investigate, using a novel 3D immersive and interactive neuronavigation (3D-IIN) approach, the endogenous &#181;-opioid transmission in the brain during a migraine headache attack in vivo. This is arguably one of the most central neuromechanisms associated with pain regulation, affecting multiple elements of the pain experience and analgesia. A 36 year-old female, who has been suffering with migraine for 10 years, was scanned in the typical headache (ictal) and nonheadache (interictal) migraine phases using Positron Emission Tomography (PET) with the selective radiotracer [11C]carfentanil, which allowed us to measure &#181;-opioid receptor availability in the brain (non-displaceable binding potential - &#181;OR BPND). The short-life radiotracer was produced by a cyclotron and chemical synthesis apparatus on campus located in close proximity to the imaging facility. Both PET scans, interictal and ictal, were scheduled during separate mid-late follicular phases of the patient's menstrual cycle. During the ictal PET session her spontaneous headache attack reached severe intensity levels; progressing to nausea and vomiting at the end of the scan session. There were reductions in &#181;OR BPND in the pain-modulatory regions of the endogenous &#181;-opioid system during the ictal phase, including the cingulate cortex, nucleus accumbens (NAcc), thalamus (Thal), and periaqueductal gray matter (PAG); indicating that &#181;ORs were already occupied by endogenous opioids released in response to the ongoing pain. To our knowledge, this is the first time that changes in &#181;OR BPND during a migraine headache attack have been neuronavigated using a novel 3D approach. This method allows for interactive research and educational exploration of a migraine attack in an actual patient's neuroimaging dataset.

3D-Neuronavigation In Vivo Through a Patient&#039;s Brain During a Spontaneous Migraine Headache

In this study, the authors report for the first time a novel 3D-Immersive &#38; Interactive Neuronavigation (3D-IIN) through the impact of a spontaneous migraine headache attack in the &#956;-opioid system of a patient's brain in vivo.

3D-nöronavigasyon<em&gt; In Vivo</em&gt; Bir Spontan migren sırasında Hasta Beyin sayesinde

A growing body of research, generated primarily from MRI-based studies, shows that migraine appears to occur, and possibly endure, due to the alteration ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with distinct functions and gene expression profiles. The roles of microglial activation in health, injury and disease remain incompletely understood due to their dynamic and complex regulation in response to changes in their microenvironment. Thus, it is critical to non-invasively monitor and analyze changes in microglial activation over time in the intact organism. In vivo studies of microglial activation have been delayed by technical limitations to tracking microglial behavior without altering the CNS environment. This has been particularly challenging during chronic neurodegeneration, where long-term changes must be tracked. The retina, a CNS organ amenable to non-invasive live imaging, offers a powerful system to visualize and characterize the dynamics of microglia activation during chronic disorders.
This protocol outlines methods for long-term, in vivo imaging of retinal microglia, using confocal ophthalmoscopy (cSLO) and CX3CR1GFP/+ reporter mice, to visualize microglia with cellular resolution. Also, we describe methods to quantify monthly changes in cell activation and density in large cell subsets (200-300 cells per retina). We confirm the use of somal area as a useful metric for live tracking of microglial activation in the retina by applying automated threshold-based morphometric analysis of in vivo images. We use these live image acquisition and analyses strategies to monitor the dynamic changes in microglial activation and microgliosis during early stages of retinal neurodegeneration in a mouse model of chronic glaucoma. This approach should be useful to investigate the contributions of microglia to neuronal and axonal decline in chronic CNS disorders that affect the retina and optic nerve.

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

Microglia activation and microgliosis are key responses to chronic neurodegeneration. Here, we present methods for in vivo, long-term visualization of retinal CX3CR1-GFP+ microglial cells by confocal ophthalmoscopy, and for threshold and morphometric analyses to identify and quantify their activation. We monitor microglial changes during early stages of age-related glaucoma.

Fare Glokomda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre morfometrisi: Nörodejenerasyonda sırasında Retina Mikroglial Aktivasyonu Vivo Dynamics

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with ...

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest improved outcome measures in both experimental and clinical studies. Although the BMMSC are implanted into the tendon lesion in large numbers (usually 10 - 20 million cells), only a relatively small number survive (&#60;10%) although these can persist for up to 5 months after implantation. This appears to be a common observation in other species where BMMSC have been implanted into other tissues and it is important to understand when this loss occurs, how many survive the initial implantation process and whether the cells are cleared into other organs. Tracking the fate of the cells can be achieved by radiolabeling the BMMSC prior to implantation which allows non-invasive in vivo imaging of cell location and quantification of cell numbers.
This protocol describes a cell labeling procedure that uses Technetium-99m (Tc-99m), and tracking of these cells following implantation into injured flexor tendons in horses. Tc-99m is a short-lived (t1/2 of 6.01 hr) isotope that emits gamma rays and can be internalized by cells in the presence of the lipophilic compound hexamethylpropyleneamine oxime (HMPAO). These properties make it ideal for use in nuclear medicine clinics for the diagnosis of many different diseases. The fate of the labeled cells can be followed in the short term (up to 36 hr) by gamma scintigraphy to quantify both the number of cells retained in the lesion and distribution of the cells into lungs, thyroid and other organs. This technique is adapted from the labeling of blood leukocytes and could be utilized to image implanted BMMSC in other organs.

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

This protocol describes the radiolabeling of equine mesenchymal stem cells and their implantation into tendon injuries in the horse in order to determine cell survival and tissue distribution using gamma scintigraphy.

Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor initiation, metastasis and resistance to radio- and chemotherapy. Here we describe a specific methodology for culturing primary human pancreatic CSCs as tumor spheres in anchorage-independent conditions. Cells are grown in serum-free, non-adherent conditions in order to enrich for CSCs while their more differentiated progenies do not survive and proliferate during the initial phase following seeding of single cells. This assay can be used to estimate the percentage of CSCs present in a population of tumor cells. Both size (which can range from 35 to 250 micrometers) and number of tumor spheres formed represents CSC activity harbored in either bulk populations of cultured cancer cells or freshly harvested and digested tumors 1,2. Using this assay, we recently found that metformin selectively ablates pancreatic CSCs; a finding that was subsequently further corroborated by demonstrating diminished expression of pluripotency-associated genes/surface markers and reduced in vivo tumorigenicity of metformin-treated cells. As the final step for preclinical development we treated mice bearing established tumors with metformin and found significantly prolonged survival. Clinical studies testing the use of metformin in patients with PDAC are currently underway (e.g., NCT01210911, NCT01167738, and NCT01488552). Mechanistically, we found that metformin induces a fatal energy crisis in CSCs by enhancing reactive oxygen species (ROS) production and reducing mitochondrial transmembrane potential. In contrast, non-CSCs were not eliminated by metformin treatment, but rather underwent reversible cell cycle arrest. Therefore, our study serves as a successful example for the potential of in vitro sphere formation as a screening tool to identify compounds that potentially target CSCs, but this technique will require further in vitro and in vivo validation to eliminate false discoveries.

Pancreatic cancer stem cells (CSCs) can be expanded in vitro using the anchorage-independent sphere culture technique, which represents a powerful tool to study CSC biology and can serve as the first step to develop novel CSC-targeting therapies. Here the methodology for expanding, analyzing and targeting of pancreatic CSCs is provided.

Pankreas Kanseri Yeni Tedavi Stratejileri Geliştirme Hücre Özellikleri Kök incelenmesi

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The amount of the different tissues in the callus provides important information on the fracture healing progress. Available in vivo techniques to longitudinally monitor the callus tissue development in preclinical fracture-healing studies using small animals include digital radiography and &#181;CT imaging. However, both techniques are only able to distinguish between mineralized and non-mineralized tissue. Consequently, it is impossible to discriminate cartilage from fibrous tissue. In contrast, magnetic resonance imaging (MRI) visualizes anatomical structures based on their water content and might therefore be able to noninvasively identify soft tissue and cartilage in the fracture callus. Here, we report the use of an MRI-compatible external fixator for the mouse femur to allow MRI scans during bone regeneration in mice. The experiments demonstrated that the fixator and a custom-made mounting device allow repetitive MRI scans, thus enabling longitudinal analysis of fracture-callus tissue development.

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

The evaluation of tissue development in the fracture callus during endochondral bone healing is essential to monitor the healing process. Here, we report the use of a magnetic resonance imaging (MRI)-compatible external fixator for the mouse femur to allow MRI scans during bone regeneration in mice.

Vivo Fare uyluk için bir MRI uyumlu Osteosentez aygıtı kullanma farelerde kemik iyileşme sırasında kırık Kallus gelişimi değerlendirme

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The ...

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue plasminogen activator (tPA) as an approved drug treatment to target ischemic strokes. Current research in the field of ischemic stroke focuses on better understanding the pathophysiology of stroke, to develop and investigate novel pharmaceutical targets. Reliable experimental stroke models are crucial for the progression of potential treatments. The middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is clinically relevant and the most frequently used surgical model of ischemic stroke in rodents. However, the outcomes of this model, such as lesion volume, are associated with high levels of variability, particularly in mice. The alternative MCAO model described here allows the reperfusion of the common carotid artery (CCA) and the increased perfusion of the middle cerebral artery (MCA) territory, using a tissue pad with fibrinogen-based sealant to repair the vessel, and the improved welfare of the mice by avoiding external carotid artery (ECA) ligation. This reduces the reliance on the Circle of Willis, which is known to be highly anatomically variable in mice. Representative data show that using this alternative surgical approach decreases the variability in lesion volumes between the traditional MCAO approach and the alternative approach described here.

Intraluminal filament occlusion of the middle cerebral artery is the most frequently used in vivo model of experimental stroke in rodents. An alternative surgical approach to allow common carotid artery repair is performed here, which allows the reperfusion of the common carotid artery and a full reperfusion to the middle cerebral artery territory.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...

A Simplified Stepwise Approach to Echo Guidance during Percutaneous Mitral Valve Repair

Percutaneous transcatheter edge-to-edge reconstruction of the mitral valve is a safe and well-established therapy for severe symptomatic mitral regurgitation in patients with high surgical risk. Echocardiographic guidance in addition to fluoroscopy is the gold standard and should be performed using a standardized technique.
This article lays out our reproducible step by step echocardiographic guide including views, measurements as well as highlighting possible difficulties that may arise during the procedure.
This article provides detailed and chronological echocardiographic views for each step of the procedure, especially preferences between 2D and 3D imaging. If needed, pulse wave, continuous wave and color doppler measurements are described. Furthermore, as there are no official recommendations for the quantification of mitral regurgitation during the percutaneous edge-to-edge-repair procedure, advice is also included for echocardiographic quantification after grasping the mitral leaflets and after device deployment. In addition, the article deals with important echocardiographic views to prevent and deal with possible complications during the procedure.
Echocardiographic guidance during transcatheter mitral valve repair is mandatory. A structured approach improves the collaboration between interventionist and imager and is indispensable for a safe and effective procedure.

This protocol presents in detail how to perform real-time echocardiographic guidance during transcatheter mitral valve repair. The fundamental views and the necessary measurements are described for each stage of the procedure.