Bu çalışma (IY için) Beyin ve Davranış Araştırma Vakfı Centre National de la Recherche Scientifique (sözleşme UPR3212), Strasbourg Üniversitesi ve bir NARSAD Genç Araştırmacı Grant tarafından desteklenmiştir. Yayın masrafları Neurex ağ (Program İnterreg IV Yukarı Ren) tarafından desteklenmektedir.

Protokoller &quot;Comité d&#39;éthique en matière d&#39;deney animale de Strasbourg&quot; (CREMEAS) tarafından onaylanmıştır. Paw Çekilme eşiklerinin 1.. Baseline Ölçme <ol><li> Fareler, test prosedürleri başlatmadan önce 2 hafta, en az 10 gün boyunca hayvan tesislere ortama alışmalarına izin verin. </li><li> Von Frey test set-up ve 4. bölümünde açıklanan von Frey prosedüre fareler alıştırmak. </li><li> Ameliyattan önce, bölüm 4.3 &#39;de tarif edildiği gibi von Frey filamentleri ile mekanik pençe çekme eşikleri değerlendirir. Not: En az üç istikrarlı ardışık değerleri pençe çekme eşikleri elde edilinceye kadar ayrı günlerde işlemi tekrarlayın. </li><li> Bu gruplar, ilk olarak pençe geri çekme eşikleri arasında farklılık yok ki, farklı deney grupları için fareler atama. </li></ol> Manşet İMPLANTASYONU 2. Cerrahi Prosedürüzerinde <ol><li> Hayvan tartılır. Not: fare vücut ağırlığı aşağıda tarif manşon yerleştirme işlemi için 20 g üzerinde olması gerekir. </li><li> Ketamin (17 mg / ml) ve anestezi yaklaşık 45 dakika içerir% 0.9 NaCl, ksilazin (2.5 mg / ml) içeren bir karışım, 4 ml / kg &#39;lık bir intraperitoneal enjeksiyon ile hayvan anestezisi. </li><li> Cımbız ile bir arka pençe sıkarak pençe reflekslerinin olmadığını kontrol ediniz ve hayvan tam anestezi olduğundan emin olmak için göz reflekslerinin olmadığını kontrol ediniz. </li><li> Bir elektrik makinesini kullanarak, kalça diz sağ bacak tıraş. </li><li> Bir pamuk uçlu çubuk ile gözlere koruyucu göz sıvı jeli uygulayın. </li><li> Onun sol tarafında hayvan koyun ve küçük bir yastık üzerinde sağ arka bacağı yerleştirin ve yapışkan bant ile yastık sağ arka bacağını korumak. </li><li> Gazlı bez veya pamuk uçlu çubuk kullanarak klorheksidin ve% 70 etanol ile ameliyat alanında dezenfekte. </li><li> Işaret parmağı femur bulmak ve yapmak bir, yaklaşık 0.5 cm&#39;lik bir kesi, femur femur ve yaklaşık 1.5 mm anterior paraleldir. </li><li> İki Otoklavlanmış sopalarla femur yakın kasları ayrı. Notlar: kas kesmeyin. Normalde, kas tabakaları, herhangi bir kanama olmadan kolayca ayırmak ve siyatik sinir sonra görülebilir. Kanama durumunda, kan emmek için steril pamuk uçlu bezi kullanın. </li><li> Ana dalı ortaya çıkarmak için, siyatik sinirin altında iki otoklava çubukları yerleştirin ve steril fizyolojik solüsyon (% 0.9 NaCl) ile sinir hidrat. </li><li> Bölünmüş PE-20 polietilen boru (manşet) sivri uçlu bir çelik sopa yardımıyla ve bulldog kelepçe ile, 0.38 mm ID / 1.09 mm OD, ve önceden hazırlanmış steril 2 mm bölümünü tutun. <ol><li> Hafifçe açılacaktır, manşet içine sivri çelik çubuk yerleştirin. </li><li> Manşon yanal açıklığa kullanarak, manşet bir ucunda Bulldog yerleştirin ve manşet paraleldir. O tarafından manşet yapacak, böylece bulldog (180 °) döndürünyan açıklığa terstir tarafı. Bulldog kapatın ve sivri çelik sopa kaldırın. Not: rotasyon tutan-on manşet yerleştirilmesi için optimize edilmiş bir pozisyonda, bulldog kelepçe de kısmen açık manşet korumak için yardımcı oluyor izin vermek için yapılır. Bu model ile Bulldog kelepçenin büyüklüğü prosedürün Bu aşama için kritik öneme sahiptir. </li></ol></li><li> Ikinci bir deneyci sinir altında iki sopa tutun ve yavaşça yaklaşık 4 mm uzunluğunda siyatik sinirin bir bölümüne erişimini kolaylaştırmak için sopa ayrı var. </li><li> Kalça proksimal sinirin parçası etrafında bulldog uzak olan manşet kısmını takarak başlayarak, siyatik sinirin ana dal etrafında 2 mm manşeti takın. </li><li> Tüpün sıkma şeklinde veya değiştirmeden, pense ile iki uzak tarafta basınç uygulayarak yavaşça manşeti kapatın. Doğru kapalı olduğundan emin olmak için manşet çevirin. </li><li> Tıraşlı cilt tabakası zekâ dikinh cerrahi knot. </li><li> Temiz bir evde kafes içinde sol tarafta fare yerleştirin. Fare uyanık kadar ısı lambası altında tutun. </li><li> Ilave su ve ev kafes doğrudan biraz yemek yer. </li></ol> Sham Kontrolleri için 3. Cerrahi Prosedür <ol><li> Adımları 2,15-2,17 ile izleyin, 2.9 adım adım 2.1, yukarıda tarif edildiği gibi aynı ameliyat prosedürü uygulayın. Sahte kontroller için 2.14 sadece endişe manşet ekleme adımlarını 2.10 atlarsanız. </li></ol> 4.. Von Frey testi <ol><li> Düz paslanmaz çelik (1 mx 50 cm, perforasyon sınırları arasında 2.5 mm ile 5 mm daire delikler) arasında yüksek bir delikli plaka, açık delikli bireysel kutuları (7 cm x 9 cm x 7 cm) &#39;de farelerin yerleştirin. Not: En fazla 12 farenin eşzamanlı Bu set-up test edilebilir. Operated hayvanlar ameliyattan bir gün sonra test edilebilir. Ancak, kurtarma 3 gün gözlenen cerrahi sonrası aşırı duyarlılık azaltmak için tavsiye edilirsahte kontrolleri. </li><li> Hayvanlar testten önce 15 dakika boyunca ortama alışmalarına izin verin. </li><li> Artan kuvvetleri bir dizi, her bir arka pençenin plantar yüzeyine von Frey filamentleri uygulanır. Notlar: von Frey filamanları kalibre çaplarda plastik kıllar bulunmaktadır. Bunlar, 5 cm uzunluğunda ve elle tutulan aplikatörler sabitlenir. Filament uygulamanın hızı, bükme ve uygulama süresi derecesi bu test 3 ile elde edilen eşik değerleri etkileyebilir. Farelerde, bu prosedür ile, en sık kullanılan filamanlar 0.16, 0.4, 0.6, 1, 1.4, 2, 4, 6, 8, ve 10 gr arasındadır. <ol><li> Filaman sadece eğilir kadar sol pençenin plantar yüzeyine seçilen filament uygulanır. Yordam 3-5 kez arka arkaya tekrarlayın ve sonra sağ ayağının için aynı şeyi. Filaman her iki ayak üzerinde test edilmiştir, bir sonraki hayvan test edin. Notlar: daha duyarlı olabilir pençe yanal sınırları kaçının. Beklenen yanıt bir pençeçekilme, ani kaçınma veya yalama. En az üç beklenen tepkiler beş çalışmaların dışında dikkat edilmesi halinde olumlu yanıtı düşünün. Belirli bir pençe her zaman üç kez test edilmiş, ancak dördüncü ve beşinci denemeler yapılır sadece 1 veya 2 yanıt (lar) ilk üç testler sırasında gözlemlenen () idi edilir. C57BL/6J fareler olarak, 1.4 g filament ile, operasyon öncesi testleri başlar. Ameliyattan sonra, 0.4 g filament ile testler başlar. Olumlu bir yanıt ilk test filament ile gözlenir, adım 4.3.2 (yerine, daha yüksek) daha düşük güç bir filaman test edin. </li><li> 4.3.1 prosedüre göre sonraki hayvanlara aynı filament uygulanır. Tüm hayvanlar test edildikten sonra, daha fazla kuvvet sonraki filament ile ilk hayvan yeniden başlar. Tüm fareler olumlu bir yanıt vermek kadar işlemi tekrarlayın. Notlar: Test Her hayvan iki ardışık filamentler olumlu bir yanıt vermek kadar. Pençe zekâ gibi olumlu yanıt verdi alt filamanın gram değerini düşününBu hayvan için hdrawal eşik. </li></ol></li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

&quot;Ağzı&quot; modeli, ilk olarak siyatik sinir çevresine birden çok 6 ağızlarının implantasyonu ile standart ve tekrarlanabilir kronik sıkışma yaralanması elde etmek için farelerde geliştirilmiştir. Daha sonra bazı araştırma grupları yine birden manşet ekleme 19-22 kullanmak bile, tek bir manşet 7,8 implant için güncellenmiştir. Daha sonra transgenik hayvanlar kullanma imkanı açılmış farelere 9,23, uyarlanmıştır. Manşet, genellikle 2 mm uzunluğunda, ancak diğer uzunlukları aynı zamanda sıçanlarda 22 kullanılmıştır. Polietilen boru türlere bağlıdır: farelerde 9 PE-20, ve farelerde PE-60, 24,25 ya da PE-90 7,8,26,27. Mekanik alodinia von Frey saçları ile ölçülür. Bu testte, pençe çekme eşikleri için mutlak değerler, hayvanın ya da 3, 28, bükme filamanın süresi üzerine üzerinde durduğu yüzeye bağlı olabilir, ancak bu faktörlerin yoknöropatik alodinia algılama etkiler. &quot;Manşet&quot; model nöropatik ağrı mekanizmalarının çalışması için ilgi. Bu miyelinli ve miyelinsiz lifler 6,29, ve duyusal nöronlar, birincil afferentlerinden ve spinal nöronların 19,21,22,30-35 fonksiyonel değişiklikler morfolojik değişiklikleri incelemek için kullanılmıştır. Bu glial aktivasyon ve nöronal anyon degrade merkezi bir kayma aktivite ve spinal nosiseptif nöronların yanıtları ve nöropatik alodinya 24,36-38 değişikliklere katılmak gösteri izin verdi. Opioid reseptörlerinin 16,42-45 ve nikotinik reseptörlerin 46 glutamat reseptörlerinin 7,39-41 gibi bir etkisi de, bu modelde incelenmiştir. Modelin bir diğer ilgi nöropatik ağrı, yani., Gabapentinoids ve antidepresanlar mevcut tedavilere olan yanıttır. Benzer klinik gözlemler: gabapentinoids a hem de gösterilecekn, yüksek dozda akut kısa süreli analjezik işlemi ve uygun bir dozda inhibitörleri akut ağrı kesici etkisi muamele, trisiklik antidepresanlar, seçici serotonin ve noradrenalin geri alım birkaç gün sonra gözlemlenmiştir ama giderici gecikmeli sürekli göstermek bir gecikmeli sürekli hareket giderici 1-2 hafta tedavi ve seçici serotonin geri alım inhibitörü olan fluoksetin gerektirir hareket 16 etkisizdir. Model hastalar 48-51 sınamak için yeni tedavi hedefleri ortaya çıkarabilir, bu bakımlarla 16-18,44,45,47 altında yatan moleküler mekanizmayı incelemek uygun olur. Son olarak, model aynı zamanda, nöropatik ağrının anxiodepressive sonuçlarından çalışma sağlar. Klinik olarak, bu sonuçların nöropatik ağrı hastalarının yaklaşık üçte etkileyebilir ancak klinik öncesi daha az ağrı duyusal açıdan daha incelenmiştir. Bu modelde, anksiyete ve depresyon gibi bir zamana bağlı gelişimisive gibi fenotipleri mevcut 52 ve ilgili mekanizma böylece ele alınabilir. Nöropatik ağrı, bu fare modelinde standart manşet ve işlemleri mekanik alodini için düşük bir değişkenlik neden olur. Genetik olarak tadil edilmiş hayvanlar 17,18,44-47,52, uzun süreli allodini kullanımı olasılığı, klinik olarak kullanılan tedavilere yanıt ve anxiodepressive semptomların zamana bağlı gelişimi, çeşitli yönlerini çalışma için bu model daha uygun hale getirmek ve Zaten araştırma bu alanda değerli bilgiler getirdi nöropatik ağrı ve tedavileri sonuçları.

Nöropatik ağrı genellikle kroniktir ve bir yara ya da somatosensory sistemini etkileyen bir hastalığın bir sonucu olarak ortaya çıkar. Merkezi sinir sistemi içinde yaralı duyu nöronlarında ve tüm yol boyunca nosiseptif uyumsuz değişiklikler bu kompleks sendromu katılabilir. Çeşitli modelleri, nöropatik ağrı ve tedavileri 1-3 okuyan kemirgenler geliştirilmiştir. Diyabette gözlenen polinöropati, periferik sinirler, merkezi yaralanmalar, trigeminal nevralji, kemoterapi, post-herpetik nevralji, vb ardışık nöropatilere için yaralanmaları taklit bilinen etiyolojilerin, nöropatik ağrı amaç modellere dayalı Farklı modeller kemirgenlerde periferik sinir yaralanması siyatik sinir odaklanın. Bu modeller, bir sıkıştırma ve / veya bu sinirin bir bölüm bağlıdır. Nitekim, siyatik sinir göreli kolay ameliyat tanıyor ve pençe çekme refleksleri dayalı testler için izin verir. Mokronik sinir sıkışmasının dels örneğin şunlardır: kronik sıkışma yaralanması (CCI) 4,5, 6-9 okşuyorlardı siyatik siniri, kısmi siyatik sinir ligasyonu (PSL) 10, spinal sinir ligasyon (SNL) 11, ya da ortak peroneal sinir ligasyonu 12. &quot;Kurtulmuş sinir hasarı&quot; (SNI) olarak adlandırılan modeller de yaygın olarak kullanılmaktadır. Üçüncü şube 13-15 bozulmadan Onlar, sıkı ligasyonu ve siyatik sinirin üç terminal dalların üzerinden iki axotomy oluşmaktadır. Siyatik siniri hedef nöropatik ağrı çeşitli modelleri, yaralı arka pençe üzerinde kronik mekanik alodinya (normal olmayan nosiseptif uyaran bir nosiseptif yanıt) sonuçlanabilir. Burada, farelerde nöropatik ağrı &quot;ağzı model&quot; için ayrıntılı bir cerrahi prosedür tarif edilmektedir. Bu siyatik sinir 6-9 ana dalı etrafına bir polietilen manşetin implantasyon oluşur. Thvon Frey filaman e kullanımı da tarif edilmektedir. Bu filamanlar, bu modelde mevcut olan bir uzun süreli bir nosiseptif belirtisidir mekanik alodinia değerlendirmesi izin verir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:633px;" width="633">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:111px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:188px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PE-20 polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td>PY2-59-8323</td>
			<td>Splitted before surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ketamine</td>
			<td>Centravet</td>
			<td>IMA004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Xylazine HCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X1251</td>
			<td>Freshly prepared before surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ocry-gel</td>
			<td>Centravet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Plier</td>
			<td>FST</td>
			<td>11003-12</td>
			<td>52.5 mm straight</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bulldog clamp</td>
			<td>FST</td>
			<td>p130 18038-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Perforated plate</td>
			<td>CTTM</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">von Frey filaments</td>
			<td>Bioseb</td>
			<td>NC-12775</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the sciatic nerve cuffing model of neuropathic pain in mice

Nöropatik ağrı, bir yara ya da somatosensory sistemini etkileyen bir hastalığın bir sonucu olarak ortaya çıkar. Yaralı duyu nöronlarının ve merkezi sinir sistemi içinde, tüm yol boyunca nosiseptif uyumsuz değişiklikler bu sendrom ile sonuçlanır. Genellikle kronik ve tedavi etmek zordur. Nöropatik ağrı ve tedavileri incelemek için, farklı model kemirgenlerde geliştirilmiştir. Bu modeller dolayısıyla periferik sinir yaralanmaları, merkezi yaralanmaları, ve metabolik-enfeksiyöz veya kemoterapi-ilişkili nöropatiler üreten, bilinen etiyolojilerden türetmek. Periferik sinir yaralanması kemirgen modelleri genellikle kolay erişim ve arka pençe nosiseptif testleri verir siyatik siniri hedef. Bu modeller, bir sıkıştırma ve / veya bir bölümüne dayanır. Burada, farelerde nöropatik ağrı &quot;ağzı model&quot; için ayrıntılı bir cerrahi prosedür tarif edilmektedir. Bu modelde, standart uzunlukta (2 mm) bir PE-20 polietilen bir boru ağzı tek taraflı isiyatik sinirin ana dal etrafında mplanted. Bu, uzun süreli mekanik allodini indükler, yani., Von Frey filamentleri kullanılarak değerlendirilebilir bir normal olarak nosiseptif uyarıcı bir nosiseptif tepki. Ayrıntılı cerrahi ve test prosedürleri yanı sıra, nöropatik ağrının duyusal ve anxiodepressive yönleri çalışma için nöropatik ağrı mekanizmasının, çalışma ve nöropatik ağrı tedavisi için, bu çalışma modelin ilgi de tartışılmıştır.

± SEM olarak veriler ifade edilir. İstatistiksel analizler varyans çok faktörlü analizi (ANOVA) veya deney tasarımına uygun olarak çiftlenmemiş t-testi kullanılarak yapıldı. Bu analizler için, Sham ve Manşet cerrahi grupları yanı sıra ilaç tedavileri vs tuzlu arası grup faktörler olarak kabul edildi. Uygun olduğunda, tekrar ölçmek analizler zaman süreci verileri için kullanılmıştır. Post-hoc karşılaştırmalar Duncan testi kullanılarak yapıldı. İstatistiksel anlamlılık p &lt;0.05 olarak kabul edildi. , Yukarıda tarif edilen prosedürler kullanılarak zaman, bir ipsilateral alodinya olarak manşon implantasyon sonuçları Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi. Fare test prosedürüne alışmış sonra, von Frey testi pençe çekme eşikleri için değerler, zaman içinde stabil olan ve Sham hayvanlarda gösterildiği gibi, tek başına cerrahi prosedürün etkilenmez. Ancak olmalıdırbir geçiş ameliyat sonrası alodinia genellikle Sham farelerde gözlenebilir kaydetti. Örneğin allodini mevcut olduğunda, pençe geri çekme tepkisi bir kaç gün sonra, ameliyat sonrası başlangıç ​​değerine geri döner. Manşet farelerde, ipsilateral alodini ilk gün sonrası cerrahi zaten mevcut ve fazla 2 ay süreyle muhafaza edilir (bkz. 9 ve Şekil 1; F8, 344 = 29.5, p &lt;0.001). Yukarıda tarif edildiği gibi bu von Frey testi ile ölçüldüğünde, manşet kaynaklı alodinia C57BL/6J fareler ipsilateral kalır, ancak diğer durumlarda karşı taraftaki pençe allodini bir varlığı da 8 gözlenebilir. Taban için mutlak değerler, C57BL/6J fareler, 4 ve 6 g arasında, genellikle, ancak test protokolü bu değerleri etkileyebilir. Trisiklik antidepresanlar, nöropatik ağrı için klinik birinci basamak tedaviler arasındadır. Bu modelde, trisiklik antidepresan ilaç nortriptilin (5 mg / kg, karın içinden, günde iki kez) rŞekil 2&#39;de gösterildiği gibi, tedavi yaklaşık 2 hafta sonra nöropatik allodini elieves (F7, 91 = 15.3, p &lt;0.001, post-hoc (CuffNor = Sham)&gt; CuffSal p &lt;0.001 gün 29-34). Bu dozda, antidepresan akut analjezik hareket 16,17 görülmektedir. Bu tür ilaçları kullanan hastalarda mevcut süreli ağrı kesici taklit etmek, fareler sonrasında değil sabah ilaç verilmesinden önce test edilebilir. Böyle bir prosedür tedavi, önceki gün ile astarlanmalıdır uzun süreli etkisinin değerlendirilmesini sağlar. Bu durumda, bu nöropatik alodinia bir uzun süreli rahatlama gözlemlemek için tedavi 1-2 hafta gereklidir. Tedavi kesildiğinde, bir nüks genellikle 3-4 gün 18 içinde görülmektedir. Bazı antidepresanlar yanında, gabapentinoids nöropatik ağrı için diğer ilk tercih tedaviler vardır. Gabapentin Bu modelde 16 bir akut ve geçici bir analjezik etkiye sahip, ama aynı zamanda bir gecikmeli ve lon görüntüler<html> g-süreli (Şekil 3, p &lt;0.001), ilacın verilmesinden önce her gün hayvan test ederken antialodinik eylemi. Bu eylem antidepresan ilaçlar ile daha hızlıdır. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1.jpg" /> Istikrarlı bir temel (baz grafik üzerinde alanına 0 temsil edilir) ürün elde edilene kadar, farelerde nöropatik ağrı manşet modelinde Şekil 1. Mekanik pençe çekme eşikleri. Yetişkin erkek C57BL/6J fareler, von Frey prosedüre alıştırılmıştır. Her iki pençeleri test edilmiştir. Alçaltılmış pençe çekme eşikleri (grup başına n = 10) ile gösteriyordu Cuff farenin ipsilateral mekanik allodini görüntüler. tp_upload/51608/51608fig2.jpg &quot;/&gt; Bir trisiklik antidepresan Şekil 2.. Gecikmeli antialodinik etki. Iki hafta ameliyat sonrası sonra, farenin grup başına% 0.9 NaCI ya da 5 mg / kg nortriptilin hidroklorür (n = 5 ya da 6 ya da birlikte günde iki kez (sabah ve akşam) intraperitoneal tedavi .) Von Frey testi sabah tedavi öncesi yapıldı. Bu işlem ile, nortriptilin gecikmiş bir antialodinik etki tedavi yaklaşık 12 günü gerektirir, görülmektedir. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3.jpg" /> Bir gabapentinoid Şekil 3. Antiallodinik action. Üç hafta ameliyat sonrası sonra, farenin% 0.9 NaCI ya da 10 mg / kg gabapentin (grup başına n = 5) ya da günde iki kez (sabah ve akşam) intraperitoneal tedavi. Von Frey testi sabah tedavi önce yapıldıment. Bu işlem ile, gabapentinin bir geciktirilmiş ve kalıcı bir antialodinik etki görülmektedir. Veri tedavi başlamadan önce ve tedavi 6. gününde sunulmaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice at JoVE.com

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

Nöropatik ağrı somatosensory sistemini etkileyen bir yara ya da hastalık, bir sonucudur. Farelerde nöropatik ağrı &quot;ağzı model&quot; siyatik sinirin ana dal etrafında bir polietilen manşetin implantasyon oluşur. Mekanik alodinia von Frey filamentleri kullanılarak test edilir.

Farelerde Nöropatik Ağrı Siyatik Sinir cuffing Modeli

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

the-sciatic-nerve-cuffing-model-of-neuropathic-pain-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

47.9K Görüntüleme.  Centre National de la Recherche Scientifique.  Nöropatik ağrı somatosensory sistemini etkileyen bir yara ya da hastalık, bir sonucudur. Farelerde nöropatik ağrı "ağzı model" siyatik sinirin ana dal etrafında bir polietilen manşetin implantasyon oluşur. Mekanik alodinia von Frey filamentleri kullanılarak test edilir. 

Video: The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

The Spared Nerve Injury (SNI) Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared nerve injury (SNI) model induces symptoms of neuropathic pain such as mechanical allodynia i.e. pain due to tactile stimuli that do not normally provoke a painful response [1]. 
The SNI mouse model involves ligation of two of the three branches of the sciatic nerve (the tibial nerve and the common peroneal nerve), while the sural nerve is left intact [2]. The lesion results in marked hypersensitivity in the lateral area of the paw, which is innervated by the spared sural nerve. The non-operated side of the mouse can be used as a control. The advantages of the SNI model are the robustness of the response and that it doesn&#x2019;t require expert microsurgical skills.
The threshold for mechanical pain response is determined by testing with von Frey filaments of increasing bending force, which are repetitively pressed against the lateral area of the paw [3], [4]. A positive pain reaction is defined as sudden paw withdrawal, flinching and/or paw licking induced by the filament. A positive response in three out of five repetitive stimuli is defined as the pain threshold. 
As demonstrated in the video protocol, C57BL/6 mice experience profound allodynia as early as the day following surgery and maintain this for several weeks.

The Spared Nerve Injury SNI Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

The Spared Nerve Injury animal model is described here as a mouse model of peripheral neuropathic pain following partial denervation of the sciatic nerve by lesioning the tibial and common peroneal nerve branches, leaving the remaining sural nerve intact. Behavioral modification resulting from mechanical allodynia is quantified by von Frey filaments.

Fare İndüklenmiş Mekanik allodini ayrılan sinir hasarı (SNI) Model

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared ...

Tıp

Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of the population1,2. Symptoms include spontaneous (tingling, burning, electric-shock like) pain, dysaesthesia, paraesthesia, allodynia (pain resulting from normally non-painful stimuli) and hyperalgesia (an increased response to painful stimuli). The sensory symptoms are co-morbid with behavioural disabilities, such as insomnia and depression. To study chronic neuropathic pain several animal models mimicking peripheral nerve injury have been developed, one of the most widely used is Bennett and Xie's (1988) unilateral sciatic nerve chronic constriction injury (CCI)3 (Figure 1). Here we present a method for performing CCI and testing pain hypersensitivity.
CCI is performed under anaesthesia, with the sciatic nerve on one side exposed by making a skin incision, and cutting through the connective tissue between the gluteus superficialis and biceps femoris muscles. Four chromic gut ligatures are tied loosely around the sciatic nerve at 1 mm intervals, to just occlude but not arrest epineural blood flow. The wound is closed with sutures in the muscle and staples in the skin. The animal is then allowed to recover from surgery for 24 hrs before pain hypersensitivity testing begins.
For behavioural testing, rats are placed into the testing apparatus and are allowed to habituate to the testing procedure. The area tested is the mid-plantar surface of the hindpaw (Figure 2), which falls within the sciatic nerve distribution. Mechanical withdrawal threshold is assessed by mechanically stimulating both injured and uninjured hindpaws using an electronic dynamic plantar von Frey aesthesiometer or manual von Frey hairs4. The mechanical withdrawal threshold is the maximum pressure exerted (in grams) that triggers paw withdrawal. For measurement of thermal withdrawal latency, first described by Hargreaves et al (1988), the hindpaw is exposed to a beam of radiant heat through a transparent glass surface using a plantar analgesia meter5,6. The withdrawal latency to the heat stimulus is recorded as the time for paw withdrawal in both injured and uninjured hindpaws. Following CCI, mechanical withdrawal threshold, as well as thermal withdrawal latency in the injured paw are both significantly reduced, compared to baseline measurements and the uninjured paw (Figure 3). The CCI model of peripheral nerve injury combined with pain hypersensitivity testing provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to modify chronic neuropathic pain. In our laboratory, we utilise CCI alongside thermal and mechanical sensitivity of the hindpaws to investigate the role of neuro-immune interactions in the pathogenesis and treatment of neuropathic pain.

Due to the simplicity of surgery and the robust behavioural outcome, chronic constriction of the sciatic nerve is one of the pre-eminent animal models of neuropathic pain. Within 24 hrs following surgery, pain hypersensitivity is established and can be quantitatively measured using a von Frey aesthesiometer (mechanical test) and plantar analgesia meter (thermal test).

Siyatik Sinir Sıçanlarda Ağrı aşırı duyarlılık Test Kronik daraltma

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of ...

Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim) for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. It has been extensively used in various clinical settings. Based upon recent discoveries related to the systemic effects of voluntary breathing and intrinsic physiological interactions among systems during voluntary breathing, a new EStim protocol, Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim), has been developed to augment the effects of electrical stimulation. In BreEStim, a single-pulse electrical stimulus is triggered and delivered to the target area when the airflow rate of an isolated voluntary inspiration reaches the threshold. BreEStim integrates intrinsic physiological interactions that are activated during voluntary breathing and has demonstrated excellent clinical efficacy. Two representative applications of BreEStim are reported with detailed protocols: management of post-stroke finger flexor spasticity and neuropathic pain in spinal cord injury.

Breathing-controlled Electrical Stimulation BreEStim for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

The purpose is to present a new method, breathing-control electrical stimulation (BreEStim) for management of neuropathic pain and spasticity.

Nöropatik Ağrı ve Spastisite Yönetiminde Solunum kontrollü Elektriksel Stimülasyon (BreEStim)

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. ...

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. Although originally developed and used extensively in the rat due to its larger size, the tibial nerve in mice is big enough that it can be easily manipulated with either crush or transection, leaving the peroneal and sural nerve branches of the sciatic nerve intact and thereby preserving their target muscles. Thus, this model offers the advantages of inducing less morbidity and impediment of ambulation than the sciatic nerve transection model and also allows investigators to study the physiologic, cellular and molecular biologic mechanisms regulating the process of muscle atrophy in genetically engineered mice. The tibial nerve supplies the gastrocnemius, soleus and plantaris muscles, so its transection permits the study of denervated skeletal muscle composed of fast twitch type II fibers and/or slow twitch type I fibers. Here we demonstrate the tibial nerve transection model in the C57Black6 mouse. We assess the atrophy of the gastrocnemius muscle, as a representative muscle, at 1, 2, and 4 weeks post-denervation by measuring muscle weights and fiber type specific cross-sectional area on paraffin-embedded histologic sections immunostained for fast twitch myosin.

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of skeletal muscle atrophy. The model surgical protocol is described and demonstrated in C57Black6 mice. &#160;

Tibial Sinir transeksiyonu - Farelerde denervasyon bağlı İskelet Kas Atrofi için bir Standart Model

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

Farelerde Mesane Ağrı için bir model olarak Mesane Distansiyonunun Uyarılmış Visceromotor Cevapları

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and either cut or crush it to induce peripheral nerve injury. Advantages of this surgery are its simplicity, high reproducibility, and the lack of effect on vital functions or mobility from the subsequent facial paralysis, thus resulting in a relatively mild surgical outcome compared to other nerve injury models. A major advantage of using a cranial nerve injury model is that the motoneurons reside in a relatively homogenous population in the facial motor nucleus in the pons, simplifying the study of the motoneuron cell bodies. Because of the symmetrical nature of facial nerve innervation and the lack of crosstalk between the facial motor nuclei, the operation can be performed unilaterally with the unaxotomized side serving as a paired internal control. A variety of analyses can be performed postoperatively to assess the physiologic response, details of which are beyond the scope of this article. For example, recovery of muscle function can serve as a behavioral marker for reinnervation, or the motoneurons can be quantified to measure cell survival. Additionally, the motoneurons can be accurately captured using laser microdissection for molecular analysis. Because the facial nerve axotomy is minimally invasive and well tolerated, it can be utilized on a wide variety of genetically modified mice. Also, this surgery model can be used to analyze the effectiveness of peripheral nerve injury treatments. Facial nerve injury provides a means for investigating not only motoneurons, but also the responses of the central and peripheral glial microenvironment, immune system, and target musculature. The facial nerve injury model is a widely accepted peripheral nerve injury model that serves as a powerful tool for studying nerve injury and regeneration.

We present a surgical protocol detailing how to perform a cut or crush axotomy on the facial nerve in the mouse. The facial nerve axotomy can be employed to study the physiological response to nerve injury and test therapeutic techniques.

Farelerde Yüz Sinir Aksotomi: Sakatlık Motonöron Yanıtı Eğitim için Bir Model

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve (IoN-CCI) to Study Trigeminal Neuropathic Pain

Animal models are important tools to study the pathophysiology and pharmacology of neuropathic pain. This manuscript describes the surgical and behavioral procedures to study trigeminal neuropathic pain in rats. To meet the specificity of trigeminal neuropathic pain syndromes, the infraorbital nerve (IoN) is subjected to a chronic constriction injury (CCI) by loosely ligating the nerve. An intra-orbital approach is presented here to expose and ligate the IoN in the orbital cavity. After IoN ligation, rats exhibit changes in spontaneous behavior and in response to von Frey hair stimulation that are indicative of persistent pain and mechanical allodynia. Two phases can be defined in the development of the behavioral changes. During the first week following IoN-CCI (phase 1), rats show an increased and asymmetric face grooming activity, i.e., with face wash strokes primarily directed to the nerve-injured IoN territory. A distinction is made between face grooming behavior that is part of a more general body grooming behavior, which remains largely unaffected by IoN-CCI, and face grooming that is neither preceded nor followed by body grooming, which is significantly increased after IoN-CCI. During this period, responsiveness to mechanical stimulation of the IoN territory is reduced. This hyporesponsiveness is abruptly replaced by an extreme hyperresponsiveness whereby even very weak stimulus intensities provoke nocifensive behavior (phase 2). The phenomenological similarities between these behavioral alterations and reported signs of facial pain (i.e., responses to noxious stimulation of the face) suggest the presence of dysesthesia/paresthesia and mechanical allodynia in the ligated IoN territory.

Chronic Constriction Injury of the Rat&#039;s Infraorbital Nerve IoN-CCI to Study Trigeminal Neuropathic Pain

This manuscript describes a rodent model to study trigeminal neuropathic pain. The methods described include surgical procedures to perform a chronic constriction injury of the rat&#8217;s infraorbital nerve and the post-surgical behavioral tests to measure the changes in spontaneous and evoked behavior that are indicative of persistent pain and allodynia.

Trigeminal Nöropatik Ağrı Eğitim için Rat adlı infraorbital Sinir (ION-CCI) kronik Daralma Yaralanma

Animal models are important tools to study the pathophysiology and pharmacology of neuropathic pain. This manuscript describes the surgical and behavioral ...

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The current treatments for OA pain such as NSAIDS or opiates are neither sufficiently effective nor devoid of detrimental side effects. Animal models of OA are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms and define novel pharmacological targets for therapy. Currently available models of OA in rodents include surgical and chemical interventions into one knee joint. The monoiodoacetate (MIA) model has become a standard for modelling joint disruption in OA in both rats and mice. The model, which is easier to perform in the rat, involves injection of MIA into a knee joint that induces rapid pain-like responses in the ipsilateral limb, the level of which can be controlled by injection of different doses. Intra-articular injection of MIA disrupts chondrocyte glycolysis by inhibiting glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase and results in chondrocyte death, neovascularization, subchondral bone necrosis and collapse, as well as inflammation. The morphological changes of the articular cartilage and bone disruption are reflective of some aspects of patient pathology. Along with joint damage, MIA injection induces referred mechanical sensitivity in the ipsilateral hind paw and weight bearing deficits that are measurable and quantifiable. These behavioral changes resemble some of the symptoms reported by the patient population, thereby validating the MIA injection in the knee as a useful and relevant pre-clinical model of OA pain.
The aim of this article is to describe the methodology of intra-articular injections of MIA and the behavioral recordings of the associated development of hypersensitivity with a mind to highlight the necessary steps to give consistent and reliable recordings.

Osteoarthritis (OA), or degenerative joint disease, is a debilitating condition associated with pain that remains only partially controlled by available analgesics. Animal models are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms. Here we describe the methodology for the monoiodoacetate model of OA pain in the mouse.

Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

Subcutaneous Trigeminal Nerve Field Stimulation for Refractory Facial Pain

Chronic or neuropathic trigeminal facial pain can be challenging to treat. Neurosurgical procedures should be applied when conservative treatment fails. Neuromodulation techniques for chronic facial pain include deep brain stimulation and motor cortex stimulation, which are complex to perform. Subcutaneous nerve field stimulation is certified for chronic back pain and is the least invasive form of neuromodulation. We applied this technique to treat chronic and neuropathic trigeminal pain as an individual therapy concept. First, trial stimulation is performed. Subcutaneous leads are placed in the painful trigeminal dermatome under local anesthesia. The leads are connected to an external neurostimulator that applies constant stimulation. Patients undergo a 12 day outpatient trial to assess the effect of the stimulation. Electrodes are removed after the trial. If the patient reports pain reduction of at least 50% in intensity and/or attack frequency, a reduction in medication or increase in quality of life, permanent implantation is scheduled. New electrodes are implanted under general anesthesia and are subcutaneously tunneled to an infraclavicular internal pulse generator. Patients are able to turn stimulation on and off and to increase or decrease the stimulation amplitude as needed.
This technique represents a minimal invasive alternative to other more invasive means of neuromodulation for trigeminal pain such as motor cortex stimulation or deep brain stimulation.

Treating chronic or neuropathic facial pain can be challenging when medical or standard treatment fails. Subcutaneous nerve field stimulation is the least invasive form of neuromodulation and is used for chronic back pain. We applied this technology to treat chronic and neuropathic trigeminal facial pain.

Refrakter Yüz Ağrısı İçin Subkutan Trigeminal Sinir Sahası Stimülasyonu

Chronic or neuropathic trigeminal facial pain can be challenging to treat. Neurosurgical procedures should be applied when conservative treatment fails. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...