이 작품은 (IY에) 두뇌 게임 및 행동 연구 재단에서 센터 내셔널 드 라 공들인 Scientifique (계약 UPR3212), 스트라스부르 대학과 NARSAD 젊은 탐정 그랜트에 의해 지원되었다. 출판 비용은 Neurex 네트워크 (프로그램 INTERREG IV 어퍼 라인)에 의해 지원된다.

프로토콜은 &quot;위원회 (CCT) D&#39; ETHIQUE EN MATIERE 디부 실험 ANIMALE 드 스트라스부르&quot;(CREMEAS)에 의해 승인되었습니다. 발 탈퇴 임계 값의 1.베이스 라인 측정 <ol><li> 마우스는 시험 절차를 시작하기 전에 이주에 적어도 10 일 동안 동물 시설 길들 허용. </li><li> 본 프레이 테스트 셋업과 4 장에서 설명하는 본 프레이 절차에 마우스를 길들. </li><li> 수술하기 전에 4.3 절에 설명 된대로 본 프레이 필라멘트와 기계 발 철수 임계 값을 평가합니다. 참고 : 적어도 세 안정적으로 연속 값이 발 철수 임계 값에 얻을 때까지 다른 일에 절차를 반복합니다. </li><li> 이 그룹은 처음 발 철수 임계 값에 차이가되지 않도록 다른 실험 그룹에 마우스를 할당합니다. </li></ol> 팔목 Implantati 2. 수술 절차에 <ol><li> 동물의 무게를 측정. 참고 : 마우스 체중 후술 커프스 삽입 절차 20g 이상이어야한다. </li><li> 케타민 (17 ㎎ / ㎖) 및 마취 약 45 분을 제공 0.9 %의 NaCl에서 자일 라진 (2.5 ㎎ / ㎖)의 혼합물을 4 ㎖ / kg의 복강 내 주사로 동물을 마취. </li><li> 핀셋 뒷 발을​​ 집어 발 반사의 부재를 확인하고 동물이 완전히 마취되어 있는지 확인하기 위해 눈 반사의 부재를 확인합니다. </li><li> 전기 면도기를 사용하여 엉덩이에 무릎에서 오른쪽 다리를 면도. </li><li> 면봉으로 눈에 눈 보호 액체 젤을 적용합니다. </li><li> 그 왼쪽에 동물을 배치하고 작은 베개에 오른쪽 뒷다리를 배치하고 접착 테이프로 베개에 오른쪽 뒷다리를 유지한다. </li><li> 거즈 패드 나 면봉을 사용하여 클로르헥시딘 70 % 에탄올로 수술 필드를 소독. </li><li> 집게 손가락을 사용하여 대퇴골을 찾아 확인약 0.5 cm의 절개는 대퇴골의 대퇴골과 약 1.5 mm 전방에 평행. </li><li> 두 멸균 스틱 대퇴골에 가까운 근육을 분리합니다. 주의 사항 : 근육을 절단하지 마십시오. 일반적으로 근육 층은 출혈없이 쉽게 분리 및 좌골 신경은 볼 수 있습니다. 출혈의 경우, 혈액을 흡수하는 멸균 면봉을 사용합니다. </li><li> 주요 지점을 노출하는 좌골 신경 아래 두 멸균 스틱을 삽입하고, 멸균 생리 용액 (0.9 % 염화나트륨)과 신경을 수화. </li><li> 분할 PE-20 폴리에틸렌 튜브 (커프스) 날카로운 강철 스틱의 도움과 불독 클램프, 0.38 mm의 ID / 1.09 mm 외경의 사전 준비 멸균 2mm 부분을 잡습니다. <ol><li> 약간을 열 때, 팔목에 날카로운 강철 막대기를 삽입합니다. </li><li> 커프 측면 개구를 사용하여, 커프스의 한쪽 끝에 불을 삽입하고 커프 평행. 그것은으로 커프를 개최 있도록 불독 (180 °) 회전측면 개방에 반대면. 불독을 닫고 날카로운 강철 막대기를 제거합니다. 참고 : 회전이 들고 온 커프 삽입에 최적화 된 위치에, 불독 클램프도 부분적으로 개방 커프를 유지하는 데 도움이되는 수 있도록하기위한 것입니다. 모델 및 불독 클램프의 크기가 절차의이 단계에 중요하다. </li></ol></li><li> 두 번째 실험은 신경에서 두 개의 스틱을 잡고 부드럽게 약 4 mm 길이입니다 좌골 신경의 한 부분에 대한 액세스를 용이하게하기 위해 스틱을 분리해야합니다. </li><li> 엉덩이에 인접하다 신경의 부분의 주위에 불에 말단 인 커프스 부분을 삽입하여 시작, 좌골 신경의 주요 지점의 주위에 2mm의 커프를 삽입합니다. </li><li> 튜브의 형태를 압박하거나 변경하지 않고, 플라이어와의 두 말단 측에 압력을 행사하여 부드럽게 팔목을 닫습니다. 올바르게 닫혀 있는지 확인하기 위해 커프를 켭니다. </li><li> 면도, 피부 층의 재치를 봉합H 수술 매듭. </li><li> 깨끗한 집 케이지의 왼쪽에 마우스를 놓습니다. 마우스가 깨어 때까지 가열 램프 아래에 보관하십시오. </li><li> 여분의 물을 추가하고 홈 케이지에 직접 어떤 중국 사람을 배치합니다. </li></ol> 샴 제어 3. 수술 절차 <ol><li> 단계 2.15-2.17으로 수행 한 다음, 2.9 단계 2.1 단계에서 전술 한 바와 같이 동일한 수술 절차를 적용한다. 가짜 컨트롤의 경우, 2.14 유일한 관심사 커프 삽입에 단계 2.10를 생략합니다. </li></ol> 4. 본 프레이 테스트 <ol><li> 부드러운 스테인리스 스틸 (1 MX 50cm, 천공 테두리 사이에 2.5 mm로 5mm의 원형 구멍)의 상승 공판에 구멍이 명확 개별 박스 (7cm X 9cm X 7cm)에 마우스를 놓습니다. 참고 : 최대 12 생쥐 병용이 세트 업에 테스트 할 수 있습니다. 운영하는 동물은 수술 후 하루 테스트 할 수 있습니다. 그러나, 복구의 3 일을 관찰 수술 후 과민 반응을 감소하는 것이 좋습니다가짜를 제어합니다. </li><li> 동물 시험을하기 전에 15 분 동안 습관화 할 수 있습니다. </li><li> 상승하는 힘의 계열의 각 뒷발의 발바닥 표면에 본 프레이 필라멘트를 적용합니다. 주의 사항 : 본 프레이 필라멘트 보정 직경의 플라스틱 머리입니다. 그들은 오래 5 cm이며, 휴대용 어플리케이터에 고정되어 있습니다. 필라멘트 애플리케이션의 속도가, 굽힘 및 애플리케이션의 재생 시간의 정도는이 테스트 3으로 수득되는 임계 값에 영향을 미칠 수있다. 마우스에서 본 절차, 가장 자주 사용되는 필라멘트는 0.16, 0.4, 0.6, 1, 1.4, 2, 4, 6, 8, 10g이다. <ol><li> 필라멘트 단지 굴절 될 때까지 왼쪽의 발바닥 표면에 선택 필라멘트를 적용합니다. 절차에게 3-5 회 연속 반복 한 다음 오른쪽 발에 동일한 작업을 수행. 필라멘트는 양쪽 발에서 테스트되면, 다음 동물을 시험한다. 참고 : 더 민감 할 수 있습니다 발 측면 테두리를하지 마십시오. 예상 응답은 발입니다철수, 갑자기 주춤하거나 발을 핥는. 적어도 세 예상 응답이 다섯 시험 중 관찰되는 경우에 긍정적으로 응답을 고려하십시오. 주어진 발은 항상 세 번 테스트,하지만 네 번째와 다섯 번째 시험이 완료되는 경우에만 1 또는 2 응답 (들)은 처음 세 개의 테스트 동안 관찰 (했다)였습니다. C57BL/6J 마우스에서 1.4 g 필라멘트와 미리 수술 테스트를 시작합니다. 수술 후, 0.4 g 필라멘트와 테스트를 시작합니다. 긍정 응답이 제 시험 필라멘트 관찰되면, 단계 4.3.2에서 (대신 그 이상) 낮은 힘의 필라멘트를 테스트한다. </li><li> 4.3.1 절차에 따라 다음 동물에 같은 필라멘트를 적용합니다. 모든 동물이 테스트되면, 더 큰 힘의 다음 필라멘트와 첫 번째 동물에 다시 시작합니다. 모든 쥐가 긍정적 인 응답을 줄 때까지 절차를 반복합니다. 주의 : 시험 각 동물 두 개의 연속 된 필라멘트가 긍정적 인 응답을 줄 때까지. 발 재치로 긍정적 인 반응을 준 낮은 필라멘트의 그램 값을 고려이 동물에 대한 hdrawal 임계 값. </li></ol></li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

&quot;커프&quot;모델은 처음에 좌골 신경 6 주위에 여러 소맷 부리의 주입과 표준화 및 재현 만성 수축 부상을 얻기 위해 쥐에서 개발되었다. 그것은 다음 몇 가지 연구 그룹은 여전히 여러 팔목 삽입 19 ~ 22를 사용하더라도 하나의 커프스 7,8 이식 수정되었습니다. 그 다음 형질 전환 동물을 사용할 수있는 가능성을 열었다 생쥐 9,23에 적응시켰다. 커프는 보통 2mm 긴하지만, 다른 길이도 쥐 22에 사용되었습니다. 폴리에틸렌 튜브는 종에 따라 다릅니다 마우스 9 PE-20, 및 쥐에서 PE-60 (24, 25) 또는 PE-90 7,8,26,27. 기계적 이질통은 본 프레이 머리카락으로 측정된다. 이 테스트에서, 발 철수 임계 값의 절대 값은 동물 28 3 구부리는 필라멘트의 기간에 스탠드하는 표면에 따라 달라질 수 있지만, 이러한 요인은하지 않습니다신경병 이질통의 검출에 영향을 미친다. &quot;커프&quot;모델은 신경 병증 성 통증의 메커니즘의 연구에 대한 관심입니다. 그것은 유수와 수초 섬유 6,29 및 감각 신경, 차 구 심성 신경과 척추 신경 19,21,22,30-35의 기능 변화의 형태 학적 변화를 연구하는 데 사용되었다. 그것은 아교 세포 활성화 및 신경 음이온 그라데이션의 중심 이동이 활동하고 척추 통각 신경 세포의 반응 및 신경 병증 성 이질통 24,36-38의 변화에 참여하는 것을 데모를 허용했다. 오피오이드 수용체 16,42-45과 니코틴 수용체 (46)의 글루타민산 염 수용체 7,39-41의 영향은이 모델을 연구 하였다. 모델의 또 다른 관심은 신경 병증 성 통증, 즉., gabapentinoids과 항우울제의 현재의 치료에 대한 응답이다. 임상 관찰과 유사 : gabapentinoids은 모두 표시N 높은 복용량에서 급성 짧은 지속되는 진통 작용 및 억제제 관련 투여 급성 진통 효과가없는 치료, 삼환계 항우울제 및 선택적 세로토닌과 노르 아드레날린 재 흡수의 몇 일 후에 관찰하지만 그들은 완화 지연 지속을 표시하는 지연 지속 완화 조치 1 ~ 2 주간의 치료 및 선택적 세로토닌 재 흡수 억제제 플루옥세틴을 요구 조치는 16 비효율적이다. 이 모델은 환자의 48 ~ 51에서 테스트하기 위해 새로운 치료 표적을 보여줄 수 있습니다 이러한 치료에게 16-18,44,45,47의 기초가되는 분자 메커니즘을 연구하는 것이 적절하다. 마지막으로, 모델은 신경 병증 성 통증의 anxiodepressive 결과의 연구를 할 수 있습니다. 임상 적으로, 이러한 결과는 신경 병증 성 통증 환자의 세 번째의 주위에 영향을 미치지 만, 전임상 적은 고통의 감각 측면보다 연구한다. 이 모델에서, 불안과 같은 및 depres의 시간에 따른 개발시브 같은 표현형은 본 (52)이며, 관련된 메커니즘 따라서 해결 될 수있다. 신경 병증 성 통증의이 마우스 모델에서 표준화 된 팔목과 절차는 기계적 이질통에 대한 낮은 interindividual 변화가 발생. 유전자 변형 동물 17,18,44-47,52, 오래 지속되는 이질통을 사용하는 가능성은, 임상 치료에 사용되는 반응과 anxiodepressive 증상의 시간에 따른 개발은 다양한 측면의 연구를위한 모델 적절한 만들고 이미 연구의이 분야에 가치있는 정보를 가져왔다 신경 병증 성 통증과 치료의 결과.

신경 병증 성 통증은 보통 만성 및 병변 또는 체성 시스템에 영향을주는 질환의 결과로서 발생한다. 중추 신경계 내에서 부상 감각 뉴런과 전체 통각 경로를 따라 부적응 변경이 복잡한 증후군에 참여한다. 다양한 모델은 신경 병증 성 통증의 치료 1-3을 연구 설치류에서 개발되었다. 당뇨병에서 관찰되는 신경 병증, 말초 신경, 중추 손상, 삼차 신경통, 항암 화학 요법, 포진 후 신경통 등으로 연속 신경 병증에 부상을 흉내 낸 알려진 원인 질환, 신경 병증 성 통증 목표의 모델에 따라 서로 다른 모델의 설치류에 말초 신경 손상은 좌골 신경에 초점을 맞 춥니 다. 이러한 모델은 압축 및 / 또는이 신경의 섹션에 따라 달라집니다. 실제로, 좌골 신경은 상대적으로 쉽게 수술을 가르치시 발 철수 반사에 따라 검사 할 수 있습니다. 미주리만성 신경 압축의 DELS 예를 들면 다음과 같습니다 : 만성 수축 손상 (CCI) 4, 5, 6-9을 정돈 해 놓을 좌골 신경, 부분 좌골 신경 결찰 (PSL) (10), 척수 신경 결찰 (SNL) 11, 또는 공통 비골 신경 결찰 12. &quot;아끼지 신경 손상&quot;(SNI)이라 모델도 널리 사용된다. 제 3 분기가 13-15 그대로 유지하면서 그들은 단단히 결찰 및 좌골 신경의 세 단자 가지 중 두 가지의 axotomy으로 구성되어 있습니다. 좌골 신경을 대상으로 신경 병증 성 통증의 다양한 모델, 부상 뒷발에 만성 기계적 이질통 (일반적으로 비 침해 성 자극에 대한 통각 응답) 결과. 여기에서, 마우스에있는 신경 병증 성 통증 &quot;커프스 모델」에 대한 상세한 수술 절차를 설명한다. 그것은 좌골 신경 6-9의 주요 지점 주위에 폴리에틸렌 커프스의 주입으로 구성되어 있습니다. 일본 프레이 필라멘트 전자의 사용은 설명한다. 이 필라멘트는이 모델에 존재 오래 지속 통각 증상 기계적 이질통을 평가 할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:633px;" width="633">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:111px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:188px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PE-20 polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td>PY2-59-8323</td>
			<td>Splitted before surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ketamine</td>
			<td>Centravet</td>
			<td>IMA004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Xylazine HCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X1251</td>
			<td>Freshly prepared before surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ocry-gel</td>
			<td>Centravet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Plier</td>
			<td>FST</td>
			<td>11003-12</td>
			<td>52.5 mm straight</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bulldog clamp</td>
			<td>FST</td>
			<td>p130 18038-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Perforated plate</td>
			<td>CTTM</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">von Frey filaments</td>
			<td>Bioseb</td>
			<td>NC-12775</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the sciatic nerve cuffing model of neuropathic pain in mice

신경 병증 성 통증은 병변 또는 체성 시스템에 영향을주는 질환의 결과로서 발생한다. 부상 감각 뉴런과 중추 신경계 내에서 전체 통각 경로를 따라 부적응 변경에서이 증후군은 결과. 그것은 일반적으로 만성 치료에 도전합니다. 신경 병증 성 통증의 치료를 연구하기 위해, 다른 모델은 설치류에서 개발되었다. 이러한 모델은 따라서 말초 신경 손상, 중앙 부상 및 신진 대사, 전염성 또는 화학 요법과 관련된 신경 병증을 재현, 알려진 원인 질환에서 파생됩니다. 말초 신경 손상의 뮤린 모델은 종종 액세스하기 쉽고, 뒷발에 통각 테스트를 허용 좌골 신경을 표적으로한다. 이러한 모델은 압축 및 / 또는 섹션에 의존한다. 여기에서, 마우스에있는 신경 병증 성 통증 &quot;커프스 모델」에 대한 상세한 수술 절차를 설명한다. 이 모델에서, 표준화 된 길이 (2 ㎜)의 PE-20 폴리에틸렌 튜브의 커프스는 일방적으로 내가있다좌골 신경의 주요 지점 주위에 mplanted. 그것은 오래 기계적 이질통을 유도 즉., 본 프레이 필라멘트를 사용하여 평가 될 수있다 일반적으로 비 침해 수용성 자극에 대한 통각 반응. 자세한 수술 및 테스트 절차 외에도, 신경 병증 성 통증 감각과 anxiodepressive 측면의 연구를위한 신경 병증 성 통증의 메커니즘의 연구 및 신경 병증 성 통증 치료의 연구를위한이 모델의이자에 대해서도 설명합니다.

± SEM 의미로 데이터가 표현된다. 통계 분석은 분산의 다중 요인 분석 (ANOVA) 또는 실험 설계에 따라 짝 t 검정을 사용하여 수행 하였다. 이러한 분석을 위해, 가짜와 팔목 수술 그룹뿐만 아니라 약물 치료 대 식염수 그룹 간 요인으로 간주되었다. 해당되는 경우, 반복 측정 분석은 시간 코스 데이터를 사용 하였다. 사후 비교는 던컨 테스트를 사용하여 수행 하였다. 통계적 유의성은 P &lt;0.05에서 고려 하였다. 상술 된 절차를 사용하는 경우, 동측 이질통에서 커프스 주입 결과는도 1에 도시 된 바와 같이. 마우스가 시험 절차에 순응하면, 본 프레이 시험에서의 발 움츠림 임계 값의 값은 시간에 안정적으로 유지하고있다 가짜 동물에 도시 된 바와 같이, 그 자체 외과 적 치료에 의해 ​​영향을받지 않습니다. 그러나 그것은해야일시적인 수술 후 무해 자극 통증은 일반적으로 위장 마우스에서 관찰 할 수 있다고 지적했다. 이러한 무해 자극 통증이있을 때, 발 금단 반응은 며칠 후 수술 후 초기에 반환합니다. 팔목 마우스에서 동측 이질통은 첫 번째 일 후 수술에 이미 존재하고 2 개월 이상 유지되어 (9 참조, 그림 1, F8, 344 = 29.5, P &lt;0.001). 전술 한 바와 같이이 본 프레이 시험에 의해 측정 될 때 커프 유발 이질통은 C57BL/6J 생쥐 동측 남아 있지만, 다른 조건에있는 반대측의 발에 이질통의 존재도 8을 관찰 할 수있다. 기준선에 대한 절대 값은 C57BL/6J 생쥐 4 6g 사이 일반적이지만, 시험 프로토콜은 이러한 값에 영향을 미칠 수있다. 삼환 성 항우울제는 신경 병증 성 통증에 대한 임상 첫 선 치료 중입니다. 이 모델에서, 삼환계 항우울제 노르 트립 틸린 (5 ㎎ / kg, 복강 내, 하루에 두번) R그림 2에 나타낸 바와 같이, 치료 약 2 주 후에 신경 병증 성 이질통을 elieves (F7 = 15.3 91, P &lt;0.001, 사후 (CuffNor = 샴)&gt; CuffSal P에서 &lt;0.001 일에 29-34). 이 용량에서 우울증의 급성 진통 작용은 16, 17를 관찰하지 않습니다. 이러한 약물을 복용 환자에 존재하는 지속적인 통증을 모방하기 위해, 마우스는 후가 아닌 아침 약물 투여하기 전에 테스트 할 수 있습니다. 이러한 절차는 치료 이전 일에 끝났다 오래 지속 효과의 평가를 할 수 있습니다. 이 경우에는 신경 병증 이질통 가지는 릴리프를 관찰하는 처리를 1 ~ 2 주 정도 필요하다. 치료가 중단되면, 재발은 일반적 3-4일 (18) 내에서 관찰된다. 일부 항우울제 옆 gabapentinoids는 신경 병증 성 통증에 대한 다른 첫 번째 선택 치료합니다. 가바펜틴이 모델 (16)의 급성 및 일시적인 진통 작용을 가지고 있지만, 또한 지연 및 경도를 표시<html> G 지속 (그림 3, P &lt;0.001), 약물 투여 전에 매일 동물을 테스트 할 때 antiallodynic 조치를. 이 작업은 항우울제보다 빠릅니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1.jpg" /> 안정된 기준이 (베이스 라인이 그래프에 점 0에 표시된다)를 얻을 때까지 생쥐의 신경 병증 성 통증의 커프스 모델의 그림 1. 기계 발 철수 임계 값은. 성인 남성 C57BL/6J 마우스는 본 프레이 절차에 길들여졌다. 두 발을 시험 하였다. 하향 발 철수 임계 값 (그룹 당 N = 10)에 의해 보이는 것과 같이 커프 마우스는 동측의 기계적 이질통을 표시합니다. tp_upload/51608/51608fig2.jpg &quot;/&gt; 삼환계 항우울제의 그림 2. 지연 antiallodynic 조치는. 이주 수술 후 후, 마우스는 그룹별로 0.9 % 염화나트륨 또는 5 ㎎ / ㎏ 노르 트립 틸린 염산염 (N = 5 또는 6 중 하나에 하루에 두 번 (아침과 저녁) 복강 내 치료를받은 ). 본 프레이 검사는 아침에 처리하기 전에 이루어졌다. 이 절차를, 노르 트립 틸린의 지연 antiallodynic 조치는 치료 약 12​​ 일이 요구하는 관찰된다. <img alt="그림 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3.jpg" /> gabapentinoid의 그림 3. Antiallodynic 조치는. 삼주 후 수술 후, 마우스는 0.9 %의 NaCl 또는 10 ㎎ / ㎏ 가바펜틴 (그룹 당 N = 5) 하나와 함께 하루에 두 번 (아침과 저녁) 복강 내 치료를 받았다. 본 프레이 검사는 아침에 치료하기 전에 이루어졌다MENT. 이 절차를 가바펜틴의 지연과 지속 antiallodynic 조치가 관찰된다. 데이터는 치료를 시작하기 전에 및 치료의 6 일에 발표된다.

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The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

신경 병증 성 통증은 체성 시스템에 영향을 미치는 장애 또는 질병의 결과이다. 생쥐의 신경 병증 성 통증의 &quot;팔목 모델은&quot;좌골 신경의 주요 지점 주위에 폴리에틸렌 커프스의 주입으로 구성되어 있습니다. 기계적 이질통은 본 프레이 필라멘트를 사용하여 테스트된다.

마우스의 신경 병증 성 통증의 좌골 신경의 바지를 접 모델

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

the-sciatic-nerve-cuffing-model-of-neuropathic-pain-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

47.8K 조회수.  Centre National de la Recherche Scientifique.  신경 병증 성 통증은 체성 시스템에 영향을 미치는 장애 또는 질병의 결과이다. 생쥐의 신경 병증 성 통증의 "팔목 모델은"좌골 신경의 주요 지점 주위에 폴리에틸렌 커프스의 주입으로 구성되어 있습니다. 기계적 이질통은 본 프레이 필라멘트를 사용하여 테스트된다. 

비디오: The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

The Spared Nerve Injury (SNI) Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared nerve injury (SNI) model induces symptoms of neuropathic pain such as mechanical allodynia i.e. pain due to tactile stimuli that do not normally provoke a painful response [1]. 
The SNI mouse model involves ligation of two of the three branches of the sciatic nerve (the tibial nerve and the common peroneal nerve), while the sural nerve is left intact [2]. The lesion results in marked hypersensitivity in the lateral area of the paw, which is innervated by the spared sural nerve. The non-operated side of the mouse can be used as a control. The advantages of the SNI model are the robustness of the response and that it doesn&#x2019;t require expert microsurgical skills.
The threshold for mechanical pain response is determined by testing with von Frey filaments of increasing bending force, which are repetitively pressed against the lateral area of the paw [3], [4]. A positive pain reaction is defined as sudden paw withdrawal, flinching and/or paw licking induced by the filament. A positive response in three out of five repetitive stimuli is defined as the pain threshold. 
As demonstrated in the video protocol, C57BL/6 mice experience profound allodynia as early as the day following surgery and maintain this for several weeks.

The Spared Nerve Injury SNI Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

The Spared Nerve Injury animal model is described here as a mouse model of peripheral neuropathic pain following partial denervation of the sciatic nerve by lesioning the tibial and common peroneal nerve branches, leaving the remaining sural nerve intact. Behavioral modification resulting from mechanical allodynia is quantified by von Frey filaments.

마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared ...

연구

의학

Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of the population1,2. Symptoms include spontaneous (tingling, burning, electric-shock like) pain, dysaesthesia, paraesthesia, allodynia (pain resulting from normally non-painful stimuli) and hyperalgesia (an increased response to painful stimuli). The sensory symptoms are co-morbid with behavioural disabilities, such as insomnia and depression. To study chronic neuropathic pain several animal models mimicking peripheral nerve injury have been developed, one of the most widely used is Bennett and Xie's (1988) unilateral sciatic nerve chronic constriction injury (CCI)3 (Figure 1). Here we present a method for performing CCI and testing pain hypersensitivity.
CCI is performed under anaesthesia, with the sciatic nerve on one side exposed by making a skin incision, and cutting through the connective tissue between the gluteus superficialis and biceps femoris muscles. Four chromic gut ligatures are tied loosely around the sciatic nerve at 1 mm intervals, to just occlude but not arrest epineural blood flow. The wound is closed with sutures in the muscle and staples in the skin. The animal is then allowed to recover from surgery for 24 hrs before pain hypersensitivity testing begins.
For behavioural testing, rats are placed into the testing apparatus and are allowed to habituate to the testing procedure. The area tested is the mid-plantar surface of the hindpaw (Figure 2), which falls within the sciatic nerve distribution. Mechanical withdrawal threshold is assessed by mechanically stimulating both injured and uninjured hindpaws using an electronic dynamic plantar von Frey aesthesiometer or manual von Frey hairs4. The mechanical withdrawal threshold is the maximum pressure exerted (in grams) that triggers paw withdrawal. For measurement of thermal withdrawal latency, first described by Hargreaves et al (1988), the hindpaw is exposed to a beam of radiant heat through a transparent glass surface using a plantar analgesia meter5,6. The withdrawal latency to the heat stimulus is recorded as the time for paw withdrawal in both injured and uninjured hindpaws. Following CCI, mechanical withdrawal threshold, as well as thermal withdrawal latency in the injured paw are both significantly reduced, compared to baseline measurements and the uninjured paw (Figure 3). The CCI model of peripheral nerve injury combined with pain hypersensitivity testing provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to modify chronic neuropathic pain. In our laboratory, we utilise CCI alongside thermal and mechanical sensitivity of the hindpaws to investigate the role of neuro-immune interactions in the pathogenesis and treatment of neuropathic pain.

Due to the simplicity of surgery and the robust behavioural outcome, chronic constriction of the sciatic nerve is one of the pre-eminent animal models of neuropathic pain. Within 24 hrs following surgery, pain hypersensitivity is established and can be quantitatively measured using a von Frey aesthesiometer (mechanical test) and plantar analgesia meter (thermal test).

좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of ...

Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim) for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. It has been extensively used in various clinical settings. Based upon recent discoveries related to the systemic effects of voluntary breathing and intrinsic physiological interactions among systems during voluntary breathing, a new EStim protocol, Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim), has been developed to augment the effects of electrical stimulation. In BreEStim, a single-pulse electrical stimulus is triggered and delivered to the target area when the airflow rate of an isolated voluntary inspiration reaches the threshold. BreEStim integrates intrinsic physiological interactions that are activated during voluntary breathing and has demonstrated excellent clinical efficacy. Two representative applications of BreEStim are reported with detailed protocols: management of post-stroke finger flexor spasticity and neuropathic pain in spinal cord injury.

Breathing-controlled Electrical Stimulation BreEStim for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

The purpose is to present a new method, breathing-control electrical stimulation (BreEStim) for management of neuropathic pain and spasticity.

Neuropathic 고통과 Spasticity의 관리를위한 호흡 조절 전기 자극 (BreEStim)

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. ...

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. Although originally developed and used extensively in the rat due to its larger size, the tibial nerve in mice is big enough that it can be easily manipulated with either crush or transection, leaving the peroneal and sural nerve branches of the sciatic nerve intact and thereby preserving their target muscles. Thus, this model offers the advantages of inducing less morbidity and impediment of ambulation than the sciatic nerve transection model and also allows investigators to study the physiologic, cellular and molecular biologic mechanisms regulating the process of muscle atrophy in genetically engineered mice. The tibial nerve supplies the gastrocnemius, soleus and plantaris muscles, so its transection permits the study of denervated skeletal muscle composed of fast twitch type II fibers and/or slow twitch type I fibers. Here we demonstrate the tibial nerve transection model in the C57Black6 mouse. We assess the atrophy of the gastrocnemius muscle, as a representative muscle, at 1, 2, and 4 weeks post-denervation by measuring muscle weights and fiber type specific cross-sectional area on paraffin-embedded histologic sections immunostained for fast twitch myosin.

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of skeletal muscle atrophy. The model surgical protocol is described and demonstrated in C57Black6 mice. &#160;

경골 신경 절개 - 마우스의 탈 신경에 의한 골격근의 위축에 대한 표준 모델

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

쥐의 방광 통증 모델로 방광 팽창 유발 내장 운동 응답

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and either cut or crush it to induce peripheral nerve injury. Advantages of this surgery are its simplicity, high reproducibility, and the lack of effect on vital functions or mobility from the subsequent facial paralysis, thus resulting in a relatively mild surgical outcome compared to other nerve injury models. A major advantage of using a cranial nerve injury model is that the motoneurons reside in a relatively homogenous population in the facial motor nucleus in the pons, simplifying the study of the motoneuron cell bodies. Because of the symmetrical nature of facial nerve innervation and the lack of crosstalk between the facial motor nuclei, the operation can be performed unilaterally with the unaxotomized side serving as a paired internal control. A variety of analyses can be performed postoperatively to assess the physiologic response, details of which are beyond the scope of this article. For example, recovery of muscle function can serve as a behavioral marker for reinnervation, or the motoneurons can be quantified to measure cell survival. Additionally, the motoneurons can be accurately captured using laser microdissection for molecular analysis. Because the facial nerve axotomy is minimally invasive and well tolerated, it can be utilized on a wide variety of genetically modified mice. Also, this surgery model can be used to analyze the effectiveness of peripheral nerve injury treatments. Facial nerve injury provides a means for investigating not only motoneurons, but also the responses of the central and peripheral glial microenvironment, immune system, and target musculature. The facial nerve injury model is a widely accepted peripheral nerve injury model that serves as a powerful tool for studying nerve injury and regeneration.

We present a surgical protocol detailing how to perform a cut or crush axotomy on the facial nerve in the mouse. The facial nerve axotomy can be employed to study the physiological response to nerve injury and test therapeutic techniques.

마우스의 얼굴 신경 Axotomy : 부상으로 운동 신경 응답을 연구하는 모델

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve (IoN-CCI) to Study Trigeminal Neuropathic Pain

Animal models are important tools to study the pathophysiology and pharmacology of neuropathic pain. This manuscript describes the surgical and behavioral procedures to study trigeminal neuropathic pain in rats. To meet the specificity of trigeminal neuropathic pain syndromes, the infraorbital nerve (IoN) is subjected to a chronic constriction injury (CCI) by loosely ligating the nerve. An intra-orbital approach is presented here to expose and ligate the IoN in the orbital cavity. After IoN ligation, rats exhibit changes in spontaneous behavior and in response to von Frey hair stimulation that are indicative of persistent pain and mechanical allodynia. Two phases can be defined in the development of the behavioral changes. During the first week following IoN-CCI (phase 1), rats show an increased and asymmetric face grooming activity, i.e., with face wash strokes primarily directed to the nerve-injured IoN territory. A distinction is made between face grooming behavior that is part of a more general body grooming behavior, which remains largely unaffected by IoN-CCI, and face grooming that is neither preceded nor followed by body grooming, which is significantly increased after IoN-CCI. During this period, responsiveness to mechanical stimulation of the IoN territory is reduced. This hyporesponsiveness is abruptly replaced by an extreme hyperresponsiveness whereby even very weak stimulus intensities provoke nocifensive behavior (phase 2). The phenomenological similarities between these behavioral alterations and reported signs of facial pain (i.e., responses to noxious stimulation of the face) suggest the presence of dysesthesia/paresthesia and mechanical allodynia in the ligated IoN territory.

Chronic Constriction Injury of the Rat&#039;s Infraorbital Nerve IoN-CCI to Study Trigeminal Neuropathic Pain

This manuscript describes a rodent model to study trigeminal neuropathic pain. The methods described include surgical procedures to perform a chronic constriction injury of the rat&#8217;s infraorbital nerve and the post-surgical behavioral tests to measure the changes in spontaneous and evoked behavior that are indicative of persistent pain and allodynia.

삼차 신경 병증 성 통증을 연구하기 위해 쥐의 눈꺼풀의 신경 (이온 CCI)의 만성 수축 부상

Animal models are important tools to study the pathophysiology and pharmacology of neuropathic pain. This manuscript describes the surgical and behavioral ...

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The current treatments for OA pain such as NSAIDS or opiates are neither sufficiently effective nor devoid of detrimental side effects. Animal models of OA are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms and define novel pharmacological targets for therapy. Currently available models of OA in rodents include surgical and chemical interventions into one knee joint. The monoiodoacetate (MIA) model has become a standard for modelling joint disruption in OA in both rats and mice. The model, which is easier to perform in the rat, involves injection of MIA into a knee joint that induces rapid pain-like responses in the ipsilateral limb, the level of which can be controlled by injection of different doses. Intra-articular injection of MIA disrupts chondrocyte glycolysis by inhibiting glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase and results in chondrocyte death, neovascularization, subchondral bone necrosis and collapse, as well as inflammation. The morphological changes of the articular cartilage and bone disruption are reflective of some aspects of patient pathology. Along with joint damage, MIA injection induces referred mechanical sensitivity in the ipsilateral hind paw and weight bearing deficits that are measurable and quantifiable. These behavioral changes resemble some of the symptoms reported by the patient population, thereby validating the MIA injection in the knee as a useful and relevant pre-clinical model of OA pain.
The aim of this article is to describe the methodology of intra-articular injections of MIA and the behavioral recordings of the associated development of hypersensitivity with a mind to highlight the necessary steps to give consistent and reliable recordings.

Osteoarthritis (OA), or degenerative joint disease, is a debilitating condition associated with pain that remains only partially controlled by available analgesics. Animal models are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms. Here we describe the methodology for the monoiodoacetate model of OA pain in the mouse.

마우스에서 관절염 통증의 Monoiodoacetate 모델

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

Subcutaneous Trigeminal Nerve Field Stimulation for Refractory Facial Pain

Chronic or neuropathic trigeminal facial pain can be challenging to treat. Neurosurgical procedures should be applied when conservative treatment fails. Neuromodulation techniques for chronic facial pain include deep brain stimulation and motor cortex stimulation, which are complex to perform. Subcutaneous nerve field stimulation is certified for chronic back pain and is the least invasive form of neuromodulation. We applied this technique to treat chronic and neuropathic trigeminal pain as an individual therapy concept. First, trial stimulation is performed. Subcutaneous leads are placed in the painful trigeminal dermatome under local anesthesia. The leads are connected to an external neurostimulator that applies constant stimulation. Patients undergo a 12 day outpatient trial to assess the effect of the stimulation. Electrodes are removed after the trial. If the patient reports pain reduction of at least 50% in intensity and/or attack frequency, a reduction in medication or increase in quality of life, permanent implantation is scheduled. New electrodes are implanted under general anesthesia and are subcutaneously tunneled to an infraclavicular internal pulse generator. Patients are able to turn stimulation on and off and to increase or decrease the stimulation amplitude as needed.
This technique represents a minimal invasive alternative to other more invasive means of neuromodulation for trigeminal pain such as motor cortex stimulation or deep brain stimulation.

Treating chronic or neuropathic facial pain can be challenging when medical or standard treatment fails. Subcutaneous nerve field stimulation is the least invasive form of neuromodulation and is used for chronic back pain. We applied this technology to treat chronic and neuropathic trigeminal facial pain.

난치성 안면 통증을위한 피하 삼차 신경장 자극

Chronic or neuropathic trigeminal facial pain can be challenging to treat. Neurosurgical procedures should be applied when conservative treatment fails. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...