Breanne Cuddington holds a fellowship from the Canadian Breast Cancer Foundation. This work was sponsored by operating grants from the Cancer Research Society and the Canadian Cancer Society Research Institute (formerly the Canadian Breast Cancer Research Alliance). We thank Ann Tollefson (Saint Louis University School of Medicine) for LCRT cells and Dr. Kathleen Delaney and Marion Corrick for technical assistance with cotton rat housing and sedation.

NOT: kullanılan protokoller Hayvan Bakımı yönergelere Kanada Konseyi&#39;ne göre McMaster Üniversitesi&#39;nde kurumsal Hayvan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. Deneyler McMaster Üniversitesi Merkez Hayvan Tesisleri&#39;nde gerçekleştirildi. 1. Kültürleme fazla tercih Hücreler <ol><li> Dulbecco tadil edilmiş Eagle ortamı (DMEM) içinde kültür fazla tercih hücreleri,% 10 fetal sığır serumu (FBS), 2 mM L-glutamin, 100 U / ml penisilin ve 100 ug / ml streptomisin ile takviye edilmiştir. 37 ° C &#39;de, T-150 doku kültürü şişelerinden hücreler korumak ve% 5 CO2. Geçiş hücreleri% 90 konfluent tek tabaka (2-3 günde, Şekil 1) oluşturmak zaman. </li><li> Ön sıcak 1x fosfat tamponlu tuzlu su (PBS), hücrelerin bölünmesi önce 10 dakika için 37 ° C su banyosu içinde 1 x tripsin ve orta. </li><li> Aspire şişeden orta ve 1x PBS 5 ml hücreleri yıkayın. </li><li> Duruladıktan sonra, PBS aspire ve inkübehücreler kadar 1x tripsin 2 ml hücre şişeye (yaklaşık 2 dakika) çözülür. </li><li> Yumuşak ve (10 mi hücre süspansiyonu, toplam), 8 ml ortam içinde yeniden süspanse hücreler, hücrelerin yığınları parçalamak için yukarı ve aşağı pipet ve. </li><li> Yan hafifçe yan ve kaya şişeye (T-150 25 ml toplam) 24 ml ortam içine 1 ml hücre süspansiyonu, tohumlama ile, bir T-150 şişesi içinde hücrelerin muhafaza edin. Bir sonraki bölünme kadar 37 ° C&#39;de ve% 5 CO2 hücreleri koruyun. </li></ol> 2. fazla tercih Hücreleri Virüs Çoğaltma ve Sitotoksisite Değerlendirilmesi <ol><li> Virüs Çoğaltma NOT: yerli viral promoterlerin kontrolü altında yeşil floresan proteini (GFP) gibi bir floresan etiketi sentezleyen Virüs yapılan, virüs enfeksiyonu vizüalizasyon ve floresans plaka okuyucusu kullanılarak yayıldı. <ol><li> Sayma için kuyu bırakarak kültür plakaları içine Tohum fazla tercih hücreleri,. Tohum hücreleri gibi onlar bir gün sonra% 80-90 konfluent olacak. 10 5 cel bir konsantrasyon kullanınls / ml (oyuk başına 100 ul) 96 oyuklu düz tabanlı plakalar içinde bir gün sonra, istenen konfluent üretilir. </li><li> Bir sonraki gün, önceden sıcak 1x PBS, 1 x tripsin, 10 dakika önce deney başlamadan 37 ° C su banyosu içinde tam ve serumsuz ortam. </li><li> Iyi yüzeyi üzerine sallanmasıyla 1x PBS, 5 ml iyi sayma ve durulama hücrelerden aspire ortamı. </li><li> Durulamadan sonra, hücreler kadar 1x tripsin 2 ml PBS aspire ve inkübe hücreler şişeden (~ 2 dakika) çözülür. </li><li> Bir hemasitometre kullanarak sayılabilir aralığı içinde bir hücre yoğunluğu vermek üzere tam orta uygun hacimde tekrar süspansiyon hücreleri. Doğru bir hücre sayısını sağlamak için, önce iyice yukarı ve aşağı pipetleme hemasitometre aşılamak için hücre süspansiyonu karıştırın. </li><li> Enfeksiyon istenen çokluğu (İçişleri Bakanlığı) enfeksiyonu için gerekli virüs stokunun hacmini belirleyin. Birimleri Şekillendirme Gerekli Paque (pfu) = kaplama hücrelerinin sayısı * İçişleri Bakanlığı(Pfu / hücre) Virüs stokunun hacmi gerekli = gerekli pfu / virüs stok titresi (pfu / ml) </li><li> Tüpler, serum barındırmayan ortam içinde, virüs inokulum hazırlayın. Hücrelere inokulum eklemeden önce vorteks veya pipetle iyice karıştırın. </li><li> Bundan sonra DMEM +% 1 FBS bakım paylaşımı uygulama, 37 ° C de 1 saat süre ile hücreleri enfekte etmektedir. </li><li> Tarama plakaları bir ve iki gün sonrası enfeksiyon (pi) GFP floresan görselleştirmek için. </li></ol></li><li> Virüs Sitotoksisite NOT: Bileşik ışığa gibi düşük ışık koşullarında resazurin sitotoksisite deneyi gerçekleştirin. Aynı içeren ortam, sadece eşiğe düzeltmek için dahil edilmelidir. <ol><li> 1x PBS resazurin,% 5 (h / h) çözeltisi hazırlayın. Pipetleme tarafından çözüm karıştırın. </li><li> Hücrelerden aspire orta ve% 5 resazurin çözümü uygulayın. Iyi içeren ortamı sadece eşiğe düzeltmek için ekleyin. </li><li> 37 ° C&#39;de 30 dakika boyunca kuluçkaya bırakılır C, sonrabu, bir floresan plaka okuyucu (eksitasyon 530 nm, emisyon 595 nm) kullanılarak floresans okundu. </li><li> Eşiğe için düzeltme bulaşmamış kontrollere veri göreli analiz. </li></ol></li></ol> 3. Konut ve Taşıma <ol><li> Konut ve Diyet <ol><li> Ev pamuk fareleri tek tek kemirgen yatak (1/8 &quot;mısır koçanı yatak), artık zenginlik olarak 8 inç ve nestlets daha PVC boru (Şekil 2) bir bölümünü içeren polikarbonat sıçan kafeslerde de söndürme azaltmak için. </li><li> Üstünlük kafesin oturmak ve kemirgen yiyecek ve su şişesi içeren bir güvenilir çelik sepet kullanın. NOT: Bu kafes kurulum büyük önem kafes varlığının ucuna karşı zenginleştirme tüpün yerleştirilmesi ile, hayvan güvenli ve kolay bir yakalama sağlayacaktır. </li></ol></li><li> Kullanma <ol><li> Hayvan tesis teknisyenleri tarafından mermi önce önce heyecan verici bunları önlemek için, sabah pamuk fareleri Kolubir prosedür. </li><li> Tüm işlemler sırasında, koruma için kalın deri eldiven giyin. </li><li> Hayvanlar öncelikle zenginleştirme tüplerinde kalır gibi, rutin temizlik sırasında yeni bir kafes içine sıçan aktarmak için kullanabilirsiniz. Alternatif olarak, işleyici kendi elini ulaşmasına izin biraz kafesi açmak, hayvan sonra sadece omuzlar üstünde cildi Eksfoliyant ve aşağı iterek ölçülü olabilir. Hayvan kendi dilini ısırabilir olarak Pratik bakım aşırı güç kullanmak değil. </li><li> Sabırlı olun ve hayvanlar güçlü bir uçuş veya dövüş yanıt var ve çalışıyor ve kafesin dışına atlayarak yakalama önlemek için çalışacağız olarak istikrarlı bir elinizi kullanın. Derinin büyük oluşacak gibi Önemlisi, kuyruk hayvanlar dokunmayın. </li><li> Tuzak doğrudan kullanım üzerindeki zenginleşme tüpler hayvanlar. Bu büyük ölçüde yaralanmaları ve kaçan azalır. </li></ol></li></ol> 4. Yakalama ve Anestezi <ol><li> Ele geçirmek <ol><li> Koruma için kalın deri eldiven giyinTüm işlemler sırasında iyon. </li><li> Hava ve bir kapak, kap ve gaz çıkış hortumunun (Şekil 3) takılan bir burun konisi sığacak kadar büyük bir indüksiyon odası için delikli bir büyük şeffaf plastik kap kullanın. </li><li> Prosedür daha verimli hale getirmek ve izofluran, bir inhalasyon anestezik hayvanların maruz kalma süresini azaltmak için çiftler halinde çalışın. Emin bir araştırmacı olun (işleyicisi # açılması ve kafes çelik kapağını yerine ve indüksiyon odasının kapağı (1 işleyicisi #) sorumludur ve onların ortak indüksiyon odasına tüp ve ulaşım hayvanın yakalanması için sorumlu 2). </li><li> Düz bir yüzeye yerleştirin ve kafesi dış kapağı çıkarın. Biraz çelik besleme tepsisini kaldırın ve kafes kenarları ve arka karşı paralel çok yavaş zenginleştirme tüp manevra. Gerekirse, hayvan ajitasyon önlemek için kafes açmadan zenginleştirme tüp manevra bir nesne kullanın (işlemekr # 1). </li><li> Hayvan ajite olur ve tüp bırakırsa, hayvan dinlenmek ve bir kez daha tüp (işleyici # 1) yerleşmek için yeterli zaman tanıyın. </li><li> Yavaşça ve kasıtlı kafes ile temas diğer ucunu tutarak, zenginleştirme tüp çelik kapak sağdaki kenarını kaldırın. Plastik kap (2 işleyicisi #) için yeterli bir alan, büyük olun. </li><li> Bir yumuşak, hızlı bir hareketle, zenginleştirme tüp üstünlük plastik kap itin. Tüp hayvan bindirme kafesin yüzü kabın temas halindedirler. Mümkün (işleyici # 2) olduğunca çabuk adımlar 4.1.6 ve 4.1.7 gerçekleştirin. </li><li> Çelik besleme tepsisini çıkarın ve # 2 (işleyici # 1) işleyicisi için plastik kap kapağı vermek. Süreç içinde sıkışıp hayvanın ekleri dikkatli olmak, kafes ve kabın yan arasındaki plastik kapağı kaydırın. Bu sonraki adım daha zor hale getirecek gibi kabı mühür etmeyin (işleyici # 2). </li></ol></li><li> Anesthesia <ol><li> Emin konteyner kapalı kalır emin olun ve indüksiyon odasına hayvan taşıma. Hızla odasında hayvan koyun ve bir sıvı hareketi (işleyici # 2) konteyner kapağı kaldırın. Açın ve hemen indüksiyon odası kapağı yerine (işleyici # 1). </li><li> Indüksiyon odasına (/ dak 5 L) izofluran akışının açın ve hızlı bir şekilde gaz dolaşımını kolaylaştırmak için indüksiyon odasından çıkarmadan tüp ve kap, hayvanın slayt point hangi uyuşukluk belirtileri için hayvan izlemek. </li><li> Sıçan tam anestezi olduğunda, çalışma yüzeyine taşıyın ve burun konisi (Şekil 3) içine burun ve ağız yerleştirin. Sıçan tam olarak güçlü bir ayak tutam tepkisiz olduğunda anestezi. </li><li> Kuruluk ve aşınmaları önlemek için hayvanın gözleri veteriner vazelin oftalmik merhem yerleştirin. Bu pamuk fareleri yaralanma olursa enfeksiyona eğilimli olabilir büyük gözleri var gibi önemli bir adımdır. </li> &lt;li&gt; dikkatlice izlemek ve sabit solunum hızını korumak ve hayvanın burnu prosedürü boyunca uydurma burun konisi içinde kalmasını sağlamak. Uygun izofluran akış hızını ayarlayın. izofluran miktarı her hayvan değişecektir uyutmak için gerekli. </li><li> Post-işlem, kendi kafesine hayvan dönün ve tam hareketlilik ve sternum yatma kavuşur sağlamak. </li></ol></li></ol> Subkutan Tümör Oluşumu için fazla tercih Hücreler 5. hazırlanması Not: fazla tercih biri, tamamen T-150 şişesi (% 90 konflüans) yaklaşık 2 x 10 7 hücreleri elde edilir. Ihtiyaç duyulan hücre sayısı gerekli T-150 şişelerinde sayı tabanıdır. Elde edilir gerekli hücrelerin toplam sayısını sağlamak için ekstra şişeler Tohum ve hazırlık ve ekstra enjeksiyonlar için gerekli olan sırasında kaybedilen hücreleri karşılamak için. Hücre canlılığı uzatmak için mümkün buz üzerinde hücreleri tutun. <ol><li> Balon hücreleri, aspire orta hasat1x PBS, 5 ml d durulama hücreleri. </li><li> PBS aspire ve hücreler, bir şişeye (yaklaşık 2 dakika) ayrışmasına kadar 1x tripsin 2 ml hücreleri inkübe edin. </li><li> Yumuşak ve (10 mi hücre süspansiyonu, toplam), 8 ml ortam içinde yeniden süspanse hücreler, hücrelerin yığınları parçalamak için yukarı ve aşağı pipet ve. Ek matara hücreleri hasat devam edin. </li><li> Bir konik tüp, 50 ml konik tüp başına yaklaşık 4, T-150s içine tüm hücre süspansiyonları havuzda toplayın. </li><li> Santrifüj, 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 160 x g&#39;de tüpü. </li><li> Kültür ortamı basınçla bir hemositometre kullanılarak sayılabilir aralığı içinde bir hücre yoğunluğu vermek üzere bir PBS uygun hacmi (T-150 başına 10 ml PBS) hücre pelletini. Doğru bir hücre sayısını sağlamak için, önce iyice yukarı ve aşağı pipetleme hemasitometre yükleme hücre süspansiyonu karıştırın. </li><li> Toplam hücre sayısını hesaplayın: Hücrelerin toplam sayısı = hücre sayımı (hücre / ml) toplandı X yeniden süspansiyon hacmi (mi) </li><li> BelirlemekTüm enjeksiyonlar için gerekli olan hücre süspansiyonu hacmi. Deneme başına 2-3 ilave doz olun. Deri altına enjekte, 5 x 10 5 fazla tercih hücrelerinin toplam 3-4 gün içinde aşikar tümörler oluşturacaktır. Gerekli hücrelerin sayısı = 5 x 10 5 hücre x doz sayısı Birim hücre süspansiyonu gerekli (mi) = (* toplamı, püskürtme miktarının gerekli olan toplam hücreleri) /, (hasat edilmiş hücrelerin toplam sayısı) </li><li> Pipet gerekli PBS içeren bir konik tüp içine, hücre süspansiyonu hacmi ve iyice karıştırın. Eppendorf tüpleri içine kısım tek enjeksiyonu (100 ul). Enjeksiyon işlemi sırasında buz şok koruyun. </li></ol> 6. Enjeksiyonlar NOT: Bir süre başka izler hayvanın solunum hızı ve genel durumu ise anestezi altında iğne yapmak, iki araştırmacı olan prosedürleri uygulayın. Tüm enjeksiyonlar ve yeni bir iğne için insülin şırınga (29 g 0.3 mi, &#39;1/2 x) kullanarakHer bir hayvan. <ol><li> Deri altı enjeksiyonları <ol><li> Yakalama ve hayvan (bölüm 4) uyutmak. </li><li> Makası kullanarak enjeksiyon bölgesini tıraş. Pamuk sıçan kürk kalın ve enjeksiyonlar için pürüzsüz bir yüzey elde etmek için keskin bir düzeltici gerektirir. Bir pamuklu çubukla kullanarak% 70 etanol ile enjeksiyon bölgesini temizleyin ve ilerlemeden önce tamamen buharlaşmasına izin verin. </li><li> Yavaş ve sürekli bir şekilde çizerek hücreleri ile yüklenebilir şırıngalar (29 g x 1/2 &quot;, 0.3 ml) eklenmiştir. Kabarcıklar bazı kuvvet ile şırınga belirgin fiske iseniz. Kabarcıklar üst basarak kez sıvı kadar piston iğne üstünde olduğunu. </li><li> (Cilt çadırlaşması olarak anılacaktır) enjeksiyon yerinde cilt kaldırın ve iğne konik tarafı yukarı yerleştirin. İğnenin kas enjekte önlemek için cilt altında serbestçe hareket edin. </li><li> Eşit ve yavaş yavaş şırınga içeriğini boşaltınız. Aşağı iğne konik tarafı çekiniz. </li></ol></li><li> İntratümöral enjeksiyonlar <ol><li> Yakalama birhayvan (bölüm 4) uyutmak d. </li><li> Bir pamuklu çubukla kullanarak% 70 etanol ile enjeksiyon bölgesini temizleyin ve ilerlemeden önce tamamen buharlaşmasına izin verin. </li><li> Dik bir pozisyonda iğne tutarken yavaşça ve sürekli yukarı çizerek virüs inokulum ile yük şırıngalar (29 G 0.3 ml, &#39;1/2 x). Kabarcıklar bazı kuvvet ile şırınga belirgin fiske iseniz. Kabarcıklar üst basarak kez sıvı iğne üstünde olduğu kadar, sonra Pistonun. </li><li> Tümör içine iğne konik tarafı yukarı yerleştirin ve kısmen tümörün laserasyonunu önlemek için her hareketinden önce iğneyi çekilmesi, fan gibi desen iğne hareket ederken eşit ve yavaş yavaş şırınga içeriğini sınırdışı. Aşağı iğne konik tarafı çekiniz. NOT: Subkutan fazla tercih tümörler hızlı büyüyen 5-7 gün içinde yaklaşık 100 mm 3 ulaşan vardır. Ayrıca, nekrotik ve hemorajik merkezleri genellikle birkaç gün içinde tümörün yüzeyinde oluşan ve ca gerektirirreful izleme (Şekil 4). </li></ol></li><li> Periton içi enjeksiyonlar <ol><li> Yakalama ve hayvan (bölüm 4) uyutmak. </li><li> Pamuklu çubuklarla kullanarak% 70 etanol ile enjeksiyon bölgesini temizleyin ve ilerlemeden önce tamamen buharlaşmasına izin verin. </li><li> Yavaş yavaş ve sürekli yukarıya çizerek ilaç ile yük şırıngalar (29 G 0.3 ml, &#39;1/2 x). Kabarcıklar bazı kuvvet ile şırınga belirgin fiske iseniz. Kabarcıklar üst basarak kez sıvı iğne üstünde olduğu kadar, sonra Pistonun. </li><li> Karın sağ alt kadranda içine iğne takın. Kan ya da dışkı aspire değil emin olmak için tekrar pistonu çekin, bu iğnenin yanlış yerleştirme gösterir. Bu durum ortaya çıkarsa, iğneyi çıkartın ve yeni bir şırınga hazırlayın. İğne doğru yerleştirildiğinde, eşit ve yavaş yavaş şırınga içeriğini sınırdışı. </li></ol></li></ol> 7. Tümör eksizyonu ve Nekropsi <ol><li> Toplayın ve al temizlemek% 70 etanol önce hayvanın ötenazi için birlikte l araçları. </li><li> İstediğiniz yöntemle hayvan Euthanize, CO 2 inhalasyon (5-10 dakika / dak 2 L) tavsiye edilir. Vücut durumda herhangi bir anormallik için hayvan inceleyin. </li><li> Bir diseksiyon gemide sırt yatma hayvan koyun ve% 70 etanol ile hayvan temizleyin. </li><li> Alt karın cildi kaldırmak için cımbız kullanın. Makas kullanılarak deri ve kas yoluyla kesin ve hayvan uzunluğunu (çene anüs) çalıştıran bir medial kesi yapmak. </li><li> İki kesim, yanal göğüs kafesi tarafı yukarı bir ve kalp ve akciğerler maruz sternum üzerinden bir yaparak göğüs kafesi kesin. Herhangi bir metastaz 27,29 akciğerin lobları inceleyin. </li><li> Anormallikler için tüm organlarını incelemek ve renk, boyut ve tutarlılık içinde herhangi bir değişiklik kayıt. Gerekirse, iç dokuları incelemek için bir neşter ile organları insizyon. Özellikle, karaciğer, böbrekler, dalak ve mide yolu incelemek. </li><li> Metastaz için lenf düğümleri kontrol edin ve 27,29 genişleme. </li><li> Tümör toplamak için, cenah kesiler üstünde ve cilt cımbız ile vücuttan uzak çekilebilir şekilde tümör altında olun. Sıkıca cımbız ile cilt tutarken, dikkatli tümör ve dermis (Şekil 5) arasındaki keserek tümörü çıkarmak için bir neşter kullanabilirsiniz. </li><li> Hemen% 10 nötr tamponlu formalin etiketli bir kap içinde tümör yerleştirin. </li><li> Tümörün büyüklüğüne bağlı olarak, 1-2 gün izin (≤ 2 mm, küçük) ya da 5-6 gün histolojik analiz (Şekil 6) bölümler hazırlamadan önce sabitlemek için (&gt; 2 mm geniş). </li></ol>

<ol>
	<li>Cervantes-Garcia, D., Ortiz-Lopez, R., Mayek-Perez, N., Rojas-Martinez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncolytic+virotherapy.">Oncolytic virotherapy.</a> Ann Hepatol. 7 (1), 34-45 (2008).</li><li>Vaha-Koskela, M. J., Heikkila, J. E., Hinkkanen, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncolytic+viruses+in+cancer+therapy.">Oncolytic viruses in cancer therapy.</a> Cancer Lett. 254 (2), 178-216 (2007).</li><li>Abril, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Both+viral+and+host+factors+contribute+to+neurovirulence+of+bovine+herpesviruses+1+and+5+in+interferon+receptor-deficient+mice.">Both viral and host factors contribute to neurovirulence of bovine herpesviruses 1 and 5 in interferon receptor-deficient mice.</a> J Virol. 78 (7), 3644-3653 (2004).</li><li>Nakamichi, K., Matsumoto, Y., Otsuka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+infection+of+bovine+herpesvirus+1+in+non-permissive+murine+cells.">Defective infection of bovine herpesvirus 1 in non-permissive murine cells.</a> J Vet Med Sci. 63 (10), 1139-1142 (2001).</li><li>Boukhvalova, M. S., Blanco, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cotton+rat+sigmodon+hispidus+model+of+respiratory+syncytial+virus+infection.">The cotton rat sigmodon hispidus model of respiratory syncytial virus infection.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 372, 347-358 (2013).</li><li>Papp, Z., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+immunity+in+the+respiratory+tract+and+protection+from+bovine+herpesvirus+type+1+infection+by+different+routes+of+immunization+with+recombinant+adenovirus.">Induction of immunity in the respiratory tract and protection from bovine herpesvirus type 1 infection by different routes of immunization with recombinant adenovirus.</a> Viral Immunol. 11 (2), 79-91 (1998).</li><li>Hughes, T. C. R., Lilley, C. E., Ponce, R., Kaufman, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+analysis+of+an+oncolytic+herpesvirus+encoding+granulocyte-macrophage+colony+stimulating+factor+for+the+treatment+of+malignant+melanoma.">Critical analysis of an oncolytic herpesvirus encoding granulocyte-macrophage colony stimulating factor for the treatment of malignant melanoma.</a> Journal of Oncolytic Virotherapy. 3, 11-20 (2014).</li><li>Jones, C., Chowdhury, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+biology+of+bovine+herpesvirus+type+1+(BHV-1),+its+role+as+a+cofactor+in+the+bovine+respiratory+disease+complex+and+development+of+improved+vaccines.">A review of the biology of bovine herpesvirus type 1 (BHV-1), its role as a cofactor in the bovine respiratory disease complex and development of improved vaccines.</a> Anim Health Res Rev. 8 (2), 187-205 (2007).</li><li>Jones, C., Chowdhury, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+herpesvirus+type+1+(BHV-1)+is+an+important+cofactor+in+the+bovine+respiratory+disease+complex.">Bovine herpesvirus type 1 (BHV-1) is an important cofactor in the bovine respiratory disease complex.</a> Vet Clin North Am Food Anim Pract. 26 (2), 303-321 (2010).</li><li>Hushur, O., Takashima, Y., Matsumoto, Y., Otsuka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+bovine+herpesvirus+1+(BHV-1)+growth+in+non-permissive+cells+beyond+the+expression+of+immediate+early+genes.">Restriction of bovine herpesvirus 1 (BHV-1) growth in non-permissive cells beyond the expression of immediate early genes.</a> J Vet Med Sci. 66 (4), 453-455 (2004).</li><li>Cuddington, B. P., Dyer, A. L., Workenhe, S. T., Mossman, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncolytic+bovine+herpesvirus+type+1+infects+and+kills+breast+tumor+cells+and+breast+cancer-initiating+cells+irrespective+of+tumor+subtype.">Oncolytic bovine herpesvirus type 1 infects and kills breast tumor cells and breast cancer-initiating cells irrespective of tumor subtype.</a> Cancer Gene Ther. 20 (5), 282-289 (2013).</li><li>Cuddington, B. P., Mossman, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permissiveness+of+Human+Cancer+Cells+to+Oncolytic+Bovine+Herpesvirus+1+Is+Mediated+in+Part+by+KRAS+Activity.">Permissiveness of Human Cancer Cells to Oncolytic Bovine Herpesvirus 1 Is Mediated in Part by KRAS Activity.</a> J Virol. 88 (12), 6885-6895 (2014).</li><li>Small, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase+I+trial+of+intravenous+CG7870,+a+replication-selective,+prostate-specific+antigen-targeted+oncolytic+adenovirus,+for+the+treatment+of+hormone-refractory,+metastatic+prostate+cancer.">A phase I trial of intravenous CG7870, a replication-selective, prostate-specific antigen-targeted oncolytic adenovirus, for the treatment of hormone-refractory, metastatic prostate cancer.</a> Mol Ther. 14 (1), 107-117 (2006).</li><li>Freytag, S. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+I+study+of+replication-competent+adenovirus-mediated+double+suicide+gene+therapy+for+the+treatment+of+locally+recurrent+prostate+cancer.">Phase I study of replication-competent adenovirus-mediated double suicide gene therapy for the treatment of locally recurrent prostate cancer.</a> Cancer Res. 62 (17), 4968-4976 (2002).</li><li>Benjamin, R., Helman, L., Meyers, P., Reaman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase+I/II+dose+escalation+and+activity+study+of+intravenous+injections+of+OCaP1+for+subjects+with+refractory+osteosarcoma+metastatic+to+lung.">A phase I/II dose escalation and activity study of intravenous injections of OCaP1 for subjects with refractory osteosarcoma metastatic to lung.</a> Hum Gene Ther. 12 (12), 1591-1593 (2001).</li><li>Prince, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Cotton+Rat+in+Biomedical+Research.">The Cotton Rat in Biomedical Research.</a> Animal Welfare Information Center Newsletter. 5 (2), 3-5 (1994).</li><li>Tsai, J. C., Garlinghouse, G., McDonnell, P. J., Trousdale, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+animal+model+of+adenovirus-induced+ocular+disease.+The+cotton+rat.">An experimental animal model of adenovirus-induced ocular disease. The cotton rat.</a> Arch Ophthalmol. 110 (8), 1167-1170 (1992).</li><li>Ginsberg, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+investigating+the+molecular+pathogenesis+of+adenovirus+pneumonia.">A mouse model for investigating the molecular pathogenesis of adenovirus pneumonia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (5), 1651-1655 (1991).</li><li>Russell, S. J., Peng, K. W., Bell, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncolytic+virotherapy.">Oncolytic virotherapy.</a> Nat Biotechnol. 30 (7), 658-670 (2012).</li><li>Mossman, K. L., Saffran, H. A., Smiley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+virus+ICP0+mutants+are+hypersensitive+to+interferon.">Herpes simplex virus ICP0 mutants are hypersensitive to interferon.</a> J Virol. 74 (4), 2052-2056 (2000).</li><li>Mossman, K. L., Smiley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+virus+ICP0+and+ICP34.5+counteract+distinct+interferon-induced+barriers+to+virus+replication.">Herpes simplex virus ICP0 and ICP34.5 counteract distinct interferon-induced barriers to virus replication.</a> J Virol. 76 (4), 1995-1998 (2002).</li><li>Hummel, J. L., Safroneeva, E., Mossman, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+ICP0-Null+HSV-1+and+interferon+signaling+defects+in+the+effective+treatment+of+breast+adenocarcinoma.">The role of ICP0-Null HSV-1 and interferon signaling defects in the effective treatment of breast adenocarcinoma.</a> Mol Ther. 12 (6), 1101-1110 (2005).</li><li>Papp, Z., Middleton, D. M., Mittal, S. K., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+immunization+with+recombinant+adenoviruses:+induction+of+immunity+and+protection+of+cotton+rats+against+respiratory+bovine+herpesvirus+type+1+infection.">Mucosal immunization with recombinant adenoviruses: induction of immunity and protection of cotton rats against respiratory bovine herpesvirus type 1 infection.</a> J Gen Virol. 78 (11), 2933-2943 (1997).</li><li>Papp, Z., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+pre-existing+adenovirus-specific+immunity+on+immune+responses+induced+by+recombinant+adenovirus+expressing+glycoprotein+D+of+bovine+herpesvirus+type+1.">The effect of pre-existing adenovirus-specific immunity on immune responses induced by recombinant adenovirus expressing glycoprotein D of bovine herpesvirus type 1.</a> Vaccine. 17 (7-8), 933-943 (1999).</li><li>Mittal, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+systemic+and+mucosal+immune+responses+in+cotton+rats+immunized+with+human+adenovirus+type+5+recombinants+expressing+the+full+and+truncated+forms+of+bovine+herpesvirus+type+1+glycoprotein+gD.">Induction of systemic and mucosal immune responses in cotton rats immunized with human adenovirus type 5 recombinants expressing the full and truncated forms of bovine herpesvirus type 1 glycoprotein gD.</a> Virology. 222 (2), 299-309 (1996).</li><li>Steel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syngeneic+Cotton+Rat+Cancer+Model+for+Replicating+Adenoviral+Vectors.">Syngeneic Cotton Rat Cancer Model for Replicating Adenoviral Vectors.</a> Molecular Therapy. 13 (1), 123 (2006).</li><li>Toth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cotton+rat+tumor+model+for+the+evaluation+of+oncolytic+adenoviruses.">Cotton rat tumor model for the evaluation of oncolytic adenoviruses.</a> Hum Gene Ther. 16 (1), 139-146 (2005).</li><li>Toth, K., Spencer, J. F., Wold, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocompetent,+semi-permissive+cotton+rat+tumor+model+for+the+evaluation+of+oncolytic+adenoviruses.">Immunocompetent, semi-permissive cotton rat tumor model for the evaluation of oncolytic adenoviruses.</a> Methods Mol Med. 130, 157-168 (2007).</li><li>Steel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocompetent+syngeneic+cotton+rat+tumor+models+for+the+assessment+of+replication-competent+oncolytic+adenovirus.">Immunocompetent syngeneic cotton rat tumor models for the assessment of replication-competent oncolytic adenovirus.</a> Virology. 369 (1), 131-142 (2007).</li><li>Workenhe, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenic+HSV-mediated+oncolysis+shapes+the+antitumor+immune+response+and+contributes+to+therapeutic+efficacy.">Immunogenic HSV-mediated oncolysis shapes the antitumor immune response and contributes to therapeutic efficacy.</a> Mol Ther. 22 (1), 123-131 (2014).</li><li>Sobol, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+antiviral+immunity+is+a+determinant+of+the+therapeutic+success+of+oncolytic+virotherapy.">Adaptive antiviral immunity is a determinant of the therapeutic success of oncolytic virotherapy.</a> Mol Ther. 19 (2), 335-344 (2011).</li><li>Prince, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Cotton+Rat+in+Biomedical+Research.">The Cotton Rat in Biomedical Research.</a> Animal Welfare Information Center Newsletter. 5 (2), (1994).</li></ol>

The authors acknowledge there are no financial conflicts of interest related to this research.

Cotton rats are highly excitable and have a strong flight response. Therefore, special care should be taken to minimize any undue stress on the animal. The cage setup described will allow for safe and easy capture of the animals, with the placement of the enrichment tube being of the utmost importance. When setting up cages, ensure that the enrichment tubes meet the size and shape requirements, and are placed in proper orientation in the cage. It is also important to ensure that any technicians who might be aiding in ani...

Onkolitik virüsler (OV) seçici olarak normal ve tümörlü hücrelerde 1,2 arasındaki biyokimyasal farklılıklar yararlanılarak tümör hücreleri içinde replike. Doğal olarak meydana gelen doğal tipte virüs ifade seçici oncolysis elde etmek için bir mutasyon gerekmez olanlar, seçici oncolysis elde etmek için tasarlanmış olmalıdır ki bu: Ovs iki türü vardır. Belirli bir tümör türü içinde mutasyonların koleksiyonu OV 2 normal hücreler üzerinde selektif büyüme avantajı doğasını belirler. kullanılarak Ovs güvenlik ve faydaları, klinik çalışmalarda 3-7&#39;de gösterilmiştir. Onkolitik viroterapi alanında ilerlemelere rağmen iyi modeller Ovs antitümör etkinliğini değerlendirmek için gerekli olduğunu düşündüren, klinik öncesi ve klinik sonuçlar arasındaki boşlukları söz konusudur. Sığır herpes virüs tip 1 (BHV-1) Herpesviridae ailesinin üyesi ve Alphaherpesviridae alt familyası olduğunu. BHV-1 başlatılmaktadırates kötü bir soğuk 8,9 benzeyen belirtiler geniş bir yelpazede tezahür, sığırlarda solunum hastalığı kompleksi bovin. BHV-1 gibi, heparan sülfat ve adiponektin-1, 10, HSV-1 tarafından kullanılan bağlanma ve giriş reseptörleri bağlar. Bununla birlikte, adiponektin-2 10 yerine CD155 bağlanır. BHV-1 verimli girerek, normal ve transforme hücreler sıçangil 3,4,10 çoğaltma başlatmak için mümkün olduğu şekilde çok dar bir konakçı yelpazesine sahiptir. Bu geleneksel fare modelleri kullanımı sorunlu hale getirir. BHV-1 onkolitik kapasite in vitro 11,12 gösterilmiştir. BHV-1 göğüs kanseri hücreleri ve meme kanseri başlatan hücrelerin 11,12 dahil olmak üzere histolojik kaynaklı çeşitli insan tümör hücreleri içinde replikasyonunu başlatır ve öldürmek için gösterilmiştir. Bununla birlikte, BHV-1 ve anti-tümör kapasitesi İmmün kapsamında, in vivo olarak değerlendirilmesi gerekir. İnsan Adenovirüs (Ad), hangi57 tanımlanan serotipi en yaygın insanlarda solunum hastalığa neden vardır. Onkolitik Ad vektorlerı çeşitli klinik denemeler 13-15 ilerlemesini ile anti-tümör etkinliği için değerlendirilmiştir. Umut verici klinik öncesi verilere rağmen, klinik sonuçlar beklentilerini kısa düştü. Virüsün 16,17 bağışıklık tepkilerinin zayıflatılmış sergileyen, ancak insan tümör ksenograft modelleri, tipik olarak, Reklam vektörlerin antitümör etkinliğini incelemek için kullanılır. Ayrıca, singeneik fare modelleri, Reklam enfeksiyona olmayan toleranslılar 17,18 pratik bu modelleri kullanarak konak bağışıklık tepkilerinin değerlendirme yapılırken. konukçu bağışıklık sisteminin Ovs tümör hücre ölümünü 19 ortaya olan en etkili bir mekanizma olarak tanımlanmıştır. Ile tolerize edilmiş ve tolerize edilmiş olmayan tümörle birleşmiş antijeni arasında antitümör tepkiler (TAD) modelleri farklıdır ve büyük ölçüde OV tedavinin başarısını etkiler. HSV-1 OV KM100 (ICP0 n21220) 20,21 1814 VP16 bir murin Polyoma Orta T antijeni meme kanseri modelinde 22 tümör taşıyan farelerin% 80 tümör regresyonu ortaya çıkardı. Bununla birlikte, HER-2 / neu modellerinde KM100 antitümör etkinliği, transgenik farelerde sinjeneik farelerde% 20 tam bir gerileme ve tümör staz arasında değişmiştir, fareler HER2 tolerans kazandırma. Birlikte bu veriler tamamen iyi tamamen tedavi başarısını belirlemek özellikleri anlamak için insan bağışıklık manzara özetlemek hayvan modelleri kullanılarak Ovs değerlendirilmesinin önemini vurgulamak. (5 gözden gibi), Kuzey ve Güney Amerika yerli pamuk sıçan (Sigmodon hispidus), en sık RSV enfeksiyonuyla bir model olarak kullanılmaktadır. Bunlar 6,23 kompleks sığır solunum hastalığı ile bağlantılı patoloji özetlemek olarak pamuk fareleri aynı zamanda anti-BHV-1 aşı araştırmalarında kullanılmıştır. Pamuk sıçan Ayrıca, BHV-1 enfeksiyonuimmünojenik olan sürekli mukozal hem de sistemik bağışıklık tepkilerini 6,23-25 ​​uyarılması. Hücre hatları, spontan fibrosarkom ve meme bezi (fazla tercih) ve kemik (TÇHK ve VCRT) sırasıyla 26 ve osteosarkom elde edilmiştir. Pamuk fareler Reklam enfeksiyona yatkın olarak onkolitik Reklam vektörleri in vivo etkinliğini değerlendirmek ve insanlarda 27-29 benzer bir patoloji gösteren için kullanılmıştır. OVS öncesi klinik değerlendirme için immün sistemi baskılanmış modellerin kullanımı sadece tedaviye klinik yanıtlar daha az göstergesidir ancak onkolitik viroterapi 30,31 dikkate bağışıklık sisteminin rol almak için başarısız. Bu nedenle, singenik ve meme kanseri ve osteosarkom tümör-Tolerize pamuk sıçan modelleri, geleneksel kemirgen modelleri kullanılarak okudu olamaz gibi BHV-1 gibi OVS ve Ad öncesi klinik etkinliğini değerlendirmek için ilgili modellerdir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog #</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>May use any brand&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Can prepare in lab, filter to sterilize</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 mM L-glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030164</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x Antibiotic-Antimycotic&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Quality Biological Inc.</td>
			<td>110-001-101HI</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-150cm2 tissue culture flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-80</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X TypLE Express</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12604-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well cell culture plate, flat bottom</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-29</td>
			<td>May use any brand, must be tissue culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>alamarBlue</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>DAL1025</td>
			<td>May use an alternative reagent for determination of cell viability</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8640 Teklad 22/5 Rodent diet</td>
			<td>Harlan&#160;</td>
			<td>8640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/8&#8221; corncob rodent bedding</td>
			<td>Harlan</td>
			<td>7092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nestlets</td>
			<td>Ancare</td>
			<td>-</td>
			<td>Made of pulped virgin cotton fiber, dust-free and autoclavable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td>May use any brand, must be sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane USP, 99.9 %, inhalation anesthetic</td>
			<td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td>
			<td>M60302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Can prepare in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 % Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog #</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAPCO NapFlow 1200 Class II A/B3 Biosafety Microbiological Safety Cabinet (cell culture hood)</td>
			<td>NAPCO</td>
			<td>Model used not currently available</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Fisher Scientific Precision Heated Water Bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Model used not currently available&#160;</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reichert Bright-line Hemacytometer</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z359629</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Typhoon Trio BioAnalyzer&#160;</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>Model used not currently available&#160;</td>
			<td>May use any fluorescence plate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Safire2 Multi-detection Microplate Reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Model used not currently available&#160;</td>
			<td>May use any fluorescence plate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allegra 6R benchtop centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>366816</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table Top Anaesthesia machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>Model used not currently available&#160;</td>
			<td>May use any brand, must be portable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wahl Peanut Mini Clippers</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td>May use any brand of small clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes 29 G x 1/2&#39;, 0.3 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>329464</td>
			<td>May use any brand. Insulin syringes are recommended as they make injections easier through the rat&#8217;s tough skin.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>MedPro</td>
			<td>018-425</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>8940</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-812-41</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

handling of the cotton rat in studies for the pre-clinical evaluation of oncolytic viruses

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact. For this strategy to be successful, recent studies have shown that involvement of the host immune system is essential. Therefore, oncolytic virotherapy should be evaluated within the context of an immunocompetent model. Furthermore, the study of antitumor therapies in tolerized animal models may better recapitulate results seen in clinical trials. Cotton rats, commonly used to study respiratory viruses, are an attractive model to study oncolytic virotherapy as syngeneic models of mammary carcinoma and osteosarcoma are well established. However, there is a lack of published information on the proper handling procedure for these highly excitable rodents. The handling and capture approach outlined minimizes animal stress to facilitate experimentation. This technique hinges upon the ability of the researcher to keep calm during handling and perform procedures in a timely fashion. Finally, we describe how to prepare cotton rat mammary tumor cells for consistent subcutaneous tumor formation, and how to perform intratumoral and intraperitoneal injections. These methods can be applied to a wide range of studies furthering the development of the cotton rat as a relevant pre-clinical model to study antitumor therapy.

Nedeniyle pamuk sıçanların son derece heyecanlı doğası, aşina olmak ve bir klinik öncesi hayvan modeli olarak kullanımı kolaylaştıracak hayvanların stresi azaltmak için optimize prosedürler kullanılarak için. Uygun kullanım tekniklerinin kullanımı da araştırmacı riskini en aza indirecektir. Pamuk fareleri kullanırken sakin kalmak zorunludur. sıçanlar son derece heyecanlı ve onların kafesini kaçmaya çalışacaktır. Bir zenginleştirme tüpü ve kaçış girişim...

Watch this Scientific Journal Video about Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses at JoVE.com

Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses

Cotton rats are extremely excitable and have a strong flight-or-fight response. A handling method optimized to reduce the stress of the animals is described which will make cotton rats more accessible as a preclinical model.

Oncolytic virüs klinik öncesi Değerlendirme Çalışmaları Pamuk Rat Taşıma

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact.  For this strategy to be ...

handling-cotton-rat-studies-for-pre-clinical-evaluation-oncolytic

Research

JoVE Journal

Medicine

9.2K Görüntüleme.  McMaster University. Cotton rats are extremely excitable and have a strong flight-or-fight response. A handling method optimized to reduce the stress of the animals is described which will make cotton rats more accessible as a preclinical model. 

Video: Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

Ex Vivo Enfeksiyon Oncolytic Virüsler Canlı Doku

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Tıp

The Use of Pharmacological-challenge fMRI in Pre-clinical Research: Application to the 5-HT System

Pharmacological MRI (phMRI) is a new and promising method to study the effects of substances on brain function that can ultimately be used to unravel underlying neurobiological mechanisms behind drug action and neurotransmitter-related disorders, such as depression and ADHD. Like most of the imaging methods (PET, SPECT, CT) it represents a progress in the investigation of brain disorders and the related function of neurotransmitter pathways in a non-invasive way with respect of the overall neuronal connectivity. Moreover it also provides the ideal tool for translation to clinical investigations. MRI, while still behind in molecular imaging strategies compared to PET and SPECT, has the great advantage to have a high spatial resolution and no need for the injection of a contrast-agent or radio-labeled molecules, thereby avoiding the repetitive exposure to ionizing radiations. Functional MRI (fMRI) is extensively used in research and clinical setting, where it is generally combined with a psycho-motor task. phMRI is an adaptation of fMRI enabling the investigation of a specific neurotransmitter system, such as serotonin (5-HT), under physiological or pathological conditions following activation via administration of a specific challenging drug.
The aim of the method described here is to assess brain 5-HT function in free-breathing animals. By challenging the 5-HT system while simultaneously acquiring functional MR images over time, the response of the brain to this challenge can be visualized. Several studies in animals have already demonstrated that drug-induced increases in extracellular levels of e.g. 5-HT (releasing agents, selective re-uptake blockers, etc) evoke region-specific changes in blood oxygenation level dependent (BOLD) MRI signals (signal due to a change of the oxygenated/deoxygenated hemoglobin levels occurring during brain activation through an increase of the blood supply to supply the oxygen and glucose to the demanding neurons) providing an index of neurotransmitter function. It has also been shown that these effects can be reversed by treatments that decrease 5-HT availability16,13,18,7. In adult rats, BOLD signal changes following acute SSRI administration have been described in several 5-HT related brain regions, i.e. cortical areas, hippocampus, hypothalamus and thalamus9,16,15. Stimulation of the 5-HT system and its response to this challenge can be thus used as a measure of its function in both animals and humans2,11.

The goal of this technique is to assess serotonin (5-HT) neurotransmitter function in the live and free-breathing animal with pharmacological magnetic resonance imaging (phMRI) and an intravenous challenge with a selective serotonin reuptake inhibitor (SSRI), fluoxetine.

Pre-klinik araştırma Farmakolojik-meydan fMRI Kullanımı: 5-HT Sistemi Uygulaması

Pharmacological MRI (phMRI) is a new and promising method to study the effects of substances on brain function that can ultimately be used to unravel ...

Pre-clinical Evaluation of Tyrosine Kinase Inhibitors for Treatment of Acute Leukemia

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are attractive druggable therapeutic targets. Here we describe an efficient four-step strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in the treatment of acute leukemia. Initially, western blot analysis is used to confirm target inhibition in cultured leukemia cells. Functional activity is then evaluated using clonogenic assays in methylcellulose or soft agar cultures. Experimental compounds that demonstrate activity in cell culture assays are evaluated in vivo using NOD-SCID-gamma (NSG) mice transplanted orthotopically with human leukemia cell lines. Initial in vivo pharmacodynamic studies evaluate target inhibition in leukemic blasts isolated from the bone marrow. This approach is used to determine the dose and schedule of administration required for effective target inhibition. Subsequent studies evaluate the efficacy of the TKIs in vivo using luciferase expressing leukemia cells, thereby allowing for non-invasive bioluminescent monitoring of leukemia burden and assessment of therapeutic response using an in vivo bioluminescence imaging system. This strategy has been effective for evaluation of TKIs in vitro and in vivo and can be applied for identification of molecularly-targeted agents with therapeutic potential or for direct comparison and prioritization of multiple compounds.

Receptor tyrosine kinases are ectopically expressed in many cancers and have been identified as therapeutic targets in acute leukemia. This manuscript describes an efficient strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors for the treatment of acute leukemia.

Akut lösemi tedavisi için Tirosin Kinaz İnhibitörleri klinik öncesi değerlendirilmesi

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are ...

Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis. In recent years, oncolytic virotherapies have proven themselves to be potentially powerful tools to fight malignancy. Due to the unique dual blood supply in the liver, it is possible to apply therapies locally to orthotopic liver tumors, which are predominantly fed by arterial blood flow. We have previously demonstrated that hepatic arterial delivery of oncolytic viruses results in safe and efficient transduction efficiency of multifocal HCC lesions, resulting in significant prolongation of survival in immune competent rats. This procedure closely mimics the application of transarterial embolization in patients, which is the standard palliative care provided to many HCC patients. The ability to administer tumor therapies through the hepatic artery in rats allows for a highly sophisticated preclinical model for evaluating novel viral vectors under development. Here we describe the detailed protocol for microdissection of the hepatic artery for infusion of oncolytic virus vectors to treat orthotopic HCC.

Oncolytic virotherapies are under development as novel therapeutics for the treatment of hepatocellular carcinoma (HCC). Here we describe a method for locoregional therapy of HCC via hepatic arterial administration of oncolytic virus.

Sıçanlarda Ortotopik HCC Lokorejyonel Tedavisi için oncolytic virüs transarteryel İdaresi

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis.  In recent years, oncolytic virotherapies have proven ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Use of a Low-flow Digital Anesthesia System for Mice and Rats

A traditional vaporizer depends on flowing gas and atmospheric pressure for passive anesthetic vaporization. Newly developed direct injection vaporizers utilize a syringe pump to directly administer volatile anesthetics into a gas stream. Unlike a traditional vaporizer, it can be used at very low flow rates, making it ideal for use on mice and rats. 
The equipment's capability to use low flow rates could result in a substantial cost savings due to the reduced need for anesthetic agents, compressed gas, and charcoal scavenging filters1. A lower flow rate means less waste of anesthetic gas and likely reduces the risk of anesthetic exposure to laboratory personnel. Thus, the high levels of precision and safety associated with direct injection vaporizers, along with a reduced need for anesthetic agents, compressed gas, and charcoal filters are beneficial for research requiring small animal anesthesia. 
The goal of this protocol is to demonstrate the use of a syringe-driven direct injection vaporizer as part of a digital, low-flow anesthesia system. The direct injection vaporizer is capable of accurately delivering anesthesia at very low flow rates compared to a traditional vaporizer, making it a promising alternative for controlled gas anesthetic delivery to rodents.

Here, we present a protocol to more safely and efficiently administer anesthetic gas to mice using a digital, low flow anesthesia system utilizing a syringe-driven direct injection vaporizer.

Fare ve Sıçanlarda için düşük akış Dijital Anestezi Sistemi Kullanımı

A traditional vaporizer depends on flowing gas and atmospheric pressure for passive anesthetic vaporization. Newly developed direct injection vaporizers ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

Deneysel Kolit sırasında Bağırsak epitel Bariyer Fonksiyonları Üzerine Ek Beslenme Faydalı Etkileri Analizi

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include supporting mastication and deglutition, as well as taste-sensing and phonetics. Accordingly, the strength and volume of the tongue can impact the ability of vertebrates to accomplish basic activities such as feeding, communicating, and breathing. Human patients with sleep apnea have enlarged tongues, characterized by reduced muscle tone and increased intramuscular fat that can be visualized and quantified by magnetic resonance imaging (MRI). The abilities to measure force generation and viscoelastic properties of the tongue constitute important tools for obtaining functional information to correlate with imaging data. Here, we present techniques for measuring tongue force production in anesthetized Zucker rats via electrical stimulation of the hypoglossal nerves and for determining the viscoelastic properties of the tongue by applying passive Lissajous force/deformation curves.

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

We describe a surgical procedure in an anesthetized rat model for determining the muscle tone and viscoelastic properties of the tongue. The procedure involves specific stimulation of the hypoglossal nerves and application of passive Lissajous force/deformation curves to the muscle.

Sıçan Dilinin Mekanik ve Viskoelastik Özelliklerinin In Vivo Değerlendirilmesi

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

Ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi porcine modeli

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Pre-clinical Model of Cardiac Donation after Circulatory Death

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after circulatory death (DCD) is a solution to address this limited availability, but due to a period of prolonged warm ischemia and the risk of tissue injury, its routine use in cardiac transplantation is seldom seen. In this manuscript we provide a detailed protocol closely mimicking current clinical practices in the context of DCD with continuous monitoring of heart function, allowing for the evaluation of novel cardioprotective strategies and interventions to decrease ischemia-reperfusion injury.
In this model, the DCD protocol is initiated in anesthetized Lewis rats by stopping ventilation to induce circulatory death. When systolic blood pressure drops below 30 mmHg, the warm ischemic time is initiated. After a pre-set warm ischemic period, hearts are flushed with a normothermic cardioplegic solution, procured, and mounted onto a Langendorff ex vivo heart perfusion system. Following 10 min of initial reperfusion and stabilization, cardiac reconditioning is continuously evaluated for 60 min using intraventricular pressure monitoring. A heart injury is assessed by measuring cardiac troponin T and the infarct size is quantified by histological staining. The warm ischemic time can be modulated and tailored to develop the desired amount of structural and functional damage. This simple protocol allows for the evaluation of different cardioprotective conditioning strategies introduced at the moment of cardioplegia, initial reperfusion and/or during ex vivo perfusion. Findings obtained from this protocol can be reproduced in large models, facilitating clinical translation.

This protocol shows a simple and flexible approach for the evaluation of new conditioning agents or strategies to increase the feasibility of cardiac donation after circulatory death.

Dolaşım ölümünden sonra kardiyak bağış öncesi klinik model

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after ...