Bu protokol, dolaşım ölümünden sonra bağışlanan kalplerin kullanımına olanak sağlayacak farklı kardiyoprotektif kondisyon stratejilerinin değerlendirilmesini kolaylaştırarak sınırlı organ nakli organ temini konusunu hedeflemektedir. Orta ayarlanmış bir ısıtma yastığı üzerinde hayvan yerleştirin. Anesteziedilmiş yetişkin sıçanda parmak ucuna yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra rektal sıcaklık sondası yerleştirin.
Bir arka pençe bir transdermal darbe oksimetre sensörü takın ve vücut ısısını korumak için bir emici ped ile sıçan kapağı. Boyunda üç-dört santimetre orta hat deri kesi yapmak, ve künt ucu kavisli makas kullanın deri altı doku künt diseksiyon, sağ sternohyoid kas ortaya çıkarmak için. Nontravmatik forceps kullanarak, sağ karotis arter kadar yanal kas hareket, juguler ven, ve vagus siniri.
Vagus sinirini karotis arterden dikkatlice ayırmak için makas kullanın. Sağ juguler vene kilogram başına 2,000 uluslararası ünite enjekte edin, kan sızıntısını önlemek için iğne geri çektikten sonra enjeksiyon bölgesine basınç uygulayın. Karotis arter etrafında iki 5-0 ipek dikiş geçmek için kavisli forceps kullanın.
Sıkıca maruz arterin üstün yönü karotis arter tıkanıklığı için distal sütür takın, proksimal dikiş çözülmüş tutmak, ve bir stereo mikroskop altında sıçan yerleştirin. Sonra dikkatle karotis arterin ön duvarı üzerinde bir milimetrelik kesi yapmak için mikrocerrahi makas kullanın, ve aort kemer doğru 22-gauge, bir inç kapalı intravenöz kateter eklemek. Büyütme ve mikrodisese araçlarının kullanımı bu adımlar için son derece tavsiye edilir.
Kanamayı önlemek için proksimal sütür gerilerek temiz bir alan elde edilebilir. Kardiyak bağış ex vivo cardioplegia cihazı monte etmek için gereklidir. DCD protokolünü başlatmak için önce hayvanı ektübasyona, sonra da nefes borusunu kenetlemek için sivrisinek forcep'leri kullanarak agonal evreye başla.
En yüksek sistolik kan basıncı 30 milimetrenin altına düştüğünde fonksiyonel WIT'yi saymaya başlayın. WIT sonunda, gerekirse bir Alm retraktör ile toraks açık tutarak, bir medial sternotomi gerçekleştirin. Kardiyoektomi tamamlamak için pulmoner venler ve diğer torasik yapılardan kalbi ayırın.
Ex vivo sistemine hızlı bir ulaşım için kalbi hemen buz gibi Krebs çözümüne daldırın. Langendorff cihazına aortu sıkıca tamir etmek için 2-0 ipek sütür kullanın ve sonra stopcock açın. Şimdi kanüle akışı tamamen açın ve ilk reperfüzyon ve stabilizasyon süresini başlatın.
Kalbi, atria basınç sensörüne bakacak şekilde döndürün ve gerekirse sol ventrikül atriyal açıklığı genişletmek için pulmoner damarları inceleyin. Daha sonra, bir basınç sensörüne bağlı bir lateks balon takın ve balonun ventrikülün içine tam olarak yerleştirildiğinden emin olun. Yavaşça son diyastolik basınç cıva 15 milimetre ulaşana kadar tuzlu balon doldurun.
Koroner damarları delmeden kalbin ön yüzüne pacing elektrodu yerleştirin. Spontan dayak gözlendikten sonra, dakikada 300 atım için pacing ayarlayın. 10 dakikalık stabilizasyondan sonra, yenileme ve değerlendirme aşamasına başlamak için sürekli intraventriküler basınç ölçüm kaydını başlatın.
Bir saat sonra, Langendorff aparatından kalbi çıkarın ve atria'yı çıkarmak için düz yüksek karbonlu çelik bıçak kullanın. Sağ ventrikül aşağı bakacak şekilde, bir ila iki milimetre kalınlığında enine ventriküler dilimler kesin. Doku üçüncü dilim sağ ventrikül çıkarmak ve snap downstream biyokimyasal analizler için sol ventrikül dondurmak.
Kalan bölümleri PBS'de yeni hazırlanmış %5'lik TTC çözeltisine 37 derecede 10 dakika batırın. Ertesi sabah, numuneleri taze PBS'de iki kez yıkayın ve görüntüleme için numuneleri taze PBS'ye batırın. Canlı dokular tuğla-kırmızı renkli görünür.
Ekstübasyondan sonra, kan basıncı hızla öngörülebilir bir model düşer ve ölüm beklenen zaman az beş dakikadır. Burada, sıfır, 10 ve 15 dakikalık WIT'yi takiben yenilemenin başlangıcındaki ortalama basınç ve zaman eğrileri gösterilir. Kontraktil fonksiyon zamanla düzelecek, WIT kısa sürekullanımı sözleşme normale dönmek için izin vemorf hasar tespit edilemez.
Kardiyopleji ile eklenen bir kondisyon ajanının kullanımı ve stabilizasyon aşamasında bu modelde 15 dakikalık WIT'nin verdiği hasarın kardiyoprotektif ajanlar tarafından modülasyona uygun olduğunu göstermiştir. Bu teknik, ilgili tüm değişkenlerin ve farmakolojik ve farmakolojik olmayan müdahale testlerinin tam olarak kontrol altına alınmasına olanak sağlar ve daha büyük modellerde çoğaltılarak klinik çevirinin kolaylaştırılmasını sağlar.
