The authors are grateful for the support from the Center for Predicative Medicine Animal Models (Carol Vanover, Ashley Biller and Jennifer Kraenzle) and Microbiology (Daniel Cramer and Julie Sotsky) Core Facilities. This work was supported by funding from the NIH (HHSN272201000033I to M.B.L and J.M.W.).

Not Burada açıklanan tüm işlemler gözden ve Louisville Kurumsal Biyogüvenlik Komitesi (protokol # 13-056) ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (protokol # 13-064) Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. Boya hazırlanması 1. <ol><li> % 0.1 seyreltin (ağırlık / hacim) PBS içinde Coomassie Parlak Mavi ve 0.45 uM şırınga filtresi kullanılarak filtre ile sterilize. </li></ol> Pseudomonas aeruginosa Kültür 2. Hazırlık <ol><li> İlaçların uygulanmasından önce 15 saat, tek bir bakteri kolonisi ile sıvı kültürü içinde 3 ml inoküle. </li><li> Bir karıştırıcıda (200 rpm) ile 37 ° C&#39;de, kültür 15 saat büyütün. </li><li> Santrifüj 30 saniye için bir 1.5 ml mikrofüj tüpü 12.000 x g, kültürün 1 mi. </li><li> Ortamı çıkarın ve PBS içinde 1 ml pelletini. </li><li> PBS içinde bakteriyel stok süspansiyonu 01:10 bir kısım seyreltin ve belirlemek için seyreltilmiş bakteri süspansiyonu OD 600 ölçmekbakteri konsantrasyonu. </li><li> IMIT aşılama için 50 ul bir dağıtım hacmi kullanılarak bakteriyel inokulum istenen konsantrasyona getirilebilmesi için PBS içinde Bakteriyel stok süspansiyonu seyreltin. </li></ol> 3. IMIT damlatma <ol><li> Izofluran anestezi indüksiyon odasına farelerin bir grup yerleştirin ve 2 kullanarak uyutmak -% 3 izofluran / oksijen karışımı. </li><li> Sedasyon ilk başlangıcında, dik fareyi tutan, fare ense ve boğaz arkasına sonda iğne ile% 2 lidokain solüsyonu 10 ul yönetmek ve çözüm aşağı epiglot için süzülmesini bekleyin. Anestezi odasına fare dönün. <ol><li> Lokal anestezik olarak tam etkisini almaya lidokain izin vermek 5 dakika en az izin. </li></ol></li><li> Fareler sedasyon istenen seviyeye geldikten (60 bpm ~ oranı nefes), sedasyon korumak için% 2 izofluran azaltır. </li><li> 250 ul gaz geçirmez içine Önyükle&#39;nin boya veya bakteriyel aşı22 G, uzun künt iğne ile hassas şırınga uygun. <ol><li> İlk şırınga Teflon piston tarafından ölçülen havanın 150 ul kadar çizin. Daha sonra, şırınga gövdesi üzerindeki 200 ul işaretine 150 ul işaretinden Teflon® pistonu ilerletilmesiyle aşı 50 ul belirlemektedir. NOT: Örnek entübe fare içine çıktığında, 50 ul süspansiyon akciğerlerde inokülumu dağıtacak 150 ul hava yastığı ile, ilk teslim takip edilecektir. </li></ol></li><li> Indüksiyon odasından bir fareyi çıkarın ve entübasyon platformda sırtüstü yatıyordu. Velcro şerit bağlı bir O-ring ile kesicilerin çengel ve platforma Velcro sabitleyerek platforma fareyi sabitleyin. 45 ° eğim için fareyi kaldırın. </li><li> Bir mikro pamuk aplikatör kullanarak, Dominant eli kullanarak, bir dönme hareketi ile dilini çekin. </li><li> Nondominant yandan, her iki ma bir entübasyon spekülümleriyle bir faaliyet otoskop uyum kullanındil çekilmesini intain ve glottis görselleştirmek. </li><li> Baskın elinizle, (kateter maruz kateter 10 mm silikon kovanı ile uyum) fare trakea içine 10 mm derinliğe kadar kateteri oturma, fareyi entübe 20 G kateter aracılığıyla dişli bir kılavuz tel kullanın. Otoskop / speculum çıkarın. </li><li> Fare doğru kısaca renkli bir boya içeren 1/16 &quot;açık bir boru Luer bağlı uzunluğu takarken dominant olmayan elle kateter güvence entübe edildiğini onaylayın. NOT: boya hızla nefes cevaben ileri geri göç edecek. </li><li> Entübasyon onay Bu noktada kurulmuş değil eğer sonraki adımlara devam etmeyin. Entübasyon başarısız teşebbüs ederse, entübasyon bir ek girişimi için kateter ve kılavuz tel sıfırlayın. NOT: Bu fare travma olmaksızın tek oturumda fare ikiden fazla entübasyon girişimi önerilemez olduğunu. </li><li> Devamsıvı süspansiyon / hava yastığı içeren hassas şırınga / Künt iğne takarken dominant olmayan elle kateteri sabitleyin. </li><li> Doğrudan tek bir sıvı hareket akciğer içine, sıvı / hava dağıtın ve hemen fare iğne / kateter çekilir. </li><li> Bir kafes fare dönün ve anestezi kurtarma sağlar. </li></ol> IMT 4. Teslim Karakterizasyonu <ol><li> IMIT uygulamasından sonra, uygun bir zaman sonrası aşılamadan CO 2 havasızlık fare euthanize. </li><li> Bir diseksiyon gemide ötenazi fare Güvenli ve% 70 EtOH bücür şişe kullanarak göğüs ve karın ıslatın. </li><li> Akciğerlerde bir görüntüleme maddesi dağılımının değerlendirilmesi ise, steril bir teknik kullanılarak hayvandan ciğerleri çıkarın ve görüntüleme için uygun olarak akciğerlere görüntüler. NOT:. Akciğerler uygun fiksasyon veya kriyokorunmasında yoluyla ek histolojik boyama teknikleri için hazırlanabilir &lt;/ Li&gt; <li> Enfekte akciğer dokusunun bakteri yükünü değerlendirirken ise, steril tekniği kullanarak hayvandan akciğerleri kaldırmak. Yer akciğerler steril içine 1 oz örnek torba tartılır. Tartın ve numune kabına + akciğer ağırlığı kaydedin. <ol><li> Her bir numune, çanta + dokulara steril 1 x PBS&#39;de 1 ml ilave edilir. Örnek çanta kapatın. </li><li> Örnek çanta + doku üzerinde 25 ml serolojik pipet haddeleme nazik dokuları homojenize. </li><li> (Çalışılan LB veya bakteriyel türe uygun şekilde) agar plakası üzerine, akciğer, steril PBS içinde homojenat levha ve seri dilüsyonları oluşturmak: <ol><li> Daha sonra, agar plakası üzerinde çok kanallı göre, üçlü numuneler plaka çok kanallı pipet ile U tabanlı, 96 oyuklu bir plaka içerisinde altı kat seri seyreltme yapılması. </li></ol></li><li> Gece boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edin agar ve ertesi gün koloni oluşturan birim numaralandırmak. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Reznik, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+anatomy,+physiology,+and+function+of+the+upper+respiratory+tract.">Comparative anatomy, physiology, and function of the upper respiratory tract.</a> Environ Health Perspect. 85, 171-176 (1990).</li><li>Hoyt, R. F. J., Hawkins, J. V., St. Clair, M. B., Kennet, M. B., Fox, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+2.">Chapter 2.</a> The Mouse in Biomedical Research, Volume 2, Second Edition: Diseases (American College of Laboratory Animal Medicine). 2, 23-90 (2007).</li><li>Visweswaraiah, A., Novotny, L. A., Hjemdahl-Monsen, E. J., Bakaletz, L. O., Thanavala, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+tissue+distribution+of+marker+dye+following+intranasal+delivery+in+mice+and+chinchillas:+a+multifactorial+analysis+of+parameters+affecting+nasal+retention.">Tracking the tissue distribution of marker dye following intranasal delivery in mice and chinchillas: a multifactorial analysis of parameters affecting nasal retention.</a> Vaccine. 20, 3209-3220 (2002).</li><li>Eyles, J. E., Spiers, I. D., Williamson, E. D., Alpar, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+distribution+of+radioactivity+following+intranasal+administration+of+radioactive+microspheres.">Tissue distribution of radioactivity following intranasal administration of radioactive microspheres.</a> J Pharm Pharmacol. 53, 601-607 (2001).</li><li>Southam, D. S., Dolovich, M., O'Byrne, P. M., Inman, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+intranasal+instillations+in+mice:+effects+of+volume,+time,+body+position,+and+anesthesia.">Distribution of intranasal instillations in mice: effects of volume, time, body position, and anesthesia.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 282, 833-839 (2002).</li><li>Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+murine+intranasal+dosing+efficiency+using+luminescent+Francisella+tularensis:+effect+of+instillation+volume+and+form+of+anesthesia.">Visualization of murine intranasal dosing efficiency using luminescent Francisella tularensis: effect of instillation volume and form of anesthesia.</a> PLoS ONE. 7, (2012).</li><li>Lathem, W. W., Crosby, S. D., Miller, V. L., Goldman, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+primary+pneumonic+plague:+a+mouse+model+of+infection,+pathology,+and+bacterial+transcriptional+activity.">Progression of primary pneumonic plague: a mouse model of infection, pathology, and bacterial transcriptional activity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 17786-17791 (2005).</li><li>Warawa, J. M., Long, D., Rosenke, R., Gardner, D., Gherardini, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescent+diagnostic+imaging+to+characterize+altered+respiratory+tract+colonization+by+the+Burkholderia+pseudomallei+capsule+mutant.">Bioluminescent diagnostic imaging to characterize altered respiratory tract colonization by the Burkholderia pseudomallei capsule mutant.</a> Front Microbiol. 2, 133 (2011).</li><li>Gutierrez, M., Pfeffer, T. L., Warawa, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+3+Secretion+System+cluster+3+is+a+critical+virulence+determinant+for+lung-specific+melioidosis.">Type 3 Secretion System cluster 3 is a critical virulence determinant for lung-specific melioidosis.</a> Submitted. , (2014).</li><li>Fodah, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+Klebsiella+pneumoniae+comparative+genetic+analyses+with+virulence+profiles+in+a+murine+respiratory+disease+model.">Correlation of Klebsiella pneumoniae comparative genetic analyses with virulence profiles in a murine respiratory disease model.</a> PLoS ONE. In revision, (2014).</li><li>Soto-Montenegro, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+airway+distribution+of+transnasal+solutions+in+mice+by+PET/CT+imaging.">Assessment of airway distribution of transnasal solutions in mice by PET/CT imaging.</a> Mol Imaging Biol. 11, 263-268 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

IMIT İnstilasyon tekrarlanabilir akciğere doğrudan reaktifleri aşılamak için yeteneği var olan solunum hastalığı modellerinde yönelik önemli geliştirmeler sunuyor. Bu IMIT tekniği gerçekleştirir ideal anestezi ve caging lojistik yöneten biri iki araştırmacı, bir takım için ideal bir hızlı yaklaşım ve diğeri. Fare başına 3 dakika - Büyük çalışmaları 2 ortalama süresi taahhüdü ile IMIT kullanılarak yapılabilir. Yaklaşım bir anestezik olarak izofluran kullanımını kolaylaştırır, çünkü, fareler geri kazanımı yoluyla hayvanları izleme hayvancılık süresini azaltarak, anestezi hızla iyileşir. IMIT yönteminin teknik açıdan en zor yönü fareler entübasyon ilk adımıdır. IMIT gerçekleştirmek için öğrenme Bireyler bu ilk kateter yerleştirilmesi aşamasında ve entübasyon sağlanması boya hareketin görsel onay yoluyla elde edilmiştir odaklanmak edebiliyoruz. Yaklaşımın faydası akciğer-spectüpte İnstilasyon yeni araştırmacı hem güvenini hem de zor bir hayvan entübe girişiminde uzman artar entübasyon teyidi kullanımı ile garanti edilmektedir. Başarılı entübasyon olasılığını optimize kilit unsurları şunlardır: Bir derin sedasyon elde i), ii) ağızda Spekül doğru yerleştirme iii) iyi derinlik yerleştirme, epiglot iyi görselleştirme izin için yeterli çalışma süresi sağlamak için aynaları dil işlem boyunca geri kalır, ve prosedür, rahat ve sürekli bir yaklaşım ile yapılır ve böylece, devirme platformun iv) kullanımı araştırmacının el destek böylece. IMIT prosedürün sınırlamalar biri IMIT instilasyon etkinlikleri frekansı ile ilişkilidir. Cevapsız entübasyon ile ilişkili potansiyel travma nedeniyle, ikiden fazla entübasyon girişimleri (iki isabetsizlik için) tek oturumda yapılan tavsiye edilmez. IMITkabiliyeti mükemmel bir potansiyel murin akciğer içine terapötik sağlamak için kullanılacak olan, akciğere reajanı çok sık teslimat yararlanabilir Ancak terapötik rejimler IMIT için uygun olmayabilir. Bu IMIT önemli bir travma olmaksızın bir murin akciğer içine reaktifleri teslim etmek için günlük olarak kullanılabilecek bu mümkün olabilir, ancak entübasyon bağlantılı travma çoğunda olduğu gibi, yüksek vasıflı bir araştırmacı tarafından yapılan yalnızca kaçırılmış entübasyon olayla ilişkili olduğu düşünülmektedir . Bu tür yüksek frekanslı IMIT yerel veteriner hekimler ve IACUC ile ele alınmalıdır. IMIT ek bir potansiyel bir sınırlama entübe olan fare boyutudur. 20 G kateter Bu aralıktaki değerlere sahip farelerin trakea için uygun bir boyutta olduğu bulunmuştur 22 g, - yukarıda tarif edilen IMIT prosedürü yaklaşık 17 fareleri kullanılarak geliştirilmiştir. Büyük kateterler başarılı yaşlı farelerin kullanılmıştır; IMIT m ilk geliştirme&gt; 20 gr arasındadır, BALB / c farelerinde bir 18 G kateter ade kullanımı. Alternatif bir kateter boyutlar kullanılıyorsa da önemlisi, küt iğne kateter lümeni uygun ve sadece kateter ucu ötesine 1 mm uzanan bir uzunluğa kesilmiş olan kaynaklı olmalıdır. 17 g&#39;dan küçük farelerin Entübasyon mümkün olabilir, fakat gerekli uzmanlık nedeniyle tavsiye edilmez, ve daha küçük kateter ve yukarıda tarif edilen daha Spekül kullanımını gerektirecektir. P. ek olarak birçok solunum patojenlerin verilmesi için IMIT kullandık B. dahil aeruginosa, pseudomallei 9 ve Klebsiella pneumoniae 10. IMIT Model B çalışmalarımız önemli ilerlemeler kaydetmiştir pseudomallei solunum hastalığı, burun aşılama yerine insan hastalığında 9 gözlenen sistemik hastalık bitiş daha farelerin erken, ÜRT-ilişkili morbiditeye neden olduğu tespit sahip. B. pseudomallei Tier 1 selec olduğunubiyosavunma etki t madde, ve, solunum hastalık modelleri Aerosol çıkarmasından için geliştirilmektedir gibi olan modeller silaha patojen için giriş potansiyel biyosavunma ilgili yol. Mevcut aerosol modelleri RBB ve lrt hem de enfeksiyona neden için, aynı potansiyel erken hastalık fenotipi, B. göre olan burun içi model belirledik pseudomallei solunum hastalığı aerosol model için geçerli olabilir. IMIT modelinin bir gelecek uyarlama farelerin sadece akciğer içine hedef Aerosol uygulaması için entübe edildiği entübasyon aracılı aerosol yoluyla (IMAD) olabilir. Mekanik fanlar aerosollaştınlmış, sıvı bazlı ziyade, patojen meydan sunmak için adapte olabilir izofluran anestezisi, korumak için şu anda kullanılabilir. IMIT akciğere bakterilerin iletimini optimize etmek için bir yöntem olarak, başlangıçta gelişmiş değil, aynı zamanda, fare akciğer içine, diğer reaktifler verilmesi için uygulama sahiptir. Dis olarakyukarıda ele alınan, düşük verimlilik farelerde terkiplerin burun içinden sağlanması, akciğerlerin hedef organı içine reaktiflerin son derece değişken teslimat. Biz IMIT olarak&gt;% 98 dağıtım etkinlik ve multilober dağılımına sahip yaklaşımları için diğer akciğere verilme için mükemmel bir alternatif olduğunu göstermiştir, oysa sıçangil akciğere Pozitron Emisyon Tomografisi (PET) görüntüleme reaktifleri burun içinden sağlanması,% 40 iletim verimliliği 11 elde edildi. Akciğere hedeflenen bir gönderim bu gelişme solunum hastalığının tedavisi için terapötik teslimat tekrarlanabilirliğini artırma potansiyeline sahiptir. I) Çevre akciğer tahriş edici etkisi, ii) akciğer kanseri fenotipik çalışmalar, iii) akciğer özgü siRNA knock-down: IMIT benzer çalışmaları fayda sunabilir.

Fareler, solunum hastalıklarının bir sayısız da dahil olmak üzere çok sayıda insan hastalık açıklamalarını modellemek için kullanılmıştır. Yedek hastalık modelleri genellikle tipik olarak önemli fizyolojik veya iki konak modellerinde immün farklılıklar nedeniyle, bir modellenen hastalığın tüm yönlerini özetlemek mümkün değildir. Böylece, model sistemlerinin iyileştirilmesi bir gol suretler daha yakından bir hastalık sürecini ayna veya özgün ana bilgisayar sisteminde görüldüğü gibi yanıt ev sahipliği yapmaya izin yaklaşımlar geliştirmektir. Onlar havasını hangi mekanizma fareler ve insanlar arasında birçok önemli fizyolojik farklılıklar vardır. URT ve LRT boyutları arasında anlamlı rasyometrik farklılıkların bu farklar bulunuyor. Bu fareler&gt; 100 toplam akciğer kapasitesi 1,2 karşı normalize insanlara ÜRT yüzey alanı, kat sahip olduğu tahmin edilmiştir. Bu durumda, fare konka breathi çok daha büyük bir oranını teşvik etmek için solunan havanın çok daha geniş bir filtreleme için izinburun boşluğunun enfeksiyon hastalığın ilerlemesinde önemli bir rol oynar eğer ng, pnömoni çalışmaları üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir. Çeşitli yaklaşımlar insan gibi solunum yolu hastalığı araştırmak için, farelerin ciğerlerine bakterileri aşılamak için kullanılmıştır. Bu yaklaşımlardan en çok sıvı bir süspansiyon, bir fare, bir ya da her iki burun tatbik edildiği intranazal aşılama vardır. Nispeten basit iken, burundan aşılamadan 3-5 yoluyla lrt damlatma verimliliğini etkileyebilir kullanılan anestezinin damlatılması hacmi ve türü olarak uyarılar. Spesifik olarak, Miller ve diğ. en az 50 ul lrt 6 içine bakteri damlatma ile sonuçlanmadı hacimlerde, Francisella tularensis bu burun içi instilasyon göstermiştir. Anestezi için enjekte ketamin / ksilizin karşıt olarak inhale izofluran kullanırken Onlar daha iyi lrt instilasyonunu gözlendi. Ancak, ExperiencYersinia pestis, intranazal aşılama e izofluran (MBL, yayınlanmamış veriler) kıyasla daha tutarlı bir aşı, ketamin / ksilazin kullanılarak elde edilebilir gösterir. Bu farklılıklar kullanılan patojene veya laboratuar prosedürlerinde, çeşitlilikten dolayı, ama önemlisi bu teknikte olası değişkenliği vurgulamak atfedilebilir. Bundan başka, başlangıç ​​bakteriyel inokulum nispeten düşük bir yüzdesi ciğere erişmesi burun içi instilasyon göstermektedir kısa bir süre sonra hasat akciğerlere bakterilerin büyük sayıda düşündüren (Y. pestis durumunda, sadece% 10 instilasyon 7 1 saat sonra elde edildi) RBB olarak muhafaza edilir (veya mide-barsak kanalında Yutulan) olabilir. Organizma, insan hastalığı ile tutarlı bir şekilde, sıçangil burun boşluğunu kolonize edebilen ise, bazı hastalık modellerinde, ÜRT mukoza bakteri, bu önemli bir çökelme hastalığın ilerlemesinin anlamamıza karıştırıcı etki. Örneğin, in vivo kullanımı &lt;/ Em&gt; görüntüleme, bu burun içi instilasyon yöntemiyle 8 ile iletildikleri zaman, insan urt kolonize etmez Burkholderia pseudomallei, sıçangil burun boşluğunun ezici fırsatçı enfeksiyonlara neden olduğu gözlenmiştir. Farelerin ciğerlerine bakterilerin aşılanması için diğer yöntemler de enfeksiyonlu hastalık araştırmalarında kullanılmıştır. Transoral [sindirim sistemi ve LRT]; ancak, burun damlatılması ile karşılaştırıldığında bu yöntemler çoklu siteleri (örneğin, aerosol [URT ve LRT] enfeksiyon başlatılması için potansiyelini ortadan kaldıracak olmadan daha fazla teknik uzmanlık ve / veya pahalı ekipman gerektiren eğilimindedir ve cerrahi intratraşel [LRT ve kan akışı]). Enfeksiyonun ikincil siteleri ile ilişkili olabilecek olası komplikasyonları göz önüne alındığında, biz UrT atlar ve doğrudan anestezi farelerin ciğerlerine patojeni sunan bir intratraşel yaklaşım geliştirmeye çalıştılar, ama aynı zamanda yanlışlıkla inoculat sınırlarKan akımı veya GI kanalı içine iyon. Bu amaçla, entübasyon-aracılı intratraşel (IMIT) damlatılması önce damlatılmasını uygun kateter yerleştirme doğrulamak için bir ara adım ekleyerek inokulum lrt instilasyonunu garanti cerrahi olmayan bir prosedür olarak geliştirilmiştir. Görsel akciğerlerde inokulum geniş dağılımını göstermektedir, ve P. Bu yöntem, boya instilasyonunu kullanılarak tarif edilmektedir aeruginosa, instilasyon akciğere Bu yöntemin oldukça etkili teslimatı (&gt; aşı% 98) gösterdi. Önemli olarak başlangıçta bakteriyel verilmesi için geliştirilmiş olup, IMIT de için etkin bir araç sunmaktadır: diğer solunum yolu hastalığı modellerinde ii) &#39;ın özel terapötik teslimat çalışma için çeşitli moleküllerin i) damlatma ve iii) bazik akciğer fonksiyon testleri, hedef dahil akciğere siRNA teslimat.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1035">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:160px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:447px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Rodent, Tilting WorkStand</td>
			<td style="width:160px;">Hallowell EMC</td>
			<td style="width:119px;">000A3467</td>
			<td>Base should be detached when working in a BSC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Operating Otoscope Head</td>
			<td style="width:160px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:119px;">21700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Otoscope 3.5 V Li Battery</td>
			<td style="width:160px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:119px;">71900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:311px;">Mouse Intubation Specula short, Autoclaveable</td>
			<td style="width:160px;">Hallowell EMC</td>
			<td style="width:119px;">200A3589S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Incisor Loops</td>
			<td style="width:160px;">Hallowell EMC</td>
			<td style="width:119px;">210A3490A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Cotton fine tip applicator</td>
			<td style="width:160px;">Puritan</td>
			<td style="width:119px;">871-PC DBL&#160;</td>
			<td>Used for tongue retraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">I.V. Catheter, 20G</td>
			<td style="width:160px;">Exel Int</td>
			<td style="width:119px;">26741</td>
			<td>Optional: fit a silicon sleeve with 10mm exposed catheter surface</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Gas tight syringe, 250ul</td>
			<td style="width:160px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">81120</td>
			<td>Used for delivery of liquid inoculum by IMIT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Blunt Needle, 22G</td>
			<td style="width:160px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">91022</td>
			<td>Trim to length to protrude 1mm from 20G catheter</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:311px;">Guide wire (Fiber optic wire, 0.5mm)</td>
			<td style="width:160px;">TheFiberOpticStore.com</td>
			<td style="width:119px;">FOF .50</td>
			<td>Cut to 6&#34; length: used as guide wire for intubation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Tuberculin syringe, 1ml</td>
			<td style="width:160px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td>Assemble with fiber optic wire as guide wire</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Brilliant Blue R (Coomassie)</td>
			<td style="width:160px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">B0149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Tygon tubing, 1/16&#34;</td>
			<td style="width:160px;">Saint Gobain</td>
			<td style="width:119px;">ALC00002&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Male luer 1/16&#34; barb</td>
			<td style="width:160px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">45503-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Female luer 1/16&#34; barb</td>
			<td style="width:160px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">45500-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Lidocaine, USP</td>
			<td style="width:160px;">Spectrum</td>
			<td style="width:119px;">LI102</td>
			<td>pH lidocaine into solution at 2%(w/v) pH7.0</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">Sample bag, 1oz</td>
			<td style="width:160px;">Whirl-Pak</td>
			<td style="width:119px;">B01067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:311px;">U-bottom 96 well plate, sterile</td>
			<td style="width:160px;">Greiner</td>
			<td style="width:119px;">650161</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intubation-mediated intratracheal (imit) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system

Solunum hastalığı çalışmalar tipik vekil sistemleri gibi fare modellerinin kullanımını içerir. Bununla birlikte, özellikle üst solunum yollarının (ÜRT) &#39;de murin ve insan solunum yolu şekli bir çok fizyolojik farklılıklar vardır. Potansiyel olarak, bu hastalıklar çalışma fare modeli olan faydalılığı sınırlandırmakta, burun içi instilasyon teknikler kullanılarak Bazı modellerde, murin burun boşluğunda bu farklılıklar, alt solunum yolunun (MDT), hastalığın ilerlemesi ve sunum üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir. Bu nedenlerden dolayı, RBB tutulumu yokluğunda lrt hastalığı araştırmak amacıyla, farenin akciğerlerinde doğrudan bakteri aşılamak için bir tekniğin geliştirilmesi de avantajlı olacaktır. Biz bu akciğer özel uygulama tekniği entübasyon-aracılı intratraşel (IMIT) instilasyonunu tabirinin. Bu yöntem ile daha invaziv nda geleneksel sırasında oluşabilecek kan, damlatma için potansiyeli en aza indirirÖnal cerrahi intratrakeal enfeksiyon yaklaşımlar ve arızi sindirim sistemi teslim olasılığını sınırlar. IMIT farelerin akciğerine bakterilerin doğrudan dağıtım aracılık katetere, kör bir iğne sokulması ile, soluk borusu içine doğru bir kateter yerleştirme sağlamak için bir ara adım, entübe takip edildiği, bir, iki aşamalı bir işlemdir. Bu yaklaşım, akciğerlerde reaktifi mükemmel dağılımı ile akciğerlere, bir teslimat&gt; 98% etki kolaylaştırır. Bu nedenle, IMIT insan solunum yolu hastalığı araştırmak için belirteci olarak fareler kullanma yeteneği üzerine iyileştirilmesi, doğrudan akciğere lrt hastalık ve tedavi teslim incelemek için yeni bir yaklaşımı temsil etmektedir. Ayrıca, bu iletim sisteminin doğru ve tekrarlanabilirliği de Good Laboratory Practice Standartları (LU) için uygun, hem de akciğer yüksek verim gerçekleştirilmesini gerektiren reaktifler geniş bir iletim yapar.

IMIT yöntemi ile aşılanan maddenin dağılımını görselleştirmek için,% 0.1 Coomassie Parlak Mavisi 50 ul bir anestezi fare akciğerlerine damla damla akıtıldı. Fare hemen kurban edilmiş ve akciğerleri steril otopsiden yoluyla uzaklaştırılmıştır. Boyanın tüm akciğer lobları teslim edilmiş olduğu 1 göstermektedir. IMIT yöntemi ile akciğerlere verilen bakteri miktarının, fareler üç gruba (n = 3), P. üç farklı konsantrasyonları ile akıtıldı belirlemek için aeruginosa (1.21 x 10 8, 1.21x10 7, ve 1.21 x 10 6 koloni oluşturan birim [CFU] 50 ul başına). Hemen IMIT damlatma sonrası, fareler akciğerleri çıkartılmıştır ötenazi uygulandı, ve bakteri sayıları mikroorganizma (Şekil 2) ile numaralandırılır ve karşılaştırıldı. Akıtıldı ve inokulum teslim akciğerinden kazanılan inokulum&gt;% 98 olan, bu yöntem ile son derece verimlidirHayvanlar. Ayrıca, IMIT instilasyon bağımsız olarak aşı (= 0,9951 R2) konsantrasyonunun yüksek oranda tekrar. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52261/52261fig1highres.jpg" /> Resim 1: IMIT instilasyon akciğerlere inokulum dağıtır her loblarda dağıtılmış% 0.1, Coomassie Parlak Mavisi göster mavi boya, 50 ul ile aşılanan farelerden Akciğerler.. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52261/52261fig2highres.jpg" /> Şekil 2:. Akciğerler Bakterilerin farelere IMIT instilasyon P. ile akıtıldı aeruginosa ve akciğerlerin içine telkin bakteri sayısı (10 CFU Log - iyileşti) tahmin Aşılama karşılaştırıldı (10 CFU Log - teslim). Her bir halka bir tek farenin (CFU / akciğer her biri için n = 3 temsil ederbakteriyel doz).

Watch this Scientific Journal Video about Intubation-mediated Intratracheal IMIT Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System at JoVE.com

Intubation-mediated Intratracheal IMIT Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

Reaktiflerin Entübasyon aracılı intratrakeal (IMIT) instilasyon solunum yolu hastalıkları, hem de akciğer içine doğrudan tedavi reaktifler aşılamak için bir yöntem incelenmesi için mükemmel, invazif olmayan bir yöntemdir. Bu klinik öncesi test için uygun bir hızlı ve yüksek oranda çoğaltılabilir bir yöntemdir.

Entübasyon-aracılı intratrakeal (IMIT) damlatma: A Noninvaziv, Lung-özel Dağıtım Sistemi

Respiratory disease studies typically involve the use of murine models as surrogate systems. However, there are significant physiologic differences ...

intubation-mediated-intratracheal-imit-instillation-noninvasive-lung

Research

JoVE Journal

Medicine

Intubation-mediated Intratracheal (IMIT) Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

24.0K Görüntüleme.  University of Louisville Medical School.  Reaktiflerin Entübasyon aracılı intratrakeal (IMIT) instilasyon solunum yolu hastalıkları, hem de akciğer içine doğrudan tedavi reaktifler aşılamak için bir yöntem incelenmesi için mükemmel, invazif olmayan bir yöntemdir. Bu klinik öncesi test için uygun bir hızlı ve yüksek oranda çoğaltılabilir bir yöntemdir. 

Video: Intubation-mediated Intratracheal IMIT Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and acquired diseases. Apart from congenital or inherited abnormalities with the requirement for long-term expression of the delivered gene, several non-inherited perinatal conditions, where short-term gene expression or pharmacological intervention is sufficient to achieve therapeutic effects, are considered as potential future indications for this kind of approach. Candidate diseases for the application of short-term prenatal therapy could be the transient neonatal deficiency of surfactant protein B causing neonatal respiratory distress syndrome1,2 or hyperoxic injuries of the neonatal lung3. Candidate diseases for permanent therapeutic correction are Cystic Fibrosis (CF)4, genetic variants of surfactant deficiencies5 and &alpha;1-antitrypsin deficiency6.
Generally, an important advantage of prenatal gene therapy is the ability to start therapeutic intervention early in development, at or even prior to clinical manifestations in the patient, thus preventing irreparable damage to the individual. In addition, fetal organs have an increased cell proliferation rate as compared to adult organs, which could allow a more efficient gene or stem cell transfer into the fetus. Furthermore, in utero gene delivery is performed when the individual's immune system is not completely mature. Therefore, transplantation of heterologous cells or supplementation of a non-functional or absent protein with a correct version should not cause immune sensitization to the cell, vector or transgene product, which has recently been proven to be the case with both cellular and genetic therapies7.
In the present study, we investigated the potential to directly target the fetal trachea in a mouse model. This procedure is in use in larger animal models such as rabbits and sheep8, and even in a clinical setting9, but has to date not been performed before in a mouse model. When studying the potential of fetal gene therapy for genetic diseases such as CF, the mouse model is very useful as a first proof-of-concept because of the wide availability of different transgenic mouse strains, the well documented embryogenesis and fetal development, less stringent ethical regulations, short gestation and the large litter size.
Different access routes have been described to target the fetal rodent lung, including intra-amniotic injection10-12, (ultrasound-guided) intrapulmonary injection13,14 and intravenous administration into the yolk sac vessels15,16 or umbilical vein17. Our novel surgical procedure enables researchers to inject the agent of choice directly into the fetal mouse trachea which allows for a more efficient delivery to the airways than existing techniques18.

We developed a novel surgical approach for intratracheal administration of bioactive agents into the mouse fetus. The delivery route is more efficient in targeting the fetal mouse lungs than the commonly used intra-amniotic injection. This procedure has to date not been described in a mouse model.

Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Tıp

Intraoperative Detection of Subtle Endometriosis: A Novel Paradigm for Detection and Treatment of Pelvic Pain Associated with the Loss of Peritoneal Integrity

Endometriosis is a common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this study was to demonstrate the use of a blue dye (methylene blue) to stain peritoneal surfaces during laparoscopy (L/S) to detect the loss of peritoneal integrity in patients with pelvic pain and suspected endometriosis. Forty women with CPP and 5 women without pain were evaluated in this pilot study. During L/S, concentrated dye was sprayed onto peritoneal surfaces, then aspirated and rinsed with Lactated Ringers solution. Areas of localized dye uptake were evaluated for the presence of visible endometriotic lesions. Areas of intense peritoneal staining were resected and some fixed in 2.5% buffered gluteraldehyde and examined by scanning (SEM) electron microscopy. Blue dye uptake was more common in women with endometriosis and chronic pelvic pain than controls (85% vs. 40%). Resection of the blue stained areas revealed endometriosis by SEM and loss of peritoneal cell-cell contact compared to normal, non-staining peritoneum. Affected peritoneum was associated with visible endometriotic implants in most but not all patients. Subjective pain relief was reported in 80% of subjects. Based on scanning electron microscopy, we conclude that endometrial cells extend well beyond visible implants of endometriosis and appear to disrupt the underlying mesothelium. Subtle lesions of endometriosis could therefore cause pelvic pain by disruption of peritoneal integrity, allowing menstrual or ovulatory blood and associated pain factors access to underlying sensory nerves. Complete resection of affected peritoneum may provide a better long-term treatment for endometriosis and CPP. This simple technique appears to improve detection of subtle or near invisible endometriosis in women with CPP and minimal visual findings at L/S and may serve to elevate diagnostic accuracy for endometriosis at laparoscopy.

Loss of peritoneal integrity provides a new paradigm to understand and treat chronic pelvic pain in women with mild forms of endometriosis and can be easily detected using intraoperative instillation of dye at the time of laparoscopy.

Hafif Endometriozis İntraoperatif Algılama: Periton Bütünlüğü Kaybı ile İlişkili Pelvik Ağrı Tespiti ve Tedavisi İçin Yeni Bir Paradigma

Endometriosis is a  common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic  pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this ...

Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular disease and for developing therapeutic intervention. With the increasing availability of knockout and transgenic derivatives, together with a vast amount of genetic information, mice provide one of the best models to study the molecular mechanisms underlying the pathology and physiology of lung diseases. Inhalation, intranasal instillation, intratracheal instillation, and intratracheal intubation are the most widely used techniques by a number of investigators to administer materials of interest to mouse lungs. There are pros and cons for each technique depending on the goals of a study. Here a noninvasive intratracheal intubation method that can directly deliver exogenous materials to mouse lungs is presented. This technique was applied to administer bleomycin to mouse lungs as a model to study pulmonary fibrosis.

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular disease and for developing therapeutic intervention. Here a noninvasive intratracheal intubation method that can directly deliver exogenous materials to mouse lungs is presented.

Noninvaziv Entübasyon Fare Akciğer Patolojisi ve Fizyolojisi Eğitim için

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular ...

Implantation of Fibrin Gel on Mouse Lung to Study Lung-specific Angiogenesis

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and repair damage in simple tissues in the orthopedic and periodontal fields. However, attempts to regenerate the structures and functions of more complex three-dimensional (3D) organs such as lungs have not been very successful because the biological processes of organ regeneration have not been well explored. It is becoming clear that angiogenesis, the formation of new blood vessels, plays key roles in organ regeneration. Newly formed vasculatures not only deliver oxygen, nutrients and various cell components that are required for organ regeneration but also provide instructive signals to the regenerating local tissues. Therefore, to successfully regenerate lungs in an adult, it is necessary to recapitulate the lung-specific microenvironments in which angiogenesis drives regeneration of local lung tissues. Although conventional in vivo angiogenesis assays, such as subcutaneous implantation of extracellular matrix (ECM)-rich hydrogels (e.g., fibrin or collagen gels or Matrigel - ECM protein mixture secreted by Engelbreth-Holm-Swarm mouse sarcoma cells), are extensively utilized to explore the general mechanisms of angiogenesis, lung-specific angiogenesis has not been well characterized because methods for orthotopic implantation of biomaterials in the lung have not been well established. The goal of this protocol is to introduce a unique method to implant fibrin gel on the lung surface of living adult mouse, allowing for the successful recapitulation of host lung-derived angiogenesis inside the gel. This approach enables researchers to explore the mechanisms by which the lung-specific microenvironment controls angiogenesis and alveolar regeneration in both normal and pathological conditions. Since implanted biomaterials release and supply physical and chemical signals to adjacent lung tissues, implantation of these biomaterials on diseased lung can potentially normalize the adjacent diseased tissues, enabling researchers to develop new therapeutic approaches for various types of lung diseases.

Recapitulation of the organ-specific microenvironment, which stimulates local angiogenesis, is indispensable for successful regeneration of damaged tissues. This report demonstrates a novel method to implant fibrin gels on the lung surface of living mouse in order to explore how the lung-specific microenvironment modulates angiogenesis and alveolar regeneration in adult mouse.

Fare Akciğer Fibrin Gel implantasyonu Akciğer özel Anjiogenez Eğitim için

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and ...

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer research. Although there are a number of methods that have been published showing how to intubate mice for pulmonary function measurements, none are without potential problems for rapid tracheal instillation in large cohorts of mice. In the present paper, a simple and quick method is described that enables an investigator to carry out such instillations in an efficient manner. The method does not require any special tools or lighting and can be learned with very little practice. It involves anesthetizing a mouse, making a small incision in the neck to visualize the trachea, and then inserting an intravenous catheter directly. The small incision is quickly closed with tissue adhesive, and the mice are allowed to recover. A skilled student or technician can do instillations at an average rate of 2 min/mouse. Once the cancer is established, there is frequently a need for quantitative histologic analysis of the lungs. Traditionally pathologists usually do not bother to standardize lung inflation during fixation, and analyses are often based on a scoring system that can be quite subjective. While this may sometime be sufficiently adequate for gross estimates of the size of a lung tumor, any proper stereological quantification of lung structure or cells requires a reproducible fixation procedure and subsequent lung volume measurement. Here we describe simple reliable procedures for both fixing the lungs under pressure and then accurately measuring the fixed lung volume. The only requirement is a laboratory balance that is accurate over a range of 1 mg&#8211;300 g. The procedures presented here thus could greatly improve the ability to create, treat, and analyze lung cancers in mice.

The goal of this paper is to describe simple methods that will greatly aid in the setup and analysis of mouse lungs with lung cancer or other pathologies. We present 3 protocols to simply and reliably carry out lung instillations, fixation, and lung volume measurements.

Fare Akciğer Kanseri Araştırma Faydalı instillation ve Fiksasyon Yöntemi

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

A Multimodal Imaging- and Stimulation-based Method of Evaluating Connectivity-related Brain Excitability in Patients with Epilepsy

Resting-state functional connectivity MRI (rs-fcMRI) is a technique that identifies connectivity between different brain regions based on correlations over time in the blood-oxygenation level dependent signal. rs-fcMRI has been applied extensively to identify abnormalities in brain connectivity in different neurologic and psychiatric diseases. However, the relationship among rs-fcMRI connectivity abnormalities, brain electrophysiology and disease state is unknown, in part because the causal significance of alterations in functional connectivity in disease pathophysiology has not been established. Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) is a technique that uses electromagnetic induction to noninvasively produce focal changes in cortical activity. When combined with electroencephalography (EEG), TMS can be used to assess the brain's response to external perturbations. Here we provide a protocol for combining rs-fcMRI, TMS and EEG to assess the physiologic significance of alterations in functional connectivity in patients with neuropsychiatric disease. We provide representative results from a previously published study in which rs-fcMRI was used to identify regions with abnormal connectivity in patients with epilepsy due to a malformation of cortical development, periventricular nodular heterotopia (PNH). Stimulation in patients with epilepsy resulted in abnormal TMS-evoked EEG activity relative to stimulation of the same sites in matched healthy control patients, with an abnormal increase in the late component of the TMS-evoked potential, consistent with cortical hyperexcitability. This abnormality was specific to regions with abnormal resting-state functional connectivity. Electrical source analysis in a subject with previously recorded seizures demonstrated that the origin of the abnormal TMS-evoked activity co-localized with the seizure-onset zone, suggesting the presence of an epileptogenic circuit. These results demonstrate how rs-fcMRI, TMS and EEG can be utilized together to identify and understand the physiological significance of abnormal brain connectivity in human diseases.

Resting-state functional-connectivity MRI has identified abnormalities in patients with a wide range of neuropsychiatric disorders, including epilepsy due to malformations of cortical development. Transcranial Magnetic Stimulation in combination with EEG can demonstrate that patients with epilepsy have cortical hyperexcitability in regions with abnormal connectivity.

Epilepsi Hastalarında Beyin uyarılabilmenin Bağlantı ile ilgili değerlendirmek için bir Multimodal imaging- ve Uyarım tabanlı Yöntemi

Resting-state functional connectivity MRI (rs-fcMRI) is a technique that identifies connectivity between different brain regions based on correlations ...

Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. Irreparable cell damage results in a chronic loss of salivary function that impairs basic oral activities, and increases the risk of oral infections and dental caries. Salivary hypofunction and its complications gravely impact a patient's comfort. Current symptomatic management of the condition is ineffective, and newer therapies to assuage the condition are needed. 
Salivary glands are exocrine glands, which expel their secretions into the mouth via excretory ducts. Cannulation of these ducts provides direct access to the glands. Retroductal delivery of a contrast agent to major salivary glands is a routine out-patient procedure for diagnostic imaging. Using a similar procedure, localized treatment of the glands is feasible. However, performing this technique in preclinical studies with small animals poses unique challenges. In this study we describe the technique of retroductal administration in rat submandibular glands, a procedure that was refined in Dr. Bruce Baum's laboratory (NIH)1, and lay out a procedure for local gland irradiation.

Salivary gland hypofunction, a major adverse effect of head and neck radiotherapy diminishes a patient's quality of life. The demonstration of efficacy of new therapies in animal models is a prerequisite before clinical transition. This protocol describes retroductal administration and local irradiation of rat submandibular glands.

Tükürük hipofonksiyonunun bir Sıçan Modelinde Retroductal Submandibuler Bezi damlatma ve yerelleştirilmiş fraksiyonlara Işınlama

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. ...

A Pleural Effusion Model in Rats by Intratracheal Instillation of Polyacrylate/Nanosilica

Pleural effusion is a prevalent clinical finding of many pulmonary diseases. Having a useful animal pleural effusion model is very important to study these pulmonary diseases. Previous pleural effusion models paid more attention to biological factors rather than nanoparticles in the environment. Here, we introduce a model to make pleural effusion in rats by intratracheal instillation of polyacrylate/nanosilica, and a method of nanoparticle isolation in the pleural effusion. By intratracheal instillation of polyacrylate/nanosilica with concentrations of 3.125, 6.25 and 12.5 mg/kg&#8729;mL, the pleural effusion in rats presented on day 3, peaked at days 7-10 in 6.25 and 12.5 mg/kg&#8729;mL groups, then slowly decreased and disappeared on day 14. When the concentration of polyacrylate/nanosilica increased, the pleural effusion is produced more and faster. This pleural fluid was detected by ultrasound examination or CT chest scanning and confirmed by dissection of rats. Silica nanoparticles were observed in the rats' pleural effusion by transmission electron microscope. These results showed that the exposure to polyacrylate/nanosilica leads to the induction of pleural effusion, which was consistent with our previous report in humans. Additionally, this model is beneficial for the further study of nanotoxicology and the pleural effusion diseases.

Here, we present a protocol to construct a pleural effusion model in rats by intratracheal instillation of polyacrylate/nanosilica.

Plevral efüzyon manken poliakrilat/Nanosilica boğaza korumak tarafından Sıçanlarda

Pleural effusion is a prevalent clinical finding of many pulmonary diseases. Having a useful animal pleural effusion model is very important to study ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Development of a Noninvasive, Laser-Assisted Experimental Model of Corneal Endothelial Cell Loss

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the optical breakdown at the laser focus. Acoustic shock waves and cavitation bubbles are generated, causing tissue rupture. Bubble sizes and pressure amplitudes vary with pulse energy and position of the focal point. In this study, enucleated porcine eyes were positioned in front of a commercially available Nd:YAG laser. Variable pulse energies as well as different positions of the focal spots posterior to the cornea were tested. Resulting lesions were evaluated by two-photon microscopy and histology to determine the best parameters for an exclusive detachment of corneal endothelial cells (CEC) with minimum collateral damage. The advantages of this method are the precise ablation of CEC, reduced collateral damage, and above all, the non-contact treatment.

Here, we present a protocol to detach corneal endothelial cells (CEC) from Descemet&#8217;s membrane (DM) using a neodymium:YAG (Nd:YAG) laser as an ex vivo disease model for bullous keratopathy (BK).

Kornea Endotel Hücre Kaybının Noninvaziv, Lazer Destekli Deneysel Modelinin Geliştirilmesi

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the ...