Biz iPSC nesil uzmanlık ve protokol paylaşımı için, sırasıyla ChR2 ve Synapsin1-tdTomato lentiviral yapıları C. Chai K. Deisseroth ve S. Je teşekkür, WY Leong, teknik destek için, paylaşım reaktif ve uzmanlık için Goh laboratuar üyeleri. Bu çalışma ELG onun Rekabet Araştırmaları Programı (002-082 2008 NRF-CRP UÇK) altında Ulusal Araştırma Vakfı Singapur, Abbott Beslenme ve ELG için Mükemmeliyet Merkezi Akademik (ACE) GlaxoSmithKline (GSK) araştırma ödülü tarafından desteklenen ve GJA ve Eğitim, Bilim ve Kore Teknoloji (MEST) Bakanlığı tarafından finanse Kore Ulusal Araştırma Vakfı World Class Enstitüsü (WCI) Programı (UÇK) tarafından (UÇK Hibe Numarası: BÇYÖ 2009-003) GJA için

<ol>
	<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-speed+mapping+of+synaptic+connectivity+using+photostimulation+in+Channelrhodopsin-2+transgenic+mice.">High-speed mapping of synaptic connectivity using photostimulation in Channelrhodopsin-2 transgenic mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (19), 8143-8148 (2007).</li><li>Boyden, E. S., Zhang, F., Bamberg, E., Nagel, G., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Millisecond-timescale+genetically+targeted+optical+control+of+neural+activity.">Millisecond-timescale genetically targeted optical control of neural activity.</a> Nature Neuroscience. 8 (9), 1263-1268 (2005).</li><li>Nagel, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Channelrhodopsin-2,+a+directly+light-gated+cation-selective+membrane+channel.">Channelrhodopsin-2, a directly light-gated cation-selective membrane channel.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 100 (24), 13940-13945 (2003).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+fast+optical+interrogation+of+neural+circuitry.">Multimodal fast optical interrogation of neural circuitry.</a> Nature. 446 (7136), 633-639 (2007).</li><li>Stroh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+stem+cell+differentiation+in+the+setting+of+automated+optogenetic+stimulation.">Tracking stem cell differentiation in the setting of automated optogenetic stimulation.</a> Stem Cells. 29 (1), 78-88 (2011).</li><li>Weick, J. P., Liu, Y., Zhang, S. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryonic+stem+cell-derived+neurons+adopt+and+regulate+the+activity+of+an+established+neural+network.">Human embryonic stem cell-derived neurons adopt and regulate the activity of an established neural network.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (50), 20189-20194 (2011).</li><li>Viviani, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+coculture+of+neurons+and+glial+cells.">Preparation and coculture of neurons and glial cells.</a> Curr Protoc Cell Biol. 32, 2.7.1-2.7.2.1 (2006).</li><li>Braun, H., G&#252;nther-Kern, A., Reymann, K., Onteniente, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+differentiation+of+human+iPS-cells+in+a+rat+cortical+primary+culture.">Neuronal differentiation of human iPS-cells in a rat cortical primary culture.</a> Acta Neurobiologiae Experimentalis. 72 (30), 219-229 (2012).</li><li>Shivaraj, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurine+induces+proliferation+of+neural+stem+cells+and+synapse+development+in+the+developing+mouse+brain.">Taurine induces proliferation of neural stem cells and synapse development in the developing mouse brain.</a> PLoS ONE. 7, e42935 (2012).</li><li>Okita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+more+efficient+method+to+generate+integration-free+human+iPS+cells.">A more efficient method to generate integration-free human iPS cells.</a> Nature Methods. 8 (5), 409-412 (2011).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+induction+and+long-term+self-renewal+of+primitive+neural+precursors+from+human+embryonic+stem+cells+by+small+molecule+inhibitors.">Rapid induction and long-term self-renewal of primitive neural precursors from human embryonic stem cells by small molecule inhibitors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (20), 8299-8304 (2011).</li><li>Chen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+conditions+for+human+iPSC+derivation+and+culture.">Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.</a> Nature Methods. 8 (50), 424-429 (2011).</li><li>Packer, A. M., Roska, B., Hausser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+neurons+and+photons+for+optogenetics.">Targeting neurons and photons for optogenetics.</a> Nature Neuroscience. 16 (7), 805-815 (2013).</li><li>Marchetto, M. C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Model+for+neural+development+and+treatment+of+Rett+Syndrome+using+human+induced+pluripotent+stem+cells.">A Model for neural development and treatment of Rett Syndrome using human induced pluripotent stem cells.</a> Cell. 143 (4), 527-539 (2010).</li><li>Asrican, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next-generation+transgenic+mice+for+optogenetic+analysis+of+neural+circuits.">Next-generation transgenic mice for optogenetic analysis of neural circuits.</a> Frontiers in Neural Circuits. 7, 160 (2013).</li></ol>

No conflicts of interest declared.

Optogenetik nöronların 13 belirlenen popülasyonlarının aktivasyonu için zamansal ve uzamsal kesinlik sağlar. Deneylerde, mikroskop objektif tüm alanı ChR2 ifade fotoğraf uyarmak sadece kortikal nöronların 30 saniye aydınlattı. Bu sinaptik bağlantıları ko-kültür içindeki nöronların farklı popülasyonlar arasındaki oluşmuş olup olmadığını belirlemek bize izin verdi. Bizim sonuçlar photostimulation bu nöronlar ChR2 ifade presinaptik kortikal nöronların sinaptik girdi almak olduğunu göstermektedir ki, iPSC türetilmiş nöronlarda PSC sıklığını artırmaktadır ortaya koydu. Bu da, iPSC türetilen nöron başarılı bir şekilde kortikal nöronlar devrelerin içine dahil olduğu saptanmıştır. Bu ko-kültür sisteminin oluşturulması için pek çok kritik adım vardır. Bu kaplama ile devam etmeden önce fare NPC türetilmiş astrosit kültürleri, minimal hücre ölümü ile, sağlıklı olmasını sağlamak için önemlidirdiğer hücre türleri. Kortikal nöronlar ve insan NPC sağlıklı astrositlerde üzerine de eklemek ve elektrofizyolojik kayıtlar kültür koşulları ağır bağlıdır. Bu protokolde diğer önemli adımlar astrosit kültürleri üzerine elektroporasyon ve kortikal nöronların kaplama vardır. Hücrelerin geniş bir sayısı elektroporasyon sonra kalıp gibi, en az 6.000.000 kortikal nöronlar, 24 oyuklu plakalar içinde astrosit kültürleri üzerine kaplama için elektroporasyona sağlamak için önemlidir. Biz az 6 milyon hücre elektroporate zaman, hayatta nöronların sayısı elektrofizyolojik kayıtları etkilenen yoğun nöronal ağ oluşturmak olmadığını gözlemledik. Her ko-kültür deney farklı çalışmalar arasında karşılaştırma izin için electroporated kortikal nöronların sayısı da tutarlı olmalıdır. Enzimatik sindirim ile ilgili tüm adımlar için, çok uzun hücre ölümüne neden olabilir sindirim çözelti hücreleri bırakmamaya esastır. Buyaklaşım, diğer nöronlarla sinaptik temas oluşturmak üzere, hastaya özgü fibroblastlar türetilen nöron yeteneği taranması için kullanılabilir. Nöro bozukluğu Rett sendromu (RTT) mustarip hastaların fibroblastlardan elde edilen nöronlar sinaptik transmisyon kusurlar sergilerler: RTT nöronlar ki tahminen bu, daha az sinaptik bağlantı 14 sağlıklı nöronlara göre PSK frekans ve genlik belirgin bir azalma sergiler. Bizim co-kültür sistemi gelişim kusurları görüntüleyen nöronlar üzerinde uyuşturucu etkileri muayene izin verir. Bu hastalıklı insan NPC ekim sırasında ve aynı zamanda nöronal farklılaşma süresi boyunca bileşiklere sürekli maruz kalma sırasında söz konusu bileşikler, ilave edilerek gerçekleştirilebilir. Bu ko-kültür sistemi de uyuşturucu testi için bir model olarak kullanılabilir iken, bu yaklaşım ile bir sınırlama her aday bileşiğin etkilerini araştıran süreci uzun ve gibi sıkıcı olabilir kiBu, yüksek veri akışı tarama yöntemi değildir. Aday bileşikler ile işlemden geçirildikten sonra, iPSC türetilen nöron ayrı PSC&#39;lerin her bileşiğin etkisini belirlemek için yama gerekir. Ayrıca, şu anda hastaların pek mevcut fibroblastlar ve iPSCs vardır. Bu nedenle, daha sabırlı hücrelere sahip ve aynı zamanda yüksek verimli tarama için bu protokolü adapte yakın gelecekte ilgi olacaktır. Örneğin, bu gibi iyonları ya da zar potansiyeli genetik olarak kodlanmış sensör olarak bir etkinlik göstergesi iPSC türetilmiş nöronlar, etiketleyerek yan adım zaman alıcı elektrofizyolojik prosedür ile esas olarak akış oranını artırmak için mümkün olacaktır. Elektrofizyolojik kayıtları gerçekleştirmeden fibroblastları yeniden programlanması gelen, bu ko-kültür sistemi üreten tüm süreç olarak, en fazla 90 gün, sırasıyla yeniden programlama ve nöral indüksiyon adımlarından sonra, insan iPSCs veya NPC ya genişletilmiş olması tavsiye edilir gerektirir,ve kriyoprezerve gelecek deneyler için gerekli zamanı azaltmak için. Deneylerde, biz synapsin1 promotörün kontrolü altında kortikal nöronlarda ChR2 ifade edilmiştir. Bu promotör Pan-nöronal olduğundan, biz muhtemelen hem inhibitör ve eksitatör kortikal nöronlar photostimulating edildi. Gelecek deneylerin amacı, özellikle engelleyici veya uyarıcı ya da devre sorgulamak için ise, daha özel promoterler kullanılabilir. Alternatif olarak, kortikal nöronlar transjenik (ya da virüs enjekte edilen fareler) ChR2 sentezleme, özellikle nöron genetik tanımlanmış alt popülasyonlar hedeflenen elde edilebilir. Örneğin, Cre recombinase sahip bir fare hasat kortikal dokular ChR2 ifade sadece kortikal nöronlar PV internöron 15 olacak bir durum verecektir floxed ChR2 ile bir fare ile geçilen parvalbumin içeren internöronlar (PV internöron) olarak ifade edilmiştir. Böyle ChR2 ifade eden de internöronlardan ko-cu kullanımılture sistemi yamalı iPSC türetilmiş nöron PV internöronlar bir devrenin içine dahil etmek mümkün olup olmadığı tespitine imkan olacaktır. Bir önceki çalışmada 9 dayanarak, kortikal nöronlar in vitro 14 gün sonra dendrit örtüşen olgun. Photostimulation bir yamalı iPSC türetilmiş nöron bir tepkisi yoksa Böylece, bu nöron kortikal nöronlar ile sinaptik bağlantıları yapmak için yeteneğine sahip olmadığını belirtmelidir. Bir iPSC türetilmiş nöron diğer iPSC türetilmiş nöronlar veya kortikal nöronlar ya sinaptik girdi alabilir. Geleneksel yama kelepçe kayıtları kullanılmış olsaydı, bu sinaptik girdi nereden geldiğini ayırt etmek mümkün olmazdı. Bizim sistemin avantajı kortikal presinaptik girişten postsinaptik cevaplar seçici uyarılmış ve tespit edilebilir olmasıdır. Burada özetlenen prosedürler entegre iPSC türetilmiş nöronların yeteneğini değerlendirmek için basit bir yaklaşım sağlamaktanımlanmış bir nöronal ağa.

Son yıllarda, nöron ve nöronal devre fonksiyonu anlayışımız nöronal uyarılabilirliği denetleyen çeşitli Optogenetic araçlar tarafından devrim edilmiştir. Böyle bir alet ışık aktive katyon kanalı, channelrhodopsin-2 (ChR2): ışık uyarımı 1-3 cevaben ChR2 yangın aksiyon potansiyelleri ifade nöronlar. Nöronlar ışığa duyarlı normalde olmadığından, bu olağanüstü yetenek nöronların 4 genetik tanımlanmış nüfusun faaliyet kesin zamansal ve mekansal kontrolü için yeni yollar açılır ve büyük ölçüde beyin fonksiyonlarının çalışmaları hızlandırdı. ChR2 sinir ağları 6 faaliyetlerini düzenleyen nöronal gelişme 5 izlenmesi, farklı amaçlar için kök hücre araştırmaları için uygulanmıştır. Burada nöronal bir eş-kültür sistemine yararını artırmak ChR2 kullanılır. Ko-kültür sistemleri farklı hücre tipleri arasındaki etkileşimlerin değerlendirmesini sağlar.Nöron ve glial ko-kültür, sinir sisteminin ana hücre tipi, genel olarak, bu farklı hücre tipleri arasında sinyal araştırmak ve aynı zamanda fizyolojik yanıtlar, bu sinyal önemini değerlendirmek için, hasar yayılması ve incelemek için kullanılan Potansiyel olarak, bu 7 sinyal yer alan moleküler mekanizmalar. Bir önceki çalışmada, insan iPSCs sıçan kortikal birincil kültür içeren nöronlar, astrositler, oligodendrositler ve mikroglia 8 varlığında nöronların içine çok hızlı bir şekilde ayırt ortaya koymuştur. Bu protokol, insan uyarılmış pluripotent kök hücreler (iPSCs) elde edilen fare kortikal nöronlar ve nöronlar arasındaki sinaptik bağlantıları sorgulamak için bir ko-kültür sisteminde ChR2 kullanan bir yöntemi göstermektedir. Biz astrositlere içine incelemek için adımlar ve hasat beyin dokuları 9 yanı sıra fare nöral progenitör hücreleri korumak ve ayırt etmek için (NPC) açıklamak ve insan NPC&#39;ler into nöronlar ko-kültür sistemi oluşturmak için. Bu ko-kültür sistemi kurmak için, biz Okita ve arkadaşları tarafından tarif entegrasyon-ücretsiz yeniden programlama yöntemi kullanıldı. 10 insan iPSCs oluşturmak için. Li ve arkadaşları tarafından tarif edildiği gibi bu iPSCs sonra verimli bir şekilde küçük moleküllü inhibitörleri kullanılarak kimyasal olarak tanımlanmış ortamlarda NPC ayrışmıştır edildi. 11 Ko-kültürlerinde nöronların farklı popülasyonlar Domates (tdTomato) dimer floresan protein, tandem ile iPSC türetilen nöron kortikal nöronlarda ChR2 ekspresyonunun saptanması ve etiketleme yoluyla tespit edilebilir. Kortikal Nöronların Optogenetic photostimulation ile iPSC türetilmiş nöronlardan elektrofizyolojik kayıtları birleştirme birbirleriyle devreleri oluşturmak üzere nöronların bu iki tip yeteneğinin değerlendirilmesine olanak sağlamaktadır. Spesifik olarak, kortikal nöronlar ChR2 ifade photostimulation sinaptik devreleri oluşmuş iPSC türetilen nöron sinaptik tepkiler uyandırmakphotostimulated kortikal nöron ağı ile. Bu artış postsinaptik akımlar gerçekten bu koşullar altında iPSC türetilen nöron tespit edilir olduğunu göstermektedir. Bu protokol, hastalarından fibroblastlardan elde edilen iPSCs kullanarak farklı nörolojik hastalık modelleri içinde tekrarlama da dahil olmak üzere deneysel koşullar, çeşitli altında sinaptik devre değerlendirilmesine olanak sağlamaktadır.

an optogenetic approach for assessing formation of neuronal connections in a co-culture system

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are reprogrammed from human fibroblasts using episomal vectors. Colonies of iPSCs can be observed 30 days after initiation of fibroblast reprogramming. Pluripotent colonies are manually picked and grown in neural induction medium to permit differentiation into neural progenitor cells (NPCs). iPSCs rapidly convert into neuroepithelial cells within 1 week and retain the capability to self-renew when maintained at a high culture density. Primary mouse NPCs are differentiated into astrocytes by exposure to a serum-containing medium for 7 days and form a monolayer upon which embryonic day 18 (E18) rat cortical neurons (transfected with channelrhodopsin-2 (ChR2)) are added. Human NPCs tagged with the fluorescent protein, tandem dimer Tomato (tdTomato), are then seeded onto the astrocyte/cortical neuron culture the following day and allowed to differentiate for 28 to 35 days. We demonstrate that this system forms synaptic connections between iPSC-derived neurons and cortical neurons, evident from an increase in the frequency of synaptic currents upon photostimulation of the cortical neurons. This co-culture system provides a novel platform for evaluating the ability of iPSC-derived neurons to create synaptic connections with other neuronal populations.

Burada, astrositler içeren bir ko-kültür üreten alan çoklu aşamalarını tarif protokol kortikal nöronlar ve insan nöron görüntülenmiştir. İnsan iPSCs yüksek yoğunluklu (Şekil 1A) muhafaza edilmiş NPC 11 yaparak, küçük molekül inhibitörlerinin bir kokteyl ile bir sinir soy içine epizomal kullanarak fibroblastlar yeniden programlama ile elde edilen 10 vektörleri ve belirlenmiştir. TdTomato (Şekil 1B) ile etiketlenmiş insan NPClerden astrositlerde içine fare NPC farklılaşmasını, ChR2 ifade sıçan kortikal nöronların kaplama ve ekim: Çeşitli adımlar ko-kültür oluşturmak için gereklidir. Farklılaşma 2 gün içinde Glial fibrilar asidik protein (GFAP) + astrositler kolaylıkla eden kültürler (Şekil 1C) &#39;de görülmektedir. Fare NPC astrosit tek katmanlı (Şekil 1D) üzerine ChR2 ifade kortikal nöronlar kaplama önce en az bir hafta için ayırt etmek için izin verilmiştir. 3 sonraİnsan NPC farklılaşma 4 hafta, tdTomato + nöronlar kültürleri (Şekil 1E) tespit edilmiştir. Bu ko-kültür sistemi ışık uyarımı (Şekil 2A) yanıt olarak tek tek iPSC türetilmiş nöronlardan postsinaptik akımlar sürekli tespit edilmesine olanak sağlar. Işık ile uyarıldığında, aksiyon potansiyeli ChR2 (Şekil 2B) ifade kortikal nöronlarda üretilmiştir. Mevcut edilen kutuplaşma giderici darbelerin genliği artmış aksiyon potansiyeli ateşlemesini gösteren nöronları da (Şekil 2C) uyarılabilir olan iPSC türetilen (Şekil 2D) yükseltilmiştir. Bu nedenle, bu hücreler olgun nöronal özellikler sergiler. Işık yokluğunda, iPSC türetilen nöron spontan sinaptik giriş (Şekil 2E) verildi. GABA reseptörleri aracılığıyla akımlar dışa olurdu çünkü bu içe postsinaptik akımlar ağırlıklı, AMPA alıcıları tarafından aracılık ve NMDA reseptörleri mevcut a taşımak yok-70 mV tutma potansiyeline t. Hafif stimülasyon ölçüde postsinaptik akımlar (Şekil 2E) sıklığını artması nedeniyle en azından bazı girdilerin, CHR2 ifade presinaptik kortikal nöronlar arası idi. sinaptik girdi bu artışın zaman ders Şekil 2F gösterilmiştir: kortikal nöronların photostimulation 30 sn uzun ışık flaş boyunca devam edildi. ChR2 ifade kortikal nöronların (Şekil 2G) photostimulated zaman PSC&#39;ler sıklığı yüksek iken, onların genlik (Şekil 2H) etkilenmemiş oldu. Özetle, bu sonuçlar iPSC türetilen nöron olgun nöronal özellikler sergiledi ve presinaptik kortikal nöronlar ile sinaptik bağlantılar oluşturabilir göstermektedir. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52408/52408fig1highres.jpg" /> Şekil 1: ortak-kültürünün oluşturulması için şematik diyagramıiPSCs ve NCPlerle nöral indüksiyon, insan fibroblastlar yeniden programlanması için sistem. (A) Timeline. kortikal nöron ve astrosit kültürleri üzerinde olgun nöronların içine insan NPC terminal farklılaşması için (B) Timeline. (C) Fare NPC hızla GFAP içine ayırt + astrositler 2 sonra in vitro gün. (D) Bir hafta sonra, ChR2 ifade kortikal nöronlar GFAP + astrositler üzerine ekildi. (E) 4-5 hafta sonra, insan NPC ayrılmasından sonraki elektrofizyolojik tdTomato + nöronlar üzerinde gerçekleştirilmiştir. Ölçek çubukları 100 um temsil eder. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52408/52408fig2highres.jpg" /> Şekil 2: Fonksiyonel sinaptik bağlantı optogenetic analizi. TdTomato (kırmızı) ile etiketlenmiş, (A) iPSC türetilmiş hücreler kortikal nöronlar ifade ile birlikte kültürlenmiştir ışıkla aktiveKanal, ChR2 (yeşil). IPSC türetilmiş nöronların Kayıtlar kortikal nöronların veya diğer iPSC-türetilmiş nöronların birinden gelebilir postsinaptik akım (PSC) yanıtları, ortaya. (B) Aydınlatma (mavi çubuk) ChR2 ifade kortikal nöronlarda aksiyon potansiyelleri bir dizi uyarılmış. ( C) iPSC türetilmiş hücreler ChR2 ifade kortikal nöronlar (E) photostimulation (mavi bar) korur. iPSC türetilmiş hücre akım eğrisi vs D) Pişirim (. Mevcut enjeksiyon ile uyarılmış iPSC türetilen nöron PSC&#39;lerin sıklığı arttırılır . photostimulation tarafından üretilen PSC sıklığında bir artış (F) zaman akışı. Mavi çubuk photostimulation zaman gösterir. PSC frekans photostimulation (G) bir artış iken (G, H), PSC genlik etkilenmemiş (lH) idi. * P &lt;0.05, öğrencinin t-testi ile kontrol grubuna göre gösterir.

Watch this Scientific Journal Video about An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System at JoVE.com

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

A protocol to generate a co-culture system consisting of neurons derived from induced pluripotent stem cells (iPSCs), primary cortical neurons and astrocytes is described. This co-culture system allows detection of the formation of synaptic contacts and circuits between new, iPSC-derived neurons and pre-existing cortical neurons expressing channelrhodopsin-2.

Bir Co-kültür Sistemde nöronal bağlantıları Oluşumunda değerlendirilmesi için bir optogenetic Yaklaşım

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

an-optogenetic-approach-for-assessing-formation-neuronal-connections

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

13.3K Görüntüleme.  Duke-NUS Graduate Medical School. A protocol to generate a co-culture system consisting of neurons derived from induced pluripotent stem cells (iPSCs), primary cortical neurons and astrocytes is described. This co-culture system allows detection of the formation of synaptic contacts and circuits between new, iPSC-derived neurons and pre-existing cortical neurons expressing channelrhodopsin-2. 