Yazarlar Alman Araştırma Vakfı (SFB / TRR57, Q3 ve Q2) mali destek kabul etmek istiyorum. Yazarlar fotoğraf hazırlarken onların yardım için Mareike Schulz, Pascal Paschenda ve Klaudia Warzecha teşekkür ederiz.

NOT: Tüm deneyler resmi devlet hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (LANUV, Recklinghausen, Almanya) tarafından onaylanmıştır. fareler Laboratuar Hayvan Bilimi Dernekleri Federasyonu&#39;nun için (FELASA) kurallarına göre özel-patojen içermeyen koşullar altında muhafaza edilmektedir. Tüm deneyler (Sağlık yayın 8. Edition Ulusal Enstitüleri, 2011) &#39;Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanımı Kılavuzu&#39; hayvanların korunması ile ilgili olarak Alman federal yasalar uyarınca yapılmıştır. 1. Cerrahi öncesi Hazırlık NOT: temiz ama steril olmayan koşullarda tüm işlemleri yürütmek. Ameliyat gerçekleştirmek için kullanılan bu tür cerrahi forseps, makas, ve Colibri retraktor gibi tüm araçlar ve diğer yeniden ekipman hayvanlarda cerrahisine yönelik kurumsal kurallarına tamamen uygun olan protokollere göre kullanımdan önce sterilize edilmelidir., Gerekli reaktifler, malzeme ve ekipman ayrıntılı bir listesi için, Belirli Malzemeleri / Ekipman listesine bakınız. <ol><li> Tam deney sırasında, sıvı geçirmeyen, kendinden yapışkanlı perdeler genel kapağı operasyon alanı sürekli anestezi sistemine bağlı 37 ° C arasındaki bir sıcaklıkta, bir sıcak tutma levhasının üzerinde hayvan tutmak ve. Düzgün tüm instrumentations ve ameliyat öncesi deney sırasında kullanılan çözümleri (Şekil 1) düzenlemek. </li><li> Anestezinin indüksiyonu için 4 L / dk&#39;lık bir akış hızında% 100 oksijen 4 hacimce% izofluran teneffüs ile fare anestezisi. Aşağıdaki hayati kriterler ulaşıldığında anesthetization derinliği yeterlidir: Düzenli spontan solunum, ayak parmakları arasında ağrı uyaranların ayarladıktan sonra hiçbir refleks ve ağrı yanıt. </li><li> Bir elektrikli tıraş makinesi kürk ile fare karın kürk Tıraş ve göz ve n kullanımı ile kurumasını gözleri korumakose merhem. </li><li> , 37 ° C ısıtılmış sıcak plaka üzerinde fare koyun Fluovac anestezi sistemi Fluovac maskesi fare burun yerleştirin ve ipek bant çizgili hayvanın bacakları düzeltmek. </li><li> 1 L / dakikalık bir akış hızında% 100 oksijen 1.5-3 hacimce% izofluran teneffüs ettirilerek fare anestezi bakımı ve buprenorfin çözeltisi (0.1 mg / kg BW% 0.9 NaCI solüsyonu içinde eritilmiş), intraperitonal enjeksiyon yoluyla ameliyat analjezi induct . </li><li> Derinin ameliyat öncesi tedavi için alkollü çözümü kullanmak için hazır antiseptik bir standart ile nemlendirilmiş bir gazlı bez bez ile traş karın cildi sterilize. Not: Bizim protokollerde bir poli-alkol cilt antisepticum kullanın. Bu hayvanların korunması ve Laboratuar Hayvan Bilimi Dernekleri Federasyonu&#39;nun için yönergelerine ilişkin Alman federal yasa ile tam uyumludur. Bu antiseptik% 70 ihtiva eder (h / h) 2-propanol, bütan-1,3.diol ve sarı kinolin izleri ve perfumör. </li></ol> 2. Cerrahi İşlemleri <ol><li> 11,5 cm cerrahi makas ile aynı anda kutis artı fasya keserek yaklaşık 2 cm uzunluğunda bir orta hat laparotomi ile karın açın. </li><li> Bir serpme olarak makas kullanılarak periton üstüne bağ dokusu incelemek. </li><li> Periton boşluğuna açmak için linea alba boyunca periton kesin. </li><li> , Sternum bir tutma sütür takmadan dikiş filamanın yükselterek ve Fluovac maske üstüne sabitlemek boşluğu büyütün. </li><li> Periton boşluğuna bir Colibri Retraktör (Şekil 2) takarak çalışma alanını yaymak. </li><li> Bunun ventral tarafı diyaframa sopalarla ve hilum açıkça görülebilecek şekilde bir nemli (% 0.9 NaCl çözeltisi) pamuklu çubukla karaciğer kaldırın. </li><li> Gut (Şekil 3) kaudal hareketi tarafından safra kanalı Açığa. </li><li> Dikkatlice safra kanalını ayırınBir mikro-çentikler forseps (Şekil 4A) kullanarak portal ven ve hepatik arter yan. </li><li> Safra etrafında 5-0 dikiş yerleştirin ve iki cerrahi knot ile sabitleyin. Takviyelemede knot safra kanalı (Şekil 4B) kesilmesinin olmadan etkili tıkanıklığı sağlamak için sürekli çekiş gücü artırır. </li><li> Aynı şekilde, ikinci kafa ligasyon ekleme ancak (Şekil 4C) ile safra kanalı incelemek yoktur. Aksi takdirde safra kaçağı, bir düğüm güvenli değilse, ve hayvanlar hiçbir kolestazisli deneyim ama ciddi peritonit geliştirmek önemli bir riski vardır. </li><li> , Dikişler (Şekil 4D) uçlarını kesin sternum düşürmek ve retraktörü çıkarın. </li><li> % 0.9 NaCl solüsyonu ile periton boşluğuna durulayın ve fizyolojik pozisyonlara karın organları değiştirin. </li><li> Yakın hem karın tabakaları 6-0 Mersilk ayrı çalışan sütür ile (periton ve kutis artı facia). </li><li> E Cutsütür nds ve antiseptik solüsyon ile ıslatılmış bir gazlı bez çubukla operasyon alanını sterilize. NOT: İlk defa ameliyat yaparken, 16X-20X büyütmede bir cerrahi mikroskop altında tüm prosedürleri uygulayın. Bu safra kanalının daha iyi tanınmasını izin verir ve açıkça portal ven ve hepatik arter (Şekil 5 ve 6) ayıran. Bazı laboratuvarlar, iki bitişik harfler arasında safra kanalının diseksiyonu önerilmektedir. Safra kanalı disseke zaman knot biri potansiyel sızıntı şiddetli akut peritonit, asit ve sistemik endotoksemide neden olur, çünkü sağlam safra kanalı bırakın. </li></ol> 3. Ameliyat sonrası Tedavi ve Takip <ol><li> Fare tamamen uyanık ve aktif olana kadar fare kızılötesi lamba ile ısıtılan kafesteki kurtarmak için izin verin. </li><li> Daha sonra, normal bir kafes için fareyi hareket ettirin ve su ve gıda ad libitum erişim sağlar. </li><li> Birfter cerrahisi, düzenli aralıklarla hayvanların izlemek ve iç hayvan bakımı yerel önerisi şu uygun analjezi (örneğin, buprenorfin çözeltisi) ile takip postoperatif tedavi yürütmek ve komiteler kullanın. NOT: 3 gün analjezik tedavi gerçekleştirin. Herhangi bir anormal davranış gibi peritonit, sepsis veya iç kanama gibi komplikasyonlar nadir gösterebilir ve deney sonlandırmak için insan son nokta olarak ele alınmalıdır. </li><li> Hayvanlar deney sonuna kadar besin ve su ad libitum serbestçe ulaşabildikleri durumda tutulur. Devam eden fibrogenez sarılık ile gösterilir çünkü kan çizim için gerek yoktur. </li><li> Hayvanlar kurban edildiğinde, kan klinik kimya parametreleri (AST, ALT, bilirubin vb) ve karaciğer histokimyasal ve biyokimyasal analiz için alınır ölçümü için toplanır. </li></ol>

<ol>
	<li>Liedtke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+liver+fibrosis+research:+update+on+animal+models,+legal+issues+and+translational+aspects.">Experimental liver fibrosis research: update on animal models, legal issues and translational aspects.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 6 (1), 19 (2013).</li><li>Aller, M. A., Arias, J. L., Garc&#237;a-Dom&#237;nguez, J., Arias, J. I., Dur&#225;n, M., Arias, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+obstructive+cholestasis:+the+wound-like+inflammatory+liver+response.">Experimental obstructive cholestasis: the wound-like inflammatory liver response.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 1 (1), 6 (2008).</li><li>Tacke, F., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+hepatic+stellate+cells:+pathogenic+role+in+liver+fibrosis+and+novel+isolation+techniques.">Update on hepatic stellate cells: pathogenic role in liver fibrosis and novel isolation techniques.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 6 (1), 67-80 (2012).</li><li>Weiler-Normann, C., Herkel, J., Lohse, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+liver+fibrosis.">Mouse models of liver fibrosis.</a> Z. Gastroenterol. 45 (1), 43-50 (2007).</li><li>Cameron, G. R., Oakley, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligation+of+the+common+bile+duct.">Ligation of the common bile duct.</a> J. Pathol. 35 (5), 769-798 (1932).</li><li>Cameron, G. R., Hasan, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbances+of+structure+and+function+in+the+liver+as+the+result+of+biliary+obstruction.">Disturbances of structure and function in the liver as the result of biliary obstruction.</a> J. Pathol. 75 (2), 333-349 (1958).</li><li>Accatino, L., Contreras, A., Ferna&#324;dez, S., Quintana, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+complete+biliary+obstruction+on+bile+flow+and+bile+acid+excretion:+postcholestatic+choleresis+in+the+rat.">The effect of complete biliary obstruction on bile flow and bile acid excretion: postcholestatic choleresis in the rat.</a> J Lab Clin Med. 93 (5), 706-717 (1979).</li><li>Accatino, L., Contreras, A., Berdichevsky, E., Quintana, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+complete+biliary+obstruction+on+bile+secretion.+Studies+on+the+mechanisms+of+postcholestatic+choleresis+in+the+rat.">The effect of complete biliary obstruction on bile secretion. Studies on the mechanisms of postcholestatic choleresis in the rat.</a> J Lab Clin Med. 97 (4), 525-534 (1981).</li><li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+bile+duct+obstruction:+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat.">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li><li>Tuchweber, B., Desmouli&#232;re, A., Bochaton-Piallat, M. L., Rubbia-Brandt, L., Gabbiani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+and+phenotypic+modulation+of+portal+fibroblasts+in+the+early+stages+of+cholestatic+fibrosis+in+the+rat.">Proliferation and phenotypic modulation of portal fibroblasts in the early stages of cholestatic fibrosis in the rat.</a> Lab Invest. 74 (1), 265-278 (1996).</li><li>Desmouli&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+deposition,+lysyl+oxidase+expression,+and+myofibroblastic+differentiation+during+the+initial+stages+of+cholestatic+fibrosis+in+the+rat.">Extracellular matrix deposition, lysyl oxidase expression, and myofibroblastic differentiation during the initial stages of cholestatic fibrosis in the rat.</a> Lab Invest. 76 (6), 765-778 (1997).</li><li>Arias, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+expression+of+a+transforming+growth+factor-&#946;1+antisense+mRNA+is+effective+in+preventing+liver+fibrosis+in+bile-duct+ligated+rats.">Adenoviral expression of a transforming growth factor-&#946;1 antisense mRNA is effective in preventing liver fibrosis in bile-duct ligated rats.</a> BMC Gastroenterol. 3 (29), (2003).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant-negative+soluble+PDGF-&#946;+receptor+inhibits+hepatic+stellate+cell+activation+and+attenuates+liver+fibrosis.">Dominant-negative soluble PDGF-&#946; receptor inhibits hepatic stellate cell activation and attenuates liver fibrosis.</a> Lab. Invest. 84 (6), 766-777 (2004).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., Huss, S., Van de Leur, E., Haas, U., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+CCN3/NOV+gene+transfer+fails+to+mitigate+liver+fibrosis+in+an+experimental+bile+duct+ligation+model+because+of+hepatocyte+apoptosis.">Adenoviral CCN3/NOV gene transfer fails to mitigate liver fibrosis in an experimental bile duct ligation model because of hepatocyte apoptosis.</a> Liver Int. 32 (9), 1342-1353 (2012).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-fibrotic+effects+of+CCN1/CYR61+in+primary+portal+myofibroblasts+are+mediated+through+induction+of+reactive+oxygen+species+resulting+in+cellular+senescence,+apoptosis+and+attenuated+TGF-&#946;+signaling.">The anti-fibrotic effects of CCN1/CYR61 in primary portal myofibroblasts are mediated through induction of reactive oxygen species resulting in cellular senescence, apoptosis and attenuated TGF-&#946; signaling.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1843 (5), 902-914 (2014).</li><li>Huss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+open+source+Delphi-based+software+for+morphometric+quantification+of+liver+fibrosis.">Development and evaluation of an open source Delphi-based software for morphometric quantification of liver fibrosis.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 3 (1), 10 (2010).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., Drews, F., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+lipocalin-2+expression+in+acute+and+chronic+experimental+liver+injury+moderated+by+pro-inflammatory+cytokines+interleukin-1&#946;+through+nuclear+factor-&#954;B+activation.">Induction of lipocalin-2 expression in acute and chronic experimental liver injury moderated by pro-inflammatory cytokines interleukin-1&#946; through nuclear factor-&#954;B activation.</a> Liver Int. 31 (5), 656-665 (2011).</li><li>Karlmark, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fractalkine+receptor+CX3CR1+protects+against+liver+fibrosis+by+controlling+differentiation+and+survival+of+infiltrating+hepatic+monocytes.">The fractalkine receptor CX3CR1 protects against liver fibrosis by controlling differentiation and survival of infiltrating hepatic monocytes.</a> Hepatology. 52 (5), 1769-1782 (2010).</li><li>Tarcin, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collagen+peak+in+bile+duct-ligated+rats.">Time course of collagen peak in bile duct-ligated rats.</a> BMC Gastroenterol. 11, 45 (2011).</li><li>Takase, S., Leo, M. A., Nouchi, T., Lieber, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmin+distinguishes+cultured+fat-storing+cells+from+myofibroblasts,+smooth+muscle+cells+and+fibroblasts+in+the+rat.">Desmin distinguishes cultured fat-storing cells from myofibroblasts, smooth muscle cells and fibroblasts in the rat.</a> J. Hepatol. 6 (3), 267-276 (1988).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+lipocalin-2+(LCN2)+in+acute+liver+injury+suggest+a+novel+function+in+liver+homeostasis.">Protective effects of lipocalin-2 (LCN2) in acute liver injury suggest a novel function in liver homeostasis.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1832 (5), 660-673 (2013).</li><li>Labbus, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+profiling+in+Lipocalin+2+deficient+mice+under+normal+and+inflammatory+conditions.">Proteomic profiling in Lipocalin 2 deficient mice under normal and inflammatory conditions.</a> J Proteomics. 78, 188-196 (2013).</li><li>Kirkland, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+surgical+model+of+biliary+inflammation+and+obstructive+jaundice+in+mice.">Reversible surgical model of biliary inflammation and obstructive jaundice in mice.</a> J. Surg. Res. 164 (2), 221-227 (2010).</li><li>Heinrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+bile+duct+ligation+in+mice:+a+novel+model+of+acute+cholestasis.">Partial bile duct ligation in mice: a novel model of acute cholestasis.</a> Surgery. 149 (3), 445-451 (2011).</li><li>Scholten, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+labeling+does+not+detect+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+cholangiocytes+in+liver+fibrosis+in+mice.">Genetic labeling does not detect epithelial-to-mesenchymal transition of cholangiocytes in liver fibrosis in mice.</a> Gastroenterology. 139 (3), 987-998 (2010).</li><li>Aller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+half+century+(1961-2011)+of+applying+microsurgery+to+experimental+liver+research.">A half century (1961-2011) of applying microsurgery to experimental liver research.</a> World J Hepatol. 4 (7), 199-208 (2012).</li><li>Russell, W. M. S., Burch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Principles of Humane Experimental Technique. , (1959).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Kolestatik karaciğer hasarı, kronik karaciğer hastalığı olan hastalarda karaciğer fibroz ve siroz gelişmesi için temel nedensel faktörlerin biri. Bu hastalıklar ölçülemez sağlık masraflarını üretmek gerçeğine dayanarak, birçok araştırmacı devam eden hepatik fibroz patojenik mekanizmalarını anlamak için çalışıyoruz anlaşılabilir. Bu nedenle, deneysel modeller karaciğer iltihabı, fibrozis ve siroza yol açan karmaşık 1 mekanizmaların çeşitli yönlerini taklit oluşturulan edilmiştir. Cerrahi BDL farelerde ve sıçanlarda 4,23,24 obstrüktif kolestatik hasara yol için kullanılan en yaygın deney modellerinde biridir. Protokoller çoğunda, hayvanlar anestezi edilmekte ve Orta bölüm laparotomi gerçekleştirilir. Daha sonra, safra kanalı karın boşluğundan ortaya ve cerrahi sicim kullanılarak iki kez bağlandı. Sonuç olarak, fareler ve sıçanlar bu ameliyat d aldığınıevelop ilk periportal alanlarda 25 kaynaklanan güçlü bir fibrotik reaksiyon. Yıllarda çeşitli cerrahi teknikler ve modifikasyonlar tarif edilmiştir. Özel prosedürler bile BDL 23 sonra yeniden bağlanma ya da re-anastomoz sağlar. Diğer teknikler, önemli ölçüde daha az nekroz oluşumu ve bunun sonucu olarak, hepatosit proliferasyonu 24 elde edilen kısmi BDL dayanmaktadır. Kolesistit oluşumunu önler safra kesesi (kolesistektomi) sonradan giderilmesi ile birlikte Kısmi BDL akut kolestaz için mükemmel bir deneysel model temsil eder. İnsan durumun 24 yakın bir model olduğu ileri sürülmüştür. Ve gerçekten de, bu modelin kurulması sırasında, o zaten tekrarlanabilir sadece minimal histolojik doku hasarı ile kolestaz nedenleri ve kronik kolestaz 25 devam etmediğini ortaya konmuştur. Bu nedenle, bu model enlem çalışmak için ideal olduğu öne sürülmüştürters kolestaz 24 e etkileri. Hatta daha sofistike yöntemler mikrocerrahi dayalı ve hızlı ve tekrarlanabilir bir yol sadece karaciğer 26 seçilmiş bölgelerinde kolestatik karaciğer hasarı indirebilmek için izin vardır. Orijinal BDL protokolü bu sofistike modifikasyonlar özel araştırma soruları araştıran çok yararlı kanıtlanmış olmasına rağmen, birçok laboratuvarda dünya çapında temelde kolestatik karaciğer fibrozis için son derece güvenilir ve tekrarlanabilir model olarak BDL modeli istihdam hedefliyoruz. Ancak, birçok komplikasyonlar büyük ölçüde teknik yanlışlıklar kaçınılmalıdır değilse, bu modelle elde edilen sonuçların tekrarlanabilirliği ve güvenilirliği değiştirebilir ki oluşabilir. Sırasında ya da hızla ameliyat sonrası oluşabilecek - Örneğin, safra kanalı eşlik kan damarlarının yaralanması ile ilgili kanama komplikasyonları (4 Şekil 3). Sonraki kardiyodepresyona veya r anestezi doz aşımıespiratory yetmezliği de prosedürün önlenebilir komplikasyonlar vardır. Dikişler doğru periton boşluğuna yapılan ve safra kaçağı değilse peritonit gelen sepsis kadar Şiddetli enfeksiyonlar, deney tüm döneminde ortaya çıkabilir. Ameliyat sırasında bağırsak Kaza yaralanmaları da peritonit yol açabilir. Bu nedenle, bu sıkı kullanım kurallarına uygun olan standart protokolleri kuvvetle gerekli olduğu açıktır. Bu koşul yakın zamanda 2013 1 yeni hayvan refahı kuralları uygulamaya Avrupa Birliği, ülkeleri içinde talep edildi. Bu yönetmelik ile ilişkili ilgili şartlar yeni değildir ve zaten 1959 yılında önerilmiştir, Russell ve Burch etik önerdi ağırlıklı olarak yerine, arıtma ve azaltma (3R) prensibine 27 dayanmaktadır hayvanlarla bilimsel deneyler için çerçeve. Outlin izlerkened protokolü teknik yanlışlıklar doğabilecek sadece birkaç komplikasyonlar vardır. Üç özel sorunlar oldukça düşük frekansta oluşabilir. Tüm cerrahi işlemlerde olduğu gibi, anestezik aşırı dozda özellikle hipotermi ile birlikte hayvanlara tehlike potansiyel kaynağıdır. Ameliyat sırasında kardiyovasküler komplikasyonlar ortaya çıkarsa, anestezik arz derhal durdurulmalı ve operatör fare mümkün oksijen gibi çok sağlamak için çalışmalısınız. Bu hava ile dolu ve bozulmuş hayvanın ağzına pompalanır küçük bir plastik şırınga vasıtasıyla yapılabilir. Alternatif olarak, etkilenen hayvan havalandırma için küçük bir Peleusball kullanımı canlandırılması süreci için sık sık yararlı olduğunu. Yara iyileşmesinde Sorunlar BDL Ameliyattan sonra, fareler kendi boğaz dikişler veya diğer hayvanların bu ısırabilir. Bu durum ortaya çıkarsa, ilgili fareler ayrı olmalıKafesli. Açık yara olan hayvanlar yara etrafında bölge yavaşça bir standart antiseptik ile sterilize ve yara tekrar dikilmelidir, anestezi gerekir. Önümüzdeki 3 gün boyunca, bu hayvanların yara düzenli (2-3 kez bir gün) kontrol edilmelidir. Karın veya asit oluşumu Distensions bakteriyel enfeksiyonlar için göstergesidir. Bunlar nedeniyle ameliyat sırasında steril olmayan çalışma oluşabilir. Enfeksiyonların her türlü insani son nokta olarak istisnasız ele alınmalıdır ve etkilenen hayvanlar kurban edilmelidir. Biz kolay uygulamak basit ve yüksek tekrarlanabilirlik ile birlikte sadece düşük hayvansal mortalite çağrıştırıyor farelerde BDL performansını sağlayan protokolü takip sağladı. Cerrahi protokollerin tüm hızla yetenekli bilim adamları tarafından yakalanan olabilir. Tam deney sırasında, hayvanlar 37 ° C &#39;de bir sıcak tutma levhasının üzerinde tutuldu ve sürekli bağlıdırBir anestezi sistemine ağrı ve sıkıntı en aza indirir. Ameliyat için, karın orta hat laparotomi ve diseksiyon olmadan çift bağlandı safra kanalı açıldı. Burada ele alındı ​​temsilcisi sonuçları karaciğer morfolojisi (inflamasyon, fibrozis, siroz) açısından fenotipik değişiklikler son derece tekrarlanabilir ve fibrogenez farklı yönlerini incelemek için izin olduğunu göstermek (örn., inisiyasyon, inflamasyon, ilerlemesi, son dönem hastalığı) belirlenen zaman noktalarında. Biz bizim protokol özeti başarıyla diğer laboratuarlarda bu fibrozis modeli kurmak ve farklı yerlerde güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçları garanti için gerekli olan öğrenme eğrisi kısaltmak için yardımcı olacağını umuyoruz. Böylece biz sunulan protokol 1959 yılında Russell ve Burch tarafından gerekiyordu 3R prensibini destekler ve halen pek çok ülkede wi uygulanan yeni hayvan refahı kuralları temelini temsil ettiğini düşünüyorumİnce Avrupa Çerçeve.

Karaciğer fibrozu matrisi üreten gelmiş hepatik yıldız şeklinde hücreler karmaşık bir etkileşim ağının ve karaciğer yerleşik ve nüfuz eden hücreler, kan hücreleri 1,2 çeşitli kaynaklanan aşırı üretimi ve hücre dışı matris (ECM) birikmesi olarak tanımlanır. Hepatik fibroz farklı uyarılara bir çok neden olabilir, ancak fibrozun altında yatan moleküler mekanizmaların, genel olarak çok benzerdir. Karaciğer hasarı takiben, moleküler ve hücresel değişikliklerin bir çok orkestra programı başlatılır. Bu programda inflamatuar sinyaller, monosit / makrofajlar ve hepatik stellat hücreler arasında yakın bir etkileşim oluşur miyofibroblastlar, ECM birikimi ve karaciğer doku bütünlüğü 3 ardışık anatomik ve fonksiyonel değişikliklere stellat hücre aktivasyonu ve transdiferansiyonun uç sonuçlarına. Hepatik stellat hücrelerin aktivasyonu, özellikle karaciğer ile inflamatuar sinyalleri ve etkileşimleri ile tahrik edilir(Kupffer hücreleri örneğin) yerleşim makrofajlar. Patojen ilişkili moleküler desenleri gibi Toll benzeri reseptörler gibi özel örüntü tanıma reseptörleri tarafından tanınan bu inflamatuar süreci 3 sürücü inflamatuar sitokinler ve kemokinlerin çok sayıda ifadesini ve salgılanmasını tetikleyen farklı yollar karmaşık bir ağ üzerinden sinyal aktif olduğunda. Hastalık üreten faktör çıkarıldığında inflamatuvar yanıt ve oluşan hepatik hakaret geçicidir. Yaralanma devam ederse aksine, kronik inflamasyon karaciğer ve skar dokusu oluşumu ile normal karaciğer parankimi progresif yerine sonuçlanan ön planda ifade ve ECM kalabalıklar birikimi içinde gelişir. İnsanlarda karaciğer fibrogenez dünya çapında bir klinik sorun olduğundan, akut ve kronik karaciğer yetmezliği birkaç deneysel kemirgen modelleri, son on yılda kurulmuştur. Mu iseDenizel sistemi, örneğin, ortak modeller kritik etkileyen farklı hepatotoksiktir- çeşitli yönetim, ortak safra kanalı ligasyonu, bağışıklık aracılı karaciğer hasarı indüksiyon ve gen defektleri hedeflenen tanıtım veya transjenlerin tersi aşırı ifadesi vardır Karaciğer fibroz 4 patogenezinde sinyal yolları. Kemirgenlerde koledok ligasyonu yıllardır 5-8 araştırma deneysel prosedür olarak yapılmıştır. Kemirgenlerde uzun süreli safra kanalı ligasyonu (BDL) için ilk yüksek tekrarlanabilir protokol zaten fazla üç yıl önce 9 şimdi sunuldu. Bu protokolde, kanülasyon / obstrüksiyon ve ligasyonu insan biliyer siroz 9 gözlenenler ile karşılaştırılabilir olmuştur morfolojik değişikliklerle sıçanlarda sirozu yüksek verim neden olmuştur. ilgili protokol cerrahi prosedür, nispeten hızlı bir şekilde uygulanabilir, basitVe hayvanların hayatta kalma oranları 95 üzerinden% ile yüksektir. Klasik sıçan kanülasyon / tıkanıklık protokolde, 2 cm kısa bir kesi sadece kılıç şeklinde süreci altında yapılır. Bundan sonra, bir kanül safra kanalının yakın kısmının içine konulduğu ve ipek dikiş ile konumunda sabitlenir. Bir sonraki adımda, kanülün distal kısmı sağ alt kadranda 9 deri orta hat kesi alt ucundan koymak ve gömülü, 3 knot ile tıkalı. Sonunda, karın kapatılır ve hayvanlar iyileşmek üzere izin verilir. Ligasyon protokolü, fareler ya da ligatures 9 arasında safra kanalı diseksiyonu olmadan ya koledok ligasyonu çift tabi tutulmaktadır. Bu deneysel model, iyi kabul ve karaciğer kolestaz ve fibrozis ikna etmek laboratuvarlarda yüzlerce dünya çapında kullanılmaktadır. Bu intrahepatik safra epitel hücre çoğalması, miyofibroblastik differentiatio uyarmaktadırPortal fibroblastların n etrafında ECM 10,11 son derece tekrarlanabilir, masif ifade ve birikimi ile sonuçlanan, safra epitel hücreleri çoğalan. Bu nedenle, sıçan ve farelerde bu modelin uygulanması hepatik inflamasyon ve fibrozis patogenezi anlamak amaçlayan bilim adamları arasında popüler ediliyor. Laboratuvarımızda, biz kapsamlı karaciğer fibrogenez özel moleküler ve hücresel yönlerini araştırmak ve yeni antifibrotik kavram ve uyuşturucu 12-15 sınamak amacıyla çeşitli deneysel çalışmalarda sıçanlarda geçmişte bu protokolü kullanılır. Son zamanlarda, biz kemirgen sisteme bu metodoloji adapte ve safra kanalı ligasyonu cerrahisi de farelerde 16-18 düşük varyasyon ve mortalite ile zamana bağlı fibrozis kurmak için cazip bir ortalama olduğunu bulundu. Hayvanların küçük boyutu, ancak, anestezi ile ilgili bazı önemli değişiklikler, cerrahi interv nedeniyleşayan ve tedavi sonrası gözlem, bu modelde, güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için gereklidir. tam uyum aşağıdaki protokol ve beraberindeki bir video belgelerinde özetlenmiştir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1185">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:263px;">Company</td>
			<td style="width:219px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:293px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:263px;">Forene Abbott</td>
			<td style="width:219px;">B 506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Shaver Favorita II</td>
			<td style="width:263px;">Aeskulap</td>
			<td style="width:219px;">GT104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cutter head</td>
			<td style="width:263px;">Aeskulap</td>
			<td style="width:219px;">GT730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Bepanthen eye and nose ointment</td>
			<td style="width:263px;">Bayer Vital GmbH</td>
			<td style="width:219px;">6029009.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Warming plate and controller</td>
			<td style="width:263px;">Labotect</td>
			<td style="width:219px;">HP 062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Fluovac anesthesia system</td>
			<td style="width:263px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:219px;">34-1030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ISOFLO (Isoflurane Vapor) vaporiser</td>
			<td style="width:263px;">Eickemeyer</td>
			<td style="width:219px;">4802885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scotch Tape</td>
			<td style="width:263px;">commercially available</td>
			<td style="width:219px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Tissue paper</td>
			<td style="width:263px;">commercially available</td>
			<td style="width:219px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Durapore silk tape</td>
			<td style="width:263px;">3M</td>
			<td style="width:219px;">1538-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cotton Gauze swabs</td>
			<td style="width:263px;">Fuhrmann GmbH</td>
			<td style="width:219px;">32014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Poly-Alcohol Haut&#8230;farblos Antisepticum</td>
			<td style="width:263px;">Antiseptica GmbH</td>
			<td style="width:219px;">72PAH200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Raucodrape OR adhesive drapes</td>
			<td style="width:263px;">Lohmann &#38; Rauscher GmbH</td>
			<td style="width:219px;">33013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Scissor</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">14074-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Graefe forceps straight</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">11050-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">6-0 Mersilk suture</td>
			<td style="width:263px;">Ethicon</td>
			<td style="width:219px;">K889H</td>
			<td>Silk, non-absorbable/Abdominal closure</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Needle holder Mathieu</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">12010-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Colibri retractor</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">17000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cotton swabs</td>
			<td style="width:263px;">Noba Verbandmittel</td>
			<td style="width:219px;">974202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cotton swabs</td>
			<td style="width:263px;">Heinz Herenz Medizinalbedarf GmbH</td>
			<td style="width:219px;">1032238</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">25mL beaker</td>
			<td style="width:263px;">Schott Duran</td>
			<td style="width:219px;">50-1150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Isotonic (0.9%) NaCl solution</td>
			<td style="width:263px;">DeltaSelect GmbH</td>
			<td style="width:219px;">PZN 00765145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Micro-serrations forceps Moria MC31</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">11370-31</td>
			<td>Bile duct separation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">5-0 Mersilene suture</td>
			<td style="width:263px;">Ethicon</td>
			<td style="width:219px;">EH6731H</td>
			<td>Polyester, non-absorbable/Bile duct ligation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">5mL syringe</td>
			<td style="width:263px;">BD Discardit II</td>
			<td style="width:219px;">300296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">1mL syringe</td>
			<td style="width:263px;">BD Plastipak</td>
			<td style="width:219px;">300013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Sterican needle 26 G x 1</td>
			<td style="width:263px;">B. Braun</td>
			<td style="width:219px;">4657683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:263px;">Essex Pharma</td>
			<td style="width:219px;">997.00.00</td>
			<td>Analgeticum, 0.1 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Infrared lamp</td>
			<td style="width:263px;">Petra Electric</td>
			<td style="width:219px;">IR 11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bile duct ligation in mice: induction of inflammatory liver injury and fibrosis by obstructive cholestasis

En omurgalılar, karaciğer absorbe yağ emülsifiye ve bilirubin ve diğer metabolik ürünlerin vücuttan yanı sıra ince bağırsakta lipidlerin sindirimi sağlamak için gerekli olan safra üretir. Karaciğerde, ekstrahepatik safra yollarının tıkanması deneysel kolestaz ve inflamasyon periportal alanlardan kaynaklanan güçlü bir fibrotik reaksiyonu sonucu yol açar patolojik olaylar zincirini başlatır karmaşık. Bu nedenle, safra kanalının cerrahi ligasyon kemirgenlerde obstrüktif kolestatik hasara yol ve uygunsuz safra akışı tarafından uyarılan bu patofizyolojik mekanizmaları altında yatan moleküler ve hücresel olayları incelemek için en sık kullanılan model haline gelmiştir. Son yıllarda, farklı cerrahi teknikler özel araştırma soruları için yeniden bağlanma ya da re-anastomoz safra kanalı ligasyonu (BDL) sonra, örneğin, kısmi BDL veya diğer mikrocerrahi yöntemleri izin ya bu tarif edilmiştir. Ancak, en sık kullanılan model 21-28 gün sonra güçlü bir fibrotik yanıtı uyaran koledok tam tıkanması olduğunu. ölüm oranı nedeniyle enfeksiyöz komplikasyon veya teknik yanlışlıklar yüksek olabilir. Burada 1959 yılında Russel ve Burch tarafından öne hayvan refahı için 3R kural uyarınca bir derece tekrarlanabilir fibrotik tepkisine neden farelerde BDL modeli için detaylı bir cerrahi prosedür sağlamak.

Tipik bir deney Histopatolojik yaklaşık 18-20 gram ağırlığındaki 40 erkek C57BL / 6 vahşi tip farelerde gerçekleştirilmiştir. Bu deney ilerlemesi (10, 14, ve 20 gün) boyunca başlangıç ​​fazı (3 ve 7 gün) karaciğer fibrogenezise, ​​araştırmak için yapılır, ve uzun vadeli (30 ve 60 gün) 16 sırasında oldu. Sürekli deney sonuna kadar artan periportal fibrozit tam 20 gün sonra geliştirilmiştir, ancak bu modelde, persinusoidal fibroz önce, ameliyat sonrası 10. günde geliştirmiştir. Söz konusu deneyde, basit bir sahte operasyon alınan tüm hayvanlar hayatta ve sadece BDL alınan 40 fareden (% 5), iki genel durum kötü gelişmiş ve dolayısıyla erken bir deney planlanan uç noktadan önce kurban edilmişlerdir. BDL tabi hayvanların çoğu ilk üç gün boyunca düşük aktivite gösterirken sahte operasyona hayvanların aktivitesi, istisnasız laparotomi sonra zaten normal bir bir gün oldu. Jaundiced cilt BDL 16 ayarladıktan sonra tüm BDL hayvanlar bir ya da iki gün zaten belirgin olmuştu. karaciğer hasarının köklü serum belirteçlerini ifade ederler, her iki alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat transaminaz (AST) değerler hızlı bir şekilde artan ve BDL (Tablo 1) gün sonra 7 ve 20 gün boyunca yükseldi. Bundan sonra, ALT ve AST güne kadar 30 sürekli bir düşüş ve 60 gün ameliyat sonrasına kadar sabit kalmıştır. Kolestatik yaralanma doğrultusunda, toplam bilirubin serum konsantrasyonları sürekli yüksek ve 7 gün 16 sonra bir platoya ulaşmış. ALT ve AST serum faaliyetlerinin Benzer zaman süreci de BDL uygulanan sıçanlarda bildirildi. Son çalışmada BDL ameliyattan sonraki ilk hafta normal 5 veya 10 kat kadar artmış ve iki hafta sonra 19 azalma serum AST ve ALT düzeylerini gösteren oldu. Tipik olarak, sahte operasyona hayvanların karaciğerleri hala Smoot bakmakDeneyin sonunda h BDL alan hayvanların karaciğer esas karaciğerler ve büyük miktarlarda doldurulur safra kesesi hidropsu karşılık gelen yüzeyi üzerinde ödem ve fibrotik nodüller oluşumu ile karakterize edilen bir mimari değişiklikler gösterirken safra (Şekil 7). BDL cerrahi ile indüklenmektedir karaciğer tipik morfolojik değişiklikler, aynı zamanda standart histolojik analiz (Şekil 8) &#39;de kanıtlanabilir. Deney aynı sette, karaciğer fibroz gelişimi maksimum vererek, yarı-nicel değerlendirildi periportal fibrozis 0-2 0-4 ve perisinüzoidal fibrozis sahnelendi hangi bir puanlama sistemi kullanılarak bir kör patolog tarafından değerlendirilir karaciğer histolojisi dayalı oldu Beklendiği gibi 6. siroz eşdeğer oldu değer, sahte operasyona hayvanların grubunda ortalama fibrozis skoru 0.00 ± 0.00 idi. T hayvanların grubu içinde aksine,şapka BDL, skor 4.83 ± 0.17 değerine güne kadar 60 sürekli artış aldı. periportal fibrozis için 3 maksimum incelenen tüm hayvanlarda günde 20 ulaşılmıştır, perisinüzoidal fibrozis denemenin ilk 10 gün icerisinde yoktu ve iki hafta sonra öncelikle fark oldu. Bundan sonra, 1.8 ± 0.17 (Tablo 1) değerlerine deneyin sonuna kadar sürekli olarak artmıştır. Ayrıca yapıldı birkaç bağımsız hayvan deneylerinde, bu fibroz oluşumu devam fibrogenez (Şekil 9) bir sonucu olarak, intrahepatik kollajen ifade ve çökelme yüksek oranda çoğaltılabilir gösteren zamana bağlı artış olduğu gözlemlenmiştir. Benzer şekilde, devam eden fibrogenez bir işlem α-düz kas aktini fibroblastik hücrelerin bir markeri eder (α-SMA) yüksek ekspresyonu belirgindir örneğin, yıldız şeklinde hücreler ve portal miyofibroblastlar hepatik aktifve hepatik hidroksiprolin, bol kollajen olarak bulunan bir amino asit 18 (Şekil 9) matrisler. Buna ek olarak, miyofibroblastlar veya fibroblast artan miktarlarda gösterir vimentin ifadesi BDL cerrahisi 20 kurduktan sonra artmıştır. yaralı karaciğer enflamasyonun birlikteliği daha güçlü bir şekilde akut ve kronik karaciğer yaralanması sırasmda ortaya çıkan ve akut karaciğer zedelenmesinde 21,22 sırasında hepato-koruyucu etkiler geliştikçe olan lipokalin 2 (LCN2) artan ifadesi ile yansıtılmaktadır. BDL alan hayvanların karaciğerler infiltre İnflamatuar hücreler CD45 (Şekil 10) için özel olan bir antikor ile belirli bir boyama ile saptanabilir. Ayrıca PTPRC (protein tirozin fosfataz, reseptör tipi) olarak bilinen bu hücre yüzeyi işaretleyicisi özellikle eritrosit ve plazma hücreleri hariç, tüm farklı hematopoietik hücrelerde ifade edilir. <table fo:keep-together.within sayfa = &quot;always&quot; border = &quot;0&quot; cellpadding = &quot;0&quot; cellspacing = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td rowspan="2"> Safra kanalı ligasyonu sonrası Süre (gün) </td><td> Toplam bilirubin </td><td rowspan="2"> AST (U / L) </td><td rowspan="2"> ALT (U / L) </td><td rowspan="2"> Portal fibrozis </td><td rowspan="2"> Perisinüzoidal fibrozis </td><td rowspan="2"> Toplam skor </td></tr><tr><td> (Mg / dL) </td></tr><tr><td> 0 (n = 3) </td><td> 0.17 ± 0.06 </td><td> 192,67 ± 30.50 </td><td> 50,33 ± 6.03 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td></tr><tr><td> 3 (n = 5) </td><td> 6.85 ± 2.21 </td><td> 1159,25 ± 319,27 </td><td> 566,50 ± 335,25 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td></tr><tr><td> 7 (n = 5) </td> &lt;td&gt; 14.38 ± 2.14 ± </td><td> 976,60 ± 477,16 </td><td> 448,20 ± 259,47 </td><td> 0.60 ± 0.25 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.60 ± 0.25 </td></tr><tr><td> 10 (n = 5) </td><td> 15.92 ± 2.60 </td><td> 1916,60 ± 868,25 </td><td> 560,40 ± 80,88 </td><td> 1.40 ± 0.25 </td><td> 0.25 ± 0.25 </td><td> 1.67 ± 0.25 </td></tr><tr><td> 14 (n = 5) </td><td> 17.90 ± 3.84 </td><td> 1088,60 ± 276,32 </td><td> 505.00 ± 96,15 ± </td><td> 2.4 ± 0.25 </td><td> 1.0 ± 0.0 </td><td> 3.40 ± 0.24 </td></tr><tr><td> 20 (n = 4) </td><td> 18.00 ± 2.12 </td><td> 1072,67 ± 364,27 </td><td> 404,00 ± 195,48 </td><td> 3.0 ± 0.0 </td><td> 1.0 ± 0.0 </td><td> 4.0 ± 0.0 </td></tr><tr><td> 30 (n = 5) </td><td> 16.04 ± 4.79 </td><td> 446,40 ± 169,75 </td><td> 260,20 ± 126,97 </td><td> 2.8 ±; 0.2 </td><td> 1.4 ± 0.25 </td><td> 4.20 ± 0.20 </td></tr><tr><td> 60 (n = 6) </td><td> 16.02 ± 1.19 </td><td> 484,67 ± 117,79 </td><td> 257,17 ± 50,97 </td><td> 3.0 ± 0.0 </td><td> 1.8 ± 0.17 </td><td> 4.83 ± 0.17 </td></tr></tbody></table> Kullanılan kısaltmalar şunlardır: ALT, alanin aminotransferaz; AST, aspartat aminotransferaz. Tablo 1: fibrozis bir temsili skorlama bu tablosunun veri karaciğer fibrozu, C57BL / 6 fareleri 16 safra kanalı ligasyonu ile uyarılmış olan bir çalışma yeniden.. Bu çalışmada, BDL ameliyat sonrası ölüm oranı% 5 idi (2 40 hayvanlar erken zavallı hayvan koşulları geliştirilen çünkü kurban edildi). <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig1highres.jpg" /> Şekil 1: Bir safra gerçekleştirmek için deneysel kurulumkanal bağlama. Hayvan 37 C arasında bir sıcaklıkta bir ısıtma plakası üzerinde tutulur ve faaliyet alanı sıvı geçirmeyen, kendi kendine yapışan bir örtü ile genel olarak kaplanır. Tam Ameliyat sırasında, hayvan kalıcı olarak anestezi sistemine bağlanır. Tüm Instrumentations ve çözümleri (analjezikler, anestezikler, antiseptik solüsyon,% 0.9 NaCl) açıkça düzenlenmiştir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig2highres.jpg" /> Şekil 2:. Cerrahi alanının hazırlanması periton boşluğunun önce açılması, karın cilt elektrikli tıraş makinesi ile tıraş kürk ve antiseptik gazlı bez ile dezenfekte edilmelidir. Cerrahi bölge daha sonra sıvı geçirmeyen, kendi kendine yapışan bir örtü ile kaplıdır. Karın orta hat laparotomi (~ uzunluğunda 2 cm) ile açılır. kavite sternum bir holding sütür ve yayılan operasyon alanını ekleyerek büyütülürAmeliyat sırasında engelsiz deney sağlayan bir Colibri retraktör sokulması. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig3highres.jpg" /> Şekil 3: safra kanalı Poz. Bu diyaframa sopa ve hepatik hilus açıkça görünür hale böylece safra kanalı ligasyonu iletken için (A), karaciğer ventral tarafı kaldırdı. (B) daha iyi safra kanalı göstermek için, bağırsak kaudal ile taşınır Bir nemlendirilmiş pamuklu çubukla. safra kanalı bir okla işaretlenmiştir. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig4highres.jpg" /> Şekil 4: safra kanalı bağlanması. (A), bir birinci adımda, safra kanalı, bir mikro-Çentikli forseps kullanılarak portal damar ve hepatik arter yan dikkatlice ayrılır. (B) daha sonra, bir ameliyat dikiş ipliği etrafına yerleştirilirsafra kanalı ve bir cerrahi düğüm ile tespit edilmiş. (c) Bundan sonra, ikinci bir ameliyat dikiş ipliği, ilk dikiş yakın yerleştirilmiş ve safra kanalı çevresinde düğümlenir. (D), ameliyat dikiş ipliği kısaltılmaktadır, boşluk% 0.9 NaCl çözeltisi ile durulandı ve bütün organları kendi fizyolojik konumuna yerini aldı. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig5highres.jpg" /> Şekil 5:.. Ile safra kanalı Düğümleme hassas temsil sütür yerleştirme ve safra akışını önlemek iki knot ayarını belgelemek için, Şekil 4&#39;te belirtilen aynı prosedür binoküler altında belgelenmiştir (A) Confinement İlk dikiş. İlk dikiş (B) Düğüm. İkinci sütür ile safra kanalının (C) Confinement. (D) ikinci dikiş Düğüm. (E) safra d Çift ligelerine aşırı sütür kısaltılması sonra. (E &#39;) Bu panel (E) bir kroki göstermektedir. sağa sola (rl), (II) ve orta (mi) lob karaciğer gibi safra kanalı, mide ve oniki parmak bağırsağı pozisyonlarını harflerle edilir. Kroki safra kanalı çift iki sütür ile bağlanır. <img alt="Şekil 6," fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig6highres.jpg" width="400" /> Şekil 6:. Safra kanalı, portal ven ve farelerde hepatik arter anatomisi koledok daha iyi anatomik konumu için, portal ven ve hepatik arter bir şema olarak tasvir edilir. İşaretli da sağ (rl) pozisyonlarıdır, sol (II) medyan (mi) ve karaciğer kaudat (Cl) loblar. <img alt="Şekil 7," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig7highres.jpg" /> Şekil 7: Temsilci appeara2 hafta Sham ve BDL sonrası karaciğer ım. C57BL / 6 fareleri işlem veya BDL cerrahi Sham tabi tutuldu. İki hafta sonra, organ boşluğu açıldı. Sahte operasyona hayvanların karaciğerleri fibrozis belirtisi gösterirken, safra kanalı ligasyonu alan hayvanların karaciğerleri gelen karaciğer yüzeyinde ödem oluşumu ve fibrotik nodüller ile düzensiz bir yüzey yapısı vardı. <img alt="Şekil 8," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig8highres.jpg" /> Şekil 8:. Hematoksilin ve eozin boyama, karaciğer kesitleri (A) &#39;numaradan ameliyat edilmişlerdir ya da üç hafta sonra (B) için BDL alınan, C57BL / 6 vahşi tip hayvanlardan meydana getirilmiştir. bölümler hematoksilin ve eozin aşağıdaki standart prosedürler ile boyandı. Inflamasyon belirtileri (infiltre hücreler), parankimal (Hepato dahil BDL karaciğer içinde tipik değişiklikleri unutmayıncyte) nekroz ve safra kanallarının çoğalması. Her şekil panelinde ölçek çubuğu 50 mikron temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52438/52438fig8large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 9," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig9highres.jpg" /> Şekil 9: hepatik fibrogenez için histolojik ve biyokimyasal okumalar. (A), karaciğer kesitleri 2 hafta boyunca plasebo işlemi veya BDL almış olan hayvanlarda, hazırlandı ve Sirius Kırmızı (üst panel, kırmızı kollajen lifleri) ile boyandı ya da α-düz kas aktini sentezlenmesi (α-SMA) (alt panel için analiz edildi immünohistokimyasal olarak kahverengi, α-SMA pozitif hücreler). Her bir şekil panelinde ölçek çubuğu 100 um temsil eder. (B), karaciğerinden alınan protein ekstreleri, Western blot tabi tutulur ve Expre bakımından analiz edilmiştirkollajen tip I, α-SMA ve iyi hepatik fibrogenez belirteçleri kurulan Vimentinin salgılanması. lipokalin-2 (LCN2) olarak ifade eden fibrogenez ile ilişkili inflamatuar yanıtı göstermektedir. Bu analizde, eşit protein yükleme β-aktin için özel bir antikor ile lekelerini araştırarak gösterilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52438/52438fig9large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 10," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig10highres.jpg" /> Şekil 10:. Infiltre olan inflamatuar hücrelerin immünolojik boyama Seri karaciğer dokularında 3 hafta içinde safra kanalı ligasyonu alınan bir hayvan karaciğer hazırlandı. bölümleri hematoksilin ve eozin (A) ya da CD45 (B) için özel olan bir antikor ile boyandı. Lütfen aklınızda bulundurun,safra kanalları çevreleyen CD45 pozitif hücrelerin sayısının yüksek. Iltihaba sebep Bu büyük sızıntılar yapay olarak ameliyat edilmiş hayvanlardan elde edilen karaciğer parçalarında görünmez (gösterilmemiştir). Her şekil panelinde ölçek çubuğu 500 mikron temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52438/52438fig10large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis at JoVE.com

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Farelerde Safra Kanalı ligasyonu: Obstrüktif Kolestaz tarafından İnflamatuar Karaciğer Hasarı ve Fibrozis indüksiyonu

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

bile-duct-ligation-mice-induction-inflammatory-liver-injury-fibrosis

Research

JoVE Journal

Medicine

51.4K Görüntüleme.  RWTH Aachen University. Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Video: Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

In organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is indispensable for proper physiological function, and the formation and maintenance of these structures is a highly regulated process. The analysis of these complex, 3-dimensional structures has greatly depended on either 2-dimensional examination in section or on dye injection studies. These techniques, however, are not able to provide a complete and quantifiable representation of the ductal or vascular structures they are intended to elucidate. Alternatively, the nature of 3-dimensional plastic resin casts generates a permanent snapshot of the system and is a novel and widely useful technique for visualizing and quantifying 3-dimensional structures and networks.
A crucial advantage of the resin casting system is the ability to determine the intact and connected, or communicating, structure of a blood vessel or duct. The structure of vascular and ductal networks are crucial for organ function, and this technique has the potential to aid study of vascular and ductal networks in several ways. Resin casting may be used to analyze normal morphology and functional architecture of a luminal structure, identify developmental morphogenetic changes, and uncover morphological differences in tissue architecture between normal and disease states. Previous work has utilized resin casting to study, for example, architectural and functional defects within the mouse intrahepatic bile duct system that were not reflected in 2-dimensional analysis of the structure1,2, alterations in brain vasculature of a Alzheimer's disease mouse model3, portal vein abnormalities in portal hypertensive and cirrhotic mice4, developmental steps in rat lymphatic maturation between immature and adult lungs5, immediate microvascular changes in the rat liver, pancreas, and kidney in response in to chemical injury6.
Here we present a method of generating a 3-dimensional resin cast of a mouse vascular or ductal network, focusing specifically on the portal vein and intrahepatic bile duct. These casts can be visualized by clearing or macerating the tissue and can then be analyzed. This technique can be applied to virtually any vascular or ductal system and would be directly applicable to any study inquiring into the development, function, maintenance, or injury of a 3-dimensional ductal or vascular structure.

A method of visualizing and quantifying the 3-dimensional structure of mouse hepatic portal vein or intrahepatic bile duct is described. This resin cast technique can also be applied to other ductal or vascular systems and allows for in situ visualization or quantification of a system's intact communicating architecture.

3-Boyutlu Reçine Döküm ve Fare Portal Ven veya intrahepatik safra Sisteminin Görüntüleme

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Tıp

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide new expandable sources of beta cells to alleviate the donor scarcity in human islet transplantation as therapy for diabetes. Although recent advances have been made towards this aim, mechanisms that regulate beta cell expansion and differentiation from a stem/progenitor cell remain to be characterized. Here, we describe a protocol for an injury model in the adult mouse pancreas that can function as a tool to study mechanisms of tissue remodeling and beta cell proliferation and differentiation. Partial duct ligation (PDL) is an experimentally induced injury of the rodent pancreas involving surgical ligation of the main pancreatic duct resulting in an obstruction of drainage of exocrine products out of the tail region of the pancreas. The inflicted damage induces acinar atrophy, immune cell infiltration and severe tissue remodeling. We have previously reported the activation of Neurogenin (Ngn) 3 expressing endogenous progenitor-like cells and an increase in beta cell proliferation after PDL. Therefore, PDL provides a basis to study signals involved in beta cell dynamics and the properties of an endocrine progenitor in adult pancreas. Since, it still remains largely unclear, which factors and pathways contribute to beta cell neogenesis and proliferation in PDL, a standardized protocol for PDL will allow for comparison across laboratories.

This protocol describes an injury model involving the surgical ligation of the pancreatic duct in the adult mouse pancreas, resulting in severe injury that establishes an environment that allows beta cell neogenesis and proliferation. This model can be used as a tool to study mechanisms involved in beta cell formation.

Endokrin ve Ekzokrin yeniden programlanması ve Silahların Yayılmasını Önleme Modeli Olarak Pankreas kanalının bağlanmasını yoluyla Fare Pankreas Cerrahi Sakatlık

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg dimethylnitrosamine (DMN), given intraperitoneally for three consecutive days per week. Intraperitoneal injections were performed in the fume hood as DMN is a known hepatoxin and carcinogen. The model has several advantages. Firstly, liver changes can be studied sequentially or at particular stages of interest. Secondly, the stage of liver disease can be monitored by measurement of serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) enzymes. Thirdly, the severity of liver damage at different stages can be confirmed by sacrifice of animals at designated time points, followed by histological examination of Masson&#39;s Trichome stained liver tissues. After four weeks of DMN dosing, the typical fibrosis score is 5 to 6 on the Ishak scale. The model can be reproduced consistently and has been widely used to assess the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

Rat Dimethylnitrosamine Başlatılan Karaciğer Fibrozis Modeli

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Farelerde Hızlandırılmış Ateroskleroz Indüksiyonu: "Tel-Yaralanma" Modeli

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high incidence in aging populations. The current conventional therapies for COPD focus mainly on symptom-modifying drugs; thus, the development of new therapies is urgently needed. Qualified animal models of COPD could help to characterize the underlying mechanisms and can be used for new drug screening. Current COPD models, such as lipopolysaccharide (LPS) or the porcine pancreatic elastase (PPE)-induced emphysema model, generate COPD-like lesions in the lungs and airways but do not otherwise resemble the pathogenesis of human COPD. A cigarette smoke (CS)-induced model remains one of the most popular because it not only simulates COPD-like lesions in the respiratory system, but it is also based on one of the main hazardous materials that causes COPD in humans. However, the time-consuming and labor-intensive aspects of the CS-induced model dramatically limit its application in new drug screening. In this study, we successfully generated a new COPD model by exposing mice to high levels of ozone. This model demonstrated the following: 1) decreased forced expiratory volume 25, 50, and 75/forced vital capacity (FEV25/FVC, FEV50/FVC, and FEV75/FVC), indicating the deterioration of lung function; 2) enlarged lung alveoli, with lung parenchymal destruction; 3) reduced fatigue time and distance; and 4) increased inflammation. Taken together, these data demonstrate that the ozone exposure (OE) model is a reliable animal model that is similar to humans because ozone overexposure is one of the etiological factors of COPD. Additionally, it only took 6 - 8 weeks, based on our previous work, to create an OE model, whereas it requires 3 - 12 months to induce the cigarette smoke model, indicating that the OE model might be a good choice for COPD research.

This study describes the successful generation of a new chronic obstructive pulmonary disease (COPD) animal model by repeatedly exposing mice to high concentrations of ozone.

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

Karaciğer Biyolojisi Ex Vivo Modeli olarak Murine Precision-Cut Karaciğer Dilimleri

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, including ischemia-reperfusion injury (IRI) of extrahepatic organs. This model requires numerous experiments and devices. The duration of anhepatic phase is closely related to the time to develop IRI after transplantation. In this experiment, we used hemodynamic changes to induce extrahepatic organ damage in rats and determined the maximum tolerance time. The time until the most severe organ injury varied for different organs. This method can easily be replicated and can also be used to study IRI of the extrahepatic organs after liver transplantation.

This paper provides a detailed description of how to build an animal model of the anhepatic phase (liver ischemia) in rats to facilitate basic research into ischemia-reperfusion injury after liver transplantation.

Sıçan Karaciğer Nakli Modelinde Hemodinamik Değişiklikleri Simüle Ederek Organ İskemi-Reperfüzyon Yaralanması

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

Safra Kanalı TNBS infüzyonu ile Kronik Pankreatit için Bir Fare Modeli

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...