Kronik pankreatit, pankreas iltihabı, fibrozis, karın ağrısı ve diğer semptomları içeren karmaşık bir hastalıktır. Safra kanalı TNBS infüzyon modeli kronik pankreatit hastalarında gözlenen nöropatik ağrıyı çoğaltır. Bu safra kanalı TNBS infüzyon protokolü, farelerde kronik pankreatit modelinin üretilmesini sağlamak için optimize edilmiştir.
Farelerde safra kanalı ilaç füzyonu teknik olarak zor olduğundan, görselleştirilmesi yönteme yeni yeni araştırmacılara yardımcı olacaktır. Ameliyattan önce ve ameliyattan iki ve üç hafta sonra, von Frey monofilamentlerini kullanarak sekiz ila 10 haftalık bir C57 siyah altı farenin üst karın bölgesine, uygulama başına bir ila iki saniye boyunca 10 kez artan bir şekilde farklı kuvvet seviyeleri uygulayın. Olumlu bir yanıt olarak karın geri çekilmesini veya yalamasını yükseltmeyi düşünün.
Daha sonra, taze hazırlanmış yüzde 0,75 TNBS çözeltisinin 50 mikrolitresi ile 31 kalibrelik bir iğne ile donatılmış bir insülin şırıngası yükleyin. İkinci bir şırıngayı salin içinde yüzde 10 etanolden oluşan 50 mikrolitre ile araç kontrolü olarak yükleyin ve her iki şırıngayı da ışıktan korunan buza yerleştirin. Pedal refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, epilasyon kremini tıraş ederek veya uygulayarak anestezi yapılan farenin karın bölgesinden saçı çıkarın ve fareyi bir diseksiyon mikroskobu altında ısıtılmış bir cerrahi ped üzerine yerleştirin.
Her göze veteriner merhem uygulayın ve cerrahi bölgeyi üç sıralı iki yüzde iyot ve üç yüzde 70 etanol mendili ile dezenfekte edin, tek bir sürekli harekette 0,5 ila bir santimetrelik bir kesi yapmak için mikro makas kullanın ve duodenumu hafifçe ortaya çıkarmak ve ortak safra kanalını bulmak için pamuklu çubuklar kullanın. Tedavinin karaciğer ve safra kesesine akışını önlemek için mikroskobu kullanarak proksimal ortak kanalın üzerine düz bir mikro hemoklip yerleştirin ve TNBS yüklü şırınganın iğnesini vater papillası aracılığıyla pankreas kanalına yerleştirin. İğneyi sabitlemek için kavisli bir mikro hemoklip kullanın ve çözeltiyi bir dakika boyunca pankreas kanalına aşılayın.
Tüm çözelti teslim edildiğinde, mikro kelepçeleri dikkatlice çıkarın ve duodenumun orijinal konumuna geri döndüğünü onaylayın. Karın boşluğunu kapatmadan önce, duodenumun orijinal konumuna dönmesine yardımcı olmak ve peristalsis'in iyileşmesine yardımcı olmak için 36 ila 37 santigrat derecelik 500 mikrolitre steril salin ekleyin. Kas tabakasındaki kesiği kapatmak için beş-O dikişli sürekli bir dikiş kullanın ve dört-O dikişli kesik bir dikiş kullanarak cildi kapatın.
Daha sonra fareyi tam görev süresine kadar izleme ile bir ısıtma yastığı üzerinde bir kurtarma kafesine yerleştirin. Seslendirme, kambur sırt duruşu gibi sıkıntı belirtileri için ameliyat sonrası ilk hafta boyunca günlük fare sağlığını ve davranışını izleyin veya hareket hızını azaltın ve vücut ağırlığını her gün ölçün. Gözlemlendiği gibi, 50 mikrolitre mürekkebin gösterdiği gibi enjeksiyonu, tüm pankreasın sızmasına neden olur ve daha homojen bir hastalık fenotipinin indüksiyonuna izin verir.
Bu temsili analizde, ameliyattan sonraki ilk üç gün içinde, kontrol grubundaki fareler yavaş yavaş iyileşmeden ve 21. Buna karşılık, TNBS alan fareler ameliyattan sonraki ilk beş gün boyunca orijinal vücut ağırlıklarının yaklaşık yüzde 15'ini kaybettiler ve 21. Kontrol fareleri ile karşılaştırıldığında, TNBS enjekte edilen hayvanlar ameliyattan sonraki ikinci ve üçüncü haftalarda karın mekanik aşırı duyarlılığının arttığını göstermiştir.
Pankreasların vücut ağırlığı başına büyüklüğü ve ağırlığı, kontrol hayvanlarından hasat edilen pankreaslara kıyasla TNBS farelerinde önemli ölçüde azaltılmış, bu da TNBS ile tedavi edilen hayvanlarda şiddetli ve uzun süreli kronik pankreatitli insanlardaki bulgularla tutarlı belirgin bir pankreas atrofisi olduğunu düşündürmektedir. Kontrol etanol işlem görmüş farelerden pankreas dokusu bölümlerinin histolojik analizi normal bir morfoloji gösterirken, TNBS ile tedavi edilen farelerden alınan doku bölümleri, yağ hücresi infiltrasyon ve fibrozis ile değiştirilen büyük bir acınar hücre kaybı ile boş bir farkındalık sergiledi. Enjekte edilen TNBS'nin gal mesanesi ve bağırsağa girmesini önlemek, TNBS'nin dokuya zarar veren etkileri olduğu için önemlidir.
infüzyon sırasında, safra kanalını delinme etkili önlemek için eli mümkün olduğunca sabit tutun. Kronik pankreatit gelişimini teşvik etmenin yanı sıra, bu safra kanalı infüzyon fareleri sanatı diğer pankreas hastalığı modellerinin gelişimi için kullanılabilir. Bu TNBS kronik pankreatit fare modeli, kronik pankreatit ve diğer pankreas hastalıklarının hem patogenezi hem de tedavisini incelemek için kullanılabilir.
