Bu yöntem, miyokard enfarktüsünü takiben kalbi çevreleyen perikardiyal boşluğun ve içeriğinin kardiyak onarımdaki rolünü değerlendirmemizi sağlayacaktır. Miyokard enfarktüsünün modellenmesi için geleneksel koroner ligasyon yöntemleriyle karşılaştırıldığında, yöntemimiz sağlam bir perikardiyal boşluğu koruyarak içeriğin belirlenmesine izin verir ve kardiyak iskemik hasarı takiben rollerini izler. Perikard boşluğunun ve kalbin yaralanma yanıtının katkısını anlamak, kalp iyileşmesini iyileştirmek için perikardı hedef alan terapötik stratejiler hakkında önemli bilgiler sağlayacaktır.
Anestezi sonrası başlamak için, farenin pençelerini kısıtlayın ve ameliyat masasına yerleştirin. Fareyi makalede açıklandığı gibi ameliyat için hazırladıktan sonra, ticari bir ventilatör kullanarak fareyi% 2 izofluran ve% 100 oksijen taşıyıcı gaz olarak havalandırın. Daha sonra dakikada 110 nefeslik bir hız, 250 mikrolitrelik bir gelgit hacmi ve dört milimetre cıva pozitif bir ekspiratuar basınç ayarlayın.
Ameliyat için göğsün sol tarafını konumlandırmak için fareyi sağ tarafında% 30 yuvarlayın. Daha sonra sol taraftaki pektoralis kaslarını görselleştirmek için göğüs derisinde iki ila üç santimetrelik bir yanal kesi yapın. Pektoralis majör ve minör kesmek için orta hattan dışa doğru bir santimetre kesi yapın.
Kanayan damarların koterizasyonu boyunca aşırı kanamadan kaçının. Üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki interkostal kasları görselleştirin. Göğüs boşluğuna hava vermek ve kalbin ve akciğerlerin insizyondan düşmesine izin vermek için sol interkostal kasta iki santimetrelik bir kesi yapın.
İnterkostalı kanamadan kesmek için, ventilatörü geçici olarak durdurun ve bir koter cihazı kullanarak açıklığı genişletin. Retraktörleri kullanarak, kalbi açığa çıkarmak için kaburgaları geri çekin. Daha sonra perikardi ve altta yatan kalbi stereo mikroskop altında gözlemleyin.
Perikardın ve altta yatan kalp hareketini azaltmak için forsepsleri perikard yüzeyine yavaşça yerleştirin. Sol uzantının altındaki ortaya çıkışını izleyerek LAD koroner arterini görsel olarak işaretleyin. Mikroiğne sürücüsünü kullanarak, LAD altındaki perikarddan uygun bir sütür geçirin.
LAD ve perikardın diğer tarafında ortaya çıkan dikişi gözlemleyin. Kalıcı ligasyon modelini temsil ederek, koroner arterden kan akışını kısıtlamak için dikişi bağlayın ve sol ventrikülün ön kısmının beyazlatılmasını görünür hale getirin. Daha sonra fazla sütürü makas yardımıyla kesin.
Ameliyat sonrası 72 saat boyunca her 12 saatte bir deri altından analjezik bakım enjeksiyonları sağlayın. İzofluranı% 1'e indirgedikten sonra, havalandırmayı oksijenle korurken izofluranı kapatın. Hayvan nefes alma belirtileri gösterdiğinde, 23 gauge trakea tüpünü ağızdan çıkarın ve solunumun yeniden başlamasını izlemek için fareyi bir kurtarma kafesine yerleştirin.
Harici bir ısı kaynağı sağlamak için kafesin bir kısmı bir ısıtma pedine yerleştirilerek farenin kafeste iyileşmesine izin verin. Kesiler ve hayvan rahatsızlıklarını değerlendirerek farenin sağlık durumunu yedi gün boyunca günlük olarak izleyin. Gerekirse, invaziv cerrahiyi takiben başarılı bir iyileşme için antibiyotik uygulayın.
Fareyi genel anestezi altında oksijenle tuttuktan sonra, fareyi ısıtılmış bir sahne platformunda sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve pençeleri EKG uçlarına takın. Sonra göğsü kovalayın. Transdüser probu ve temas jeli kullanarak EKG görüntüleri elde edin ve uygun yazılımla analiz edin.
Noninvaziv EKG değerlendirmesinden sonra, izofluranı kapatın ve fareyi kafese geri getirin. Kalbi en az 24 saat boyunca% 10 formalin içinde sabitleyin. Numuneyi sağ ventrikül, interventriküler septum ve sol ventrikülden düz bir tıraş bıçağı kullanarak kesin ve insizyonun enfarktüs bölgesinin merkezinden geçmesini sağlayın.
Ve sonra parafin doku örneklerini gömer. Kesilen bölümler daha sonra daha fazla parafin gömmek ve daha sonra beş mikrometre kalınlığında bölümlere ayırmak için montaj kasetine yerleştirilir. Doku kesitlerinin slaytlara yerleştirilmesini takiben, toluen ve derecelendirilmiş alkol kullanarak deparafinize deiyonize su ile yıkanır.
Sonra rehidratlayın. Daha sonra, bölümü oda sıcaklığında iki saat boyunca pikrik asitte% 0.1sirius kırmızısı ile lekeleyin. Bölümü üç dakika boyunca% 0.5 asetik asit ile yıkayın, ardından bir dakika boyunca% 70 etanol ile durulayın.
Mikroskobik değerlendirme için monte edilmeden önce artan ve derecelendirilmiş etanol konsantrasyonlarına sahip yıkamaların ters sırasını kullanarak bölümü kurutun. Modifiye koroner ligasyon ile başarılı miyokard infarktüsü indüksiyonu, kalbin fonksiyonel parametreleri ve yapısal özellikleri incelenerek değerlendirildi. Fonksiyon açısından, azalmış sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonu, miyokard enfarktüsünden sonraki üç ila dört hafta içinde ekokardiyografi ile değerlendirildi.
Histolojik boyama, fonksiyonel değişikliklere sol ventrikül duvarının belirgin fibrozisinin eşlik ettiğini gösterdi; bunlar, enfarktüsten dört hafta sonra kalbin enine kesitlerindeki pikrosirius kırmızı boyalı fibrozisin bozulmuş veya bozulmamış perikardiyal koroner ligasyon modelleriyle nicelleştirilmesiyle daha da doğrulandı. Floresan boncuk etiketleme yönteminin akış sitometrisi analizi ile birleştirilmesi, yerleşik Gata6 pozitif perikardiyal makrofajların izlenmesi için bir yaklaşım sağlamıştır. Daha da önemlisi, kalpte veya kanda çok az veya hiç etiketleme tespit edilmedi.
Miyokard enfarktüsünü takiben, hücrelerin yer değiştirmesi akım sitometrisi ve görüntüleme ile izlenebilir. Miyokard enfarktüsü olan veya olmayan perikardiyal miyeloid hücrelerin floresan boncuk etiketli miktarının belirlenmesi gösterilmiştir. İşlem sırasında ince perikardın yanlışlıkla bozulmasını veya yırtılmasını önlemek için özen gösterilmelidir.
Bu yöntem, perikardiyal bileşenin enfarktüslü kalpteki iyileşme yanıtı üzerindeki etkisinin izlenmesine ve belirlenmesine izin verecek olan hücresel veya efektör blokajı izleyen soy izleme ile birleştirilebilir. Perikard boşluğunun, kısmen yerleşik perikardiyal makrofajların aracılık ettiği yaralanma sonrası kalbi koruduğunu belirledik. Bu yaklaşım, kardiyovasküler hastalıklar için yeni bir araştırma alanı açmaktadır.
