Name: 3d organotypic co-culture model supporting medullary thymic epithelial cell proliferation, differentiation and promiscuous gene expression
Uploaded: 2015-07-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about 3D Organotypic Co-culture Model Supporting Medullary Thymic Epithelial Cell Proliferation, Differentiation and Promiscuous Gene Expression at JoVE.com

This work has been supported by the German Cancer Research Center (DKFZ), the EU-consortium &#8220;Tolerage&#8221;, the Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 938) and the Landesstiftung Baden-W&#252;rttemberg.

Bu çalışma Regierungspräsidium Karlsruhe etik komitesi tarafından onaylanmıştır. Bütün hayvanlar, Almanya Kanser Araştırma Merkezi (DKFZ), spesifik patojenden serbest durumlar altında muhafaza edildi. Yaş 1 ila 7 gün arasında değişen tüm kültür deneyleri fare yavrular için kullanılmıştır. Timustan mTECs 1. izolasyonu Not: aşağıdaki gibi bazı modifikasyonlar ile, steril koşullar altında, daha önce tarif edildiği gibi 1, aşağıdaki sindirim adımları uygulandı. <ol><li> Fare yavrular başını kesmek ve timus çıkarın. RPMI 1640 ortamı (% 5 FCS ihtiva eden) ihtiva eden bir petri plakası buz üzerinde Thymi yerleştirin. </li><li> ~ 5-30 ml RPMI ortamı ile bir yuvarlak tabanlı tüp içinde ince, küçük parçalar ve yerine Thymi kesin ve oda sıcaklığında 10 dakika süre ile bir mıknatıs kullanılarak karıştırılmıştır hafifçe. </li><li> Bundan sonra, özellikle timositleri içeren süpernatant süzün ve collagena bir yuvarlak kalan doku sırayla sindirmek37 ° C&#39;de 25 dakika her biri için kolajenaz / dispaz (0.2 mg / ml ile 1.2 U / ml nihai konsantrasyon), ardından 37 ° C&#39;de her biri için (0.2 mg / ml ve son konsantrasyonu, dağılışı 57 U / ml), 15 dakika boyunca se tip IV, Thymi kadar manyetik karıştırma ile bir su banyosu içinde Cı tamamen sindirilir. Üç Thymi ikiye 1 ml enzim kullanın. </li><li> Dokuya Pasteur pipeti ile bir kez her 7-10 dakikada bir çalkalayın. Kollajenaz / dispase fraksiyonları havuzu ve 70 mikron gazlı süzülür. </li><li> Manyetik hücreye sıralama (MACS) tarafından mTECs zenginleştirin. Daha önce, 11 tarif edilen ve Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, ayırma, manyetik hücre tarafından mTECs arıtılmasını gerçekleştirin. NOT: anti-CD80-PE (16-10A1, 1 at kullanımı: 100 seyreltme) ve (1 at G8.8, kullanımı: 100 seyreltme), anti-EpCAM-bio 12 mTECs manyetik sıralama için aşağıdaki antikorları kullanılmıştır. MACS kullanarak Olgunlaşmamış ve olgun mTECs olarak tanımlandı: CD45 - EpCAM + CD80 - ve CD45 - CD80 + respectively. </li><li> Aşağıdaki (Bölüm 2.3) açıklandığı gibi MACS saflaştırma (olgunlaşmamış mTECs saflığı = 83.1 ± 6.3% ve olgun mTECs = 79,23 ± 3.42%) ardından, organotipik kültürlerinin üzerine mTECs tohum. </li><li> Alternatif olarak, CD45 MACS tükenmesi sonrasında (100 mikron memesi kullanarak) FACS sıralama mTECs aşağıdaki antikorlar kullanılarak: Anti-CD45-PerCP (30-F11, 1 at kullanımı: 100 seyreltme), anti-Ly51-FITC (6C3, 1 de kullanmak : 100 seyreltme), anti-EpCAM-Alexa647 (G8.8, 1 ile kullanımı: 500 oranında seyreltilmiş) ile 1 anti-CD80-PE (16-10A1, kullanımı: 100 seyreltme). (Gün 4): propidium iyodür (5,000 1) kullanılarak ölü hücreleri hariç. Sırasıyla EpCAM + CD80 + - CD45 - - Ly51 - EpCAM + CD80 - ve PI - CD45 - Ly51 PI: FACS kullanarak Olgunlaşmamış ve olgun mTECs olarak tanımlandı. </li></ol> 2. 3D Organotipik Co-kültürler (OTC) NOT: keratinocyt ve organotipik ekimi için 3D-dermal yapılarDaha önce tarif edildiği gibi 9,13 es hazırlandı. Tüm adımlar da hücreler, 2, 37 ° C de inkübe edildi ve% 5 bulundu. Şöyle mTECs kullanılarak OTC küçük değişiklikler ile hazırlandı. <ol><li> Insanlara özgü fibroblastlar hazırlanması Not: daha önce tarif edildiği gibi, 9, insan dermal fibroblastları de-epidermised dermişin eksplant kültürleri elde edildi. <ol><li> Kısaca, insan cildi (~ 5 cm uzunluğunda) şeritler kesildi ve termolisin, 4 ° C&#39;de, O / N (10 mM Hepes, pH 7.4 ile birlikte tuzlu su içinde 0.5 mg / ml) ile tedavi. </li><li> Bundan sonra, forseps kullanarak dermis epidermis ayırın. </li><li> İnce 10 cm&#39;lik petri plakasında küçük parçalar yerine dermis kesilir ve steril bir hava akımı altında 1-2 saat boyunca kurumaya bırakılır. DMEM% 20 FBS içeren düzenli eksplantlar tamamlayın. </li><li> Out büyüyen fibroblastlar bölmek zaman konfluent eksplantlar ileri con plakaya uymak devam emin% 0.1 tripsin kullanarak (genellikle yaklaşık 3 hafta)akıbet ardışık mermi. </li><li> Kadar DMEM 3 kat% 10 FBS aynı eksplantlardan fibroblastlar genişletin ve onları 14 cryo-korumaktadır. Her bir deney serisi için fibroblastlar aynı toplu kullanın. NOT: fibroblastlar dermal eşdeğeri set-up için ışımaya değildi. </li></ol></li><li> İskele hazırlanması <ol><li> Tam 12 iyi filtre ekler uyması için keskin bir 11 mm çaplı metal zımba kullanarak iyi sınırlı, çevrelerin içine 0.4-0.6 mm kalınlığında viskon, dokunmamış lifli malzeme (excel sayfasını destekleyen ürün detay) kesin. Sonra bir iskele olarak 12- kuyu filtre elemanı (polyester kılcal gözenek membran 3 mikron gözenek boyutu) içine yerleştirin. Steril 12 oyuklu plaka içine komple filtre setup yerleştirin. </li><li> Fibrinojen ve trombin bir kombinasyonundan oluşan cerrahi bir fibrin yapışkan, fibrin jel kiti kullanılarak hazırlanır. Fibrinogen- olarak 8 mg / ml ve 10 kit trombin bileşeni önceden seyreltinsırasıyla birim / ml. Aşağıdaki gibi, bir 12-kuyucuklu plaka tek bir oyuk için devam edin. <ol><li> Ca2 + ve Mg + 2, pH 7.0, 100 ul olmayan fibrinojen 100 ul fosfat tamponlu tuz (PBS) ile (8 mg / ml) ile seyreltilir. 270.000 fibroblastlar içeren 100 ul FCS ile 100 ul trombin (10 birim / ml) ile seyreltilir. </li><li> 2 mg / ml ve 2.5 ünite / ml trombin fibrinojen bir nihai konsantrasyonu ile sonuçlanan, (1 karışımı 1) 200 ul fibrinojen ekleme fibroblastlar iskele üzerine hücre-karışımı ihtiva eden trombin 200 ul için koyun. İyice karıştırın ve yumuşak pipetleme (Gün 1) ile iskele bütün alana eşit dağıtın. NOT: 37 ° C&#39;de 30 dakika sonra fibroblastlar kuşatan bir pıhtı, tamamen iskele iç boşlukları dolduran ve düzgün bir üst yüzey oluşturan, meydana gelmiş olacaktır. </li></ol></li></ol></li><li> MTECs ile ortak kültür <ol><li> Ön kültür için organ kültürleri daldırılmasıBir değiştirilen ortam içinde% 10 FBS, 50 ug / ml L-askorbik asit ve 1 ng / ml TGF-β1 ile DMEM, 4-5 gün süre ile her gün. </li><li> Mtec tohumlama gününde, rFAD medyumla yerine (1: 1 DMEM + DMEM / F12),% 10 FBS ile, 10 -10 M kolera toksini, 0.4 mg / ml hidrokortizon, 50 ug / ml L-askorbik asit, RANK bağı nedenle fibroblastlar tarafından salgılanan serin proteaz ile erken fibrinolizi önlenmesi (0.1 ug / ml) ve 500 birim / ml Aprotinin,. </li><li> 7-8 saat sonra, 250,000 mTECs tohumlayarak ko-kültürler-ayarlamak (tam mTECs, ya CD80 LO ve CD80 yüksek alt-gruplar), fibroblast iskele üst oyuk başına 100 ul&#39;lik bir hacim içinde. Bir Neubauer odası (gün 4) kullanarak hücreleri sayın. NOT: timüs 3D organotipik kültürler hava kaldırdı olan cilt OTC aksine medyada submersed tüm zamanlarda. </li><li> 24 saat inkübasyondan sonra, şimdi containi (adım 2.3.2) yukarıda belirtildiği gibi orta kültürleri (toplam orta değişimi) kaynağıng Aprotininin miktarlarda 250 ünite / ml (Gün 5) azalır. </li><li> MTECs proliferatif aktivitesini değerlendirmek için, kültürler tahliye edilmeden önce 4 saat OTC (yani 6.7 uM / ml, / de 10 uM) edu ekleyin. Her kültürün numunesinin veya akışla iki bölüm halinde ya sayma K14 + Edu + hücreler tarafından, mTECs çoğalma endeksleri belirleyin keratin 14. co-boyanması ile birlikte Edu Görüntüleme Kit açıklandığı gibi OTC cryo bölümlerin boyama yapın sitometri (EDU akış sitometri, Bölüm 1.7 yerine Ly51-FITC bir 1&#39;deki CDR1-PB 15 kullanın: 100 seyreltme ve 2.3.6.4). </li><li> Ko-kültür 4-7 gün sonra, RNA izolasyonu, cryo-kesit veya FACS analizi (Gün 8-11) için OTC&#39;leri ve işlemi sonlandırmak. <ol><li> Bir forseps kullanarak kuyu ucun filtreden iskele / dermal eşdeğer ayıran kültürleri sonlandırın. </li><li> Cryo-kesit için, Ekim bileşik bütün OTC embed ve li dondurmacryo-kesit önce sterlin azot buharı. Kullanılana kadar -20 ° C &#39;de, bir kriyostat ve mağaza kullanılarak 5-7 mikron kalınlığında OTC bölümleri hazırlayın. Antikorlar: (100 seyreltme oranı: 1 de GP53, kullanım), ve anti-vimentin: cryo-kesitsel OTC immüno-histokimya için, anti-keratin 14 (1000 seyreltme AF64, kullanım 1 de) kullanın. İlgili ikincil antikorlar kullanılarak dolaylı immüno histokimya boyama gerçekleştirin. </li><li> RNA izolasyonu için çözelti, 2 ml RNazsız tüpün vidalı kapak olarak (fenol ve guanidinyum tiyosiyanat ihtiva eden) Denatüre edici 1 ml. Bir neşter ile parçalar halinde tüm OTC kesin ve denatüre çözeltisi içeren tüp içine ekleyin. Mekanik bir 6.0 hızda 30 saniye boyunca iki kez FastPrep aleti ile OTC&#39;leri parçalamak, 2 dakika boyunca (örnek, bu noktadan sonra -80 ° C&#39;de muhafaza edilebilir) boyunca buz üzerinde arasında yerleştirin. -80 ° C&#39;de donduruldu durumunda, buz üzerinde eritin. 4 ° C&#39;de 10 dakika süreyle 11,500-13,000 rpm tüpler santrifüjleyin. Bir tüpe süpernatantı aktarın RT ve f de 5 dakika boyunca inkübeüretici tarafından tarif edildiği gibi asit guanidinyum tiyosiyanat-fenol-kloroform ekstraksiyonu kullanılarak ollow RNA izolasyonu protokolleri. </li><li> FACS analizi için, iskele kaldırmak ve fibrin / fibroblast / mtec jelden membran ayırın. İnce bir neşter ile jel kesilmiş ve ~ bir FACS tüpü içinde 20 dakika o sindirimi ya da tamamen manyetik karıştırma ile bir su banyosu içinde 37 ° C &#39;de kolajenaz / dispaz, 2 ml ile sindirilmiş kadar. Bir kez, bir Pasteur pipeti her 5 dakikada enzim çözeltisi çalkalayın. Tam bir sindirimden sonra, 70 um filtre üzerinden bir hücre süspansiyonu filtre; 1,7 anlatılan ve akış sitometrisi ile analiz edildiği üzere antikorlar kullanılarak tek bir hücre süspansiyonu leke. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Derbinski, J., Schulte, A., Kyewski, B., Klein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promiscuous+gene+expression+in+medullary+thymic+epithelial+cells+mirrors+the+peripheral+self.">Promiscuous gene expression in medullary thymic epithelial cells mirrors the peripheral self.</a> Nat Immunol. 2, 1032-1039 (2001).</li><li>Kyewski, B., Klein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+central+role+for+central+tolerance.">A central role for central tolerance.</a> Annual review of immunology. 24, 571-606 (2006).</li><li>Bonfanti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+reprogramming+of+thymic+epithelial+cells+to+skin+multipotent+stem+cells.">Microenvironmental reprogramming of thymic epithelial cells to skin multipotent stem cells.</a> Nature. 466, 978-982 (2010).</li><li>Kont, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Aire+regulates+the+expression+of+tissue-restricted+antigens.">Modulation of Aire regulates the expression of tissue-restricted antigens.</a> Molecular Immunology. 45, 25-33 (2008).</li><li>Mohtashami, M., Zuniga-Pflucker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+architecture+of+the+thymus+is+required+to+maintain+delta-like+expression+necessary+for+inducing+T+cell+development.">Three-dimensional architecture of the thymus is required to maintain delta-like expression necessary for inducing T cell development.</a> J Immunol. 176, 730-734 (2006).</li><li>Palumbo, M. O., Levi, D., Chentoufi, A. A., Polychronakos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+proinsulin-producing+medullary+thymic+epithelial+cell+clones.">Isolation and characterization of proinsulin-producing medullary thymic epithelial cell clones.</a> Diabetes. 55, 2595-2601 (2006).</li><li>White, A., Jenkinson, E., Anderson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaggregate+thymus+cultures.">Reaggregate thymus cultures.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2008).</li><li>Stark, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+homeostasis+in+long-term+scaffold-enforced+skin+equivalents.">Epidermal homeostasis in long-term scaffold-enforced skin equivalents.</a> J Investig Dermatol Symp Proc. 11, 93-105 (2006).</li><li>Boehnke, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+fibroblasts+and+microenvironment+on+epidermal+regeneration+and+tissue+function+in+long-term+skin+equivalents.">Effects of fibroblasts and microenvironment on epidermal regeneration and tissue function in long-term skin equivalents.</a> Eur J Cell Biol. 86, 731-746 (2007).</li><li>Pinto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organotypic+coculture+model+supporting+proliferation+and+differentiation+of+medullary+thymic+epithelial+cells+and+promiscuous+gene+expression.">An organotypic coculture model supporting proliferation and differentiation of medullary thymic epithelial cells and promiscuous gene expression.</a> J Immunol. 190, 1085-1093 (2013).</li><li>Gabler, J., Arnold, J., Kyewski, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promiscuous+gene+expression+and+the+developmental+dynamics+of+medullary+thymic+epithelial+cells.">Promiscuous gene expression and the developmental dynamics of medullary thymic epithelial cells.</a> Eur J Immunol. 37, 3363-3372 (2007).</li><li>Farr, A., Nelson, A., Truex, J., Hosier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+heterogeneity+in+the+murine+thymus:+a+cell+surface+glycoprotein+expressed+by+subcapsular+and+medullary+epithelium.">Epithelial heterogeneity in the murine thymus: a cell surface glycoprotein expressed by subcapsular and medullary epithelium.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 39, 645-653 (1991).</li><li>Stark, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Authentic+fibroblast+matrix+in+dermal+equivalents+normalises+epidermal+histogenesis+and+dermoepidermal+junction+in+organotypic+co-culture.">Authentic fibroblast matrix in dermal equivalents normalises epidermal histogenesis and dermoepidermal junction in organotypic co-culture.</a> Eur J Cell Biol. 83, 631-645 (2004).</li><li>Schoop, V. M., Mirancea, N., Fusenig, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+organization+and+differentiation+of+HaCaT+keratinocytes+in+organotypic+coculture+with+human+dermal+fibroblasts.">Epidermal organization and differentiation of HaCaT keratinocytes in organotypic coculture with human dermal fibroblasts.</a> J Invest Dermatol. 112, 343-353 (1999).</li><li>Rouse, R. V., Bolin, L. M., Bender, J. R., Kyewski, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+reactive+with+subsets+of+mouse+and+human+thymic+epithelial+cells.">Monoclonal antibodies reactive with subsets of mouse and human thymic epithelial cells.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 36, 1511-1517 (1988).</li></ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar mali veya ticari çatışması beyan ederim.

RTOCs yanı sıra, 3D OTC TEC farklılaşma ve PGE bakım / indüksiyon diğer (i) ile karşılaştırıldığında (Tablo 1) &#39;basitleştirilmiş 3D kültürlerin&#39; kullanımı açısından çok daha üstün tarafından olmuştur - fibroblastlar yalnız iskele olmaksızın; (Ii) 2 D sistemleri kullanan -, (iii) 3T3-J2 hücreleri TEC klonlar geliştirmek olup, burada, TECS 10 ile birlikte kültürlenmiş fibroblast / besleyici hücreleri ama PGE kaybolur (iv) Matrigel veya (v) ECM bile?...

Geri kalan% 2 toplu timik stroma oluşturan çeşitli hücreler oluşur ise geliştirilmesi timositleri, timüs yaklaşık% 98 kadar olmak (yani, epitel hücreleri, dendritik hücreler, makrofajlar, B hücreleri, fibroblastlar, endotel hücreleri). Dış kortikal epitel hücreleri (cTECs) multipotent öncesi T hücreleri ve öz-MHC olumlu seçiminde kemik iliği, T hücre soyu indüksiyon yanlısı T hücrelerinin göçü temin olgunlaşmamış timositleri kısıtlı. İç medüller timik epitelyum hücreleri (mTECs) indükleyen negatif seçim ya da regülatör T hücre soyu içine sapma ya göre kendinden peptit / MHC kompleksleri için bir yüksek afiniteli TCR olan timositlerin tolerans indüksiyonu katılmaktadırlar. Merkezi tolerans indüksiyonu bağlamında, mTECs Böylece periferik öz yansıtma dokuya sınırlı bir kendi antijenlerine (TRA) çok geniş bir yelpaze ifade etmeleri açısından benzersizdir. Bu olay karışık gen ifadesi olarak adlandırılır (PGE)1,2. Çeşitli kısa vadeli 2B kültür sistemleri değişmez ilk 2 gün içinde 3-6 MHC sınıf II, FoxN1 ve Aire gibi PGE kaybı ve anahtar düzenleyici moleküllerin sonuçlandı olarak bu büyüleyici hücre tipine En güncel çalışmalar, ex vivo izole hücrelerde güveniyor . Özellikle takımlar ve timus bozulmamış 3D ağda özellikleri 2B modellerinde eksik olan, ancak belirsiz kaldı. Yeniden birikme timik organ kültürü (RTOC) sağlam bir timik mikro-7, şu ana kadar, diğer yandan, sadece 3D, bir yandan, T hücresi gelişiminin çalışma sağlar sistemi ve stromal hücre biyolojisi, olmuştur. Bununla birlikte, RTOCs zaten fetal stromal hücrelerin bilgi girişini içerir ve 5-10 günlük bir maksimum kültür dönemi tahammül bir hücre kompleks bir karışımı içeren, örneğin, bazı sınırlamaları vardır. in vitro kültür sistemlerinde indirgemeci eksikliği çalışma engellemiştirT hücre gelişimi ve timus organogenez çeşitli yönleri az değil moleküler PGE düzenlenmesi ve mTECs gelişimsel biyoloji ile ilişkisi. Deri ve timus epitel hücrelerinin yapısal kuruluşun yakın ilişkililik sayesinde, in vitro keratinositlerin farklılaşması taklit ve böylece dermal eşdeğer oluşturmak için başlangıçta geliştirilmiş olan 3D organotipik kültürü (OTC) sistemi için seçti. OTC sistem keratinositler 8,9 numaralı seribaşı olan üzerine fibrin jel, içinde sıkışıp kalırlar dermal fibroblastlar ile kaplanmış inert iskele matriks oluşur. Burada, biz saflaştırılmış mTECs ile keratinositler yerini aldı. Bu modelin temel özellikleri korurken, biz belirli parametreleri optimize edilmiş. MTECs çoğaldı kabul OTC modelinde, böylece yakından in vivo mTECs geliştirme taklit terminal farklılaşma yapıldı ve mtec kimlik ve PGE muhafaza <sup&gt; 10. Bu teknik not timus OTC aşamalı set-up sağlayan ayrıntılı bir protokol sağlar.

<table><tbody><tr><td>Pregnant C57BL/6 mice&amp;nbsp;</td><td>Charles River WIGA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LS columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MS columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>CD45 Microbeads, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-052-301</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PE Microbeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-048-801</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin Microbeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-048-101</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM (G8.8 -Alexa 647 and -biotin)</td><td>Ref. 12</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD80-PE antibody</td><td>BD Pharmingen</td><td>553769</td><td></td></tr><tr><td>CD45-PerCP antibody</td><td>BD Pharmingen</td><td>557235</td><td></td></tr><tr><td>Ly51-FITC antibody</td><td>BD Pharmingen</td><td>553160</td><td></td></tr><tr><td>CDR1-Pacific Blue</td><td>Ref. 15</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Keratin 14 antibody</td><td>Covance</td><td>PRB-155P</td><td></td></tr><tr><td>Vimentin antibody</td><td>Progen</td><td>GP58</td><td></td></tr><tr><td>Cy3-conjugated AffiniPure Goat anti-Rabbit IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch&amp;nbsp;</td><td>111-165-003</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 488-conjugated AffiniPure F(ab&#039;)2 Fragment Goat anti-Guinea Pig IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch&amp;nbsp;</td><td>106-546-003</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 conjugate</td><td>Molecular Probes (Invitrogen GmbH)</td><td>A-11008</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Alexa Fluor 594 Imaging Kit</td><td>Invitrogen</td><td>C10339</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Flow Cytometry Assay Kit</td><td>Invitrogen</td><td>C10425</td><td></td></tr><tr><td>12-well filter inserts (thincerts)</td><td>Greiner bio-one</td><td>657631</td><td></td></tr><tr><td>12-well plate</td><td>Greiner</td><td>665180-01</td><td></td></tr><tr><td>Jettex 2005/45</td><td>ORSA, Giorla Minore, Italy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fibrinogen TISSUECOL-Kit Immuno</td><td>Baxter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Thrombin TISSUECOL-Kit Immuno</td><td>Baxter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Serva</td><td>47302.03</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Lonza</td><td>BE12-604F</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Lonza</td><td>BE12-719F</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-049&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>FBS Gold</td><td>GE Healthcare</td><td>A11-151</td><td></td></tr><tr><td>Aprotinin (Trasylol)</td><td>Bayer</td><td>4032037</td><td></td></tr><tr><td>Cholera toxin</td><td>Biomol</td><td>G117</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Seromed (Biochrom)</td><td>K3520</td><td></td></tr><tr><td>L-ascorbic acid</td><td>Sigma</td><td>A4034</td><td></td></tr><tr><td>TGF-&amp;szlig;1</td><td>Invitrogen</td><td>PHG9214</td><td></td></tr><tr><td>RANKL</td><td>R&amp;amp;D systems</td><td>462-TR-010</td><td></td></tr><tr><td>Thermolysin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&amp;nbsp;T-7902</td><td></td></tr><tr><td>OCT Compound</td><td>TissueTek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Trizol (aka. Denaturing solution - Acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction)</td><td>Invitrogen</td><td>10296028</td><td></td></tr><tr><td>FastPrep FP120</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type IV&amp;nbsp;</td><td>CellSystems</td><td>LS004189</td><td>0.2 mg/ml and 57U/ml final conc.</td></tr><tr><td>Neutrale Protease (Dispase)</td><td>CellSystems</td><td>LS002104</td><td>0.2 mg/ml and 1.2U/ml final conc.</td></tr><tr><td>DNase I&amp;nbsp;</td><td>Roche</td><td>11 284 932 001</td><td>25 &amp;micro;g/ml final conc.</td></tr></tbody></table>

3d organotypic co-culture model supporting medullary thymic epithelial cell proliferation, differentiation and promiscuous gene expression

Intra-timik T hücre gelişimi, çeşitli stromal hücrelerin, yani olmayan T hücrelerden oluşan karmaşık bir üç boyutlu ağ örgüsü gerektirir. Sırayla, yani T hücre reseptör repertuarı oluşturma ve seçim ardından T hücre soyu taahhüt önce çevre içine ihracat, zorunlu kontrol noktaları geçerken timositleri son derece koordineli zamansal ve mekansal için bu iskelesi travers. Bu iskele oluşturan iki ana yerleşik hücre tipleri (cTECs) kortikal ve medüller timik epitel hücreleri (mTECs) bulunmaktadır. MTECs önemli bir özelliği, bir çok dokuya sınırlı bir antijenlerin olarak adlandırılan rasgele ifadesidir. Bu dokuya sınırlı antijenler, sırasıyla kendi kendine tolerans sonuçlanan mTECs ya timik dendritik hücreler tarafından doğrudan veya dolaylı olarak timositleri olgunlaşmamış sunulmaktadır. CTECs ve mTECs gelişim yollarını ve fonksiyonlarını taklit in vitro uygun modeller şu anda lak vardırkral. Yeterli deneysel modellerin eksikliği, örneğin hala tam olarak hücresel ve moleküler düzeyde anlaşılmaktadır karışık gen ifadesinin, analiz engelliyordu. Biz ex vivo izole mTECs kültürüne 3D organotipik ko-kültür modeli uyarladı. Bu model, ilk olarak in vitro olarak, bir cilt eşdeğer üretmek üzere bir şekilde keratinosit yetiştirmek için geliştirilmiştir. , CD80 hi, Aire-pozitif mTECs, RANKL (ii) tepki ve FoxN1 (iii) sürekli ifadeye (i) çoğalması ve CD80 lo, Aire-negatif terminal farklılaşma: 3D model mtec biyoloji temel fonksiyonel özellikler korunmuş Aire ve CD80 hi mTECs doku kısıtlı genler.

Biz aslında keratinositlerde 9 in vitro uzun vadeli kültürü için geliştirilmiş olan 3D organotipik ko-kültür modeli (3D OTC) kabul etti. MACS zenginleştirilmiş mTECs (MACS zenginleştirme şeması Şekil 1 e bakınız), bir fibrin jel ve tutulu fibroblastlar içeren bir yapı iskelesi üzerine ekilmiştir. fibroblastlar in vitro mTECs destekleyen temel hücre dışı matriks (ECM) sağlarlar. MTECs hava maruz kalan in vivo ortamı (OTC set-up şeması <st...

Watch this Scientific Journal Video about 3D Organotypic Co-culture Model Supporting Medullary Thymic Epithelial Cell Proliferation, Differentiation and Promiscuous Gene Expression at JoVE.com

3D Organotypic Co-culture Model Supporting Medullary Thymic Epithelial Cell Proliferation, Differentiation and Promiscuous Gene Expression

Studying medullary thymic epithelial cells in vitro has been largely unsuccessful, as current 2D culture systems do not mimic the in vivo scenario. The 3D culture system described herein - a modified skin organotypic culture model - has proven superior in recapitulating mTEC proliferation, differentiation and maintenance of promiscuous gene expression.

Medüller Timik epitel hücre proliferasyonu, farklılaşması ve Promiscuous Gen İfade Destekleme 3D Organotipik Co-kültür Modeli

Intra-thymic T cell development requires an intricate three-dimensional meshwork composed of various stromal cells, i.e., non-T cells. Thymocytes traverse ...

3d-organotypic-co-culture-model-supporting-medullary-thymic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

10.6K Görüntüleme.  German Cancer Research Center (DKFZ). Studying medullary thymic epithelial cells in vitro has been largely unsuccessful, as current 2D culture systems do not mimic the in vivo scenario. The 3D culture system described herein - a modified skin organotypic culture model - has proven superior in recapitulating mTEC proliferation, differentiation and maintenance of promiscuous gene expression. 

Video: 3D Organotypic Co-culture Model Supporting Medullary Thymic Epithelial Cell Proliferation, Differentiation and Promiscuous Gene Expression

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a promising source for adoptive T cell therapy (ACT). However, classical in vitro methods for producing regenerated T cells from iPSC result in either innate-like or terminally differentiated T cells, which are phenotypically and functionally distinct from na&#239;ve T cells. Recently, a novel three-dimensional (3D) thymic culture system was developed to generate a homogenous subset of CD8&#945;&#946;+ antigen-specific T cells with a na&#239;ve T cell-like functional phenotype, including the capacity for proliferation, memory formation, and tumor suppression in vivo. This protocol avoids aberrant developmental fates, allowing for the generation of clinically relevant iPSC-derived T cells, designated as iPSC-derived thymic emigrants (iTE), while also providing a potent tool to elucidate the subsequent functions necessary for T cell maturation after thymic selection.

This article describes a novel method to generate tumor antigen-specific induced pluripotent stem cell-derived thymic emigrants (iTE) by a three-dimensional (3D) thymic culture system. iTE are a homogenous subset of T cells closely related to na&#239;ve T cells with the capacity for proliferation, memory formation, and tumor suppression.

Üç boyutlu Timik Kültür Sistemi Murine indüklenen Pluripotent Kök Hücre kaynaklı Tümör Antijen-spesifik Timik Emigrants oluşturmak için

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Kanser Araştırmaları

Reaggregate Thymus Cultures

Stromal cells within lymphoid tissues are organized into three-dimensional structures that provide a scaffold that is thought to control the migration and development of haemopoeitic cells. Importantly, the maintenance of this three-dimensional organization appears to be critical for normal stromal cell function, with two-dimensional monolayer cultures often being shown to be capable of supporting only individual fragments of lymphoid tissue function. In the thymus, complex networks of cortical and medullary epithelial cells act as a framework that controls the recruitment, proliferation, differentiation and survival of lymphoid progenitors as they undergo the multi-stage process of intrathymic T-cell development. Understanding the functional role of individual stromal compartments in the thymus is essential in determining how the thymus imposes self/non-self discrimination. Here we describe a technique in which we exploit the plasticity of fetal tissues to re-associate into intact three-dimensional structures in vitro, following their enzymatic disaggregation. The dissociation of fetal thymus lobes into heterogeneous cellular mixtures, followed by their separation into individual cellular components, is then combined with the in vitro re-association of these desired cell types into three-dimensional reaggregate structures at defined ratios, thereby providing an opportunity to investigate particular aspects of T-cell development under defined cellular conditions. (This article is based on work first reported Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pages 185-196).

In this video the preparation of 2-dGuo-treated reaggregate thymus cultures is demonstrated.

Thymus Kültürler Reaggregate

Stromal cells within lymphoid tissues are organized into three-dimensional structures that provide a scaffold that is thought to control the migration and ...

Biyoloji

Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures

In the thymus, interactions between developing T-cell precursors and stromal cells that include cortical and medullary epithelial cells are known to play a key role in the development of a functionally competent T-cell pool. However, the complexity of T-cell development in the thymus in vivo can limit analysis of individual cellular components and particular stages of development. In vitro culture systems provide a readily accessible means to study multiple complex cellular processes. Thymus organ culture systems represent a widely used approach to study intrathymic development of T-cells under defined conditions in vitro. Here we describe a system in which mouse embryonic thymus lobes can be depleted of endogenous haemopoeitic elements by prior organ culture in 2-deoxyguanosine, a compound that is selectively toxic to haemopoeitic cells. As well as providing a readily accessible source of thymic stromal cells to investigate the role of thymic microenvironments in the development and selection of T-cells, this technique also underpins further experimental approaches that include the reconstitution of alymphoid thymus lobes in vitro with defined haemopoietic elements, the transplantation of alymphoid thymuses into recipient mice, and the formation of reaggregate thymus organ cultures. (This article is based on work first reported Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pages 185-196).

This video demonstrates the dissection and removal of the fetal thymus as well the preparation of ex vivo cultures of 2-dGuo-treated thymus.

2-dGuo Boyalı Thymus Organ Kültürleri hazırlanması

In the thymus, interactions between developing T-cell precursors and stromal cells that include cortical and medullary epithelial cells are known to play ...

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, which is regulated by a variety of soluble and physical signals in the microenvironment. Described here is a method created to study the process of branching morphogenesis by forming engineered three-dimensional (3D) epithelial tissues of defined shape and size that are completely embedded within an extracellular matrix (ECM). This method enables the formation of arrays of identical tissues and enables the control of a variety of environmental factors, including tissue geometry, spacing, and ECM composition. This method can also be combined with widely used techniques such as traction force microscopy (TFM) to gain more information about the interactions between cells and their surrounding ECM. The protocol can be used to investigate a variety of cell and tissue processes beyond branching morphogenesis, including cancer invasion.

This manuscript describes a soft lithography-based technique to engineer uniform arrays of three-dimensional (3D) epithelial tissues of defined geometry surrounded by extracellular matrix. This method is amenable to a wide variety of cell types and experimental contexts and allows for high-throughput screening of identical replicates.

Ekstraselüler Matrix içinde Gömülü Mühendislik Üç boyutlu Epitel Dokular

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Biyomühendislik

Generation of Mosaic Mammary Organoids by Differential Trypsinization

Organoids offer self-organizing, three-dimensional tissue structures that recapitulate physiological processes in the convenience of a dish. The murine mammary gland is composed of two distinct epithelial cell compartments, serving different functions: the outer, contractile myoepithelial compartment and the inner, secretory luminal compartment. Here, we describe a method by which the cells comprising these compartments are isolated and then combined to investigate their individual lineage contributions to mammary gland morphogenesis and differentiation. The method is simple and efficient and does not require sophisticated separation technologies such as fluorescence activated cell sorting. Instead, we harvest and enzymatically digest the tissue, seed the epithelium on adherent tissue culture dishes, and then use differential trypsinization to separate myoepithelial from luminal cells with ~90% purity. The cells are then plated in an extracellular matrix where they organize into bilayered, three-dimensional (3D) organoids that can be differentiated to produce milk after 10 days in culture. To test the effects of genetic mutations, cells can be harvested from wild type or genetically engineered mouse models, or they can be genetically manipulated prior to 3D culture. This technique can be used to generate mosaic organoids that allow investigation of gene function specifically in the luminal or myoepithelial compartment.

The mammary gland is a bilayered structure, comprising outer myoepithelial and inner luminal epithelial cells. Presented is a protocol to prepare organoids using differential trypsinization. This efficient method allows researchers to separately manipulate these two cell types to explore questions concerning their roles in mammary gland form and function.

Diferansiyel Tripsinizasyon a göre Mozaik Meme Organoidlerinin Üretimi

Organoids offer self-organizing, three-dimensional tissue structures that recapitulate physiological processes in the convenience of a dish. The murine ...

Gelişim Biyolojisi

Extra Cellular Matrix-Based and Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Testicular Organoids

Testicular organoids provide a tool for studying testicular development, spermatogenesis, and endocrinology in vitro. Several methods have been developed in order to create testicular organoids. Many of these methods rely upon extracellular matrix (ECM) to promote de novo tissue assembly, however, there are differences between methods in terms of biomimetic morphology and function of tissues. Moreover, there are few direct comparisons of published methods. Here, a direct comparison is made by studying differences in organoid generation protocols, with provided outcomes. Four archetypal generation methods: (1) 2D ECM-free, (2) 2D ECM, (3) 3D ECM-free, and (4) 3D ECM culture are described. Three primary benchmarks were used to assess the testicular organoid generation. These are cellular self-assembly, inclusion of major cell types (Sertoli, Leydig, germ, and peritubular cells), and appropriately compartmentalized tissue architecture. Of the four environments tested, 2D ECM and 3D ECM-free cultures generated organoids with internal morphologies most similar to native testes, including the de novo compartmentalization of tubular versus interstitial cell types, the development of tubule-like-structures, and an established long-term endocrine function. All methods studied utilized unsorted, primary murine testicular cell suspensions and used commonly accessible culture resources. These testicular organoid generation techniques provide a highly accessible and reproducible toolkit for research initiatives into testicular organogenesis and physiology in vitro.

Here, four methods for generating testicular organoids from primary neonatal murine testicular cells are described i.e., extracellular matrix (ECM) and ECM-free 2D and 3D culture environments. These techniques have multiple research applications and are especially useful for studying testicular development and physiology in vitro.

Ekstra Hücresel Matris Tabanlı ve Ekstra Hücresel Matrissiz Murine Testiküler Organoidlerin Üretimi

Testicular organoids provide a tool for studying testicular development, spermatogenesis, and endocrinology in vitro. Several methods have been developed ...

Preparation and Applications of Organotypic Thymic Slice Cultures

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell repertoire. In vitro models to study T lineage commitment and development have provided valuable insights into this process. However, these systems lack the complete three-dimensional thymic milieu necessary for T cell development and, therefore, are incomplete approximations of in vivo thymic selection. Some of the challenges related to modeling T cell development can be overcome by using in situ models that provide an intact thymic microenvironment that fully supports thymic selection of developing T cells. Thymic slice organotypic cultures complement existing in situ techniques. Thymic slices preserve the integrity of the thymic cortical and medullary regions and provide a platform to study development of overlaid thymocytes of a defined developmental stage or of endogenous T cells within a mature thymic microenvironment. Given the ability to generate ~20 slices per mouse, thymic slices present a unique advantage in terms of scalability for high throughput experiments. Further, the relative ease in generating thymic slices and potential to overlay different thymic subsets or other cell populations from diverse genetic backgrounds enhances the versatility of this method. Here we describe a protocol for the preparation of thymic slices, isolation and overlay of thymocytes, and dissociation of thymic slices for flow cytometric analysis. This system can also be adapted to study non-conventional T cell development as well as visualize thymocyte migration, thymocyte-stromal cell interactions, and TCR signals associated with thymic selection by two-photon microscopy.

We describe the preparation of thymic slices that, in combination with flow cytometry, can be used to model positive and negative selection of developing T cells. Thymic slices can also be adapted for the in situ analysis of thymocyte migration, localization, and signaling via immunofluorescence and two-photon microscopy.

Hazırlık ve Organotipik Timik Dilim Kültürler Uygulamaları

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion

Breast cancer is the second leading cause of cancer-related death among women in the U.S. Organoid models of solid tumors have been shown to faithfully recapitulate aspects of cancer progression such as proliferation and invasion. Although patient-derived organoids and patient-derived xenograft organoids are pathophysiologically relevant, they are costly to propagate, difficult to manipulate, and comprised primarily of the most proliferative cell types within the tumor microenvironment (TME). These limitations prevent their use for elucidating cellular mechanisms of disease progression that depend upon tumor-associated stromal cells which are found within the TME and known to contribute to metastasis and therapy resistance. 
Here, we report on methods for cultivating epithelial-stromal multicellular 3D cultures. The advantages of these methods include a cost-effective system for rapidly generating organoid-like 3D cultures within scaffold-free environments that can be used to track invasion at single-cell resolution within hydrogel scaffolds. Specifically, we demonstrate how to generate these heteromulticellular 3D cultures using BT-474 breast cancer cells in combination with fibroblasts (BJ-5ta), monocyte-like cells (THP-1), and/or endothelial cells (EA.hy926). Additionally, differential fluorescent labeling of cell populations enables time-lapse microscopy to define 3D culture assembly and invasion dynamics. 
Notably, the addition of any two stromal cell combinations to 3D cultures of BT-474 cells significantly reduces circularity of the 3D cultures, consistent with the presence of organoid-like or secondary spheroid structures. In tracker dye experiments, fibroblasts and endothelial cells co-localize in the peripheral organoid-like protrusions and are spatially segregated from the primary BT-474 spheroid. Finally, heteromulticellular 3D cultures of BT-474 cells have increased hydrogel invasion capacity. Since we observed these protrusive structures in heteromulticellular 3D cultures of both non-tumorigenic and tumorigenic breast epithelial cells, this work provides an efficient and reproducible method for generating organoid-like 3D cultures in a scaffold-free environment for subsequent analyses of phenotypes associated with solid tumor progression.

There is a critical need for 3D cancer models that capture heterocellular crosstalk to study cancer metastasis. Our study presents the generation of heteromulticellular stromal-epithelial in a scaffold and scaffold-free environment that can be used to study invasion and cellular spatial distributions.

İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler

Breast cancer is the second leading cause of cancer-related death among women in the U.S. Organoid models of solid tumors have been shown to faithfully ...

<meta charset="utf8"></head><body>iPSC'den Türetilmiş Organoidlerle Timik Mikro Ortamın Yeniden Oluşturulması

Formation of Human Thymus Organoids in Three-Dimensional Fibrin Hydrogels

Generation of a functional and self-tolerant T cell repertoire is a complex process dependent on the thymic microenvironment and, primarily, on the properties of its extracellular matrix (ECM). Thymic epithelial cells (TECs) are crucial in thymopoiesis, nurturing and selecting developing T cells by filtering self-reactive clones. TECs have been empirically demonstrated to be particularly sensitive to physical and chemical clues supplied by the ECM and classical monolayer cell culture leads to a quick loss of functionality until their death. Because of this delicate maintenance combined with relative rarity, and despite the high stakes in modeling thymus biology in vitro, models able to faithfully mimic the TEC niche at scale and over time are still lacking. Here, we describe the formation of a multicellular human thymic organoid model, in which the TEC compartment is derived from human induced pluripotent stem cells (iPSC) and reaggregated with primary early thymocyte progenitors in a three-dimensional (3D) fibrin-based hydrogel. This model answers current needs for a scalable culture system that reproduces the thymic microenvironment ex vivo and demonstrates functionality, i.e., the ability to produce T cells and to support thymus organoid growth over several weeks. Thus, we propose a practical in vitro model of thymus functionality through iPSC-derived organoids that would benefit research on TEC biology and T cell generation ex vivo.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: İnsan Timik Organoidleri ile Timik Epitel Hücrelerini ve T-Hücresi Araştırmalarını İlerletmek

Here, we describe a protocol for the formation of human iPSC-derived thymus organoids grown in 3D fibrin hydrogels aiming to support thymic epithelial cell (TEC) maturation and prolonged maintenance, as well as thymopoiesis in vitro.

Üç Boyutlu Fibrin Hidrojellerinde İnsan Timus Organoidlerinin Oluşumu

Generation of a functional and self-tolerant T cell repertoire is a complex process dependent on the thymic microenvironment and, primarily, on the ...

Medüller Timik epitel hücre proliferasyonu, farklılaşması ve Promiscuous Gen İfade Destekleme 3D Organotipik Co-kültür Modeli

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Üç boyutlu Timik Kültür Sistemi Murine indüklenen Pluripotent Kök Hücre kaynaklı Tümör Antijen-spesifik Timik Emigrants oluşturmak için

Thymus Kültürler Reaggregate

2-dGuo Boyalı Thymus Organ Kültürleri hazırlanması

Ekstraselüler Matrix içinde Gömülü Mühendislik Üç boyutlu Epitel Dokular

Diferansiyel Tripsinizasyon a göre Mozaik Meme Organoidlerinin Üretimi

Ekstra Hücresel Matris Tabanlı ve Ekstra Hücresel Matrissiz Murine Testiküler Organoidlerin Üretimi

Hazırlık ve Organotipik Timik Dilim Kültürler Uygulamaları

İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler

Üç Boyutlu Fibrin Hidrojellerinde İnsan Timus Organoidlerinin Oluşumu

Üç Boyutlu Fibrin Hidrojellerinde İnsan Timus Organoidlerinin Oluşumu