Name: foraging path-length protocol for drosophila melanogaster larvae
Uploaded: 2016-04-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae at JoVE.com

The authors acknowledge continued funding the Natural Sciences and Engineering Council of Canada (NSERC) to MBS.

1. Larva Tahsil Üzüm Plakaları ve Holding Şişeler hazırlayın <ol><li> Tutan şişe yapmak için, hava temini için bir sinek flakon fiş sığacak kadar büyük 6 oz sinek kültürü şişeleri, (Şek. 1D) bir tarafında delikler kesti. </li><li> (Ağar, üzüm suyu kaynatma ile üzüm suyu ortamında (% 1.8 ağar,% 45 üzüm suyu,% 2.5 asetik asit,% 2.5 etanol) 250 ml hazırlanması ve suyun büyük bölümü, 70 ° C kadar soğumaya, üzüm plakaları yapmak için ) soğutma sırasında, daha sonra asetik asit ve etanol ekleyin ve su ile hacme getirmek karıştırın. </li><li> Üzüm suyu ortamının yüzey kapağının (Şek. 1A) dudak üzerinde bir kubbe edinceye kadar 35 x 10 mm Petri kabı kapaklarını doldurmak için (iğne olmadan) bir şırınga kullanın. </li><li> 4 ° C&#39;de nemli ve hava almayan kaplarda saklayın üzüm plakaları kullanıma kadar (2 hafta maksimum). </li></ol> Gıda Tabaklar 2. Hazırlık <ol><li> Standart sinek gıda tarifi hazırlayın. Not: t için% 10 sakroz,% 1.3 ağar,% 0.8 potasyum sodyum tartrat, 0.1% monopotasyum fosfat,% 0.05 sodyum klorür,% 0.05 kalsiyum klorid,% 0.05 magnezyum klorür: yol uzunluğu EST yetiştirme gıda kalitesi etkisi Bu düşük besin sinek gıda kullanılan % 0.05 su içinde demir sülfat,% 5 ve% 0.5 maya propionik asit; ve yüksek besin sinek gıda:% 1.5 sukroz,% 1.4 ağar,% 3 glükoz,% 1.5 mısır unu,% 1 buğday tohumu,% 1 soya unu,% 3 melas,% 3.5 maya,% 0.5 propionik asit,% 0.2 Tegosept 1 su içinde% etanol. Her iki yiyeceklerde propiyonik asit, Tegosept ve etanol eklemeden önce 50 o C &#39;çözüm ve serin otoklav. </li><li> 100 x 15mm Petri kapları içine sinek gıda 40 ml dökün. </li><li> 4 ° C&#39;de nemli ve hava almayan kaplarda saklayın gıda plakaları kullanıma kadar (2 hafta maksimum). </li></ol> 3. Test Plakaları hazırlayın <ol><li> çapı 58 x 25 cm, 10, 1 mm derinliğinde dairesel çukurlar 6 mm kalınlığında siyah Pleksiglas plakalar, 10 cm hazırlamak ve 2 x 5 gün içinde düzenlenmişlarva üzerinde test etmek esign (Şek. 1C). Not: 3 ya da yukarıdaki pleksiglas plakaların daha mevcut olup olmadığını 30 larva kadar bir seferde test edilebilir. Seçenek olarak ise, larvalar petri kase çapı 10 cm test edilebilir. Bu seçenek daha zahmetlidir ve test edilecek larvaların düşük sayılar için izin verir. </li><li> Pleksiglas testi plakalar üzerinde maya macunu yaymak için bir siyah 39 x 8 cm, 6 mm kalınlığında pleksiglas serpme edinin. </li><li> önceden dipleri kapaklarını ayırarak larva yol-uzunlukları kayıt için 100 x 15 mm Petri kabı kapaklarını hazırlayın. </li></ol> 4. Ebeveyn Populasyonlarında ayarlama <ol><li> Tüm tahlil boyunca sabit yetiştirme koşulları tutmak (örneğin, 25 ºC,% 60 nem ve 12:12 ışık: Standart sinek gıda karanlık döngüsü). </li><li> Aynı yetiştirme koşullarında ebeveyn nüfusu kaldırın. </li><li> 150 kadın ve 50 - - 100 toplayın 75 erkek ve optimum doğurganlık için 5 ± 1 gün boyunca onları yaş. </li><li> f izinemales ve erkekler standart sinek gıda ile 6 oz sinek kültür şişe gecede çiftleşme. </li><li> Maskeleme bandı (Şekil 1E.) Ile üst üzerinde, Transfer tutma şişenin içine uçar ve bir üzüm plakasını (Şekil 1B döşeme yumurta teşvik edecektir üzüm plaka üzerinde taze maya hamur küçük bir miktar.) Sabitleyin. </li><li> Altındaki üzüm plaka ile, baş aşağı (Şek. 1F) ayakta şişeleri yetişkin üzüm plaka üzerinde yumurtalarını bırakmak için izin bırakın. </li><li> 24 saat sonra ilk üzüm plaka atın ve tutma şişe yeni bir üzüm plakasını yerleştirin. Bu larvalar, ertesi gün toplanıp getirildiği, üzüm plaka olacaktır. Not: Üzüm plakaları kurmak erken ertesi gün silinebilir, böylece plakaları kurmak sonra larva 22 saat temizlenecek gerekecektir (. Örneğin 12 pm plaka kurmak ve 10 net ertesi gün ben). Kadın stopaj ve tha olmuş olabilecek yumurta önlemek için ilk üzüm plaka atmak için tavsiye edilirt gelişiminde ileri olabilir. </li></ol> 5. Üzüm Tabaklar L1 (İlk Evre) Larva toplayın <ol><li> 60 x 15 mm Petri kabındaki onlar kuruldu 22 saat sonra şişe ve yerden üzüm plakaları çıkarın. </li><li> tutma şişesi üzerinde taze maya macun ile yeni bir üzüm plaka koyun. </li><li> Açık ve diseksiyon prob kullanılarak seri başı üzüm plaka tüm larvaların atın. </li><li> Inkübe standart koşullarda 4 saat süreyle üzüm plakaları temizlenir. </li><li> 4 saat sonra, üzüm plakalardan suş başına 100 L1 larvaları almak ve gıda plakaları üzerinde yerleştirin. <ol><li> (Larva gıda delme ve gömme olmadan) nazikçe gıda larvaları koyun ve gıda plaka üzerinde larvaları dağıtarak kalabalığı önlemek. </li></ol></li><li> Test hayvanları dolaşıp başlamadan önce yaklaşık 10 saat kadar gıda inkübe. Not: - yumurtadan çıktıktan sonra 96 ​​saat 25 ºC &#39;de, genel olarak dolaşıp 10 saat önce 72 karşılık gelir. exacinkübasyon süresi t miktarı her bir suş için larva bir başlangıç ​​seti toplama ve göçebe başlangıcına kadar saat sayısını kaydederek deney başlamadan önce belirlenmelidir (dolaşıp larvalar gıda tarafına ve kapağın üzerine gıda dışında hareket edecek levha). Not: Gerekirse, aynı anne 3 larva toplamak için kullanılabilir - 5.5 adımları 4.7 tekrarlayarak test 4 gün. suşları yol uzunluğu bir test sipariş etkisini önlemek için gün boyunca kurmak ve test edildiği sırasını değiştirin. Aynı &quot;kontrol&quot; gerginlik test / gün etkileri kontrol etmek için test her gün suşları. </li><li> Birçok suş test edilir ise, daha sonra, uygun bir zaman noktasında her bir suş test edilmesi için izin vermek için, larvaların kurmak ve toplama süreleri sersemleme. </li></ol> 6. Larva Yol boyu Testi <ol><li> 2 oranında (hacime göre ağırlık) bir 1: su içinde, kuru aktif fırıncı mayası içinde çözülür. bitmiş maya yapıştırmak pa daha ince olmalıdırncake meyilli, macun dışında bir kaşık kaldırma bir şekilde, o damlar ve hızlı bir şekilde eriyip hamur yüzeyinde şeritler geride bırakır. Not: Maya macunun kıvamı önemlidir ve deney boyunca sabit olmalıdır. Tam maya: su oranı marka ve maya toplu bağlı ayarlanması gerekebilir. </li><li> Yavaşça ilk gerginlik larvaları bir boya fırçası kullanarak gıda plaka test edilecek seçin. </li><li> Bir Petri kabındaki larvaları toplayın ve yavaşça tüm yiyecek çıkarmak için su ile yıkayın. <ol><li> bir laboratuvar ile 2 ml su ve hafifçe dab larva kuru test plakası üzerinde larvaları verirken suyun aktarılmasını engellemek için silin - Çabuk 1 ile larva yıkayın. , Stres önlemek nemli ama suya batırıldıktan değil larvaları tutmak için. </li></ol></li><li> yan üç test plakaları yan düzenleyin ve her bir test plakası için 5 dk zamanı ayarlayın. </li><li> Test plakalarının üstüne maya macunu sürün ve serpme kullanarak, ince yatıyordu yayıldıtüm kuyuları maya düz bir tabaka var ki her test plakası üzerinde maya hamur er. </li><li> Yavaşça her tabakta ilk larvaları yerleştirdikten sonra 5 dakika zamanlayıcı başlayarak her bir merkezi bir larva yerleştirin. Not: Üç tabak 500 larva toplam kadar 30 / suş / test günün bir örneklem büyüklüğü veren, bir defada yapılabilir. </li><li> her bir üstüne bir Petri kabı kapağı yerleştirin. </li><li> Zamanlayıcı bittiğinde, plakadan larvaları çıkarmadan, kalıcı bir kalem kullanarak maya geride bıraktığı yol-uzunlukları izleme başlar. larva aynı sırayla iz yolu uzunlukları testi plakalar üzerine yerleştirildi. <ol><li> Larvalar tabakalarına yerleştirildi ile aynı hızda izlemeyi gerçekleştirin. Daha sonra veri analizinde tutarlılık için, tüm yol-uzunlukları aynı işaretleyici kullanın. Kalıcı işaretleyici tavsiye edilir. </li></ol></li><li> Yineleyin her suş test edilecek için 6.8.1 için 6.2 adımları tekrarlayın. hemen pa üzerinde açlık etkilerini önlemek için test etmeden önce gıda her yük almakinci uzunlukta. </li></ol> 7. Gıda Yoksunluk <ol><li> Larvalar, gıda test edilmeden önce yoksun olması adım 6.2 6.3&#39;e tarif edildiği gibi larvaları toplamak için, ancak gıda yoksunluğu zaman istenilen miktarda daha önce (örn., Larvalar eğer gıda 4 saat yoksun olması ise daha önce larva 4 saat toplama Test süresi). </li><li> iki gruba yıkanmış larvaları bölün ve 5 ml standart gıda ile bir Petri kabındaki 5 ml% 1 agar ve kontrol grubu ile 60 x 15 mm Petri kabındaki gıda yoksun grubu yerleştirin. </li><li> Petri yemekleri ters kapak (Aksi larva yiyecek ararken Sürünerek edebiliyoruz) üstüne bir ağırlık koyun. </li><li> Daha önce kurulan gıda yoksunluğu dönemi boyunca inkübe ve adımları 6.9 6.2 tarif edildiği gibi test ile devam edin. </li><li> Birçok suş test edilecek ise, aç bırakma, uygun bir zaman noktasında her bir suş test edilmesi için sürelerin başlangıç ​​yalpalayarak. </li></ol> 8. Veri Analizi Not: diğer yazılım kullanılabilir olmasına rağmen, bu bölümde, yol-uzunlukları işleme ImageJ 7 veya Fiji 8 kullanılarak veri analizi için bir yöntemi anlatmaktadır. <ol><li> (Kapaklar etanol ile yıkandı ve daha fazla yol uzunluğu kayıt için tekrar edilebilir) beyaz kağıda Petri kabı kapaklarının tüm takip yolu-uzunlukları aktarmak için bir ışık tabloyu kullanın. </li><li> kağıt yaprak birinde 50 mm düz referans çizgisi çiziniz. </li><li> 300 dpi çözünürlükte yol-uzunlukları tarayın ve bitmap veya TIFF görüntü dosyaları olarak kaydedin. </li><li> &quot;Süreç&quot; sekmesine&gt; &quot;Binary&quot;&gt; &quot;ikili olun&quot; seçeneğini görüntü dosyasını açın. Sonra &quot;Süreç&quot; sekmesi altında,&gt; &quot;iskeletini&quot; &quot;İkili&quot; seçeneğini seçin. Bu ne olursa olsun iz kalınlığı, bir piksel genişliği hattını oluşturur. </li><li> Her yol uzunluğu hiçbir geçitler ile sürekli tek bir satır olarak göründüğünden emin olun. </li><li> &quot;Düz li kullanarak herhangi kavşakları ayırınne aracı Wand &quot;(izleme) aracı&quot; ve çizgi beyaz (yolun devamlılığını boyama ile kontrol edilebilir &quot;, tüm yolu sarı vurgulanmış olmalıdır (Şek. 2). </li><li> &quot;Analiz&quot; sekmesi&gt; Set ölçümleri seçin ve &quot;Çevre&quot; ve &quot;Ekran etiketi&quot; seçeneğini seçin. </li><li> &quot;Analiz&quot; sekmesi&gt; &quot;Set ölçeği&quot; seçin ve &quot;ölçek Kaldır&quot; seçeneğini seçin. </li><li> resmin üzerine,&gt; &quot;Analiz parçacıkları&quot; &quot;Analiz&quot; sekmesini seçin, sadece referans satırı seçin ve &quot;Göster: Anahatları&quot;, &quot;sonuçlarını görüntüle&quot; ve &quot;Temizle sonuç tablosu&quot;. Not: Çıktı 50 mm çaplı hattına gelen piksel sayısını gösterir. </li><li> &quot;Analiz&quot; sekmesi&gt; &quot;Set ölçeği&quot; seçin ve &quot;piksel uzaklığı&quot; piksel sayısı ve &quot;Bilinen mesafe&quot; karşılık gelen mesafe (50 mm) doldurun. </li><li> Son olarak, bir genotip a tüm yol uzunluğu çizimleri seçinta zaman, &quot;Analiz&quot; sekmesi&gt; &quot;Analiz parçacıkları&quot; seçeneğini seçin &quot;Göster: hatlarını&quot;, &quot;sonuçlarını görüntüle&quot; ve &quot;Temizle sonuç tablosu&quot;. <ol><li> alanı seçerek ve beyaz doldurularak seçilen alanın içinde herhangi bir yazılı etiketleri veya bariz yabancı işaretleri (onlar yol-uzunlukları olarak kabul edilecektir) çıkarın. </li></ol></li><li> Görme perimeters doğru tespit emin olmak için &quot;Ana Hatları&quot; çıktı dosyası kontrol edin. çıkışı seçimi her yol uzunluğu çizim için mm cinsinden bir yol-uzunluğunu gösterecektir. Bu kolay bir elektronik tablo ihraç ve herhangi bir istatistik yazılımı ile analiz edilebilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Dubnau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Behavioral Genetics of the Fly (Drosophila melanogaster). , 173 (2014).</li><li>Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foraging+strategies+of+Drosophila+melanogaster:+a+chromosomal+analysis.">Foraging strategies of Drosophila melanogaster: a chromosomal analysis.</a> Behav Genet. 10, 291-302 (1980).</li><li>de Belle, J. S., Hilliker, A. J., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+localization+of+foraging+(for):+A+major+gene+for+larval+behavior+in+Drosophila+melanogaster.">Genetic localization of foraging (for): A major gene for larval behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 123, 157-164 (1989).</li><li>Osborne, K. A., Robichon, A., Burgess, E., Butland, S., Shaw, R. A., Coulthard, A., Pereira, H. S., Greenspan, R. J., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+behavior+polymorphism+due+to+a+cGMP-dependent+protein+kinase+of+Drosophila.">Natural behavior polymorphism due to a cGMP-dependent protein kinase of Drosophila.</a> Science. 277, 834-836 (1997).</li><li>Kalderon, D., Rubin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cGMP-dependent+protein+kinase+genes+in+Drosophila.">cGMP-dependent protein kinase genes in Drosophila.</a> J Biol Chem. 264 (18), 10739-10748 (1989).</li><li>Reaume, C. J., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cGMP-dependent+protein+kinase+as+a+modifier+of+behavior.">cGMP-dependent protein kinase as a modifier of behavior.</a> Handb Exp Pharmacol. 191, 423-443 (2009).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9, 671-675 (2012).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Pereira, H. S., MacDonald, D. E., Hilliker, A. J., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaser+(Csr),+a+new+gene+affecting+larval+foraging+behavior+in+Drosophila+melanogaster.">Chaser (Csr), a new gene affecting larval foraging behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 140, 263-270 (1995).</li><li>Shaver, S. A., Riedl, C. A. L., Parkes, T. L., Sokolowski, M. B., Hilliker, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+larval+behavioral+mutants+in+Drosophila+melanogaster.">Isolation of larval behavioral mutants in Drosophila melanogaster.</a> J Neurogenet. 14, 193-205 (2000).</li><li>Graf, S. A., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rover/sitter+Drosophila+foraging+polymorphism+as+a+function+of+larval+development,+food+patch+quality+and+starvation.">The rover/sitter Drosophila foraging polymorphism as a function of larval development, food patch quality and starvation.</a> J Insect Behav. 2, 301-313 (1989).</li><li>Gonzalez-Candelas, F., Mensua, J. L., Moya, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+competition+in+Drosophila+melanogaster:+effects+on+development+time.">Larval competition in Drosophila melanogaster: effects on development time.</a> Genetics. 82, 33-44 (1990).</li><li>Durisko, Z., Kemp, R., Mubasher, R., Dukas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+social+behavior+in+fruit+fly+larvae.">Dynamics of social behavior in fruit fly larvae.</a> PLoS One. 9 (4), e95495 (2014).</li><li>Sawin, E. P., Harris, L. R., Campos, A. R., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+transformation+from+light+reception+to+phototactic+behavior+in+Drosophila+larvae+(Diptera:+Drosophilidae).">Sensorimotor transformation from light reception to phototactic behavior in Drosophila larvae (Diptera: Drosophilidae).</a> J Insect Behav. 7, 553-567 (1994).</li><li>de Belle, J. S., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heredity+of+rover/sitter:+alternative+foraging+strategies+of+Drosophila+melanogaster.">Heredity of rover/sitter: alternative foraging strategies of Drosophila melanogaster.</a> Heredity. 59, 73-83 (1987).</li><li>de Belle, J. S., Sokolowski, M. B., Hilliker, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+the+foraging+microregion+of+Drosophila+melanogaster.">Genetic analysis of the foraging microregion of Drosophila melanogaster.</a> Genome. 36, 94-101 (1993).</li><li>Sokolowski, M. B., Pereira, H. S., Hughes, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+foraging+behavior+in+Drosophila+by+density+dependent+selection.">Evolution of foraging behavior in Drosophila by density dependent selection.</a> PNAS. 94, 7373-7377 (1997).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Burada özetlenen yol uzunluğu tahlil Drosophila larvaların toplayıcı davranış sağlam ve basit bir ölçü sunmaktadır. Protokol Sokolowski 2&#39;de tarif edilen genel metodolojiyi takip eder, ancak bu yana verimlilik ve deneysel kontrol açısından iyileştirilmiştir. Bizim bilgimize göre bu yöntem larva yol-uzunluk ölçüm için mevcuttur yöntemdir. Yol uzunluğu protokol 2, 3, 15, bir fırça ile uygulanır maya hamur ince bir tabaka, ve çubuk yayılan, daha sonra bir bar...

1910 yılında Thomas Hunt Morgan laboratuvarında beyaz genin bulunmasından bu yana, meyve sineği, Drosophila melanogaster (D. melanogaster), çeşitli biyolojik süreçlerin moleküler ve fizyolojik temellerinin çalışma için bir model olarak kullanılmıştır. D. popülerlik melanogaster büyük ölçüde genetik araçları önemli miktarı ve çeşitliliği kaynaklanmaktadır. Drosophila en küçük boyutlu, taşıma ve kısa nesil süresi göreli kolaylığı o genetik çalışmalar için ideal bir model oluşturmak. Aynı derecede önemli olan memeliler dahil olmak üzere daha karmaşık organizmalar tarafından ifade fenotipleri birçok göstermek için Drosophila kapasitesidir. Bu organizma ve çevresi arasındaki arayüzde durmak böyle bir davranışa gibi karmaşık fenotipleri içerir. meyve sineği böyle, davranışsal çalışmalar genler ve çevre davranışı aracılık nasıl anlayışımıza önemli ölçüde katkıda bulunmuştur olarak1. D. ilk çalışmalardan biri melanogaster larva davranış beslerken larva 2 yolu-uzunluklarını ölçerek larva toplayıcı stratejileri bireysel farklılıkları araştırıldı. Yol uzunluğu beş dakikalık bir süre içinde, maya tek bir larva tarafından katedilen toplam mesafe olarak tanımlanmıştır. Toronto&#39;da bir doğal nüfus hem laboratuar suşları ve sinekler kendi toplayıcı davranışlarında farklılık ve yol uzunluğu bireysel farklılıklara genetik bir bileşeni oldu. İki larva toplayıcı morphs nicel yol uzunluğu dağıtımlarından tarif edildi ve onlar gezici ve bakıcısı çağrıldı. daha büyük bir alanı geçme sırasında Rovers ise oturabilenler daha gıda alt tabaka üzerinde uzun yol-uzunlukları sergilerler. Bu yol uzunluğu deneyi kullanılarak, de Belle ve ark., 3 chromosome- 2 (24A3-24C5) bir ayrık konuma bu bireysel davranış farklılıkları altında yatan toplayıcılık (için) genini eşleştirilmiş. D. mgen için elanogaster sonra 4 klonlanabilir ve bir cGMP bağımlı protein kinaz 5, fizyoloji ve davranış Drosophila ve diğer organizmaların 6 bir modülatörü olduğu ortaya çıkmıştır. Burada aslında Sokolowski 2 geliştirilen larva yol uzunluğu tahlil için geçerli protokol özetlemektedir. testinin bazı yönleri yıllar içinde değişti olmasına rağmen, tasarımın arkasındaki kavram değildir vardır. Biz de Drosophila larva toplayıcı davranış bireysel farklılıklara genetik ve çevresel katkılarını değerlendirmek deney potansiyelini göstermek için veri sağlar. larva yol uzunluğu tahlil, basit, verimli ve henüz sağlam. Tek bir kişi, dört saat içinde kolaylıkla 500 larva kadar test ve sonuçlar tekrarlanabilirlik yüksek düzeyde elde edilebilir. Başlangıçta çalışmalarda genetik ekranlar, niceliksel özellik lokusu haritalama kullanılan ve edilebilir için lokalize için geliştirilmişgen-by-çevre (GXE) etkileşimleri. Dahası, onun basitliği ve uyarlık o lisans öğretimi için büyük bir kaynaktır olun.

<table><tbody><tr><td>6 oz&amp;nbsp;fly culture bottles&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>AS355&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Fly vial plugs</td><td>Droso-Plugs</td><td>59-201</td><td></td></tr><tr><td>35 x 10 mm Petri dishes&amp;nbsp;</td><td>Falcon</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>100 x 15 mm Petri dishes&amp;nbsp;</td><td>Fisher</td><td>875712</td><td></td></tr><tr><td>60 x 15 mm Petri dishes</td><td>VWR</td><td>25384-168&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting probes</td><td>Almedic</td><td>2325-58-5300&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Yeast</td><td>Lab Scientific</td><td>FLY-8040-20F</td><td></td></tr></tbody></table>

foraging path-length protocol for drosophila melanogaster larvae

Drosophila melanogaster larva yol uzunluğu fenotip davranışsal değişim genetik ve çevresel katkılarını incelemek için kullanılan bir tesis ölçüsüdür. Larva yol uzunluğu tahlil sonra toplayıcı genin bağlantılı olduğunu toplayıcı davranış bireysel farklılıkları ölçmek için geliştirilmiştir. Larva yol uzunluğu genetik ekranlar için, en az maliyetle, büyük örneklem boyutlarının toplama kolaylaştıran bir kolay gol özelliktir. Burada ilk Sokolowski tarafından kullanılan larva yol uzunluğu tahlil için geçerli protokol ayrıntılı bir açıklamasını sağlar. protokol tekrarlanabilir test hayvanları ele davranışsal tahlil gerçekleştirmek ve verileri analiz nasıl ayrıntıları. Deney ortamı besleme manipüle önce tahlil gerçekleştirerek çevresel değişikliğe yanıt olarak davranış plastisite ölçmek için nasıl kullanılabileceğini bir örneği, aynı zamanda temin edilmektedir. Son olarak, uygun test tasarımı yanı sıra çevresel faktörlerin değiştirebileceğinizBöyle gıda kalitesi, gelişimsel yaş ve gündüz etkileri gibi larva yol uzunluğu tartışılmıştır.

<html> Gezici ve bakıcısı suşlar için ve yol uzunluğu gıda yoksunluk etkisi yolu uzunluğu farklılıklar Şekil l&#39;de gösterilmiştir. . Rovers uzak oturabilenler daha yolculuk ile; (Şekil 3A. F (1,421) = 351,89, p &lt;2.20 x 10 -16) 3 Veri test üç ardışık gün boyunca toplanan önemli bir gerilme etkisi gösterdi. Gıda, dört saat önce test için yoksun bırakıldı larvaları ile, suş ...

Watch this Scientific Journal Video about Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae at JoVE.com

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

foraging-path-length-protocol-for-drosophila-melanogaster-larvae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

9.2K Görüntüleme.  University of Toronto. We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

Video: Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

High-resolution Measurement of Odor-Driven Behavior in Drosophila Larvae

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral paradigm, the experimenter usually assumes that the rapid diffusion of odorant molecules from the source leads to the creation of a stable gradient in the dish. To establish a quantitative correlation between sensory inputs and behavioral responses, it is necessary to achieve a more thorough characterization of the odorant stimulus conditions. In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

Yüksek çözünürlüklü Ölçüm Drosophila Larva Koku-Driven Davranış

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral ...

Biyoloji

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

In the following we describe the methodological details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with genetic interference, provides a handle to analyze the neuronal and molecular fundamentals of specifically associative learning in a simple larval brain.
Organisms can use past experience to adjust present behavior. Such acquisition of behavioral potential can be defined as learning, and the physical bases of these potentials as memory traces1-4. Neuroscientists try to understand how these processes are organized in terms of molecular and neuronal changes in the brain by using a variety of methods in model organisms ranging from insects to vertebrates5,6. For such endeavors it is helpful to use model systems that are simple and experimentally accessible. The Drosophila larva has turned out to satisfy these demands based on the availability of robust behavioral assays, the existence of a variety of transgenic techniques and the elementary organization of the nervous system comprising only about 10,000 neurons (albeit with some concessions: cognitive limitations, few behavioral options, and richness of experience questionable)7-10.
Drosophila larvae can form associations between odors and appetitive gustatory reinforcement like sugar11-14. In a standard assay, established in the lab of B. Gerber, animals receive a two-odor reciprocal training: A first group of larvae is exposed to an odor A together with a gustatory reinforcer (sugar reward) and is subsequently exposed to an odor B without reinforcement 9. Meanwhile a second group of larvae receives reciprocal training while experiencing odor A without reinforcement and subsequently being exposed to odor B with reinforcement (sugar reward). In the following both groups are tested for their preference between the two odors. Relatively higher preferences for the rewarded odor reflect associative learning - presented as a performance index (PI). The conclusion regarding the associative nature of the performance index is compelling, because apart from the contingency between odors and tastants, other parameters, such as odor and reward exposure, passage of time and handling do not differ between the two groups9.

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Drosophila larvae are able to associate odor stimuli with gustatory reward. Here we describe a simple behavioral paradigm that allows the analysis of appetitive associative olfactory learning.

In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Nörobilim

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

The serotonergic feeding circuit in Drosophila melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of critical importance during the development of the circuit. Using the functional output of the circuit, feeding, changes in the neuronal architecture of the stomatogastric system can be visualized. Feeding behavior can be recorded by observing the rate of retraction of the mouth hooks, which receive innervation from the brain. Locomotor behavior is used as a physiological control for feeding, since larvae use their mouth hooks to traverse across an agar substrate. Changes in feeding behavior can be correlated with the axonal architecture of the neurites innervating the gut. Using immunohistochemistry it is possible to visualize and quantitate these changes. Improper handling of the larvae during behavior paradigms can alter data as they are very sensitive to manipulations. Proper imaging of the neurite architecture innervating the gut is critical for precise quantitation of number and size of varicosities as well as the extent of branch nodes. Analysis of most circuits allow only for visualization of neurite architecture or behavioral effects; however, this model allows one to correlate the functional output of the circuit with the impairments in neuronal architecture.

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

The feeding circuit in Drosophila melanogaster larvae serves a simple yet powerful model that allows changes in feeding rate to be correlated with alterations in the stomatogastric neural circuitry. This circuit is composed of central serotonergic neurons that send projections to the mouth hooks as well as the foregut.

Içinde larvaların Devre Fonksiyonel Analiz Drosophila</i

The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

An Affordable and Efficient "Homemade" Platform for Drosophila Behavioral Studies, and an Accompanying Protocol for Larval Mitochondrial Respirometry

The usefulness of Drosophila as a model organism for the study of human diseases, behaviors and basic biology is unquestionable. Although practical, Drosophila research lacks popularity in developing countries, possibly due to the misinformed idea that establishing a lab and performing relevant experiments with such tiny insects is difficult and requires expensive, specialized apparatuses. Here, we describe how to build an affordable flylab to quantitatively analyze a myriad of behavioral parameters in D. melanogaster, by 3D-printing many of the necessary pieces of equipment. We provide protocols to build in-house vial racks, courtship arenas, apparatuses for locomotor assays, etc., to be used for general fly maintenance and to perform behavioral experiments using adult flies and larvae. We also provide protocols on how to use more sophisticated systems, such as a high resolution oxygraph, to measure mitochondrial oxygen consumption in larval samples, and show its association with behavioral changes in the larvae upon the xenotopic expression of the mitochondrial alternative oxidase (AOX). AOX increases larval activity and mitochondrial leak respiration, and accelerates development at low temperatures, which is consistent with a thermogenic role for the enzyme. We hope these protocols will inspire researchers, especially from developing countries, to use Drosophila to easily combine behavior and mitochondrial metabolism data, which may lead to information on genes and/or environmental conditions that may also regulate human physiology and disease states.

An Affordable and Efficient "Homemade" Platform for Drosophila Behavioral Studies, and an Accompanying Protocol for Larval Mitochondrial Respirometry

We provide protocols for anyone with a "maker culture" mind to start building a flylab for quantitative analysis of a myriad of behavioral parameters in Drosophila melanogaster, by 3D-printing many of the necessary pieces of equipment. We also describe a high resolution respirometry protocol using larvae to combine behavioral and mitochondrial metabolism data.

The usefulness of Drosophila as a model organism for the study of human diseases, behaviors and basic biology is unquestionable. Although practical, ...

Davranış

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat open surfaces is complex,&#160;including: pausing, turning, and meandering. This complexity in the repertoire of movement hinders detailed analysis of the events occurring during a single crawl stride cycle. To overcome this obstacle, linear agarose channels were made that constrain larval behavior to straight, sustained, rhythmic crawling. In principle, because agarose channels and the Drosophila larval body are both optically clear, the movement of larval structures labeled by genetically-encoded fluorescent probes can be monitored in intact, freely-moving larvae. In the past, larvae were placed in linear channels and crawling at the level of whole organism, segment, and muscle were analyzed1. In the future, larvae crawling in channels can be used for calcium imaging to monitor neuronal activity. Moreover, these methods can be used with larvae of any genotype and with any researcher-designed channel. Thus the protocol presented below is widely applicable for studies using the Drosophila larva as a model to understand motor control.

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

The Drosophila larva is a powerful model system to study neural control of behavior. This publication describes the use of linear agarose channels to elicit sustained bouts of linear crawling and methods to quantify the dynamics of larval structures during repetitive crawling behavior.

Doğrusal Agaroz Kanallar kullanarak Okuyacak<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva Tarama Davranış

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a considerable amount of information has been generated regarding ORN responses to odorants, the role of specific ORNs in driving behavioral responses remains poorly understood. Complications in behavior analyses arise due to different volatilities of odorants that activate individual ORNs, multiple ORNs activated by single odorants, and the difficulty in replicating naturally observed temporal variations in olfactory stimuli using conventional odor-delivery methods in the laboratory. Here, we describe a protocol that analyzes Drosophila larval behavior in response to simultaneous optogenetic stimulation of its ORNs. The optogenetic technology used here allows for specificity of ORN activation and precise control of temporal patterns of ORN activation. Corresponding larval movement is tracked, digitally recorded, and analyzed using custom written software. By replacing odor stimuli with light stimuli, this method allows for a more precise control of individual ORN activation in order to study its impact on larval behavior. Our method could be further extended to study the impact of second-order projection neurons (PNs) as well as local neurons (LNs) on larval behavior. This method will thus enable a comprehensive dissection of olfactory circuit function and complement studies on how olfactory neuron activities translate in to behavior responses.

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

This protocol analyzes navigational behavior of Drosophila larva in response to simultaneous optogenetic stimulation of its olfactory neurons. Light of 630 nm wavelength is used to activate individual olfactory neurons expressing a red-shifted channel rhodopsin. Larval movement is simultaneously tracked, digitally recorded, and analyzed using custom-written software.

Yanıt koku nöronlar Optogenetic uyarılması olarak Drosophila larva davranışını izlemek

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model to study animal avoidance behavior. This protocol introduces a light-spot assay to investigate larval phototactic behavior. The experimental set-up includes two main parts: a visual stimulation system that generates the light spot, and an infrared light-based imaging system that records the process of larval light avoidance. This assay allows tracking of the behavior of larva before entering, during encountering, and after leaving the light spot. Details of larval movement including deceleration, pause, head casting, and turning can be captured and analyzed using this method.

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

This protocol introduces a light-spot assay to investigate Drosophila larval phototactic behavior. In this assay, a light spot is generated as light stimulation, and the process of larval light avoidance is recorded by an infrared light-based imaging system.

Drosophila Larva Fototaksisanalizi için Hafif Nokta Tabanlı Tahlil

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

Lifespan Protocol for Drosophila melanogaster: Generating Survival Curves to Identify Differences in Fly Longevity

Source: Bovier, T. F., et al. <a href="https://www.jove.com/video/59535/" target="_blank">Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster</a>. J. Vis. Exp. (2019).
Scientists use the Drosophila lifespan protocol to measure how different experimental conditions affect flies&#39; longevity and generate survival curves in the process to quantify the experimental outcomes. The sample protocol features the assay being applied to study the effects on longevity from exposure to varying concentrations of endocrine disruptor chemicals, or EDCs, such as 17-&#945;-ethinylestradiol (EE2).

Drosophila melanogaster için Yaşam Süresi Protokolü: Sinek Uzun Ömürlülüğündeki Farklılıkları Belirlemek için Hayatta Kalma Eğrileri Oluşturma

Source: Bovier, T. F., et al. Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).
Scientists use the Drosophila lifespan ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Drosophila melanogaster (meyve sineği)

Yetişkin

Tracking Freely Walking Flies: A Method to Assess Locomotion in Drosophila

Source: Sun, M. and Chen, L. L. <a href="https://www.jove.com/video/55602/" target="_blank">A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila</a>. J. Vis. Exp. (2017).
This video describes how to track freely walking flies to assess their general locomotion ability. The featured protocol demonstrates the assay&#39;s setup and data analysis using video tracking software.

Serbestçe Yürüyen Sineklerin İzini Sürmek: Drosophila'da Hareketi Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Source: Sun, M. and Chen, L. L. A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).
This video describes how to ...

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Yüksek çözünürlüklü Ölçüm Drosophila Larva Koku-Driven Davranış

In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi

Içinde larvaların Devre Fonksiyonel Analiz Drosophila

An Affordable and Efficient "Homemade" Platform for Drosophila Behavioral Studies, and an Accompanying Protocol for Larval Mitochondrial Respirometry

Doğrusal Agaroz Kanallar kullanarak Okuyacak

Yanıt koku nöronlar Optogenetic uyarılması olarak Drosophila larva davranışını izlemek

Drosophila Larva Fototaksisanalizi için Hafif Nokta Tabanlı Tahlil

Drosophila melanogaster için Yaşam Süresi Protokolü: Sinek Uzun Ömürlülüğündeki Farklılıkları Belirlemek için Hayatta Kalma Eğrileri Oluşturma

Serbestçe Yürüyen Sineklerin İzini Sürmek: Drosophila'da Hareketi Değerlendirmek İçin Bir Yöntem