Name: murine prostate micro-dissection and surgical castration
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration at JoVE.com

Bu yazıda bazı rakamlar cömertçe Bart O. Williams laboratuvar tarafından sağlanmıştır. Yazarlar U54CA143803, CA163124, CA093900 VE CA143055 Ulusal Kanser Enstitüsü tarafından verir desteklenir.

Bu protokol karşılar ve Johns Hopkins Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından belirlenen kurallara uyar. 1. Fare Prostat Mikro diseksiyon <ol><li> Karbondioksit boğulma ya da kurumsal hayvan bakımı ve kullanım yönergelerine uygun bir alternatif onaylı yöntemle fare Euthanize. </li><li> Dört bacak her aracılığıyla bir iğne koyarak bir diseksiyon kurulu bir yatar pozisyonda fare sabitleyin. </li><li> % 70 etanol ile karın püskürtün. </li><li> forseps ile alt karın cildi tutun ve deri yoluyla kesilmiş ve herhangi bir organ kesmek için dikkatli penis açılması, yaklaşık 1 cm anterior periton için makas kullanın. </li><li> periton boşluğuna açığa alt karın, göğüs kafesi karın kadar her iki taraftan deri ve periton kesip. </li><li> mesane ve ürogenital yolu belirlemek ve yavaşça yanına yağ ve diğer organları hareket ettirerek maruz bırakmaktadır. </li><li> using forseps, kavrama üretra yakın üssünde vas deferens ve uzak gözyaşı. </li><li> ters vas deferens ile tekrarlayın. </li><li> Aynı anda mesane ve ventral prostatın (mesane tabanının altında yaklaşık 1 cm) altında üretra yoluyla kesmek için makas kullanırken, dikkatli, mesane kavrama forseps kullanarak ve yukarı doğru çekin. Not: Mesane çekti gibi, tüm ürogenital sistem (içeren mesane, üretra, tüm prostat loblar ve seminal vezikül bir bölümü) onunla gelecektir. Bazı direnç olabilir. </li><li> 5-10 ml fosfat tamponlu tuz (PBS) ihtiva eden bir 60-100 mm Petri kabı içine ürogenital sistem (UGT) koyun. </li><li> Bir diseksiyon mikroskobu altında protokolün kalan kısmını gerçekleştirin. İki ince forseps, her el birini kullanın. &quot;Bir kalem gibi&quot; forseps tutun ve onları sakinleştirmeye şekilde tezgah üstünde Dirseklerinizi bekletin. </li><li> Mesane olduğunu UGT gibi konumlandırmak için ince forseps kullanınüzerine, idrar yolu basılı işaret edilmektedir, ve seminal veziküller mesane her iki tarafında konumlandırılmıştır. </li><li> Kavrama bir forseps ve dikkatle ile üretra herhangi bir prostat dokusunu uzak yırtmadan diğer forseps ile uzak yağ çekin. Not: Yağ çevre dokuya &quot;parlak&quot; göreli görünecektir. </li><li> yağ çıkarıldıktan sonra, prostat iki ventral lobları arasındaki bağ dokusunu gözyaşı ve onları ayırmak için forseps kullanabilir. </li><li> Ventral lobları birini kaldırmak ucuna yakın kavrama tek bir ventral lobu bir forseps kullanabilir ve kavrama diğer forseps kullanmak için mümkün olduğunca üretraya yakın üssünde lob. hala lobun tabanını sıkarken, kavrama diğer forseps üretra kullanın. Bir firma, düzgün hareket ile uzak üretradan lob çekin. olmamasına dikkat prostat dokusu üretra bağlı kalır emin olun. Bir sonraki deneysel aşamada bağlı olarak uygun ortama lob yerleştirin. <ol><li> düzeltmek ve s parafin gömmek içinbol histolojik analiz için% 10 nötr tamponlu formalin (NBF) 8 lob yerleştirin. </li><li> Dondurulması için, OKT gibi orta, dondurma ve 8 kesit içinde lob yerleştirin. </li><li> Kültür için tek bir hücre izolasyonu için soğuk PBS lob yerleştirin veya 9 akım sitometri. </li></ol></li><li> diğer ventral lobu ile adımı yineleyin 1.15. </li><li> Emin seminal vezikül delmek değil yapım yavaşça seminal vezikül gelen lob çekmek için forseps kullanabilir, ön lob birini kaldırmak için. lob seminal vezikül bağımsız sonra, adım 1.15 ventral lob aynı şekilde çıkarın. </li><li> diğer ön lob ile adımı yineleyin 1.17. </li><li> dorsal prostat görünür şekilde üzerinde kalan ürogenital yolu çevirin. </li><li> İki dorsolateral lob ve ayrıca loblar ve t arasındaki bağ dokusu arasındaki bağ dokusu gözyaşı forseps kullanabilir, dorsolateral lob birini kaldırmak içinO seminal vezikül posterior bölgeye. Adım 1.15 ventral lob olarak benzer bir şekilde lob çıkarın. </li><li> diğer dorsolateral lob ile adımı yineleyin 1.20. </li></ol> 2. Cerrahi Hadımlaştırma Not: Bu bir hayatta kalma ameliyat, bu nedenle asepsi, anestezi ve ağrı yönetimi, bu protokolün etik ve başarılı bir şekilde tamamlanması için önemlidir. tüm kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı yönergeleri izleyin. hipotermi önlemek için cerrahi işlem sırasında, böyle bir çevrimli su battaniye gibi harici ısı kaynağı kullanın. sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayın. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyin. cerrahide Kullanmadan önce tüm cerrahi aletler otoklav. <ol><li> Temiz, steril bir yüzey üzerinde uygun önlemleri (örneğin% 2 inhale izofluran) kullanarak fare uyutmak ve m konumlandırmakBir yatar pozisyonda ouse. Not: ketamin gibi alternatif anestezi yöntemleri, de kullanılabilir, onaylanmış hayvan protokolüne göre. </li><li> ayak kısma farenin refleksleri kontrol edin. Fare tepki vermezse, bir sonraki adıma geçin. o tepki vermezse, 1-3 dakika bekleyin ve tekrar kontrol edin. Bir elektrikli tıraş makinesi ile cerrahi alan tıraş. </li><li> Aseptik kurumsal veteriner personel veya IACUC tarafından önerilen% 70 etanol ve iyot veya prosedürlerin alternatif scrubs kullanarak fare karın hazırlar. </li><li> Steril bir neşter kullanılarak, penise, alt karın orta hattında yaklaşık 1.5 cm ön deri yoluyla 1 cm dikey bir kesi yapmak. </li><li> Dikkatli herhangi organları kesmek için değil, periton içinden küçük bir kesi (&lt;1 cm) olun. </li><li> Steril forseps, kavrama periton kesim kenarı kullanılarak ve altındaki periton boşluğuna görmek mümkün olacak şekilde yavaşça yukarı kaldırın. </li><li> başka bir steril forseps kullanarak, th içine ulaşmake mesaneye yanal periton boşluğu ve kavrama ya sol ya da sağ testis yağ yastığı. Testis yanı çıkana kadar periton ve deride açıklıktan yağ yastığı çekin. Bu adımı sırasında başka doku veya organ zarar vermemek için dikkatli olun. </li><li> Bir koter kalemini kullanarak, testis tutan yağ yastığı kesti. koter kalem Not testis arter yoluyla yavaş yavaş Cut: testiküler arter çok hızlı kesilirse, orada çok fazla kanama olabilir ve fare ötenazi gerekebilir. </li><li> yağ yastığı ve arter kesilir sonra, testis ve yağ yastığı çıkarın. </li><li> Dier testisli 2,6-2,9 adımları. Not: Testis kaldırılması için alternatif bir yöntem, cerrahi makas ile kap kesme ardından testis arter bağlanması için olan. </li><li> Periton emilebilir sütür ile kapatılır dikin. </li><li> Zımba cilt cerrahi yara klipleriyle kapatılmıştır. </li><li> ağrı yönetmek için bir ağrı kesici yönetme ve yer5-10 dakika sıcak bir kafes temiz bir kafeste fare. ağrı veya kanama belirtileri için fare izleyin. </li></ol>

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li><li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia.">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li><li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+prostate+cancer.">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238 (2011).</li><li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice:+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee.">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li><li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models.">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li><li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. S., Labrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+features+of+the+basal+cells+of+human+prostate+epithelium.">Unique features of the basal cells of human prostate epithelium.</a> Microsc Res Tech. 51 (5), 436-446 (2000).</li><li>Prins, G. S., Huang, L., Birch, L., Pu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+estrogens+in+normal+and+abnormal+development+of+the+prostate+gland.">The role of estrogens in normal and abnormal development of the prostate gland.</a> Ann N Y Acad Sci. 1089, 1-13 (2006).</li><li>Valkenburg, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Wnt/beta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia.">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li><li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells.">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li><li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men--warning:+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males,+respectively.">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer.">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li><li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy.">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li><li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+prostate+cancer:+new+prospects+for+old+challenges.">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Prostat mikro diseksiyon lob özel deney ve fare prostat analizi (Şekil 1) sağlar. genetiği değiştirilmiş fare modellerinde, fenotipleri diğerlerinde görülmez bir lobun görülebilir. Ayrıca, histolojik analiz için, bu protokol, saf prostat dokusunun maksimum miktarı bölümünde mevcut olan diğer ürogenital sistem doku olmadan kesitli ve lekeli edilebilir olmasını sağlar. Son olarak, tek hücreli deneyler için, bu protokol hemen hemen saf prostat hücrelerinin izolasyonu sağlar. Epit...

Prostat ABD&#39;de erkeklerde en sık görülen kanser sitedir. Her yıl prostat kanseri tanısı olacak yaklaşık 220.000 erkek ve yaklaşık 27.000 erkeklerin hastalığa 1 yenik düşer. Erkekler ABD 1 bir prostat kanseri tanısı 1 7 ömür boyu riski vardır. İyi huylu prostat hiperplazisi (BPH), prostat yaşla ilgili bir noncancerous genişleme, 80 2 üzerindeki erkeklerin% 80 üzerinde etkileyen, aynı zamanda yaygın bir durumdur. Bu nedenle, prostat önemli araştırmaların odak noktasıdır. Fare model prostat 3 hastalıklar çalışma yaygın olarak kullanılmaktadır. Genel olarak, fare prostat insan bezinin 4 mükemmel bir temsilcisidir, fakat benzerlikler ve fare ve insan prostat anatomisi ve fizyolojisi 5 arasında farklar vardır. Her iki türde de, prostat üretra çevresindeki, mesane tabanında yer almaktadır. insan prostat bezi, tek bir lomerkezi, geçiş, periferik ve ön fibromusküler stroma: dört bölgeye ayrılmıştır olmak. anterior, ventral ve dorsolateral: aksine, fare prostat üretra etrafında farklı pozisyonlarda üç eşli lob oluşmaktadır. Hücresel seviyede, temel fark insan lümen hücre oranı bazal hücreli 1 olmasıdır: 1, fakat 1: Farelerde 6 4. fare stroma da insanlara göre farelerde farklı - kas tabakası fare prostat daha incedir iken insanlar, daha kapsamlı düz kas vardır. Fare prostat uygun bir şekilde tanımlanması, diseksiyon ve taşıma fare prostat araştırma için gereklidir. Hormon düzeyleri ölçüde hem insanlarda hem farelerde prostat bezinin gelişim ve homeostazis etkiler. Östrojen prostat gelişiminde 7&#39;de bir rol oynadığı gibi görünüyor olsa da, prostat en önemli hormonu testosteron olduğunu. Testosteron glandüler gelişimin için gereklidird bakım. ya fiziksel ya da kimyasal hadım etme sonra, yaklaşık 90 yetişkin prostat apoptoz luminal hücrelerin% ve bez küçülür. Testosteron hadım etme koşulları altında bir bireye yeniden ortaya çıkar, prostat tam kapasite kendini yeniden edebilmektedir. Testosteron ayrıca androjen baskılayıcı tedavi yaygın olarak kullanılan tedavi stratejisi neden olan prostat kanseri, sürücü görünüyor. Ancak, birçok prostat kanseri androjen yoksunluğu dayanıklı hale gelir. Buna ek olarak, prostat kanserinin tedavisi için androjen blokaj tedavisi gören hastalarda hadım edildi ve yeniden koşulları çevrimi geçirmektedir. Fare, cerrahi kastrasyon, testosteron yeniden devreye sokarak prostatın hormonal rejenerasyon ile birlikte, kastrasyon direnci ve prostat üzerinde testosteron bisiklet etkilerini incelemek amacıyla hangi ile önemli bir araçtır. Bu yazıda tartışmak ve locat tarafından uygun teknikleri gösterecektirE ve mikro-tahlil fare prostat, hem de fare hadım cerrahi olarak.

<table><tbody><tr><td>Surgical tools</td><td>Roboz</td><td>Various</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Sigma</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>OCT medium</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Johns Hopkins</td><td></td><td>Also available from vendors online</td></tr><tr><td>Cautery Pen</td><td>Medline</td><td>ESCT002</td><td></td></tr><tr><td>Silk suture</td><td>AD Surgical</td><td>M-S330R19</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Wound Clips</td><td>Roboz</td><td>RS-9265</td><td></td></tr></tbody></table>

murine prostate micro-dissection and surgical castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

Altı prostat lobları prostat mikro diseksiyon yoluyla bir fare (Şekil 1) çıkarıldı. Tam ürogenital sistem (UGT) tüm prostat loblar, mesane, seminal veziküller ve üretra (Şekil 1a) oluşmaktadır. Vaz deferens üretra verdiği, ancak prostat mikro diseksiyon için gereksizdir ve böylece idrar yolu (Şekil 1b-1c) keserek UGT sökülmeden önce ayrılabilir. Ürogenital sistem birlikte kalacağız kez karın (Şekil 1d)...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration at JoVE.com

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Bu el yazması laboratuvar fare prostat mikro diseksiyon ve cerrahi kastrasyon için protokolleri açıklar. Biz de bu protokoller tarafından üretilen temsilcisi sonuçları tasvir. Son olarak, biz avantaj ve bu protokollerin kullanımını tartışmak.

Mürin Prostat Mikro-diseksiyon ve Cerrahi Kastrasyon

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

murine-prostate-micro-dissection-and-surgical-castration

Research

JoVE Journal

Medicine

45.3K Görüntüleme.  Johns Hopkins University.  Bu el yazması laboratuvar fare prostat mikro diseksiyon ve cerrahi kastrasyon için protokolleri açıklar. Biz de bu protokoller tarafından üretilen temsilcisi sonuçları tasvir. Son olarak, biz avantaj ve bu protokollerin kullanımını tartışmak. 

Video: Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models. Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents. Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of mice. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration. Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

The goal of this protocol is to demonstrate the intra-prostatic injection of prostate cancer cells, with subsequent castration. Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease in the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Kanser Araştırmaları

Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) for prostate cancer are hampered by tumor heterogeneity and its complex microevolution dynamics. Traditional prostate cancer mouse models include, amongst others, germline and conditional knockouts, transgenic expression of oncogenes, and xenograft models. Generation of de novo mutations in these models is complex, time-consuming, and costly. In addition, most of traditional models target the majority of the prostate epithelium, whereas human prostate cancer is well known to evolve as an isolated event in only a small subset of cells. Valuable models need to simulate not only prostate cancer initiation, but also progression to advanced disease.
Here we describe a method to target a few cells in the prostate epithelium by transducing cells by viral particles. The delivery of an engineered virus to the murine prostate allows alteration of gene expression in the prostate epithelia. Virus type and quantity will hereby define the number of targeted cells for gene alteration by transducing a few cells for cancer initiation and many cells for gene therapy. Through surgery-based injection in the anterior lobe, distal from the urinary track, the tumor in this model can expand without impairing the urinary function of the animal. Furthermore, by targeting only a subset of prostate epithelial cells the technique enables clonal expansion of the tumor, and therefore mimics human tumor initiation, progression, as well as invasion through the basal membrane.
This novel technique provides a powerful prostate cancer model with improved physiological relevance. Animal suffering is limited, and since no additional breeding is required, overall animal count is reduced. At the same time, analysis of new candidate genes and pathways is accelerated, which in turn is more cost efficient.

This protocol describes a newly established method for virus delivery to the murine prostate. Using either CRISPR/Cas9 technology, gene overexpression, or Cre recombinase delivery, the technique allows orthotopic alteration of gene expression and implements a novel mouse model for prostate cancer.

Virüs gen değiştirme için fare prostat CRISPR kılavuzları teslimini

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) ...

Identification, Histological Characterization, and Dissection of Mouse Prostate Lobes for In Vitro 3D Spheroid Culture Models

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate cancer (PCa). Understanding the anatomy and histology of the mouse prostate is important for the efficient use and proper characterization of such animal models. The mouse prostate has four distinct pairs of lobes, each with their own characteristics. This article demonstrates the proper method of dissection and identification of mouse prostate lobes for disease analysis. Post-dissection, the prostate cells can be further cultured in vitro for mechanistic understanding. Since mouse prostate primary cells tend to lose their normal characteristics when cultured in vitro, we outline here a method for isolating the cells and growing them as 3D spheroid cultures, which is effective for preserving the physiological characteristics of the cells. These 3D cultures can be used for analyzing cell morphology and behavior in near-physiological conditions, investigating altered levels and localizations of key proteins and pathways involved in the development and progression of a disease, and looking at responses to drug treatments.

Genetically engineered mice are useful models for investigating prostate cancer mechanisms. Here we present a protocol to identify and dissect prostate lobes from a mouse urogenital system, differentiate them based on histology, and isolate and culture the primary prostate cells in vitro as spheroids for downstream analyses.

Kimlik, histolojik karakterizasyonu ve için fare Vitro 3D küresel kültür modelleri prostat lob diseksiyonu

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate ...

Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) are a rigorous method for studying mammalian development and disease. Our laboratory has developed several GEMMs of prostate cancer (PCa) that lack expression of one or multiple tumor suppressor genes using the site-specific Cre-loxP recombinase system and a prostate-specific promoter. In this article, we describe our method for necropsy of these PCa GEMMs, primarily focusing on dissection of mouse prostate tumors. New methods developed over the last decade have facilitated the culture of epithelial-derived cells to model organ systems in vitro in three dimensions. We also detail a 3D cell culture method to generate tumor organoids from mouse PCa GEMMs. Pre-clinical cancer research has been dominated by 2D cell culture and cell line-derived or patient-derived xenograft models. These methods lack tumor microenvironment, a limitation of using these techniques in pre-clinical studies. GEMMs are more physiologically-relevant for understanding tumorigenesis and cancer progression. Tumor organoid culture is an in vitro model system that recapitulates tumor architecture and cell lineage characteristics. In addition, 3D cell culture methods allow for growth of normal cells for comparison to tumor cell cultures, rarely possible using 2D cell culture techniques. In combination, use of GEMMs and 3D cell culture in pre-clinical studies has the potential to improve our understanding of cancer biology.&#160;

We show a method for necropsy and dissection of mouse prostate cancer models, focusing on prostate tumor dissection. A step-by-step protocol for generation of mouse prostate tumor organoids is also presented.

Prostat kanseri genetiği Işlenmiş fare modelleri tümör Organoids üretimi

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) ...

Genetik

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Tıp

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only one-fourth of these patients achieving transplantation, there is a dire need for alternatives for those with failing organs. In order to decrease the harmful consequences of dialysis along with the overall healthcare costs it incurs, active investigation is ongoing in search of alternative solutions to organ transplantation. Implantable tissue-engineered renal cellular constructs are one such feasible approach to replacing lost renal functionality. Here, described for the first time, is the microdissection of murine kidneys for isolation of living corticomedullary renal segments. These segments are capable of rapid incorporation within scaffold-free endothelial-fibroblast constructs which may enable rapid connection with host vasculature once implanted. Adult mouse kidneys were procured from living donors, followed by stereoscope microdissection to obtain renal segments 200 - 300 &#181;m in diameter. Multiple renal constructs were fabricated using primary renal segments harvested from only one kidney. This method demonstrates a procedure which could salvage functional renal tissue from organs that would otherwise be discarded.

Tissue-engineered renal constructs provide a solution for the organ shortage and deleterious effects of dialysis. Here, we describe a protocol to micro dissect murine kidneys for isolation of cortico-medullary segments. These segments are implanted into scaffold-free cellular constructs, forming renal organoids.

Mikrodiseksiyon birincil böbrek doku parçaları ve roman iskele-Alerjik yapı teknolojisi ile birleşme

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

Biyomühendislik

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative disease. The manipulation of sex hormone levels in the murine model system allows for the study of their impact on organs/tissues and within disease progression. Orchiectomy - the surgical removal of the testes - and ovariectomy - the surgical removal of the ovaries - provide a method to deplete the endogenous sex hormones so that the precise hormone levels can be provided through drug or other delivery methods. Here, we provide rapid and minimally invasive methods for both orchiectomy and ovariectomy in the murine model system for the reduction of sex hormones. This protocol details the surgical preparation and excision of the testes through the scrotal sac, and excision of the ovaries via two incisions in the right and left lateral dorsum.

This manuscript describes a consistent way to quickly perform survival rodent orchiectomies and ovariectomies.

Seks Hormonu Üretimini Azaltmak için Murin Orşiektomi ve Ovariektomi

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative ...

Modeling Prostate Cancer in Genetically-engineered Mouse Models: A CRISPR/Cas9-mediated Localized Gene Editing Technique in Mouse Anterior Prostate Lobe Cells

Source: Riedel, M. et al. <a href="https://www.jove.com/video/57525" target="_blank">Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration.</a> J. Vis. Exp. (2018)
This video describes a method for editing specific genes in prostate gland cells using an adenovirus-based delivery system. The approach allows for orthotopic and localized alteration of gene expression utilizing CRISPR technology to develop novel mouse models for prostate cancer.

Genetik Olarak Tasarlanmış Fare Modellerinde Prostat Kanserinin Modellenmesi: Fare Ön Prostat Lob Hücrelerinde CRISPR/Cas9 Aracılı Lokalize Gen Düzenleme Tekniği

Source: Riedel, M. et al. Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration. J. Vis. Exp. (2018)
This video describes a method ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Prostat Kanseri

Hayvan modeli çalışmaları

Intra-prostatic Injection of Cancer Cells: A Technique to Deliver Cancer Cells for Establishing Orthotopic Prostate Cancer Mouse Model

Source: Anker, J. F. et al. <a href="https://www.jove.com/video/57301" target="_blank">Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we demonstrate the procedure for administering intra-prostatic injection of prostate cancer cells into a mouse model. Orthotopic murine models can be used to study the disease origin and response to treatment therapies in a non-invasive and clinically relevant environment.

Kanser Hücrelerinin İntraprostat Enjeksiyonu: Ortotopik Prostat Kanseri Fare Modeli Oluşturmak için Kanser Hücreleri Verme Tekniği

Source: Anker, J. F. et al. Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate ...