Einige der Figuren in diesem Manuskript wurden großzügig durch das Labor von Bart O. Williams zur Verfügung gestellt. Die Autoren werden vom National Cancer Institute gewährt U54CA143803, CA163124, CA093900 UND CA143055 unterstützt.

Dieses Protokoll erfüllt und folgt den Richtlinien festgelegt von der Johns Hopkins University Institutional Animal Care und Use Committee. 1. Mikro-Dissektion einer Maus Prostata <ol><li> Euthanize die Maus durch Erstickung mit Kohlendioxid oder einem alternativen genehmigten Verfahren in Einklang mit den institutionellen Tierpflege und Richtlinien zur Verwendung. </li><li> Pin der Maus in Rückenlage auf eine Dissektion Bord durch einen Stift, der durch jede der vier Pfoten setzen. </li><li> Sprühen Sie den Bauch mit 70% Ethanol. </li><li> Halten Sie die Haut des Unterleibs mit einer Pinzette, und mit einer Schere durch die Haut zu schneiden und ca. 1 cm vor der Öffnung des Penis, vorsichtig, nicht zu schneiden alle Organe Bauchfell. </li><li> Schneiden Sie die Haut und Bauchfell von den unteren Bauch weg, bis beide Seiten des Bauches auf den Brustkorb, die Bauchhöhle ausgesetzt wird. </li><li> Identifizieren Sie die Blase und Urogenitaltrakt, und setzen sie durch leichtes Fett und andere Organe zur Seite bewegt. </li><li> Using Pinzette greifen die Samenleiter an der Basis in der Nähe der Harnröhre, und reißen sie weg. </li><li> Wiederholen Sie mit den gegenüberliegenden Samenleiter. </li><li> Mit einer Pinzette vorsichtig in die Blase Griff und nach oben ziehen, während gleichzeitig der Schere unter der Blase und ventralen Prostata (ungefähr 1 cm unterhalb der Basis der Blase) durch die Harnröhre zu schneiden. Hinweis: Da die Blase nach oben gezogen wird, die gesamte Urogenitaltrakts (mit Blase, einen Abschnitt der Harnröhre, alle Prostatalappen und den Samenbläschen) mit ihm kommen. Es kann eine gewisse Resistenz sein. </li><li> Platzieren Sie den Urogenitaltrakt (UGT) in eine 60-100 mm Petrischale, die etwa 5-10 ml phosphatgepufferter Salzlösung (PBS). </li><li> Führen Sie den verbleibenden Teil des Protokolls unter einem Präpariermikroskop. Verwenden Sie zwei feinen Pinzette, eine in jeder Hand. Halten Sie die Zange &quot;wie ein Bleistift&quot; und die Unterarme auf der Tischplatte ruhen, um sie zu beruhigen. </li><li> Verwenden feinen Pinzette die UGT so zu positionieren, dass die Blaseoben, wird die Harnröhre nach unten gerichtet, und die Samenbläschen sind auf beiden Seiten der Harnblase angeordnet. </li><li> Fassen Sie die Harnröhre mit einer Zange und ziehen Sie sie vorsichtig Fett weg mit den anderen Zange, ohne Prostatagewebe Abreißen. Hinweis: Fat &quot;glänzend&quot; in Bezug auf das umgebende Gewebe erscheint. </li><li> Sobald das Fett entfernt worden ist, Pinzette das Bindegewebe zwischen den beiden ventralen Lappen der Prostata und trennen sie zu zerreißen. </li><li> Um einen der Bauchlappen entfernen, verwenden Sie eine Zange zum Greifen eines einzigen Bauchlappen in der Nähe der Spitze, und verwenden Sie die andere Zange zu greifen, daß Lappen an der Basis so nah an der Harnröhre wie möglich. Während noch die Basis des Lappens Greif, verwenden Sie die andere Zange die Harnröhre zu greifen. Ziehen Sie den Lappen weg von der Harnröhre mit einer festen, glatten Bewegung. Achten Sie darauf, kein Prostatagewebe bleibt an der Harnröhre befestigt. Platzieren Sie den Lappen in dem geeigneten Medium, in Abhängigkeit von der nächsten Versuchsstufe. <ol><li> Um dies zu beheben und in Paraffin eingebettet werden, die sausreichend für die histologische Analyse, setzen Sie den Lappen in 10% neutral gepuffertem Formalin (NBF) 8. </li><li> Platzieren Sie den Lappen in Gefriermedium, wie OAT für die Kryokonservierung und sectioning 8. </li><li> Platzieren Sie den Lappen in kaltem PBS für Einzelzellisolierung für Kultur oder Durchflusszytometrie 9. </li></ol></li><li> Wiederholen Sie Schritt 1.15 mit der anderen Bauchlappen. </li><li> Um einen der Vorderlappen zu entfernen, verwenden Pinzette vorsichtig auf die Lappen ziehen weg von der Samenblase, so dass Sie sicher, dass nicht die Samenblase zu durchstechen. Sobald der Lappen unabhängig von der Samenblase, entfernen Sie sie in der gleichen Weise wie die Bauchlappen in Schritt 1.15. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 1.17 mit dem anderen Vorderlappen. </li><li> Klappen Sie den restlichen Urogenitaltrakt über, so dass die Rücken Prostata sichtbar ist. </li><li> Um einen der dorsolateralen Lappen entfernen, Zangen verwenden das Bindegewebe zwischen den beiden dorsolateralen Lappen und auch das Bindegewebe zwischen den Lappen und t zu reißener posterioren Bereich der Samenblasen. Entfernen Sie die Lappen in ähnlicher Weise wie die Bauchlappen in Schritt 1.15. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 1.20 mit dem anderen dorsolateralen Lappens. </li></ol> 2. Chirurgische Kastration Hinweis: Dies ist ein Überleben der Operation, so asepsis, Anästhesie und Schmerztherapie sind wichtig, um die ethischen und erfolgreichen Abschluss dieses Protokolls. Folgen Sie alle institutionellen Tierpflege und Richtlinien zur Verwendung. Eine externe Wärmequelle, wie beispielsweise einem rezirkulierenden Wasserdecke, während des chirurgischen Eingriffs Hypothermie zu verhindern. Verwenden Sie kein Tier unbeaufsichtigt lassen, bis es genügend Bewusstsein zu halten Brustlage wiedergewonnen hat. Nicht ein Tier zurück, die Operation an die Firma von anderen Tieren unterzogen wurde, bis sie vollständig erholt. Autoklav alle chirurgischen Instrumente vor dem Gebrauch in der Chirurgie. <ol><li> Auf einem sauberen, sterilen Oberfläche der Maus durch geeignete Maßnahmen (zB 2% inhaliert Isofluran) betäuben und die Position mOuse in Rückenlage. Hinweis: Alternative Anästhesieverfahren, wie Ketamin, kann auch verwendet werden, abhängig von dem zugelassenen Tier Protokoll. </li><li> Überprüfen Sie die Reflexe der Maus durch die Zehen einklemmen. Wenn die Maus nicht reagiert, gehen Sie zum nächsten Schritt. Wenn es nicht reagiert, warten 1-3 min und erneut prüfen. Rasieren Sie den OP-Bereich mit einem elektrischen Rasierer. </li><li> Aseptisch bereiten den Bauch der Maus durch die institutionellen Tierärzten oder IACUC empfohlen scheuert von 70% Ethanol und Jod oder Verfahren anwenden abwechseln. </li><li> Mit einem sterilen Skalpell, machen Sie eine 1 cm vertikalen Schnitt durch die Haut in der Mittellinie der Unterbauch, ca. 1,5 cm vor den Penis. </li><li> Machen Sie einen kleinen Schnitt (&lt;1 cm) durch das Peritoneum, vorsichtig keine Organe zu schneiden. </li><li> Mit einer sterilen Pinzette, greifen die Schnittkante des Peritoneum und heben Sie sie vorsichtig nach oben so in der Lage sein, unter die Bauchhöhle zu sehen. </li><li> Unter Verwendung eines anderen sterilen Zange greifen in the Peritonealhöhle und Griff entweder die linke oder rechte Hodenfettpolster, lateral in die Blase. Ziehen Sie die Fettpolster durch die Öffnung in das Peritoneum und die Haut, bis die Hoden als auch herauskommt. Seien Sie nicht vorsichtig alle anderen Geweben oder Organen bei diesem Schritt zu verletzen. </li><li> Mit einem Kauter Stift, schneiden durch die Fettpolster, die die Hoden hält. Schneiden Sie langsam durch die Hodenarterie mit dem Kauter Stift Hinweis: Wenn die Hodenarterie zu schnell geschnitten wird, kann es zu viel Blutungen und die Maus kann eingeschläfert werden. </li><li> Sobald die Fettpolster und Arterie geschnitten werden, entfernen Sie den Hoden und Fettpolster. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 2,6-2,9 mit dem anderen Hoden. Hinweis: Ein alternatives Verfahren zur Entfernung der Hoden ligieren die Hodenarterie operativ ist, worauf das Schiff mit einer Schere schneiden. </li><li> Vernähen das Peritoneum mit resorbierbaren Naht verschlossen. </li><li> Staple die Haut geschlossen mit chirurgischen Wundklammern. </li><li> Verwalten Sie eine analgetische Schmerzen zu verwalten, und Platzdie Maus in einem sauberen Käfig auf einem Käfig Wärmer für 5-10 min. Überwachen Sie die Maus auf Anzeichen von Schmerzen oder Blutungen. </li></ol>

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li><li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia.">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li><li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+prostate+cancer.">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238 (2011).</li><li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice:+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee.">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li><li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models.">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li><li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. S., Labrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+features+of+the+basal+cells+of+human+prostate+epithelium.">Unique features of the basal cells of human prostate epithelium.</a> Microsc Res Tech. 51 (5), 436-446 (2000).</li><li>Prins, G. S., Huang, L., Birch, L., Pu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+estrogens+in+normal+and+abnormal+development+of+the+prostate+gland.">The role of estrogens in normal and abnormal development of the prostate gland.</a> Ann N Y Acad Sci. 1089, 1-13 (2006).</li><li>Valkenburg, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Wnt/beta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia.">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li><li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells.">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li><li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men--warning:+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males,+respectively.">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer.">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li><li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy.">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li><li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+prostate+cancer:+new+prospects+for+old+challenges.">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li></ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

Prostate Mikrodissektion ermöglicht lappen spezifische Experimente und die Analyse der Maus Prostata (Abbildung 1). In gentechnisch veränderten Maus-Modellen, in einem Lappen kann Phänotypen gesehen, die nicht in anderen gesehen wird. Auch für die histologische Analyse, versichert dieses Protokoll, dass die maximale Menge an reinem Prostatagewebe kann, ohne andere Urogenitaltrakt Gewebe in dem Abschnitt geschnitten und gefärbt werden. Schließlich ist für Single-Cell-Experimente ermöglicht dieses...

Die Prostata ist die häufigste Stelle von Krebs bei Männern in den USA. Fast 220.000 Menschen jedes Jahr wird mit Prostatakrebs diagnostiziert und etwa 27.000 Menschen werden auf ihre Krankheit 1 erliegen. Männer haben eine 1 in 7 Lebensdauer Risiko einer Prostatakrebsdiagnose in den USA 1. Benigner Prostatahyperplasie (BPH), eine altersbedingte noncancerous Vergrößerung der Prostata, ist ebenfalls ein weitverbreiteter Zustand, beeinflussen über 80% der Männer über 80 2. Als solche kann die Prostata ist im Mittelpunkt der Beträchtliche Forschung. Mausmodelle wurden weitgehend zu studieren Erkrankungen der Prostata 3 verwendet. Insgesamt ist die Maus Prostata eine ausgezeichnete Vertreter der menschlichen gland 4, aber es gibt Ähnlichkeiten und Unterschiede zwischen Maus und menschlichen Prostata Anatomie und Physiologie 5. Bei beiden Arten wird die Prostata an der Basis der Blase, umgibt die Harnröhre entfernt. Die menschliche Prostata ist eine einzige losein, aufgeteilt in vier Zonen: zentral, Übergang, periphere und vordere fibromuskuläre Stroma. Im Gegensatz dazu besteht die Maus Prostata von drei gekoppelten Lappen an verschiedenen Positionen um die Harnröhre: vordere, ventralen und dorsolateralen. Auf zellulärer Ebene ist der Hauptunterschied , dass die basalen Zelle luminalen Zellverhältnis in menschlichen etwa 1: 1, aber es beträgt 1: 4 in Mäusen 6. Die murine Stroma unterscheidet sich auch bei Mäusen auf den Menschen - Menschen weitergehende glatte Muskulatur haben, während die Muskelschicht viel dünner in murinen Prostata ist. Die richtige Identifizierung, Präparation und Handhabung der Maus Prostata sind unerlässlich, um Maus Prostata Forschung. Hormonspiegel beeinflussen stark die Entwicklung und die Homöostase der Prostata in Menschen und Mäusen. Während Östrogen 7 eine Rolle bei Prostata - Entwicklung zu spielen scheint, ist das wichtigste Hormon , das in der Prostata Testosteron. Testosteron ist für Drüsenentwicklung eind Wartung. Im Anschluss an entweder physikalische oder chemische Kastration, etwa 90% der luminalen Zellen im adulten Prostata apoptose und die Drüse schrumpft. Wenn Testosteron an ein Individuum unter Kastrationsbedingungen wieder eingeführt wird, ist die Prostata kann sich der vollen Kapazität zu regenerieren. Testosteron scheint auch Prostatakrebs zu fahren, weshalb Androgenentzugtherapie eine häufig verwendete therapeutische Strategie ist. Allerdings werden viele Prostatakarzinome auf Androgen Deprivation resistent. Darüber hinaus Männer Androgenentzugtherapie für die Behandlung von Prostatakrebs unterziehen laufen Zyklen kastriert und regeneriert Bedingungen. Bei der Maus chirurgische Kastration, zusammen mit hormonellen Regeneration der Prostata durch Testosteron wieder einzuführen, ist ein wichtiges Werkzeug, mit dem Kastrationsbeständigkeit und die Wirkung von Testosteron-cycling auf die Prostata zu studieren. In diesem Artikel werden wir die richtigen Techniken, mit denen zu diskutieren und demonstrieren zu LOCATe und Mikro sezieren eine Maus Prostata sowie chirurgisch kastriert eine Maus.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="741">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Surgical tools</td>
			<td style="width:145px;">Roboz</td>
			<td style="width:113px;">Various</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">OCT medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td style="width:239px;">Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td align="right">10010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Johns Hopkins</td>
			<td></td>
			<td>Also available from vendors online</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cautery Pen</td>
			<td>Medline</td>
			<td>ESCT002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silk suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>M-S330R19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Wound Clips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9265</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine prostate micro-dissection and surgical castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

Alle sechs Prostatalappen wurden aus einer Maus über Prostata Mikrodissektion (Abbildung 1) entfernt wird . Der komplette Urogenitaltrakt (UGT) aus allen Prostatalappen besteht, die Harnblase, Samenbläschen und der Harnröhre (Abbildung 1a). Die Samenleiter wird an der Harnröhre, ist aber für Prostata - Mikrodissektion unnötig, und somit vor dem Entfernen des UGT gelöst werden kann durch die Harnröhre (1b-1c) zu schneiden. Der Uro...

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Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Dieses Manuskript beschreibt die Protokolle für Prostata-Mikrodissektion und chirurgische Kastration im Labor Maus. Wir zeigen auch Vertreter von diesen Protokollen erzeugt Ergebnisse. Schließlich diskutieren wir die Vorteile und die Nutzung dieser Protokolle.

Murine Prostata Micro-Dissektion und chirurgische Kastration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

45.1K Aufrufe.  Johns Hopkins University.  Dieses Manuskript beschreibt die Protokolle für Prostata-Mikrodissektion und chirurgische Kastration im Labor Maus. Wir zeigen auch Vertreter von diesen Protokollen erzeugt Ergebnisse. Schließlich diskutieren wir die Vorteile und die Nutzung dieser Protokolle. 

Serie: Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Microvascular Decompression: Salient Surgical Principles and Technical Nuances

Trigeminal neuralgia is a disorder associated with severe episodes of lancinating pain in the distribution of the trigeminal nerve. Previous reports indicate that 80-90% of cases are related to compression of the trigeminal nerve by an adjacent vessel. The majority of patients with trigeminal neuralgia eventually require surgical management in order to achieve remission of symptoms. Surgical options for management include ablative procedures (e.g., radiosurgery, percutaneous radiofrequency lesioning, balloon compression, glycerol rhizolysis, etc.) and microvascular decompression. Ablative procedures fail to address the root cause of the disorder and are less effective at preventing recurrence of symptoms over the long term than microvascular decompression. However, microvascular decompression is inherently more invasive than ablative procedures and is associated with increased surgical risks. Previous studies have demonstrated a correlation between surgeon experience and patient outcome in microvascular decompression. In this series of 59 patients operated on by two neurosurgeons (JSN and PEK) since 2006, 93% of patients demonstrated substantial improvement in their trigeminal neuralgia following the procedure&#x2014;with follow-up ranging from 6 weeks to 2 years. Moreover, 41 of 66 patients (approximately 64%) have been entirely pain-free following the operation.
In this publication, video format is utilized to review the microsurgical pathology of this disorder. Steps of the operative procedure are reviewed and salient principles and technical nuances useful in minimizing complications and maximizing efficacy are discussed.

There are many available options for management of the patient with trigeminal neuralgia. Microvascular decompression, while the most invasive of all options, is also the most effective at achieving long term remission of symptoms. Video instruction on how to maximize efficacy and minimize complications with this procedure is described.

Mikrovaskulären Dekompression: Salient Chirurgische Prinzipien und technischen Feinheiten

Trigeminal neuralgia is a disorder associated with severe episodes of lancinating pain in the distribution of the trigeminal nerve. Previous reports ...

Forschung

Medizin

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

Evaluation von Nanopartikel-Aufnahme in Tumoren in Echtzeit über Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

Ein orthotopen Mausmodell der menschlichen Prostatakrebs-Metastasen

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Surgical Fixation of Sternal Fractures: Preoperative Planning and a Safe Surgical Technique Using Locked Titanium Plates and Depth Limited Drilling

Different ways to stabilize a sternal fracture are described in literature. Respecting different mechanisms of trauma such as the direct impact to the anterior chest wall or the flexion-compression injury of the trunk, there is a need to retain each sternal fragment in the correct position while neutralizing shearing forces to the sternum. Anterior sternal plating provides the best stability and is therefore increasingly used in most cases. However, many surgeons are reluctant to perform sternal osteosynthesis due to possible complications such as difficulties in preoperative planning, severe injuries to mediastinal organs, or failure of the performed method.
This manuscript describes one possible safe way to stabilize different types of sternal fractures in a step by step guidance for anterior sternal plating using low profile locking titanium plates. Before surgical treatment, a detailed survey of the patient and a three dimensional reconstructed computed tomography is taken out to get detailed information of the fracture&#8217;s morphology. The surgical approach is usually a midline incision. Its position can be described by measuring the distance from upper sternal edge to the fracture and its length can be approximated by the summation of 60 mm for the basis incision, the thickness of presternal soft tissue and the greatest distance between the fragments in case of multiple fractures.
Performing subperiosteal dissection along the sternum while reducing the fracture, using depth limited drilling, and fixing the plates prevents injuries to mediastinal organs and vessels.
Transverse fractures and oblique fractures at the corpus sterni are plated longitudinally, whereas oblique fractures of manubrium, sternocostal separation and any longitudinally fracture needs to be stabilized by a transverse plate from rib to sternum to rib. Usually the high convenience of a patient is seen during follow up as well as a precise reconstruction of the sternal morphology.

Here we present a method to stabilize sternal fractures by using locked titanium plates in a low profile design. Performing subperiosteal dissection along the sternum while reducing the fracture, using depth limited drilling, and fixing the plates provides a safe surgical way.

Chirurgische Befestigung der Sternal Frakturen: Präoperative Planung und eine sichere Operationstechnik Mit Locked Titanplatten und Tiefe Begrenzte Bohrungen

Different ways to stabilize a sternal fracture are described in literature. Respecting different mechanisms of trauma such as the direct impact to the ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the exact pathophysiology remains unknown. In order to unravel the pathophysiology a murine model of AVF-failure was developed in which the configuration of the anastomosis resembles the preferred situation in the clinical setting. A model was described in which an AVF is created by connecting the venous end of the branch of the external jugular vein to the side of the common carotid artery using interrupted sutures. At a histological level, we observed progressive stenotic intimal lesions in the venous outflow tract that is also seen in failed human AVFs. Although this procedure can be technically challenging due to the small dimensions of the animal, we were able to achieve a surgical success rate of 97% after sufficient training. The key advantage of a murine model is the availability of transgenic animals. In view of the different proposed mechanisms that are responsible for AVF failure, disabling genes that might play a role in vascular remodeling can help us to unravel the complex pathophysiology of AVF failure.

Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

A Novel Mausmodell der arteriovenöse Fistel Ausfall: Der chirurgische Eingriff im Detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

Präklinische Orthotopische Mausmodell der menschlichen Prostata-Krebs

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Intravital Microscopy of Tumor-associated Vasculature Using Advanced Dorsal Skinfold Window Chambers on Transgenic Fluorescent Mice

Tumor and tumor vessel development, as well as tumor response to therapeutics, are highly dynamic biological processes. Histology provides static information and is often not sufficient for a correct interpretation. Intravital evaluation, in which a process is followed in time, provides extra and often unexpected information. With the creation of transgenic animals expressing cell-specific markers and live cell tracers, improvements to imaging equipment, and the development of several imaging chambers, intravital microscopy has become an important tool to better understand biological processes. This paper describes an experimental design for the investigation of tumor vessel development and of therapeutic effects in a spatial and temporal manner. Using this setup, the stage of vessel development, tip cell and lumen formation, blood flow, extravasation, an established vascular bed, and vascular destruction can be visualized and followed. Furthermore, therapeutic effects, intratumoral fate, and the localization of chemotherapeutic compounds can also be followed.

This protocol describes the intravital imaging of transgenic mice expressing cell-specific fluorescent markers. Intravital imaging provides a non-invasive method for high-resolution observations in living animals using implantable windows through which the microscopic visualization of processes is possible. This method is especially useful to study longitudinal processes.

Intravitalen Mikroskopie von Tumor-assoziierten Gefäßsystem mit erweiterten dorsalen Hautfalte Fenster Kammern an transgenen Mäusen fluoreszierende

Tumor and tumor vessel development, as well as tumor response to therapeutics, are highly dynamic biological processes. Histology provides static ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an otherwise dynamic system, and successive phases are easily overlooked or misinterpreted. Live-cell imaging and time-lapse microscopy, in which living cells can be followed for hours or even days in a more or less continuous fashion, are therefore very informative. The protocol described here allows for the investigation of the fate of chemotherapeutic nanoparticles after the delivery of doxorubicin (dox) in living cells. Dox is an intercalating agent that must be released from its nanocarrier to become biologically active. In spite of its clinical registration for more than two decades, its uptake, breakdown, and drug release are still not fully understood. This article explores the hypothesis that lipid-based nanoparticles are taken up by the tumor cells and are slowly degraded. Released dox is then translocated to the nucleus. To prevent fixation artifacts, live-cell imaging and time-lapse microscopy, described in this experimental procedure, can be applied.

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Live-cell imaging is a powerful tool to visualize dynamic processes. The examination of fixed cells provides only static pictures, which can lead to misinterpretation and confusion about the process. This work presents a method to study uptake, drug release, and intracellular localization of liposomal nanoparticles in living cells.

Verwendung von In-vitro- Live Cell Imaging zur Erkundung Chemotherapeutika geliefert durch Lipid-basierte Nanopartikel

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the quality of life. BPH includes 2 major treatments: medication and surgery. Surgical treatment is often the most effective and final intervention. Holmium laser enucleation of the prostate (HoLEP), one of the most efficient surgical procedures for BPH, is conducted transurethrally. During surgery, the most important and most difficult part is to locate the surgical capsule of the prostate, which is consistent to the idea of anatomic surgery. Different skills may be needed in treating different parts of the prostate. HoLEP tends to be efficient and safe with good hemostatic properties, and able to treat bladder calculus, which may be the complications of BPH. The technique is particularly suitable for prostate of varying volumes and sizes. Indeed, HoLEP also presents certain disadvantages, such as a long learning curve and costly equipment. Regardless, this method may be the "new standard" and the excellent method for the surgical treatment of BPH.

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Here we present a safe and efficient protocol, holmium laser enucleation of the prostate, to treat benign prostatic hyperplasia.

Chirurgische Behandlung der benignen Prostatahyperplasie: Holmium Laser Enukleation der Prostata (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result from altered activity of cells responsible for enamel synthesis named ameloblasts, which present in enamel organ. During amelogenesis, ameloblasts follow a specific and precise sequence of events of proliferation, differentiation, and death. A rat continually growing incisors is a suitable experimental model to study ameloblast activity and differentiation stages in physiological and pathological conditions. Here, we describe a reliable and consistent method to micro-dissect enamel organ of rats exposed to environmental toxicants. The micro-dissected dental epithelia contain secretion- and maturation-stage ameloblasts that may be used for qualitative experiments, such as immunohistochemistry assays and in situ hybridization, as well as for quantitative analyses such as RT-qPCR, RNA-seq, and Western blotting.

Understanding enamel formation and possible alterations requires the study of ameloblast activity. Here, we describe a reliable and consistent method to micro-dissect enamel organs containing secretion- and maturation-stage ameloblasts that may be used for further quantitative and qualitative experimental procedures.

Mikro-Dissektion der Emaille-Orgel von Unterkiefer Schneidezahn von Ratten, Umweltgifte ausgesetzt

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result ...