Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri, Diyabet, Sindirim Ulusal Enstitüsü ve Böbrek Hastalıkları (hibe numaraları JP.R. için R21 DK093406 ve T32 DK067872) ve (JP.R. hibe numarası 1BX002129) bir VA Merit ödülü ile desteklenmiştir.

Aşağıdaki protokol (18 Haziran 2015 onaylı IACUC Protokol # 0415011) Tıp Fakültesi Maryland Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanan yönergelere uyar. 19F-Etiketli safra asitlerinin olan 1. Gavaging Fareler <ol><li> 150 mg / kg vücut ağırlığı 19F-işaretli safra asitleri sonda fareler. 19F-işaretli safra asidi stok çözeltisi [kolik asit-trifloro-asetil lisin ile gerekli hacme kadar 1 ml şırınga doldurun (CA-Lys-TFA; 1: 1 polietilen glikol 400: Dulbecco fosfat tamponlu tuzlu su) ya da cholylsarcosine- trifloro-N-metil-asetamid (CA-Sar-TFMA;.% 60 polietilen glikol 400 ve% 40 Dulbecco fosfat tamponlu tuzlu su] ve 20-gauge, 1.5 inç kavisli ampul uçlu mide sondası iğne takılır emin gavaj iğnesi sağlayın iğne hub yemek borusu kadar takılı iken farenin xiphoid kıkırdak seviyesine ulaşmak için yeterince uzun </li><li> sıkıca gbaşparmak ve işaret parmağı arasında boynun arkasındaki gevşek deri ile hayvan törpülemeye ve alt sırt ve kuyruk cilt kavramak kalan parmaklarınızı kullanın. </li><li> dik fare tuşunu basılı tutun ve kenarı boyunca sonda iğne ve yemek borusu içine ve mide içine ağız çatı geçmektedir. dirence karşı itmeyin - direnç farenks karşılaşılan ise hayvan bunu &#39;kırlangıçlar&#39; kadar, iğne yeniden konumlandırmak. </li><li> Anestezi sonda için gerekli ise, 5 ml izofluran ve yakın içeren bir fanus içinde fare yerleştirin. Fare yan düştüğünde, 7 sn bekleyin fareyi kaldırmak ve sonda gerçekleştirin. anestezik buharlar Personeli korumak için, sadece bir davlumbaz çan kavanoz kullanın. </li><li> hayvan birkaç dakika içinde izofluran kurtarmak gözlemleyin. izofluran karaciğerde metabolize olduğundan, bozulmamış ilacın veya metabolitlerinin kaynaklanan bir flor sinyali safra sistemi içine atılır ve safra kesesi fluo bulandırabilir: NOTkaybedilme 19F-işaretli safra asitlerinin 15 gelen sinyalleri alır. Alternatif ketamin artı ksilazin (dozlarda için bölüm 3.1) kullanmaktır. </li></ol> 2. Hasat Safra kesesi, Sıvı Kromatografi / Kütle Spektrometresi Kullanarak Safra Asit Ölçümler için Karaciğer ve Kan <ol><li> organları hasat önce en az 6 saat süreyle maksimum safra kesesi dolum, hızlı fareler elde etmek. fosfat tamponlu tuzlu su içinde ketamin ve ksilazin hazırlama (100 ul ketamin, 62.5 ul ksilazin, 840 ul PBS). </li><li> 1 ml&#39;lik steril bir şırınga kullanılarak, ketamin / ksilazin çözeltisi (150 mg ketamin ve vücut ağırlığındaki her bir kg başına 18 mg ksilazin) 15 ul / g vücut ağırlığı ile önceden organı hasat bir fare deri altından 1 saat enjekte edilir. </li><li> ketamin / ksilazin uygulanmasından sonra bir saat ayak tutam tarafından yeterli anestezi onaylamak ve anestezi fare sırtüstü yerleştirin. </li><li> xiphoid ve fi pubis bir orta hat karın cilt kesi yapmak için 5 ya da 6 inç makas kullanınne makas (4 inç) periton astar kesme ve karın organları açığa çıkarmak için - diyafram delmek yok. </li><li> 5 inç kelepçe ile xiphoid sürecini kavramak ve üst karın boşluğuna maruz göğsünde geri kaldırın. safra kesesi açığa incelemek ve bir kenara karaciğer taşımak için forseps ve künt alet kullanın. NOT: karaciğer lacerate veya eski olarak safra kesesi dokunmayın şiddetli kanamaya neden olur ve ikinci safra kesesi kasılması ve boşalmasını teşvik edebilir. </li><li> Koledokta genelinde 4-inç kelepçe yerleştirin (Şekil 3, okları kesik). diyaframa safra kesesi üstün kutup bağlama ligament kesin ve hafifçe karnın sağ tarafına safra kesesi hareket ettirin. </li></ol><img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54597/54597fig3.jpg" /> Şekil 3: Fare Safra kesesi anatomik ve Proton MR Görüntüleme. Sol panel maruz mutabakat zaptlarından gösterirAbdominal insizyon sonrası orta hat solundaki e safra kesesi. kelepçe xiphoid süreci kavrar. Safra dolu açlık safra kesesi kesik oklarla büyük ok ve kenetlenmiş koledokta ile gösterilir. [Ankastre: eksize koledokun ile sağlam safra kesesi kelepçeli. Cetvel milimetre (mm) işaretlenir.] Sağ panel açlık fare safra kesesi (ok) yüksek çözünürlüklü proton yoğunluğu ağırlıklı MR görüntü gösterir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54597/54597fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="7"><li> Safra kesesi, kalp ponksiyon, hasat kan gerçekleştirmek ve ötenazi doğrulamak için hayvan asıl bulbus olfaktoryusları alındı ​​eksize önce. NOT: Kardiyovasküler çöküşü ve yeterli bir kan örneği almak için başarısızlık (≥ 200 ul) neden karaciğer lacerate olabilir ilk safra kesesi Hasat. </li><li> Sol diyaframın alt Açığa vekalp atışı yüzeyini tanımlamak. maksimal kardiyak nabız noktasında bir 1 ml şırınga bağlı bir 23 gauge iğne ile diyafram ve kalp delinerek. <ol><li> aspire ederken yavaşça çek. Kan şırınga doldurmak başladığında, çekme durdurmak ve 0.2 toplamak için emme korumak - 0.6 ml kan. Yavaşça iğneyi dönen ya da durdurması halinde akışını yeniden kurabilir hafifçe çekilmesi. </li><li> 15 dakika boyunca 2,000 x g hızında bir 1.5 ml heparinize tüpe ve santrifüj kan transferi. 10 dakika boyunca 12.000 xg&#39;de dört parça asetonitril ve santrifüj ile plazma hızlandırabilir. Sıvı kromatografisi / kütle spektroskopisi (LC / MS / MS) 11-1312-1412-1412-1412-14 süpernatantı analiz edin. Gerekirse, analizden önce o C -80 ° C&#39;de plazma saklayın. </li></ol></li><li> Künt diseksiyon kullanarak, karaciğer safra kesesi ücretsiz. , Kelepçe altında koledok transect kaldırmak ve safra kesesi tartmak ve bir 1.5 ml microcen yerleştirintrifuge tüp. karaciğer Hasat. </li><li> yaklaşık 100 karaciğer mg ve boyut-21 cam doku homojenleştirici buz üzerinde tüm safra kesesi homojenize. 10 dakika boyunca 12.000 x g&#39;de 75% asetonitril ve 25% su (karaciğer 800 ul, safra kesesi 300 ul) ve santrifüj ile ekstrakte edin. Gerekli ekstraktlar seyreltik ve LC / MS / MS 11-13 kullanılarak safra asidi içeriğini ölçmek. </li></ol> 3. Canlı hayvan Proton (1H) ve fluor (19F), Manyetik Rezonans Görüntüleme <ol><li> görüntüleme önce en az 6 saat süreyle maksimum safra kesesi dolum, hızlı fareler elde etmek. Ketamin ve ksilazin kullanarak, MRI tarayıcı hareketini önlemek için fareler uyutmak. fosfat tamponlu tuzlu su (130 ul ketamin, 42.5 ul ksilizin, 827 ul PBS) ketamin artı ksilizin bir stok çözeltisi hazırlayın. MR önce bir saat bu çözeltinin 5 ul / g vücut ağırlığı (65 mg ketamin ve 4.25 mg xylaz olan bir fare deri altına enjekte etmek için 1 ml&#39;lik steril bir şırınga kullanınkg vücut ağırlığı başına in). anestezi altında kuruluk hayvanın gözlerine veteriner merhem uygulamak önlemek için. </li><li> Yukarıdaki ketamin / ksilazin ile indüksiyon sonrası, # 40 veya daha ince elektrik kesme bıçakları kullanılarak karın farenin sol alt yarısında 1.5 cm 2 alan klibi. kürk çıkarılmasından sonra, 8 alanı hazırlık -% 12 seyreltilmiş iyot cerrahi fırçalama solüsyonu ve% 70 alkol ile durulayın - Her iki adımları tekrarlayın. karın boşluğuna 0.75 inç iğne / kateter deri altından ve tünel ile 24 ölçü yerleştirin. Emin kateter pistonu geri çekerek çekum veya diğer abdominal organ olmadığından emin olun - kateter hiçbir kan veya dışkı maddesi olmalıdır. </li><li> İğneyi çıkarın ve periton kateteri bırakın. MRI tarayıcı hayvan odasında sıcaklık kontrollü termal pad üzerinde fare yerleştirin. </li><li> fosfat tamponlu tuzlu su içinde ketamin ve ksilazin içeren 1 ml&#39;lik steril bir şırınga (1.000 ul ketamin, 300 ul ksilazin hazırlanması, 6700 ul PBS) ve 72-inç steril boru istenilen uzunlukta doldurun. önceden doldurulmuş steril tüp için intraperitoneal kateter bağlayın ve uzak MRG tarayıcıdan uzatın. Farenin vital bulguları stabil olup olmadığını anestezi bu çözümün her 20 dakikada 50 ul enjekte korumak için. NOT: görüntüleme önce hiçbir metal MRI tarayıcısı yakın emin olun. </li><li> 1 H için 300,283 MHz ve 19 F çekirdekleri için 282,524 MHz radyo frekans sinyalleri göndermek ve almak için bir 19 F / 1H çift ayarlı doğrusal hacmi MR bobin kullanın. <ol><li> Hızlı, düşük açılı vurdu dizisi (FLASH) kullanarak üç dilim (eksenel, mid-sagital ve koronal) izci görüntüleri ile sistem kalibrasyonu 11, 13 ve hayvan yerelleştirme gerçekleştirebilir. Denemeyi başlatmak için, yazılım konsolunda Tarama Kontrol penceresindeki &#39;trafik ışığı&#39; düğmesine tıklayın. </li><li> Gevşeme ile hızlı kazanım geliştirmek kullanarak kesitli 1H MR görüntüleri elde etmeknumune veya tekrarlama süresi 2.200 msn ile hayvanın vücudunda, eko zamanı 8.9 msn çapraz görünümünde ment (NADİR) dizisi NADİR faktör 8, görünüm 4 x 4 cm 2 alan, kalınlığı 1,0 mm, matris boyutu 266 dilim x 266, düzlem çözünürlüğü 150 x 150 mm 2 ve deney başlatmak için ortalamalar 6. sayısı, yazılım konsolunda Tarama Kontrol penceresindeki &#39;trafik ışığı&#39; düğmesine tıklayın. </li><li> Tekrarlama süresi 1 H MRG aynı bölgede bir FLASH sırası kullanılarak 19 F görüntüleri Edinme 220 ms, çevirme açısı = 30 °, eko zamanı 3,078 ms, matris boyutu 32 x 32, düzlem çözünürlüğü 1.25 x 1.25 mm 2, &#39;GOP&#39; yazılım konsolunda Spektrometre Kontrol Aracı penceresinde (G o- O n P ipeline) düğmesini tıklatın, kalınlığı 4.0 mm dilim ve ortalamalar 768. sayısı deney başlatmak için. </li></ol></li><li> MR sonrası intraperitoneal Injecti ile fare euthanizeG / 15 ul vücut ağırlığı ketamin / kan kaybından için kardiyak delme ve ardından ksilazin çözeltisi (kg vücut ağırlığı başına 150 mg ketamin / 18 ksilazin). </li><li> anestezi fare kurtarmak için periton kateteri çıkarmak ancak sternal yatma korumak için yeterli bilinç kavuşur kadar sahipsiz hayvan bırakmayın. </li><li> Yukarıda açıklandığı gibi, organ hasadından 19 F-etiketli safra asidi konsantrasyonlarını 11-13 ölçmek için ketamin artı ksilizin ile anestezi korumak. </li></ol>

<ol>
	<li>Thomas, C., Pellicciari, R., Pruzanski, M., Auwerx, J., Schoonjans, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+bile-acid+signalling+for+metabolic+diseases.">Targeting bile-acid signalling for metabolic diseases.</a> Nat Rev Drug Discov. 7, 678-693 (2008).</li><li>Vallim, T. Q., Edwards, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+acids+have+the+gall+to+function+as+hormones.">Bile acids have the gall to function as hormones.</a> Cell Metab. 10, 162-164 (2009).</li><li>Dawson, P. A., Karpen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thematic+Review+Series:+Intestinal+Lipid+Metabolism:+New+Developments+and+Current+Insights+Intestinal+transport+and+metabolism+of+bile+acids.">Thematic Review Series: Intestinal Lipid Metabolism: New Developments and Current Insights Intestinal transport and metabolism of bile acids.</a> Journal of Lipid Research. 56, 1085-1099 (2015).</li><li>Dawson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+deletion+of+the+ileal+bile+acid+transporter+eliminates+enterohepatic+cycling+of+bile+acids+in+mice.">Targeted deletion of the ileal bile acid transporter eliminates enterohepatic cycling of bile acids in mice.</a> J Biol Chem. 278, 33920-33927 (2003).</li><li>Pattni, S., Walters, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+understanding+of+bile+acid+malabsorption.">Recent advances in the understanding of bile acid malabsorption.</a> Br Med Bull. 92, 79-93 (2009).</li><li>Walters, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mechanism+for+bile+acid+diarrhea:+defective+feedback+inhibition+of+bile+acid+biosynthesis.">A new mechanism for bile acid diarrhea: defective feedback inhibition of bile acid biosynthesis.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 7, 1189-1194 (2009).</li><li>Hofmann, A. F., Mangelsdorf, D. J., Kliewer, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+diarrhea+due+to+excessive+bile+acid+synthesis+and+not+defective+ileal+transport:+a+new+syndrome+of+defective+fibroblast+growth+factor+19+release.">Chronic diarrhea due to excessive bile acid synthesis and not defective ileal transport: a new syndrome of defective fibroblast growth factor 19 release.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 7, 1151-1154 (2009).</li><li>Flynn, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deoxycholic+acid+promotes+the+growth+of+colonic+aberrant+crypt+foci.">Deoxycholic acid promotes the growth of colonic aberrant crypt foci.</a> Mol Carcinog. 46, 60-70 (2007).</li><li>Glinghammar, B., Rafter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinogenesis+in+the+colon:+interaction+between+luminal+factors+and+genetic+factors.">Carcinogenesis in the colon: interaction between luminal factors and genetic factors.</a> Eur J Cancer Prev. 8, S87-S94 (1999).</li><li>Bernstein, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinogenicity+of+deoxycholate,+a+secondary+bile+acid.">Carcinogenicity of deoxycholate, a secondary bile acid.</a> Arch Toxicol. 85, 863-871 (2011).</li><li>Zheng, X., Ekins, S., Raufman, J. P., Polli, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+models+for+drug+inhibition+of+the+human+apical+sodium-dependent+bile+acid+transporter.">Computational models for drug inhibition of the human apical sodium-dependent bile acid transporter.</a> Mol Pharm. 6, 1591-1603 (2009).</li><li>Vivian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+characterization+of+a+novel+fluorinated+magnetic+resonance+imaging+agent+for+functional+analysis+of+bile+Acid+transporter+activity.">Design and characterization of a novel fluorinated magnetic resonance imaging agent for functional analysis of bile Acid transporter activity.</a> Pharm Res. 30, 1240-1251 (2013).</li><li>Vivian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+evaluation+of+a+novel+trifluorinated+imaging+agent+for+assessment+of+bile+acid+transport+using+fluorine+magnetic+resonance+imaging.">Design and evaluation of a novel trifluorinated imaging agent for assessment of bile acid transport using fluorine magnetic resonance imaging.</a> J Pharm Sci. 103, 3782-3792 (2014).</li><li>Vivian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+performance+of+a+novel+fluorinated+magnetic+resonance+imaging+agent+for+functional+analysis+of+bile+acid+transport.">In vivo performance of a novel fluorinated magnetic resonance imaging agent for functional analysis of bile acid transport.</a> Mol Pharm. 11, 1575-1582 (2014).</li><li>Raufman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Magnetic+Resonance+Imaging+to+Detect+Biliary+Excretion+of+19F-Labeled+Drug+in+Mice.">In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Detect Biliary Excretion of 19F-Labeled Drug in Mice.</a> Drug Metab Dispos. 39, 736-739 (2011).</li><li>Ridlon, J. M., Kang, D. J., Hylemon, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+salt+biotransformations+by+human+intestinal+bacteria.">Bile salt biotransformations by human intestinal bacteria.</a> J Lipid Res. 47, 241-259 (2006).</li><li>Frisch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-methyl-11C]cholylsarcosine,+a+novel+bile+acid+tracer+for+PET/CT+of+hepatic+excretory+function:+radiosynthesis+and+proof-of-concept+studies+in+pigs.">N-methyl-11C]cholylsarcosine, a novel bile acid tracer for PET/CT of hepatic excretory function: radiosynthesis and proof-of-concept studies in pigs.</a> J Nucl Med. 53, 772-778 (2012).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

CA-Lys-TFA ve CA-Sar-TFMA ve sodyum / taurokolat eş taşıma polipeptidi eksprese ASBT ve insan embriyosu böbrek hücrelerini, eksprese eden stabil olarak aktarılmış Madin-Darby köpek böbrek hücreleri kullanılarak taşıma in vitro analizi sentezi (NTCP) Başka bir yerde 13,14 ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Burada odak canlı hayvan MRG ile safra kesesinde MFBA görüntüleme, özellikle, MFBA içeriğinin analizi için safra kesesi, karaciğer ve kan hasat ardından hayvanlar, yaş...

Bağırsaktan yağ emilimini kolaylaştıran deterjanlar olarak klasik rolüyle birlikte, safra asitleri kendi enterohepatik sirkülasyon 1,2 ile ilişkili ek olarak birden fazla organı etkileyen güçlü sinyal molekülleri olarak ortaya çıkmıştır. Kendi metabolizmasını kontrol etmeye ek olarak, safra asitleri, gastrointestinal fizyoloji (örneğin, bağırsak hareketleri ve inkretin hormon üretimi, kolon fizyolojisi ve kanser yatkınlık) çeşitli yönlerini modüle ve damar tonusu, glukoz ve lipid metabolizması ve enerji kullanımının sistemik etkileri vardır. Bu etkilerin bazıları bağırsağında aracılık ederken obez hastalarda gastrik by-pass ameliyatı sonrasında belirtildiği gibi, diğerleri, sistemik safra asidi seviyelerinde postprandiyal değişikliklere bağlıdır. gastrointestinal sistem ve meta farklı anatomik bölmeleri içindeki safra asidi seviyelerini eş zamanlı olarak izlenmesini sağlar yeni teknoloji gerekli safra asitlerinin karmaşık metabolik işlemleri, aydınlatmak içinmetabolik dokudan (karaciğer, pankreas, iskelet kası ve yağ). Böyle zamansal ve uzamsal bilgi edinme yenilikçi teknoloji gerektiren - in vivo görüntüleme Burada anlatılan böyle yeni bir yaklaşım olarak yeni safra asidi izleyiciler kullanarak. anatomik bölümlerinde safra asidi kompozisyonu ve dağıtım hepatik sentezini ve diyet, cerrahi, antibiyotik kullanımı ve bağırsak florasında değişiklikler dahil olmak üzere ileal alımını, modüle faktörler tarafından düzenlenir. Bunların enterohepatik dolaşımın 3 (Şekil 1) bağırsak safra asidi alım anahtar düzenleyicisi ileal Apikal sodyuma bağlı safra asidi taşıyıcısı (; SLC10A2 ASBT) &#39;dir. Pasif absorpsiyon bağırsak içinde meydana gelmesine rağmen, ASBT böylece normal dışkı içine Safra asitlerinin sınırlı bir dökülme bağırsak safra asitlerinin% 95 alımını aracılık eder. ASBT-eksikli (Slc10a2 - / -) farelerde dışkı safra asidi ve safra azalmış ACI artmıştırd havuzu 4. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54597/54597fig1.jpg" /> Şekil 1: safra asitlerinin enterohepatik dolaşımının. Safra kesesi depolanan safra Ağacı, içine ifrazatı Safra Asitler karaciğerde sentezlenen sayede Enterohepatik Dolaşım, çizimi, yemekler ile Proksimal İnce Barsak içine Çıkış ve Aktif Distal ileumda ASBT aracılığıyla alınır. Safra asitlerinin küçük miktarlarda, gut ile pasif olarak absorbe edilirken, bağırsak safra asitlerinin yaklaşık olarak% 95 yeni bir safra asidi sentezi benzer miktarda kompanse edilir dışkıda az (yaklaşık% 5) kaybı ile sonuçlanan ASBT aktif olarak taşınmaktadır karaciğer, böylece bir kalıcı-hal safra asidi havuzu muhafaza. Sağdaki oklar, mide asidi, pankreas, bağırsak mukoza enzimler ve en importantl dahil nativ ve fluor-etiketli safra asidi stabilitesini etkileyebilecek faktörler, tespitDistal ince bağırsak ve kolon kolonize Clostridial türlerinin tarafından yayımlanan y hidrolitik enzimler. (Izni 16 Modifiye) <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54597/54597fig1large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Safra asidi malabsorpsiyon böylece aralıklı veya kronik ishale neden fekal dihidroksi safra asitlerini arttırır her biri üç tip, kategorize edilebilir. Brüt İleal patoloji (örn rezeksiyon, Crohn hastalığı) 5 1 sonuçları yazın. kolesistektomi, vagotomi, çölyak hastalığı, bakteriyel aşırı çoğalma ve pankreas yetmezliği 3 sonuç yazın. böyle önceki koşulları eksikliği ve ileumda patoloji kanıt yok çünkü aksine, &#39;primer&#39; (Tip 2) safra asidi malabsorpsiyonu olan kişiler zorlu bir tanısal teşkil etmektedir. Bu nedenle, birincil safra asidi malabsorpsiyon yaygın ishal-p gibi yanlış teşhisredominant irritabl bağırsak sendromu (IBS-D), gastroenteroloji ile ilgili ayaktan hasta ziyaretleri için belki de en yaygın nedeni. IBS-D olan hastaların üçte biri birincil safra asidi malabsorbsiyon sahip olduğu tahmin edilmektedir; ABD&#39;de, bu birkaç milyon kişi 5 temsil edebilir. Yeni yaklaşımlar primer BAM düşürülebildiği ekspresyon veya ASBT fonksiyonu ile ilgili bağırsak fibroblast büyüme faktörü-19 (FGF19) ile safra asidi sentezinin bozulmuş geri besleme inhibisyonu nedeniyle ortaya çıktığını göstermektedir. ASBT dahil bağırsak safra asitlerinin sonuçlanan artış doyurur safra asidi taşıyıcıları, ve dışkı içine safra asitlerinin artar dökülme ishal 6 neden - birincil safra asidi emilim bozukluğu içinde, FGF19 düşük plazma seviyeleri karaciğer safra asidi sentezini kapatmak için başarısız (Şekil 2). Fgf15 (murin FGF19) eksik fareler, bir safra asidi havuzu genişletilmiş ve dışkı safra asitleri 7 artmıştır. Şekil 2: Bağırsak Safra Asit malabsorbsiyonun mekanizmaları. Panel A&#39;da gösterildiği gibi, normal olarak, bağırsak safra asitlerinin yaklaşık% 95 ASBT ile uzak ileumun aktif taşıma vasıtası ile emilir. ASBT ifade veya aktivite (panel B), kolona safra asitlerinin dökülme olarak bozuk intestinal safra asidi alım sonuçlarını azaldığı zaman. Bozulmuş FGF19 sinyalizasyonu (panel C) ile, kolon içine safra asitlerinin dökülmesinden ile ASBT taşıma kapasitesi bastıran bağırsak safra asitlerinin artmasına konsantrasyonlarda karaciğer safra asidi sentezi sonuçlarının feedback inhibisyon eksikliği. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54597/54597fig2large.jpg" target="_blank">Büyük halini görmek için tıklayınız bu figür.</a> Uzun vadeli, fekal safra aci kronik yükseklikds kolon neoplazi teşvik edebilir. Kolon neoplazi somatik gen mutasyonları, ama hızlandırmak ve bu süreci arttırsınlar fekal safra asitlerini arttırmak çevresel faktörlerle ilişkili progresif mukozal displazi kaynaklanmaktadır. Kemirgenlerde ya dışarıdan uygulanması ya ASBT eksikliğinin bir sonucu olarak, kolon displazi ve tümör oluşumunu 8-10 teşvik dışkı safra asitlerini artmıştır. Özellikle, kışkırtıcı bulgular Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından onaylanmış yaygın olarak kullanılan ilaçlar kuvvetli in vitro 11 ASBT tarafından safra asidi taşıma önlediğini göstermektedir. Bu ilaçlar in vivo ince bağırsak safra asidi taşıma azaltmak ve fekal safra asidi düzeylerini artırmak durumunda, kolon patolojisi üzerindeki potansiyel etkisi konusunda olacaktır. kolon patoloji bile küçük bir artış önemli bir sağlık etkiye sahip olabilir, böyle bir ilacın kullanımı atfedilen. In vitro bulgular ve epidemiyolojik ob bunların inandırıcılığını değerlendirmek Bir araççekincelerin konulması pazarlama sonrası güvenlik çalışmaları dahil olmak üzere ek araştırmalar, teşvik ediyorum. ihtiyacı rağmen, pratik deneyler safra asidi malabsorpsiyonu insanlar eksik tanımlamak için. Fekal safra asitlerinin direkt ölçümü, hantal pratik ve 5 güvenilmez olarak yıllar önce reddedildi. Alternatif yaklaşımlar, bir radyoaktif selenyum-işaretli kolik asit türevi (75 SeHCAT) ve 7α-hidroksi-4-kolesten-3-on (C4), veya safra asidi bağlayıcı bir terapötik değerlendirme plazma seviyelerinin tutma ölçülmesi yer alır. 75 SeHCAT test vardır tanısal test gelen Üstelik ABD&#39;de kullanım için sınırlı Avrupa&#39;da kullanılabilirliği ve FDA onaylı değil veya mevcut, hatta mütevazı radyasyona maruz kalma (0.26 mSv / 75 SeHCAT testi) kaygı uyandırmaktadır ve bakteriyel aşırı çoğalma ve ilerlemiş karaciğer hastalığı 75 SeHCAT sonuçlarını yanıltabilecek. C4 test sadece plazma gerekli olduğundan potansiyel olarak cazip olmakla birlikte, düşük pozitif öngörü val vardırue ve test yaygın olarak mevcut değildir. FGF19 serum seviyelerini ölçerek benzer sınırlamalar vardır. Sıkça klinisyenler safra asidi tutucuları terapötik deneme başvurmak, ancak bu yaklaşım safra asidi emilim bozukluğu 5 kesin bir tanı sağlayamaz. Bu nedenlerden dolayı, yeni bir MR yaklaşımı yenilikçi bir çoklu flüorinlenmiş safra asitleri (MFBA-MRI) kullanılarak in vivo olarak safra asidi taşıma ve dağıtım ölçmek için tasarlanmıştır. Florin (19F),% 100 doğal bir bolluk izotop üç atom içeren MFBA, yerli safra asitlerinin 12 benzer şekilde taşınır, ve proton (1 H) ve flor (bir kombinasyonu ile safra asidi taşınma görselleştirmek için kullanılabilmektedir 19 F) MRG, radyasyon maruziyeti 13,14 iyonlaştırıcı olmayan hassas, güvenli bir yöntemdir.

<table><tbody><tr><td>Duall size-21 all glass tissue grinder</td><td>Kimble Chase Life Science, Vineland, NJ</td><td>885351-0022</td><td></td></tr><tr><td>Bruker BioSpec 70/30USR Avance III 7T horizontal bore MR Scanner</td><td>Bruker Biospin MRI GmbH, Germany</td><td></td><td>Use companion Paravision Version 5.1 software (see step 3.5)</td></tr><tr><td>Bruker 40 mm &lt;sup&gt;19&lt;/sup&gt;F/&lt;sup&gt;1&lt;/sup&gt;H dual-tuned linerar volume coil</td><td>Bruker Biospin MRI GmbH, Germany</td><td></td><td>Use companion Paravision Version 5.1 software (see step 3.5)</td></tr><tr><td>Waters Acquity UPLC System with Quadrupole Detector</td><td>Waters Corporation, Milford, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Waters Acquity UPLC ethylene bridged hybrid C8 1.7 &amp;mu;m 2.1 x 50 mm column</td><td>Waters Corporation, Milford, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gavage Needle</td><td>Braintree Scientific, INC.</td><td>N-010</td><td>20 G-1.5&quot; curved 2.25 mm ball</td></tr><tr><td>2 Stainless Steel Hemostats&amp;nbsp;</td><td>VWR</td><td>10755-018</td><td>4 and 5 inch, straight</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>MWI Veterinary Supply</td><td>501090</td><td>Ketamin zetamine 100 mg/ml</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn, Inc.</td><td></td><td>20 mg/ml</td></tr><tr><td>Intraperitoneal Catheter</td><td>Abbott</td><td>AbbocathTM-T.I.V. G720-A01 4535-42</td><td>24-G x 0.75&quot;</td></tr></tbody></table>

using multi-fluorinated bile acids and in vivo magnetic resonance imaging to measure bile acid transport

yağ emilimini kolaylaştıran deterjan gibi geleneksel rolleriyle birlikte, edebiyat ortaya çıkan safra asitleri çoklu organları etkileyebilir güçlü sinyal molekülleri olduğunu gösterir; bunlar bağırsak motilitesi ve hormon üretimini modüle eden ve vasküler tonus, glikoz metabolizması, lipid metabolizması ve enerji kullanımını değiştirebilir. fekal safra asitlerinin değişiklikler bağırsak mikrobiyomları değiştirebilir ve cholerrheic ishal ve kolon kanseri de dahil olmak üzere kolon patolojisi teşvik edebilir. dışkı safra asidi bileşiminin anahtar regülatörleri ince bağırsak Apikal sodyuma bağlı safra asidi taşıyıcısı (ASBT) ve fibroblast büyüme faktörü-19 (FGF19) vardır. ASBT azalma ifadesi ve fonksiyon bağırsak safra asidi yukarı çekmek azalır. Ayrıca, in vitro veriler, bazı FDA onaylı ilaçlar ASBT fonksiyonunu inhibe olduğunu göstermektedir. Eksik FGF19 bırakma hepatik safra asidi sentezini artırır ve ASBT bastıran seviyelere bağırsak içine bırakın. Ya ASBT işlev bozukluğu veya FGF19 eksikliği f artırırECAL safra asitleri ve kronik ishale neden ve kolon neoplazi teşvik edebilir. Ne yazık ki, aletler safra asidi malabsorpsiyon ve in vivo olarak safra asidi taşıma ilaçların etkilerini ölçmek için sınırlıdır. Safra asitlerinin karmaşık işlemler anlamak için, teknik gut ve metabolik dokularda safra asitlerinin eş zamanlı izleme izin verdiği gerekmektedir. Bu proton (1H) ve flor (19 F) manyetik rezonans görüntüleme (MRG) bir kombinasyonu kullanılarak, canlı hayvanlarda safra asidi taşıma ölçmek için yenilikçi bir yöntem gebe götürdü. Florin (19F) yönelik yeni izleyiciler, in vitro ve in vivo olarak, canlı bir hayvan MR hazırlandı ve test edildi tabanlı. Bu yaklaşımın Güçlü Yönler, klinik araştırma ve uygulama için radyasyon ve translasyonel potansiyelini iyonize maruz kalma eksikliği sayılabilir.

Gerçek zamanlı in vivo MR için MFBA kullanımı görmek &#39;safra asidi taşıma araştırma ve klinik kullanım açısından büyük bir potansiyele sahiptir. Ayrıca, safra kesesi rezeksiyonu ve sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi kullanılarak, içeriğinin biyokimyasal analiz için burada açıklanan yöntemler, görüntüleme sonuçları teyit için bir yol sağlar. Bununla birlikte, bu yöntemlerin geçerliliği hassas doz, tahliller zamanlamasını ve gör?...

Watch this Scientific Journal Video about Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport at JoVE.com

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Araçlar sınırlıdır safra asidi malabsorpsiyon teşhis ve in vivo olarak safra asidi taşınma ölçülür. Canlı hayvanların yenilikçi bir yaklaşım kombine proton (1H) artı flor (19 F) manyetik rezonans görüntüleme kullanır tarif edilmektedir; Bu yeni yöntem, klinik uygulamada safra asidi malabsorbsiyona taranması için öteleme potansiyele sahiptir.

Çok florlu Safra Asitler ve kullanma<em&gt; İn Vivo</em&gt; Manyetik Rezonans Görüntüleme Tedbir Safra Asit Ulaşım

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

using-multi-fluorinated-bile-acids-vivo-magnetic-resonance-imaging-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

11.1K Görüntüleme.  University of Maryland School of Medicine.  Araçlar sınırlıdır safra asidi malabsorpsiyon teşhis ve in vivo olarak safra asidi taşınma ölçülür. Canlı hayvanların yenilikçi bir yaklaşım kombine proton (1H) artı flor (19 F) manyetik rezonans görüntüleme kullanır tarif edilmektedir; Bu yeni yöntem, klinik uygulamada safra asidi malabsorbsiyona taranması için öteleme potansiyele sahiptir. 

Video: Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Continuous advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance imaging (MRI) have greatly improved our ability to study physiological or pathological processes in living organisms. MRI is also proving to be a valuable tool for capturing transplanted cells in vivo. Initial cell labeling strategies for MRI made use of contrast agents that influence the MR relaxation times (T1, T2, T2*) and lead to an enhancement (T1) or depletion (T2*) of signal where labeled cells are present. T2* enhancement agents such as ultrasmall iron oxide agents (USPIO) have been employed to study cell migration and some have also been approved by the FDA for clinical application. A drawback of T2* agents is the difficulty to distinguish the signal extinction created by the labeled cells from other artifacts such as blood clots, micro bleeds or air bubbles. In this article, we describe an emerging technique for tracking cells in vivo that is based on labeling the cells with fluorine (19F)-rich particles. These particles are prepared by emulsifying perfluorocarbon (PFC) compounds and then used to label cells, which subsequently can be imaged by 19F MRI. Important advantages of PFCs for cell tracking in vivo include (i) the absence of carbon-bound 19F in vivo, which then yields background-free images and complete cell selectivityand(ii) the possibility to quantify the cell signal by 19F MR spectroscopy.

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Tracking of cells using MRI has gained remarkable attention in the past years. This protocol describes the labeling of dendritic cells with fluorine (19F)-rich particles, the in vivo application of these cells, and monitoring the extent of their migration to the draining lymph node with 19F/1H MRI and 19F MRS.

Kullanarak İzleme Dendritik Hücre Göç<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Manyetik Rezonans Görüntüleme

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Tıp

Real Time Monitoring of Intracellular Bile Acid Dynamics Using a Genetically Encoded FRET-based Bile Acid Sensor

F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET) has become a powerful tool for monitoring protein folding, interaction and localization in single cells. Biosensors relying on the principle of FRET have enabled real-time visualization of subcellular signaling events in live cells with high temporal and spatial resolution. Here, we describe the application of a genetically encoded Bile Acid Sensor (BAS) that consists of two fluorophores fused to the farnesoid X receptor ligand binding domain (FXR-LBD), thereby forming a bile acid sensor that can be activated by a large number of bile acids species and other (synthetic) FXR ligands. This sensor can be targeted to different cellular compartments including the nucleus (NucleoBAS) and cytosol (CytoBAS) to measure bile acid concentrations locally. It allows rapid and simple quantitation of cellular bile acid influx, efflux and subcellular distribution of endogenous bile acids without the need for labeling with fluorescent tags or radionuclei. Furthermore, the BAS FRET sensors can be useful for monitoring FXR ligand binding. Finally, we show that this FRET biosensor can be combined with imaging of other spectrally distinct fluorophores. This allows for combined analysis of intracellular bile acid dynamics and i) localization and/or abundance of proteins of interest, or ii) intracellular signaling in a single cell.

We provide a detailed protocol to study bile acid dynamics in living cells using a genetically encoded BAS FRET sensor. This Bile Acid Sensor represents a unique tool to study (regulation of) bile acid transport and FXR activation in a wide range of cell types.

Genetik olarak kodlanmış FRET tabanlı Safra Asit Sensor Kullanımı Hücre içi Safra Asit Dynamics Gerçek Zamanlı İzleme

F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET) has become a powerful tool for monitoring protein folding, interaction and localization in single cells. ...

Biyomühendislik

Determining Bile Duct Density in the Mouse Liver

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques are used, including serum chemistry, histological analysis, and immunostaining for specific markers. Although these techniques can provide important information about the biliary system, they often do not present a full picture of bile duct (BD) developmental defects across the whole liver. This is in part due to the robust ability of the mouse liver to drain the bile even in animals with significant impairment in biliary development. Here we present a simple method to calculate the average number of BDs associated with each portal vein (PV) in sections covering all lobes of mutant/transgenic mice. In this method, livers are mounted and sectioned in a stereotypic manner to facilitate comparison among various genotypes and experimental conditions. BDs are identified via light microscopy of cytokeratin-stained cholangiocytes, and then counted and divided by the total number of PVs present in liver section. As an example, we show how this method can clearly distinguish between wild-type mice and a mouse model of Alagille syndrome. The method presented here cannot substitute for techniques that visualize the three-dimensional structure of the biliary tree. However, it offers an easy and direct way to quantitatively assess BD development and the degree of ductular reaction formation in mice.

We present a rather simple and sensitive method for accurate quantification of bile duct density in the mouse liver. This method can aid in determining the effects of genetic and environmental modifiers and the effectiveness of potential therapies in mouse models of biliary diseases.

Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğu belirlenmesi

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques ...

Gelişim Biyolojisi

An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers

Blood-brain barrier (BBB) is a specialized barrier that protects the brain microenvironment from toxins and pathogens in the circulation and maintains brain homeostasis. The principal sites of the barrier are endothelial cells of the brain capillaries whose barrier function results from tight intercellular junctions and efflux transporters expressed on the plasma membrane. This function is regulated by pericytes and astrocytes that together form the neurovascular unit (NVU). Several neurological diseases such as stroke, Alzheimer&#39;s disease (AD), brain tumors are associated with an impaired BBB function. Assessment of the BBB permeability is therefore crucial in evaluating the severity of the neurological disease and the success of the treatment strategies employed.
We present here a simple yet robust permeability assay that have been successfully applied to several mouse models both, genetic and experimental. The method is highly quantitative and objective in comparison to the tracer fluorescence analysis by microscopy that is commonly applied. In this method, mice are injected intraperitoneally with a mix of aqueous inert fluorescent tracers followed by anesthetizing the mice. Cardiac perfusion of the animals is performed prior to harvesting brain, kidneys or other organs. Organs are homogenized and centrifuged followed by fluorescence measurement from the supernatant. Blood drawn from the cardiac puncture just before perfusion serves for normalization purpose to the vascular compartment. The tissue fluorescence is normalized to the wet weight and serum fluorescence to obtain a quantitative tracer permeability index. For additional confirmation, the contralateral hemi-brain preserved for immunohistochemistry can be utilized for tracer fluorescence visualization purposes.

An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers

Here we present a mouse brain vascular permeability assay using intraperitoneal injection of fluorescent tracers followed by perfusion that is applicable to animal models of blood-brain barrier dysfunction. One hemi-brain is used for assessing permeability quantitatively and the other for tracer visualization/immunostaining. The procedure takes 5 - 6 h for 10 mice.

Vivo kan - beyin bariyerini geçirgenliği tahlil Fluorescently kullanarak farelerde izleyiciler etiketli

Blood-brain barrier (BBB) is a specialized barrier that protects the brain microenvironment from toxins and pathogens in the circulation and maintains ...

Nörobilim

Quantitative MRI of Endothelial Permeability and (Dys)function in Atherosclerosis

Cardiovascular diseases are the leading causes of death worldwide. A permeable/leaky and dysfunctional endothelium is considered the earliest marker of vascular damage and thought to drive atherosclerosis. A method to identify these changes in vivo would be desirable in the clinic. Magnetic resonance imaging (MRI)-based tools and other technologies have enabled a profound understanding of the role of the endothelium in cardiovascular diseases and risk in vivo. There is, however, a need for reproducible and simple approaches for extracting quantifiable data reflective of endothelial damage from a single imaging study. A non-invasive, easy-to-implement, and quantitative MRI workflow was developed to acquire and analyze images that allow the quantification of two imaging biomarkers of arterial endothelial damage (leakiness/permeability and dysfunction). Here, the protocol describes the application of this method in the brachiocephalic artery of atherosclerotic ApoE-/- mice using a clinical MRI scanner. First, late gadolinium enhancement (LGE) and Modified Look-Locker Inversion Recovery (MOLLI) T1 mapping protocols to quantify endothelial leakage using an albumin-binding probe are described. Second, anatomic, and quantitative blood flow sequences to measure endothelial dysfunction, in response to acetylcholine are described. Importantly, the method outlined here allows the acquisition of high-spatial-resolution 3D images with large volumetric coverage enabling accurate segmentation of vessel wall structures to improve inter- and intra-observer variability and to increase reliability and reproducibility. Additionally, it provides quantitative data without the need for high-temporal resolution for complex kinetic modeling, making it model-independent and even allowing for imaging of highly mobile vessels (coronary arteries). Therefore, the approach simplifies and expedites data analysis. Finally, this method can be implemented on different scanners, can be extended to image different arterial beds, and is clinically applicable for use in humans. This method could be used to diagnose and treat patients with atherosclerosis by adopting a precision-medicine approach.

<meta charset="utf8"></head><body>Aterosklerozda Endotel Geçirgenliği ve Disfonksiyonunun Kantitatif MRG'si

We have developed an accurate, non-invasive, and easy-to-use method to quantify endothelial permeability and dysfunction in the arteries using Magnetic Resonance Imaging (MRI), named qMETRIC. This technique enables assessing vascular damage and cardiovascular risk associated with atherosclerosis in preclinical models and humans.

Aterosklerozda Endotel Geçirgenliği ve (Dis)fonksiyonunun Kantitatif MRG'si

Cardiovascular diseases are the leading causes of death worldwide. A permeable/leaky and dysfunctional endothelium is considered the earliest marker of ...

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity is disturbed in gastrointestinal, cardiovascular and metabolic diseases, which may result in easier access of biologically active compounds, such as gut bacterial metabolites, to the bloodstream. Thus, the permeability of the GBB may be a marker of both intestinal and extraintestinal diseases. Furthermore, the increased penetration of bacterial metabolites may affect the functioning of the entire organism.
Commonly used methods for studying the GBB permeability are performed ex vivo. The accuracy of those methods is limited, because the functioning of the GBB depends on intestinal blood flow. On the other hand, commonly used in vivo methods may be biased by liver and kidney performance, as those methods are based on evaluation of urine or/and peripheral blood concentrations of exogenous markers. Here, we present a direct measurement of GBB permeability in rats using an in vivo method based on portal blood sampling, which preserves intestinal blood flow and is virtually not affected by the liver and kidney function. 
Polyurethane catheters are inserted into the portal vein and inferior vena cava just above the hepatic veins confluence. Blood is sampled at baseline and after administration of a selected marker into a desired part of the gastrointestinal tract. Here, we present several applications of the method including (1) evaluation of the colon permeability to TMA, a gut bacterial metabolite, (2) evaluation of liver clearance of TMA, and (3) evaluation of a gut-portal blood-liver-peripheral blood pathway of gut bacteria-derived short-chain fatty acids. Furthermore, the protocol may also be used for tracking intestinal absorption and liver metabolism of drugs or for measurements of portal blood pressure.

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The access of nutrients, microbiota metabolites and medicines to the circulation is controlled by the gut-blood barrier (GBB). We describe a direct method for measuring the GBB permeability in vivo, which, in contrast to commonly used indirect methods, is virtually not affected by liver and kidney functions.

Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

High-throughput Nitrobenzoxadiazole-labeled Cholesterol Efflux Assay

Atherosclerosis leads to cardiovascular disease (CVD). It is still unclear whether cholesterol-HDL (cHDL) concentration plays a causal role in atherosclerosis development. However, an important factor in early stages of atheroma plaque formation is cholesterol efflux capacity to HDL (the ability of HDL particles to accept cholesterol from macrophages) in order to avoid foam cell formation. This is a key step in avoiding the accumulation of cholesterol in the endothelium and a part of reverse cholesterol transport (RCT) to eliminate cholesterol through the liver. Cholesterol efflux capacity to serum or plasma in macrophage cell models is a promising tool that can be used as biomarker for atherosclerosis. Traditionally, [3H]-cholesterol has been used in cholesterol efflux assays. In this study, we aim to develop a safer and faster strategy using fluorescent labelled-cholesterol (NBD-cholesterol) in a cellular assay to trace the cholesterol uptake and efflux process in THP-1-derived macrophages. Finally, we optimize and standardize the NBD-cholesterol efflux method and develop a high-throughput analysis using 96-well plates.

Measurement of in vitro cholesterol efflux capacity to serum or plasma in macrophage cell models is a promising tool as a biomarker for atherosclerosis. In the present study, we optimize and standardize a fluorescent NBD-cholesterol efflux method and develop a high-throughput analysis using 96-well plates.

Yüksek işlem hacmi Nitrobenzoxadiazole etiketli kolesterol sızma tahlil

Atherosclerosis leads to cardiovascular disease (CVD). It is still unclear whether cholesterol-HDL (cHDL) concentration plays a causal role in ...

Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis

Multiple sclerosis (MS) is a neuroinflammatory disease with expanding axonal and neuronal degeneration and demyelination in the central nervous system, leading to motor dysfunctions, psychical disability, and cognitive impairment during MS progression. Positron emission tomography (PET) is an imaging technique able to quantify in vivo cellular and molecular alterations.
Radiotracers with affinity to intact myelin can be used for in vivo imaging of myelin content changes over time. It is possible to detect either an increase or decrease in myelin content, what means this imaging technique can detect demyelination and remyelination processes of the central nervous system. In this protocol we demonstrate how to use PET imaging to detect myelin changes in the lysolecithin rat model, which is a model of focal demyelination lesion (induced by stereotactic injection) (i.e., a model of multiple sclerosis disease). 11C-PIB PET imaging was performed at baseline, and 1 week and 4 weeks after stereotaxic injection of lysolecithin 1% in the right striatum (4 &#181;L) and corpus callosum (3 &#181;L) of the rat brain, allowing quantification of focal demyelination (injection site after 1 week) and the remyelination process (injection site at 4 weeks).
Myelin PET imaging is an interesting tool for monitoring in vivo changes in myelin content which could be useful for monitoring demyelinating disease progression and therapeutic response.

Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis

This protocol has the aim of monitoring in vivo myelin changes (demyelination and remyelination) by positron emission tomography (PET) imaging in an animal model of multiple sclerosis.

Multipl Sklerozun Lysolecithin Rat Modelinde Miyelin İçeriğinin In Vivo Ölçümü için Pozitron Emisyon Tomografi Görüntüleme

Multiple sclerosis (MS) is a neuroinflammatory disease with expanding axonal and neuronal degeneration and demyelination in the central nervous system, ...

Çok florlu Safra Asitler ve kullanma

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Kullanarak İzleme Dendritik Hücre Göç

Hücre Takip için vivo ¹⁹ F MRG

Genetik olarak kodlanmış FRET tabanlı Safra Asit Sensor Kullanımı Hücre içi Safra Asit Dynamics Gerçek Zamanlı İzleme

Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğu belirlenmesi

Vivo kan - beyin bariyerini geçirgenliği tahlil Fluorescently kullanarak farelerde izleyiciler etiketli

Aterosklerozda Endotel Geçirgenliği ve (Dis)fonksiyonunun Kantitatif MRG'si

Aterosklerozda Endotel Geçirgenliği ve (Dis)fonksiyonunun Kantitatif MRG'si

Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi

Yüksek işlem hacmi Nitrobenzoxadiazole etiketli kolesterol sızma tahlil

Multipl Sklerozun Lysolecithin Rat Modelinde Miyelin İçeriğinin In Vivo Ölçümü için Pozitron Emisyon Tomografi Görüntüleme