Yazarlar lisans Daniel Korus onun yardım Matlab kodu çalıştırmak için ve lisans Alex Boettcher davranışsal deney çalışan onun yardım için teşekkür etmek istiyorum. Bu proje NSF IOS 1256799 R.L.M. için ve ulusal sağlık Enstitüleri Ödülü numarası T32DA007234 altında ilaç kötüye Ulusal Enstitüsü tarafından desteklenmektedir.

burada açıklanan tüm yordamlar kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Minnesota Üniversitesi tarafından onaylanmıştır ve uygun bakım ve kullanım laboratuvar hayvanları Guide olarak vardır 13 .
 1. hayvanlar ve Cannulation cerrahi <ol><li>elde edilir Suriye hamster yaş yaklaşık 55 gün bir ortak hayvan tedarikçiden. 
	Not: hayvan yaş nedeniyle çeşitli deneysel paradigmaların kısıtlamalarını değişir, cinsel davranış için tüm yaklaşık aynı yaşta cinsel olgun hayvanlar elde etmek önemli olsa.</li>
	<li>Ev hayvanlarda kontrollü bir sıcaklık (22 ° C) ve (14 10 h ışıklar, 13:00 h ile karanlık ardından h ışık) aydınlatma çevre, gıda ve su kullanılabilir ad libitum dönemlerde deneysel test ile. 
	Not: hamster sezona göre yeniden beri bu 1410: açık/koyu döngüsü taklit eden kendi doğal üreme koşulları.</li>
	<li>Laboratuvar 1 haftalık calıştıkları aseptik ikili ovariectomies ve kafa içi stereotaksik cannulations (örneğin, Fentobarbital) genel anestezi altında yapmak ve yönetmek uygun kurumsal olarak onaylı Post-Operatif analjezik ve antibiyotik tedavisi daha önce açıklandığı gibi 14 , 15. 
	Not: cinsel davranış çalışma için ovariectomies hayvanlar düzgün eksojen hormon uygun olarak deneysel zaman çizelgesi ile cinsel algılama için indüklenen cinsel hormonları önemli endojen kaynağı kaldırmak gereklidir.
	<ol><li>Dopaminerjik ve glutamatergic sonda implantasyonu, Stereotaxic Kılavuzu Kanüller (0.7 mm çap; implant şekil 3) ilgi alanı içine (örneğin, bu laboratuvar doğru nucleus accumbens (NAc) hedef) 15 başka bir yerde kademeli ayrıntılı olarak açıklandığı gibi. 
		Not: bir Glutamat veya dopamin sondası hayvan başına tek sensör kayıtları üzerinden sunulan veriler olmasına rağmen tek bir hayvan 4 sensörler aynı anda kayıt için bu sistemi sağlar; Böylece, 1-4 Kanüller istenen deneysel tasarım ve sonuçları bağlı olarak implante.
		<ol><li>Bölge stereotaksik atlas kullanarak ilgi implant koordinatlarını belirleyin (örneğin, Altın Hamster Brain Morin tarafından &#38; ahşap), sensör 1 mm kanül altında beyin dokusu içine uzanır akılda tutulması.</li>
		</ol></li> <li>Sonra bir kanül Stereotaxic istediğiniz ventral dorsal yere indirdi, bir kap diş akrilik, paslanmaz çelik kemiği vida ve plastik bir kafa ile güvenli inşa kullanarak kafatası yapıştırmayın mount ( şekil 3 ; 15 daha fazla bilgi için bkz:).</li>
		<li>Karbon fiber test etmek için bir referans elektrot (350 mikron çapında, 7.5 mm toplam uzunluk) kontralateral Yarımküre takın. 
		Not: Bir belirli konum veya kanül mesafeden gerekli değildir; referans elektrotlar yer yerleştirilebilir herhangi bir yerde uygun kontralateral Yarımküre.</li>
	</ol></li></ol> 2. Biyoalgılayıcı ve karbon Fiber test <ol><li>1 haftalık Cerrahi Kurtarma, cinsel algılama ikna etmek için hormon astar rejimi yönetmek.
	<ol><li>Estradiol benzoat ayçiçek yağı 0.1 ml 10 µg subkutan enjekte (SC), yaklaşık 48 saat ve cinsel davranış, cinsel algılama erkek 11 doğru ikna etmek için test önce 24 saat.</li>
		<li>Enjekte 500 µg, progesteron ayçiçek yağı, SC, erkek cinsel algılama 11 ikna etmek için giriş önce 4 h 0.1 ml.</li>
	</ol></li> <li>Beyaz ve kırmızı ışığı koşulları 16 , 17 test altında değişiklik tabi kemirgenler sosyal davranışlarını olduğu gibi onların günlük döngüsü, karanlık aşamasının başında bütün hayvanlar test , 18.</li> <li>enzimatik Biyoalgılayıcı Glutamat sınama, sensörler vitro ( şekil 4) 15 , daha önce açıklandığı gibi kullanımdan önce kalibre 19. <ol><li>yapmak kalibrasyon çözüm 20 mL cam test gününde taze tüpler santrifüj kapasitesi. Analit çözüm için 7.4 mg L-glutamik asit yavaşça tüp ters çevirme tarafından ultra-saf H 2 O 10 mL geçiyoruz. İnterferent çözüm 176.1 mg AA 10 ml ultra-saf H 2 O. çözülerek olun</li>
		<li>Kurmak için bir temel laboratuar yüzük stand temel alınarak bir manyetik karıştırıcı yerleştirerek kalibrasyon. 20 mL ceketli kabı manyetik karıştırıcı üstüne yerleştirin ve bir orta 2 prong kelepçe kullanarak yerde kelepçe.
		<ol><li>Ekle manyetik heyecan bar ve 100 mM fosfat 20 mL serum fizyolojik (PBS) ceketli kabı arabelleğe alınmış. Arabellek çözüm 37 ısıtmak için dolaşan bir su banyosu ceketli kabı bağlanmak ° C. 
			Not: enzimatik aktivite sıcaklığı ile etkilenir bu yana enzimatik Biyoalgılayıcı kalibrasyonlar vücut sıcaklığında gerçekleştirilmelidir.</li>
		</ol></li> <li>Yer sensör kalibrasyonu tutucu üzerine ceketli kabı ve bir dik açılı mengene kullanarak yerde güvenliğini sağlama üstte 4 kanallı kalibrasyon Pre amplifikatör ayarla. Pre amplifikatör veri klima ve satın alma aygıtı kayıt kalibrasyon verilerine bağlanın.</li>
		<li>Her enzimatik Biyoalgılayıcı Glutamat (veya diğer analitler için diğer ticari olarak mevcut Biyoalgılayıcı sondalar örneğin, glikoz ilgi) duyarlılığını test önce deneysel kayıt kalibrasyon tutucusuna sonda yerleştirerek bir ceketli kabı, algılama kavite ve gümüş klorür (AgCl) başvuru tel tampon çözelti içinde bir kısmı batış.
		<ol><li>Bir bağlantı noktasına bir 4 kanallı kalibrasyon Pre amplifikatör test edilen her sensör (en fazla 4) bağlanmadan önce ücretsiz indirilebilir satın yazılım kullanan bilgisayar arayüzü yeni bir kayıt başlatmak. Alıcıları çok istikrarlı bir temel ulaşmak izin.</li>
		</ol></li> <li>Sensörler istikrarlı bir temel ulaştığında analit enjeksiyonları eklemeye başlamak. Delik kalibrasyon tutucu pipet ucu arabellek çözüm tanıtmak için kullanın. Bir enjeksiyon yapıldığında açıklama eklemek için kayıt yazılımı hızlı anahtar ek açıklama aracını kullanın.
		<ol><li>Olun 10 µM eklemeler Glutamat pipetting 40 μL analit çözüm arabellek çözüm içine. Eklemeler stabilize etmek sensör için bekleyin. İnterferent AA çözümden (50 μL enjeksiyon hacmi 250 Mikron değişim konsantrasyon için) tek bir enjeksiyon eklemeden önce analit çözüm 3 enjeksiyonlari ekleyin. 
			Not: Kalibrasyon (Adım 2.12 enzimatik deneysel kayıt sırasında görülen) amperometric sinyal değişiklikleri dönüşüm Glutamat konsantrasyonu, değişikliklere istenirse sağlar. Başvuru 15 kademeli yönerge için bkz:. Bu laboratuvar tarafından kullanılan dopaminerjik probları üretim sürecinde ticari sağlayıcı tarafından kalibre. 19 enzimatik bileşenleri aşağılamak gibi zaman içinde onların hassasiyeti düşürebilir gibi Glutamat probları kullanım zaman ayarlanması gerekir. Karbon fiber elektrotlar bozulması tabi olmayan, şirketin Sevkiyat öncesinde gerçekleştirdiği kalibrasyon t yeterli boyunca çünküİşte ek işleme aracılığıyla ince karbon fiber (350 mikron çapında) zarar bir artış olasılığı.</li>
		</ol></li></ol></li> <li>Test odası ile yatak hayvandan alınan satır &#39; s ev kafes. 
	Not: Bu dişi artırır &#39; test ile s aşinalık odası, yanı sıra cinsel uyarıcı estradiol tedaviye yanıt kadın tarafından dağıtıldı koku çiftleşme ipuçları erkek ortaya koyar.</li>
	<li>Hafifçe isoflurane ya da başka bir uçucu anestezi indüksiyon odasında hayvanlar sonda ekleme öncesinde anestezi.</li>
	<li>Tıkayıcı obdurator Kılavuzu kanül çıkarıp karbon fiber elektrot veya rehber şaft aracılığıyla enzimatik sonda takın.</li>
	<li>Sonda eklemeden sonra hayvan test odasında yerleştirin. 
	Not: Bu laboratuvar 10-gal cam akvaryum (24,5 x 48.9 x 29.4 cm) kullanır, ancak eşit alan yuvarlak odaları-da var istihdam.</li>
	<li>Video ve zaman kilitli amperometric sinyal kayıt bir ticari yazılım programı, Begin açıklanan ayrıntılı olarak başka bir yerde 15.</li>
	<li>Bağlanmak duyumsal için kayıt sistemi: elektrikle korumalı bir kablo ve bir elektrik döner üzerinden potansiyostat. Sensör bağlantı bir PIN eki baş bağlama üzerine vidalama ile sabitleyin. Gerekirse laboratuvar film kullanarak bağlantı güçlendirmek. 
	Not: Özelleştirilmiş bir bağlayıcı enzimatik Glutamat sensörleri doğrudan potansiyostat için bağlı olma varken potansiyostat için karbon fiber elektrot ve referans elektrot eklemek gereklidir.</li>
	<li>İzin deneysel test etmeden önce beyinde equilibrate sensörü. 
	Not: Denge saatleri kayıt sensör bağlı olarak farklılık gösterir (örneğin, enzimatik sensörler gerektirir 2-4 h denge, karbon-fiber elektrotlar sadece yaklaşık 30 dk gerektiren süre). Her iki tip sensörler implante edilir, enzimatik sensör uzun equilibrate.</li>
	<li>Sensör denge sonra bir uyarıcı erkek test odasına tanıtmak.</li>
	<li>Uyarıcı erkek tarafından penis ekleme (adlandırılan sıra) ile ilk mount, kayıt için ek bir 10-30 dakika bağlı olarak deneysel gol devam.</li>
	<li>Davranış test, takip kesin dişi &#39; s sensörü.</li>
	<li>Her iki hamster test odasından kaldırın. Yatak çıkarmak ve % 70 etanol kullanarak odası temiz. 
	Not: karbon fiber kayıtları için gerekli kısa denge nedeniyle adımları 2.3-2,14 aynı gün içinde birden fazla hayvan test etmek için tekrar edilebilir. Enzimatik sensörler yaklaşık 4 h denge gerektirdiğinden, hayvanların farklılıkları nedeniyle mümkün arası konu varyasyon sınırlamak için günlük sadece bir hayvan buna ek olarak, test &#39; test sırasında sirkadiyen saat.</li>
</ol> 3. Fedakarlık ve perfüzyon <ol><li>test sürelerin takip derin anestezi kadın denek bir euthanizing maddesi ile (örneğin, laboratuar kullanır 0.2 mL fenitoin ve Fentobarbital çözüm mayi bir enjeksiyon) .</li>
	<li>Transcardially sıvı 25 mM %4 paraformaldehyde-PBS kullanarak 20 dk saplantı tarafından takip tüm dolaşımdaki kan kaldırmak için PBS pH 7,6, hayvanla.</li>
	<li>Beyin kaldırmak ve içinde postfix ~ 30 mL 50 mL konik tüp gecede %4 paraformaldehyde çözeltisi.
	<ol><li>Mağaza % 10 beyinde Sükroz PBS çözüm hazır seri bölümüne kadar. 
		Not: Beyin kirletici potansiyel büyüme önlemek için haftalık Sükroz çözüm değişiklikleri ile 2 hafta için depolanmış olabilir.</li>
	</ol></li> <li>Seri Bölüm 40 µm beyinde dilim ile ikisinden biri implant bölgesi boyunca buz gibi bir microtome ya da cryostat daha önce açıklandığı gibi 19.</li>
	<li>Dilimleri seri olarak piyasada bulunan Yapışkan kaplı slaytlarda mount (veya yapmak için 20 bakın). En az bir gecede kurumaya izin.</li>
	<li>Kresil Mor boya, açık, slaytlarla leke ve coverslip daha önce açıklandığı gibi 20.</li>
	<li>Görüntü sensörünün anatomik yerleşim onaylamak için parlak alan mikroskobu kullanarak slaytları.</li>
</ol> 4. Davranışsal kodlama <ol><li>görünümü ve videoları ücretsiz ticari olarak indirilebilir yazılım kullanarak açıklama (Tablo malzemeleri görmek) tam kod davranışları amperometric sinyal zaman kilitli yavaş çekimde. 
	Not: MATLAB kodu kullanabilmek için (bkz: ), başlangıcı ve sonu her kadın açıklama &#39; s ve erkek &#39; s davranışlar.
	<ol><li>Açıklama Ekle startLordosis kadın onu geri dorsoflexion başlatır ve kuyruğunu yukarıya doğru kusurları çerçeve içinde. Dişi dişi test odasında başka bir konuma readjusts bağlandığınızda sık sık oluşur bu duruş, sonlandırıldığında endLordosis açıklama.</li>
		<li>Açıklama startAI dişi lordoz duruş ve erkek onun burun dişi doğru hamle olduğunda &#39; s anogenital bölge, nerede koklama, yalama veya onun perineal bölgesini koklaşmaya oluşabilir. Ne zaman erkek dişi yakın bir mesafede onun burun kaldırır endAI açıklama &#39; s anogenital bölge.</li>
		<li>Erkek yaklaşımlar ve Bağlama girişimi (örneğin, yan, kıç) yönünü ne olursa olsun bir montaj duruş kadın onun forepaws koyar startMount açıklama.</li>
		<li>Açıklama startIntromission ne zaman başarılı agresif bağlı erkek penis dişi erişir &#39; s vajina. 
		Not: Bir sıra bağlı olarak erkek gözle görülür onun üst bacaklarda bedeni doğru çeker onun pelvis ileri bindirmeler ve kuyruğunu yukarıya doğru penetrasyon gösteren bukleler sıra önce oluşan agresif üzerinden davranışsal ayırt (bkz < güçlü sınıfı "xfig" = > şekil 4 C).
		<ol><li>Uygun olduğunda ek açıklama boşalma. 
			Not: bir çiftleşme butik ve başarılı bir sıra ile birlikte sonunda, erkek boşalmak olacaktır. Bir gerçek emisyon görselleştirmek mümkün olsa da, ortaya çıkışı, boşalma ayak hareketi açıklama onların arka ayak hareketlerle bir sıra 21 sırasında böylece ayakla basma karakteristik bir erkek hamster var.</li>
		</ol></li> <li>Açıklama endIntromission ve endMount aynı anda çerçeve içinde erkek onun açık iki pençesi kaldırdığı ve böylece dişi ile hiçbir temas vardır. Görselleştirmek için sık yetersizlik nedeniyle kararla, eşzamanlı kod nöbetleri çiftleşme arasında tutarlılık ve güvenilirlik için izin vermek için bu iki davranışlar. 
		Not: Bir çiftleşme butik ya başarılı bir boşalma izler ya da dişi en az bir bağlama takip lordoz duruş kırıldığında.</li>
	</ol></li></ol> 5. Örnek veri analizi Not: sabit potansiyel karbon fiber ve enzimatik kayıtları kullanımı için dopamin birND Glutamat, sırasıyla, tonik ve elektrokimyasal yayın phasic kalıpları ölçmek için yeteneği sağlar. Bu laboratuar ücretsiz, ticari kazanç sistemi kullanır ve yazılım dönüştürmek ve kaydetmek için analog sinyalleri dijital kaydedilen (0,600 V, örnekleme hızı önyargı 1 Hz =).
<ol><li>Örnek veri çözümleme protokolü açıklaması <ol><li>diğer programları kullanılabilse ölçmek tonik ve MATLAB kullanarak kaydedilmiş elektrokimyasal sinyal phasic (geçici) değişiklikleri.
		<ol><li>İçin sunulan veri, 50 puanlık hareketli ortalama filtre kullanarak tonik sinyali hesaplamak. Sinyal bir salt geçici normalleştirilmiş temsil ham veri tonik sinyali çıkarılarak hesaplanır. Phasic doruklarına tanımlarken, çeşitli algoritmik seçenek vardır (1'den daha fazla sinyal değişiklikleri olarak tepeler etiketleme örneğin, ortalama yukarıda SD).</li>
			<li>Bu tepeler, Yani, yerel maxima konumlarını tanımlamak, normalleştirilmiş sinyalini en az pik genlik ile MATLAB işlevi peakfinder kullanarak kök ortalama kare sinyal için ayarlayın. Normalleştirilmiş sinyalini tespit doruklarına konumunu her ayında en yüksek genlik ayıklamak için kullanıldı. Olabilir ile rastlayan, ya da göreli tepe nörokimyasal soruşturma altında sürüş herhangi bir zaman kilitli davranışların tanımlanması için zirveleri algılama yeteneğini sağlar.</li>
		</ol></li> <li>Kesimi (bkz. Adım 3) davranış ek açıklamalar doğrultusunda işlenen verileri; bir öğrenci &#39; s t-testi tonik nörotransmitter düzeyinde, geçişler oluşumunu ve genlik farklılıkları değerlendirmek için kullanılan geçişler sırasında nöbetleri çiftleşme sırasında önceden çiftleşme ne dersin lordoz lordoz karşı. Tonik desenleri elektrokimyasal sürüm değişiklikleri ölçmek için lordoz konumu (örneğin, önceden çiftleşme ne dersin lordoz) çiftleşme bir müddet önce doğrudan sırasında meydana gelen veri noktaları veri noktaları için bir çiftleşme bout sırasında karşılaştırıldı bir t-test kullanarak oturumu</li>
	</ol></li> <li>Açıklanan veri çözümleme protokolü için ham veri hazırlanması Not: diğer programlar veya analizler aynı derecede uygun seçenekler olsa da belirtildiği gibi yukarıda açıklanan MATLAB kodu kullanmak için ham veri olarak hazırlanmalıdır Şu şekilde: <ol><li>ek açıklama ve gerilim dosyalarını verme. Altında bunun için &#39; dosya &#39; sekme, seçme &#39; ihracat &#39; işlev ve seçin &#39; ek açıklamaları &#39; ek açıklamaları kaydetmek için sekme. Altında &#39; dosya &#39; sekme, seçme &#39; ihracat &#39; işlev ve seçin &#34; TSV &#39; voltaj ölçümleri TSV uzantısı dosya olarak kaydetmek için sekme.</li>
		<li>Her dosyayı bir elektronik tablo programı ile açın ve Farklı Kaydet'i &#39; xls/xlsx &#39; dosyaları MATLAB ile uyumlu hale getirmek için. 
		Not: İçin &#39; ek açıklama &#39; dosyası, ek el ile ek açıklamaları başlangıcı ve sonu her iki önceden çiftleşme ne dersin lordoz (PreMBlordorsis açıklamalı, dikte etmek için bir elektronik tablo programında sonrası ihracat eklendi ) ve çiftleşme ne dersin bu zaman Puan doğrudan belirtildiği gibi karşılaştırılabilir içinde gaza 5.1.2.</li>
		<li>Açıklama önceden çiftleşme ne dersin lordoz (startPreMBlordosis) başlangıcı aynı anda lordoz davranış (startLordosis) aynı zamanda başlar gibi bir bağlama davranışı içerir ve aynı zamanda yeni bir başlangıcında çiftleşme ne dersin Eğer dişi lordoz duruş kalır.</li>
		<li>İlk monte başladığında önceden çiftleşme ne dersin lordoz (endPreMBlordosis) sonunda açıklama.</li>
		<li>Bu çiftleşme bir müddet başlangıcı anlamına gelir gibi çiftleşme dersin (startMB) başlangıcı endPreMBlordosis, aynı zamanda ek açıklama.</li>
		<li>Bir çiftleşme ne dersin (endMB) iki ucundaki bir boşalma içeren bir bağlama sonu açıklama (bkz. Adım 4.1.4.1), ya da dişi takiben &#39; s sona ermesi lordoz duruş (endLordosis).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+brain+microdialysis.">Overview of brain microdialysis.</a> Curr Protoc Neurosci. , (2009).</li><li>Chaurasia, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAPS-FDA+Workshop+white+paper:+Microdialysis+principles,+application+and+regulatory+perspectives.">AAPS-FDA Workshop white paper: Microdialysis principles, application and regulatory perspectives.</a> Pharm Res. 24 (5), 1014-1025 (2007).</li><li>Lindsay, S., Kealey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> High performance liquid chromatography. , (1987).</li><li>Robinson, D. L., Venton, B. J., Heien, M. L., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+subsecond+dopamine+release+with+fast-scan+cyclic+voltammetry+in+vivo.">Detecting subsecond dopamine release with fast-scan cyclic voltammetry in vivo.</a> Clin Chem. 49 (10), 1763-1773 (2003).</li><li>Hu, Y., Mitchell, K. M., Albahadily, F. N., Michaelis, E. K., Wilson, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+glutamate+release+in+the+brain+using+a+dual+enzyme-based+electrochemical+sensor.">Direct measurement of glutamate release in the brain using a dual enzyme-based electrochemical sensor.</a> Brain Res. 659 (1-2), 117-125 (1994).</li><li>Agnesi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wireless+instantaneous+neurotransmitter+concentration+system-based+amperometric+detection+of+dopamine,+adenosine,+and+glutamate+for+intraoperative+neurochemical+monitoring.">Wireless instantaneous neurotransmitter concentration system-based amperometric detection of dopamine, adenosine, and glutamate for intraoperative neurochemical monitoring.</a> J Neurosurg. 111 (4), 701-711 (2009).</li><li>Erksine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solicitation+behavior+in+the+estrous+female+rat:+A+review.">Solicitation behavior in the estrous female rat: A review.</a> Horm Beh. 23 (4), 473-502 (1989).</li><li>Weiner, I., Gal, G., Rawlins, J. N., Feldon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+involvement+of+the+shell+and+core+subterritories+of+the+nucleus+accumbens+in+latent+inhibition+and+amphetamine-induced+activity.">Differential involvement of the shell and core subterritories of the nucleus accumbens in latent inhibition and amphetamine-induced activity.</a> Behav Brain Res. 81 (1-2), 123-133 (1996).</li><li>Heidbreder, C., Feldon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine-induced+neurochemical+and+locomotor+responses+are+expressed+differentially+across+the+anteroposterior+axis+of+the+core+and+shell+subterritories+of+the+nucleus+accumbens.">Amphetamine-induced neurochemical and locomotor responses are expressed differentially across the anteroposterior axis of the core and shell subterritories of the nucleus accumbens.</a> Synapse. 29 (4), 310-322 (1998).</li><li>Pierce, R. C., Kalivas, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+produces+sensitized+increases+in+locomotion+and+extracellular+dopamine+preferentially+in+the+nucleus+accumbens+shell+of+rats+administered+repeated+cocaine.">Amphetamine produces sensitized increases in locomotion and extracellular dopamine preferentially in the nucleus accumbens shell of rats administered repeated cocaine.</a> J Pharmacol Exp Ther. 275 (2), 1019-1029 (1995).</li><li>Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drive: Molecular and physiological analyses of a simple reproductive behavior. , (1999).</li><li>Carter, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postcopulatory+sexual+receptivity+in+the+female+hamster:+The+role+of+the+ovary+and+the+adrenal.">Postcopulatory sexual receptivity in the female hamster: The role of the ovary and the adrenal.</a> Horm Behav. 3 (3), 261-265 (1972).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. , (2011).</li><li>Meisel, R. L., Camp, D. M., Robinson, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microdialysis+study+of+ventral+striatal+dopamine+during+sexual+behavior+in+female+Syrian+hamsters.">A microdialysis study of ventral striatal dopamine during sexual behavior in female Syrian hamsters.</a> Beh Brain Res. 55 (2), 151-157 (1993).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 4 Channel EEG/EMG/Biosensor Manual V005. , (2012).</li><li>Pellis, S. M., Pellis, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Play-fighting+differs+from+serious+play+fighting+in+both+target+of+attack+and+tactics+of+fighting+in+the+laboratory+rats+Rattus+norvegicus.">Play-fighting differs from serious play fighting in both target of attack and tactics of fighting in the laboratory rats Rattus norvegicus.</a> Aggress Behav. 13 (3), 227-242 (1987).</li><li>Pellis, S. M., Pellis, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+rates+of+attack,+defense+and+counterattack+during+the+developmental+decrease+in+play+fighting+by+male+and+female+rats.">Differential rates of attack, defense and counterattack during the developmental decrease in play fighting by male and female rats.</a> Dev Psychobiol. 23 (3), 215-231 (1990).</li><li>Pellis, S. M., Hastings, E., Shimizu, T., Kamitakahara, H., Komorowska, J., Forgie, M. L., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+orbital+frontal+cortex+damage+on+the+modulation+of+defensive+responses+by+rats+in+playful+and+non-playful+social+contexts.">The effects of orbital frontal cortex damage on the modulation of defensive responses by rats in playful and non-playful social contexts.</a> Behav Neurosci. 120 (1), 72-84 (2006).</li><li>Wakabayashi, K. T., Kiyatkin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+changes+in+extracellular+glutamate+induced+by+natural+arousing+stimuli+and+intravenous+cocaine+in+the+nucleus+accumbens+shell+and+core.">Rapid changes in extracellular glutamate induced by natural arousing stimuli and intravenous cocaine in the nucleus accumbens shell and core.</a> J Neurophysiol. 108 (1), 285-299 (2012).</li><li>Kapelsohn, K. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+for+cutting,+mounting,+and+staining+tissue+for+neural+histology.">Improved methods for cutting, mounting, and staining tissue for neural histology.</a> Protoc Exch. , (2015).</li><li>Siegel, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+7:+Male+sexual+behavior.">Chapter 7: Male sexual behavior.</a> The Hamster: Reproduction and Behavior. , (1985).</li><li>Day, J. J., Carelli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nucleus+accumbens+and+pavlovian+reward+learning.">The nucleus accumbens and pavlovian reward learning.</a> Neuroscientist. 13 (2), 148-159 (2007).</li><li>Meisel, R. L., Mullins, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+experience+in+female+rodents:+Cellular+mechanisms+and+functional+consequences.">Sexual experience in female rodents: Cellular mechanisms and functional consequences.</a> Brain Res. 1126 (1), 56-65 (2006).</li><li>Meredith, G. E., Pennartz, C. M., Groenewegen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+framework+for+chemical+signaling+in+the+nucleus+accumbens.">The cellular framework for chemical signaling in the nucleus accumbens.</a> Prog Brain Res. 99, 3-24 (1993).</li><li>Hedges, V. L., Staffend, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+mechanisms+of+reproduction+in+females+as+a+predisposing+factor+for+drug+addiction.">Neural mechanisms of reproduction in females as a predisposing factor for drug addiction.</a> Front Neuroendocrinol. 31 (2), 217-231 (2010).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Nispeten basit olsa da, bazı sorunlar bu tekniği istihdam ortaya çıkabilir. İlk olarak, sondalar stereotaksik yerleşimini kesin olmalıdır: sonda çevreleyen ekstraselüler ortamın daha geniş bir yarıçap örnekleri microdialysis bu teknik yalnızca doğrudan temas gelir bir nörotransmitter ölçüm verir sonda ile. İkinci olarak, kablo, küçük genişliği nedeniyle karbon fiber kayıt durumunda kırılması meydana gelebilir ve sonda kasıtlı bakımı ile eklenmesi gerekir. Sonda garantili-süre içinde 3...

Nörotransmitter yayın davranıyor uyanık hayvanlarda ölçmek için yeteneği belirli davranışlar mekanizmaları ve her ikisi de temel devresi araştırmak için güçlü aracı neurotransmission bir kayma ve temporal desenleri ile bağlamak araştırmacılar doğal izin verir ve gerçek zamanlı olarak operant davranışları. Tarihsel olarak, microdialysis beyin1ekstraselüler ortamında hem elektrikle reaktif ve tepkisiz maddeler ölçmek için istihdam edilmiştir. Bu teknik ekstraselüler sıvı, benzer iyonik kompozisyon sulu bir çözüm, sürekli bir akış küçük bir şaft bir semipermeable hollow fiber membran2/ yapılan bir ucu ile oluşan bir microdialysis sonda aracılığıyla kullanır. Sonda eklemeden sonra nörotransmitter veya diğer analitler ilgi semipermeable membran daha sonraki analiz için aralıklarla yüksek performanslı sıvı Kromatografi (HPLC), tarafından toplanmakta önce pasif Difüzyon tarafından çapraz olabilir bir analitik kimya teknik ayırmak için yaygın olarak kullanılan tanımlamak ve heterojen karışım3bileşenlerinde ölçmek.
Microdialysis hemen her analit ilgi ölçmek için kullanılan hassas bir teknik olmasına rağmen zamansal çözünürlük ile dakika dakika1,2onlarca sırasına en yüksek örneklendirme oranı düşüktür. Hızlı tarama çevrimsel voltammetry (FSCV), electroactive türleri, redoks potansiyeli dayanır bir teknik icadı ekstraselüler sıvı ilgi analit anlık konsantrasyonları yakınındaki aydınlatmak. Kısaca (bkz: Robinson vd. 4 için kapsamlı bir inceleme), bir elektrot yükseltmek ve daha düşük bir üçgen dalga moda hızlı zaman ölçeği4gerilim uygulanır. Gerilim daha doğru varsa, bileşik faiz art arda okside azaltılmış ve. Küçük bir alternatif akım oluşturur bir hareket elektronların bu oksitlenmeye ve azaltma sonuçları. Oranları gerçekleşecek oksitlenmeye ve bileşikleri mikrosaniye cinsinden meydana gelen azalma ile alt ikinci ölçekte tarama. Arka plan geçerli elde edilen geçerli yoklama tarafından oluşturulan çıkararak, bir vs geçerli çizim her bileşik için benzersiz bir gerilim oluşturabilir. Gerilim salınımlarını zaman ölçeğini bilinir, bu veri geçerli bir arsa bir fonksiyonu olarak hesaplamak için kullanılabilir. Böylece, bileşik göreli konsantrasyonları aktarılan toplam elektron sayısı her oksidasyon ve Redüksiyon tepki4bilinen olarak belirlenebilir.
Bu kimyasal özgüllük ve yüksek zamansal çözünürlük FSCV kimyasal konsantrasyonu vivo içindedeğişen algılamak için güçlü bir teknik olun. Ancak, bu manifoldu avantajlara rağmen bu teknik kapsamlı teknik uzmanlık ve pahalı ekipman ve kurulum gerektirir. Ayrıca, nonelectroactive nörotransmiterler (örneğin, Glutamat) bu tekniği kullanarak ölçülen olamaz. Neyse ki, elektrokimya5, hem de ticari kullanım bu buluşlar alanında teknolojik gelişmeler electroactive sigara nörotransmitter davranıyor uyanık hayvanlarda ölçmek için nispeten basit bir yaklaşım tanıttı hassas bir enzimatik Biyoalgılayıcı teknoloji olarak bilinen zamansal tekniği ödün vermeden. Bu tekniği kullanan bir uygulanan potansiyel5 tarafından oluşturulan bir amperometric oksidasyon geçerli olarak belirlenen electroactive hidrojen peroksit biri enzimatik nonelectroactive nörotransmitter ilgi içine dönüşüm iki yüzeylerde, . Piyasada bulunan Biyoalgılayıcı sondalar (bkz. şekil 1) seçerek analitler ilgi rekabetçi endojen interferents katkısını azaltarak ölçmek. Glutamat durumunda, ortak interferent askorbik asit (AA) katkısını rekabetçi ölçülen geçerli AA oksidaz AA sigara electroactive için dönüştürme sensörün aktif enzimatik yüzeyine co yerelleştirme tarafından azalır dihydroascorbate ve su. Buna ek olarak, bir olumsuz ücret Nafion polimer tabaka enzim tabakasının altında mevcut endojen iyonik bileşikler içermez.
Bu aynı Biyoalgılayıcı deneysel kurulum-ebilmek ölçü electroactive nörotransmiterler olduğu gibi FSCV ama bunun yerine bir sabit-potansiyel kayıt6kullanır. FSCV içinde uygulanan salınım voltaj aksine, bir sabit-potansiyel kayıt gerilim Redoks faiz analit için potansiyel tutulur. Birden çok nörotransmitter ezici bir çoğunlukla doğru bir nörotransmitter çarpık beyin alanlarda aynı Redoks potansiyeli olabilir gibi FSCV daha az kimyasal olarak seçime bağlı olsa da, bu yaklaşımın komple doğa kimyasal eksikliği daha ağır basar özgüllüğü.
Electroactive ve nonelectroactive nörotransmitter sürümde yakın gerçek zamanlı ölçmek ve belirli davranış olaylara bağlamak için yakınsak nörotransmitter yayın incelemek için bir fırsat sağlar. Bu el yazması yanıt uyanık davranan hamster doğal ödül olarak dopamin ve Glutamat neurotransmission sorguya çekmek için bu sistemi ayrıntıları. Bu kağıt bu nörotransmitter yayın sırasında diğer davranışları ve deneysel paradigmalar incelenmesi için onun fizibilite gösteren amacı ile kadın hamster cinsel davranışlara Ölçme işleminin detay amaçtır.
Elektrokimyasal kayıtları kullanmak için ideal bir model hamster are Tarihsel olarak, sıçan ve fareler modelleri cinsel davranış çalışmada istihdam edilmiştir. Bu kemirgen türler atlamalı, darting ve kulak kovalamak ve sonuçta mount kadın7erkek ikna için kıpır kıpır dahil çok sayıda kadın talep davranışları içeren bir dinamik çiftleşme sırayla meşgul. Erkek (veya vajinal penetrasyon olmadan) tarafından montaj sırasında etkin talep davranışları sürdürme önce sadece birkaç saniye için ( lordozdenir) onun cinsel davranış duruş da dişi yürütmektedir yalnızca birkaç saniye sürer. Bu davranış, hareketsizlik, kısa süreler ile serpiştirilmiş etkinliği yüksek düzeyde oluşan hayvanlar davranışlar içinde neurotransmission ölçmek için sorunlu kalıptır. İlk olarak, sinirsel aktivite ile ilgili olmayan amperometric kayıtları hareketi eserler olabilir. İkinci olarak, hareket bazı beyin bölgelerinde belirli nörotransmitter sürümü ile ilişkilidir. Örneğin, dopamin yayın dorsal ve ventral striatum8,9, psikostimülan takiben dopamin microdialysis ölçümleri için temel bir bulgu Lokomotor aktivite birleştiğinde Yönetim10. Çünkü erkek tipik talep davranış ecek içindet kemirgenler Lokomotor aktivite düzeyi yüksek içerir ve bir 10 dakika cinsel davranış testi toplu tarafından temsil edilir, bu zor neurotransmission değişimler topluca sadece son açık bileşenleri cinsel davranış için atfetmek yapar dakika.
Nörokimyasal profil sahibi kadın cinsel davranışı çözümlemek için bu laboratuvar cinsel davranış eşlik eden en az Lokomotor aktivite olduğu bir tür aradı. Suriye hamster (Mesocricetus hava) çiftleşme sırayla talep davranışları genellikle görülen sıçanlar ve fareler11eksikliği nedeniyle nörokimyasal kayıtları için idealdir. Sonuç olarak, kadın hamster girmek ve korumak için lordoz duruş 10 dakikalık oturum12test 9 dakika yukarı. Lokomotor hareketlerle yabancı kadın, in vivo eksikliği ile erkek ile cinsel etkileşimlerin bileşenlerle ilişkili olabilir elektrokimyasal kayıtları elde edilebilir.
Çiftleşme nöbetleri hamster içinde Test odasına erkek uyarıcı hayvan giriş sonra erkek başlangıçta onun (Şekil 2A) montaj önce anogenital soruşturma (AI) kadın meşgul olacak. Sırayla bağlamaya erkek, dişi bir alıcı cinsel duruş içinde onu geri kemerler ve montaj erkek penis vajinaya erişebilirsiniz böylece kuyruğunu saptırır lordoz, olarak bilinen varsaymalıyız. Erkek her iki paws (Şekil 2B), ile onun hindquarters clasping erkek, dağ ve penil sıra (Şekil 2C) elde etmek için bir girişim sokmak başlar. Erkek erkek (olmadan ekleme) mount yanı sıra sonunda boşalma ulaşmak daha önce birkaç kez intromit. Bu bağlar ve boşalma için önde gelen intromissions dizisi "çiftleşme ne dersin" olarak adlandırılır. Erkek-ecek-si olmak birkaç çiftleşme nöbetleri içinde tek bir oturum.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1339">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Nembutal</td>
			<td style="width:183px;">Oak Pharmaceuticals Inc.</td>
			<td style="width:323px;">76478-501-50</td>
			<td style="width:504px;">Pentobarbital sodium injection, USP. This lab uses 8.5mg/100g body weight, injected intraperotineally.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Loxicom analgesic&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Norbrook Laboratories&#160;</td>
			<td style="width:323px;">6451603670</td>
			<td style="width:504px;">NSAID antinflammatory and analgesic used for post-operative pain control. Generic: meloxicam.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Enroflox antibiotic&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Norbrook Laboratories&#160;</td>
			<td style="width:323px;">5552915411</td>
			<td style="width:504px;">Fluoroquinolone antibiotic for post-operative infection prevention. Generic: Enrofloxacin.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Beuthanasia-D&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Merck Animal Health</td>
			<td style="width:323px;">00061047305</td>
			<td style="width:504px;">Pentobarbital Sodium, Phenytoin Sodium euthanasia agent.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bone screws</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>8111-16</td>
			<td style="width:504px;">1/8&#34; bone screw (Pkg. of 16) used to affix skull cap to skull.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Dental acrylic (Bosworth Duz-All)</td>
			<td>Bosworth&#160;</td>
			<td>166261C&#160;</td>
			<td style="width:504px;">Self curing dental acrylic is used in construction of a skull cap to affix cannula and head mount to skull.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Hardware biosensor setup&#160;</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>8400-K2</td>
			<td style="width:504px;">Pinnacle offers complete hardware kits for new users of our tethered biosensor system for rats. Kits include a commutator, preamplifier, and data conditioning and acquisition system</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">Base video computer package</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>9000-K1</td>
			<td style="width:504px;">The base computer package includes a preconfigured computer with ample hard disk storage, a high-definition monitor, a keyboard and mouse, an uninterruptible power supply, and all necessary cables.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">Video EQ700 EverFocus camera&#160; package</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>&#160;9000-K10&#160;</td>
			<td style="width:504px;">EQ700 night vision capable box camera with independent IR source was obtained as part of Pinnacle video computer package. Dome camera (9000-K9) and HD camera (9000-K11) options are also available.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;">Sirenia Acquisition software</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>Free--available to download from pinnaclet.com</td>
			<td style="width:504px;">Sirenia&#160;Acquisition provides a single platform for recording data from any Pinnacle hardware system. The software features synchronization of all data streams, user-configurable settings, data consolidation, and multiple export options. In addition, the software includes basic review and analysis modules for biosensor recordings. Sirenia&#160;delivers free ll-in-one software that is ideal for data acquisition and review.</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;">Tethered rat&#160;in vitro&#160;calibration kit</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>7000-K2-T-BAS&#160;</td>
			<td style="width:504px;">In order to relate the current changes measured by a biosensor to actual changes in analyte concentration, it is necessary to calibrate the biosensor prior to implantation into the animal. The process also confirms the integrity and selectivity of the sensors.&#160;Calibration kit includes 20 mL jacketed beaker (#7058), 1/2&#34; by 1/8&#34; magnetic stir bar (#7059), right angle clamp (#7056), 2 prong single-adjustment clamp (#7055), 4-channel calibration preamplifer (#7053), and calibration holder (#7051).&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Stir plate&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>6795-410D</td>
			<td style="width:504px;">Corning digital Stirrer, 5&#34; x 7&#34;, 120 VAC used to spin magnetic stirrer in jacketed beaker during in vitro calibration of glutamate biosensors.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Water bath capable of closed loop circulation</td>
			<td>PolyScience</td>
			<td>8006A11B</td>
			<td style="width:504px;">PolyScience 8006A11B 6L Standard Digital Heated Circulating Bath, 120VAC water bath was used with plastic tubing to heat jacketed beaker to physiological temperature.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carbon fiber sensor with BASi rat cannulae</td>
			<td>Pinnacle Technology, Inc.</td>
			<td>7002-CFS</td>
			<td style="width:504px;">Carbon fiber electrode used for recording dopamine neurotransmission.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ag/AgCl reference electrode</td>
			<td>Pinnacle Technology, Inc.</td>
			<td>7065</td>
			<td style="width:504px;">Necessary for carbon fiber recordings.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Glutamate biosensors&#160;</td>
			<td>Pinnacle Technology, Inc.</td>
			<td>7001&#160;</td>
			<td style="width:504px;">Enzymatic biosensor probe used for recording glutamatergic neurotransmission.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BASi guide cannulae</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>7030&#160;</td>
			<td style="width:504px;">Guide cannulae implanted into brain region of interest to guide probe.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BASi cannula plastic headpiece for rats&#160;</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>7011&#160;</td>
			<td style="width:504px;">Headmount stabilizes probe and attaches to potentiostat.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring in vivo changes in extracellular neurotransmitters during naturally rewarding behaviors in female syrian hamsters

Nörotransmitter yayın bir hızlı zaman ölçeğinde ölçmek için yeteneği belirli davranışları veya manipülasyonlar bağlanacak şekilde neurotransmission şekillerinin sağlar; temel mekanizmaları ve devre elucidating güçlü bir araç. Microdialysis tekniği beyin ilgi hemen hemen her analit ölçmek için yıllardır kullanılan iken, bu teknik de geçici çözüm sınırlıdır. Alternatif olarak, hızlı tarama çevrimsel voltammetry geçici kesin ve son derece hassas biri; Ancak, teknik olarak zor bu yöntem ilgi analitin electroactivity üzerinde kullandığından, nonelectroactive maddeler (örneğin, nörotransmitter Glutamat) algılamak imkanı ortadan kaldırmıştır. Bu kağıt sabit potansiyel amperometry ve electroactive ve nonelectroactive nörotransmitter zamansal hassasiyetle ölçmek için enzimatik biosensing bir araya getiren bir anahtar teslim sistemi ayrıntıları. Bu iki güçlü teknikleri eşleştirme tonik ve phasic neurotransmission ölçüm için göreli kolaylıkla sağlar ve aynı anda birden fazla nörotransmitter kayıt izin verir. Bu yazının amacı görüntüleme nihai hedefi ile kadın hamster içinde doğal olarak tatmin edici davranış (Yani, cinsel davranış) kullanarak dopamin ve Glutamat neurotransmission in vivo ölçme işlemi göstermektir Teknik fizibilite diğer davranışları ve deneysel paradigmalar incelenmesi için bu testin.

Elektrokimyasal ve davranışsal yukarıda açıklanan metodoloji kodlama kullanarak, bu lab tonik ve dopamin ve Glutamat phasic dalgalanmalar cinsel davranış vivo kayıtları sırasında karakterize etmek başladı. Bu metodoloji geçici hassas şekilde nedeniyle, daha doğrusu cinsel davranış sırasında neurotransmission karakterize olabilir; aynı zamanda yayın şekillerindeki belirli değişiklikler karşılık gelen tonik değişiklikleri için karşılık gelen geçic...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring In Vivo Changes in Extracellular Neurotransmitters During Naturally Rewarding Behaviors in Female Syrian Hamsters at JoVE.com

Measuring In Vivo Changes in Extracellular Neurotransmitters During Naturally Rewarding Behaviors in Female Syrian Hamsters

Bu kağıt dopamin ve Glutamat yüksek zamansal çözünürlük ile serbest bırakılması sırasında doğal tatmin edici davranışlara ölçmek için karbon fiber elektrotlar ve enzimatik Biyoalgılayıcı teknoloji kullanarak sabit potansiyel amperometric kayıtları kullanımı detayları kadın hamster.

Doğal olarak kadın Suriye hamster davranışları ödüllendirme sırasında hücre dışı nörotransmitter ölçüm Vivo içinde değişimler

The ability to measure neurotransmitter release on a rapid time scale allows patterns of neurotransmission to be linked to specific behaviors or ...

measuring-vivo-changes-extracellular-neurotransmitters-during

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Introduction to Psychology

Neuroscience

Unit 1

Measuring In Vivo Changes in Extracellular Neurotransmitters During Naturally Rewarding Behaviors in Female Syrian Hamsters

Biopsychology

SCIENTISTS IN ACTION

10.1K Görüntüleme.  University of Minnesota. Bu kağıt dopamin ve Glutamat yüksek zamansal çözünürlük ile serbest bırakılması sırasında doğal tatmin edici davranışlara ölçmek için karbon fiber elektrotlar ve enzimatik Biyoalgılayıcı teknoloji kullanarak sabit potansiyel amperometric kayıtları kullanımı detayları kadın hamster.

Video: Measuring In Vivo Changes in Extracellular Neurotransmitters During Naturally Rewarding Behaviors in Female Syrian Hamsters

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural connectivity form during development. In mice, retinofugal projections are arranged in a topographic manner and form eye-specific layers in the Lateral Geniculate Nucleus (dLGN) of the thalamus and the Superior Colliculus (SC). The development of these precise patterns of retinofugal projections has typically been studied by labeling populations of RGCs with fluorescent dyes and tracers, such as horseradish peroxidase1-4. However, these methods are too coarse to provide insight into developmental changes in individual RGC axonal arbor morphology that are the basis of retinotopic map formation. They also do not allow for the genetic manipulation of RGCs.
Recently, electroporation has become an effective method for providing precise spatial and temporal control for delivery of charged molecules into the retina5-11. Current retinal electroporation protocols do not allow for genetic manipulation and tracing of retinofugal projections of a single or small cluster of RGCs in postnatal mice. It has been argued that postnatal in vivo electroporation is not a viable method for transfecting RGCs since the labeling efficiency is extremely low and hence requires targeting at embryonic ages when RGC progenitors are undergoing differentiation and proliferation6. 
In this video we describe an in vivo electroporation protocol for targeted delivery of genes, shRNA, and fluorescent dextrans to murine RGCs postnatally. This technique provides a cost effective, fast and relatively easy platform for efficient screening of candidate genes involved in several aspects of neural development including axon retraction, branching, lamination, regeneration and synapse formation at various stages of circuit development. In summary we describe here a valuable tool which will provide further insights into the molecular mechanisms underlying sensory map development.

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

We demonstrate an in vivo electroporation protocol for transfecting single or small clusters of retinal ganglion cells (RGCs) and other retinal cell types in postnatal mice over a wide range of ages. The ability to label and genetically manipulate postnatal RGCs in vivo is a powerful tool for developmental studies.

Fare Retina Ganglion Hücreleri Transfeksiyon tarafından In vivo Elektroporasyon

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Nörobilim

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

Neurons communicate with other cells via axons and dendrites, slender membrane extensions that contain pre- or post-synaptic specializations. If a neuron is damaged by injury or disease, it may regenerate. Cell-intrinsic and extrinsic factors influence the ability of a neuron to regenerate and restore function. Recently, the nematode C. elegans has emerged as an excellent model organism to identify genes and signaling pathways that influence the regeneration of neurons1-6. The main way to initiate neuronal regeneration in C. elegans is laser-mediated cutting, or axotomy. During axotomy, a fluorescently-labeled neuronal process is severed using high-energy pulses. Initially, neuronal regeneration in C. elegans was examined using an amplified femtosecond laser5. However, subsequent regeneration studies have shown that a conventional pulsed laser can be used to accurately sever neurons in vivo and elicit a similar regenerative response1,3,7.
We present a protocol for performing in vivo laser axotomy in the worm using a MicroPoint pulsed laser, a turnkey system that is readily available and that has been widely used for targeted cell ablation. We describe aligning the laser, mounting the worms, cutting specific neurons, and assessing subsequent regeneration. The system provides the ability to cut large numbers of neurons in multiple worms during one experiment. Thus, laser axotomy as described herein is an efficient system for initiating and analyzing the process of regeneration.

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

A protocol to cut neurons in C. elegans with a MicroPoint pulsed laser is presented. We describe setting up the system, immobilizing worms, and severing labeled neurons. Advantages include a relatively low-cost system and the ability to sever neuronal processes or ablate cells in vivo.

C in vivo Lazer Axotomy elegans

Neurons communicate with other cells via axons and dendrites, slender membrane extensions that contain pre- or post-synaptic specializations. If a neuron ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from individual neurons are critical for understanding how neural circuits function under natural conditions. Traditionally, these recordings have been performed 'blind', meaning the identity of the recorded cell is unknown at the start of the recording. Cellular identity can be subsequently determined via intracellular1, juxtacellular2 or loose-patch3 iontophoresis of dye, but these recordings cannot be pre-targeted to specific neurons in regions with functionally heterogeneous cell types. Fluorescent proteins can be expressed in a cell-type specific manner permitting visually-guided single-cell electrophysiology4-6. However, there are many model systems for which these genetic tools are not available. Even in genetically accessible model systems, the desired promoter may be unknown or genetically homogenous neurons may have varying projection patterns. Similarly, viral vectors have been used to label specific subgroups of projection neurons7, but use of this method is limited by toxicity and lack of trans-synaptic specificity. Thus, additional techniques that offer specific pre-visualization to record from identified single neurons in vivo are needed. Pre-visualization of the target neuron is particularly useful for challenging recording conditions, for which classical single-cell recordings are often prohibitively difficult8-11. The novel technique described in this paper uses retrograde transport of a fluorescent dye applied using tungsten needles to rapidly and selectively label a specific subset of cells within a particular brain region based on their unique axonal projections, thereby providing a visual cue to obtain targeted electrophysiological recordings from identified neurons in an intact circuit within a vertebrate CNS.
The most significant novel advancement of our method is the use of fluorescent labeling to target specific cell types in a non-genetically accessible model system. Weakly electric fish are an excellent model system for studying neural circuits in awake, behaving animals12. We utilized this technique to study sensory processing by "small cells" in the anterior exterolateral nucleus (ELa) of weakly electric mormyrid fish. "Small cells" are hypothesized to be time comparator neurons important for detecting submillisecond differences in the arrival times of presynaptic spikes13. However, anatomical features such as dense myelin, engulfing synapses, and small cell bodies have made it extremely difficult to record from these cells using traditional methods11, 14. Here we demonstrate that our novel method selectively labels these cells in 28% of preparations, allowing for reliable, robust recordings and characterization of responses to electrosensory stimulation.

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde transport of fluorescent dye labels a sub-population of neurons based on anatomical projection. Labeled axons can be visually targeted in vivo, permitting extracellular recording from identified axons. This technique facilitates recording when neurons cannot be labeled through genetic manipulation or are difficult to isolate using 'blind' in vivo approaches.

Retrograd Floresan Etiketleme Belirlenen Nöronlar gelen Hedefli Hücre dışı Tek ünitesi Kayıt izin verir<em&gt; In vivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains technically challenging. One approach, Activation-Induced Manganese-enhanced MRI (AIM MRI), has been used successfully to map neuronal activity in rodents 1-5. In AIM MRI, Mn2+ acts a calcium analog and accumulates in depolarized neurons 6,7. Because Mn2+ shortens the T1 tissue property, regions of elevated neuronal activity will enhance in MRI. Furthermore, Mn2+ clears slowly from the activated regions; therefore, stimulation can be performed outside the magnet prior to imaging, enabling greater experimental flexibility. However, because Mn2+ does not readily cross the blood-brain barrier (BBB), the need to open the BBB has limited the use of AIM MRI, especially in mice.
One tool for opening the BBB is ultrasound. Though potentially damaging, if ultrasound is administered in combination with gas-filled microbubbles (i.e., ultrasound contrast agents), the acoustic pressure required for BBB opening is considerably lower. This combination of ultrasound and microbubbles can be used to reliably open the BBB without causing tissue damage 8-11.
Here, a method is presented for performing AIM MRI by using microbubbles and ultrasound to open the BBB. After an intravenous injection of perflutren microbubbles, an unfocused pulsed ultrasound beam is applied to the shaved mouse head for 3 minutes. For simplicity, we refer to this technique of BBB Opening with Microbubbles and UltraSound as BOMUS 12. Using BOMUS to open the BBB throughout both cerebral hemispheres, manganese is administered to the whole mouse brain. After experimental stimulation of the lightly sedated mice, AIM MRI is used to map the neuronal response.
To demonstrate this approach, herein BOMUS and AIM MRI are used to map unilateral mechanical stimulation of the vibrissae in lightly sedated mice 13. Because BOMUS can open the BBB throughout both hemispheres, the unstimulated side of the brain is used to control for nonspecific background stimulation. The resultant 3D activation map agrees well with published representations of the vibrissae regions of the barrel field cortex 14. The ultrasonic opening of the BBB is fast, noninvasive, and reversible; and thus this approach is suitable for high-throughput and/or longitudinal studies in awake mice.

A technique is described for broadly opening the blood-brain barrier in the mouse using microbubbles and ultrasound. Using this technique, manganese can be administered to the mouse brain. Because manganese is an MRI contrast agent that accumulates in depolarized neurons, this approach enables imaging of neuronal activity.

Ultrasonik Kan-beyin bariyeri bozulması ve Manganez kontrastlı MRG kullanma İşlevsel beyin görüntüleme

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs through activation of their ion channels and neurotransmitter receptors, and process information in part through activity-dependent release of gliotransmitters. Furthermore, astrocytes constitute the main uptake system for glutamate, contribute to potassium spatial buffering, as well as to GABA clearance. These cells therefore constantly monitor synaptic activity, and are thereby sensitive indicators for alterations in synaptically-released glutamate, GABA and extracellular potassium levels. Additionally, alterations in astroglial uptake activity or buffering capacity can have severe effects on neuronal functions, and might be overlooked when characterizing physiopathological situations or knockout mice. Dual recording of neuronal and astroglial activities is therefore an important method to study alterations in synaptic strength associated to concomitant changes in astroglial uptake and buffering capacities. Here we describe how to prepare hippocampal slices, how to identify stratum radiatum astrocytes, and how to record simultaneously neuronal and astroglial electrophysiological responses. Furthermore, we describe how to isolate pharmacologically the synaptically-evoked astroglial currents.

The preparation of acute brain slices from isolated hippocampi, as well as the simultaneous electrophysiological recordings of astrocytes and neurons in stratum radiatum during stimulation of schaffer collaterals is described. The pharmacological isolation of astroglial potassium and glutamate transporter currents is demonstrated.

Akut Hipokampal Dilimler içinde Synaptically-uyarılmış astroglial ve Nöronal Cevaplarının İkili Elektrofizyolojik Kayıtlar

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety of brain disorders1,2. To better understand the mechanisms by which brain circuits react to an animal's experience requires the ability to monitor the experience-dependent molecular changes in a given set of neurons, over a prolonged period of time, in the live animal. While experience and associated neural activity is known to trigger gene expression changes in neurons1,2, most of the methods to detect such changes do not allow repeated observation of the same neurons over multiple days or do not have sufficient resolution to observe individual neurons3,4. Here, we describe a method that combines in vivo two-photon microscopy with a genetically encoded fluorescent reporter to track experience-dependent gene expression changes in individual cortical neurons over the course of day-to-day experience. 
One of the well-established experience-dependent genes is Activity-regulated cytoskeletal associated protein (Arc)5,6. The transcription of Arc is rapidly and highly induced by intensified neuronal activity3, and its protein product regulates the endocytosis of glutamate receptors and long-term synaptic plasticity7. The expression of Arc has been widely used as a molecular marker to map neuronal circuits involved in specific behaviors3. In most of those studies, Arc expression was detected by in situ hybridization or immunohistochemistry in fixed brain sections. Although those methods revealed that the expression of Arc was localized to a subset of excitatory neurons after behavioral experience, how the cellular patterns of Arc expression might change with multiple episodes of repeated or distinctive experiences over days was not investigated. 
In vivo two-photon microscopy offers a powerful way to examine experience-dependent cellular changes in the living brain8,9. To enable the examination of Arc expression in live neurons by two-photon microscopy, we previously generated a knock-in mouse line in which a GFP reporter is placed under the control of the endogenous Arc promoter10. This protocol describes the surgical preparations and imaging procedures for tracking experience-dependent Arc-GFP expression patterns in neuronal ensembles in the live animal. In this method, chronic cranial windows were first implanted in Arc-GFP mice over the cortical regions of interest. Those animals were then repeatedly imaged by two-photon microscopy after desired behavioral paradigms over the course of several days. This method may be generally applicable to animals carrying other fluorescent reporters of experience-dependent molecular changes4.

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Experience-dependent molecular changes in neurons are essential for the brain's ability to adapt in response to behavioral challenges. An in vivo two-photon imaging method is described here that allows the tracking of such molecular changes in individual cortical neurons through genetically encoded reporters.

Kortikal Nöronlar In Vivo İki foton Of Görüntüleme Deneyimi bağımlı Moleküler Değişiklikler

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first neural circuit in the AOS pathway, called the accessory olfactory bulb (AOB), plays an important role in establishing sex-typical behaviors such as territorial aggression and mating. This small (&#60;1 mm3) circuit possesses the capacity to distinguish unique behavioral states, such as sex, strain, and stress from chemosensory cues in the secretions and excretions of conspecifics. While the compact organization of this system presents unique opportunities for recording from large portions of the circuit simultaneously, investigation of sensory processing in the AOB remains challenging, largely due to its experimentally disadvantageous location in the brain. Here, we demonstrate a multi-stage dissection that removes the intact AOB inside a single hemisphere of the anterior mouse skull, leaving connections to both the peripheral vomeronasal sensory neurons (VSNs) and local neuronal circuitry intact. The procedure exposes the AOB surface to direct visual inspection, facilitating electrophysiological and optical recordings from AOB circuit elements in the absence of anesthetics. Upon inserting a thin cannula into the vomeronasal organ (VNO), which houses the VSNs, one can directly expose the periphery to social odors and pheromones while recording downstream activity in the AOB. This procedure enables controlled inquiries into AOS information processing, which can shed light on mechanisms linking pheromone exposure to changes in behavior.

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory bulb (AOB) has been difficult to study in the context of sensory coding. Here, we demonstrate a dissection that produces an ex vivo preparation in which AOB neurons remain functionally connected to their peripheral inputs, facilitating research into information processing of mouse pheromones and kairomones.

Bozulmamış Vomeronasal Organ ve Aksesuar Koku Ampul Ex Vivo Hazırlıklar

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

Fareler Soğuk Hassasiyeti ve Uyum belirlenmesi için Basit ve ucuz Yöntem

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise from extra-retinal sources. Ex vivo ERG provides an efficient method to dissect the function of retinal cells directly from an intact isolated retina of animals or donor eyes. In addition, ex vivo ERG can be used to test the efficacy and safety of potential therapeutic agents on retina tissue from animals or humans. We show here how commercially available in vivo ERG systems can be used to conduct ex vivo ERG recordings from isolated mouse retinas. We combine the light stimulation, electronic and heating units of a standard in vivo system with custom-designed specimen holder, gravity-controlled perfusion system and electromagnetic noise shielding to record low-noise ex vivo ERG signals simultaneously from two retinas with the acquisition software included in commercial in vivo systems. Further, we demonstrate how to use this method in combination with pharmacological treatments that remove specific ERG components in order to dissect the function of certain retinal cell types.

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Ex vivo ERG can be used to record electrical activity of retinal cells directly from isolated intact retinas of animals or humans. We demonstrate here how common in vivo ERG systems can be adapted for ex vivo ERG recordings in order to dissect the electrical activity of retinal cells.

Eşzamanlı<em&gt; Ex vivo</emİki retina&gt; Fonksiyonel Test tarafından<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogram Sistemi

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Construction of Cell-based Neurotransmitter Fluorescent Engineered Reporters (CNiFERs) for Optical Detection of Neurotransmitters In Vivo

Cell-based neurotransmitter fluorescent engineered reporters (CNiFERs) provide a new tool for neuroscientists to optically detect the release of neurotransmitters in the brain in vivo. A specific CNiFER is created from a human embryonic kidney cell that stably expresses a specific G protein-coupled receptor, which couples to Gq/11 G proteins, and a FRET-based Ca2+-detector, TN-XXL. Activation of the receptor leads to an increase in the FRET signal. CNiFERs have nM sensitivity and a temporal response of seconds because a CNiFER clone utilizes the native receptor for a particular neurotransmitter, e.g., D2R for dopamine. CNiFERs are directly implanted into the brain, enabling them to sense neurotransmitter release with a spatial resolution of less than one hundred &#181;m, making them ideal to measure volume transmission in vivo. CNiFERs can also be used to screen other drugs for potential cross-reactivity in vivo. We recently expanded the family of CNiFERs to include GPCRs that couple to Gi/o G proteins. CNiFERs are available for detecting acetylcholine (ACh), dopamine (DA) and norepinephrine (NE). Given that any GPCR can be used to create a novel CNiFER and that there are approximately 800 GPCRs in the human genome, we describe here the general procedure to design, realize, and test any type of CNiFER.

Construction of Cell-based Neurotransmitter Fluorescent Engineered Reporters CNiFERs for Optical Detection of Neurotransmitters In Vivo

We present a protocol to create cell-based neurotransmitter fluorescent engineered reporters (CNiFERs) for the optical detection of volumetric neurotransmitter release.