Biz bu prosedürün geliştirilmesinde teknik yardım ve uzmanlık için Dr Robert S. Kerbel (Toronto Üniversitesi, Sunnybrook Araştırma Enstitüsü, Toronto, Kanada) ve laboratuara minnettarız. Biz de Dr Sandra Sexton ve Laboratuar Hayvan Kaynakları Roswell Park Kanser Enstitüsü Bölümü&#39;ne teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma (JMLE için) Roswell Park Alliance Vakfı bir ödül tarafından desteklenmiştir.

1.. Ortotopik Böbrek Tümör İmplantasyonu <ol><li> Hücre Kültürü <ol><li> Önce kadavradan implantasyon için,% 75 confluency bir tek tabaka olarak fare renca LUC hücreleri büyür. </li><li> % 5 FBS ihtiva eden ortam, 1000 rpm&#39;de santrifüj hücreler, 5 dakika boyunca 4 ° C&#39;de, PBS içinde yıkamak için 3 kez tekrar, tripsinizasyon ve yeniden süspansiyona alınmasından sonra. Daha sonra, 5 x 10 4 renca LUC / 5 ul serum içermeyen ortam içinde bir konsantrasyona serumsuz ortam içinde tekrar süspansiyon hücreleri. Not: varyant veya kullanılan hücre çizgisi bağlı olarak hücreler, implantasyondan sonra oldukça agresif fare hücre büyümesini ve yayılmasını yavaş matrigel ve serum barındırmayan ortam içinde bir 1:1 oranında yeniden süspanse edilebilir. </li></ol></li><li> Cerrahi ve hücre implantasyonu Not: Tüm hayvan çalışmaları, bir Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) p uygun olarak gerçekleştirildi, deneysel son nokta bakım ve belirlenmesi de dahil olmak üzere, burada tarifotokol Roswell Park Kanser Enstitüsü tarafından onaylanmıştır. <ol><li> Izofluran (% 2-3) kullanılarak, bir Balb / C fare anestezisi. Ayak tutam ve yeterli anesthetization sağlamak refleksi kontrol edin. Kurumasını önlemek için gözlere veteriner merhem sürün. Sağ lateral pozisyonda fare yerleştirin ve ön ve hind-bacak arasında sol tarafını tıraş. Aseptik kesi alanı hazırlamak için dorsal lomber bölge boyunca alkol ve iyot uygulayın. </li><li> Son kaburga ve kalça eklem arasında uzunlamasına yönde bir 1 cm cilt insizyonu başlatmak için cerrahi makas kullanın. Bir künt diseksiyon makas kullanarak deri altında bağ dokusu gevşetin. Karın duvarında uzunlamasına yönde 0.5 cm kesi yapmak için cerrahi makas kullanın. Hafifçe açık yara etrafında aşağı itmek için kavisli bir forseps kullanın - bu böbrek exteriorize ve enjeksiyon öncesinde organ nazik immobilizasyonu için izin verecektir. </li><li> Hazırlanan hücre karışımı ile 5 ul Hamilton şırıngası yerleştirin. Sub-kapsül implantasyonu içinsürgünler, implantasyon iki yöntem kullanılabilir: <ol><li> Yüzeysel: eğimli kenar up ile böbrek kapsülü altında uzunlamasına odaklı böbrek, insert iğneye (ama parankimi yukarıda) paralel yayınlanıyor. Iğne yerleştirildikten sonra, küçük beyaz kabarcık formları kadar tüm hücreleri enjekte. Yavaş yavaş kapsül iğne çıkarılır ve derhal sızıntıyı emer ve hücre yayılmasını önlemek için steril pamuk uçlu bir aplikatör ile enjeksiyon üzerinde leke. </li><li> Dahili: iğne görünür (ama delinmesiyle değil) kadar eğimli kenar up ve son implantasyon sitesine böbrek karşısında yanından başlayan, böbreğin iç kısmından alt kapsül boşluk iğne takın. Beyaz kabarcık formları ve sürüntü enjeksiyon sitesi herhangi bir sızıntıyı önlemek için kadar tüm hücreleri enjekte edilir. </li></ol></li><li> Yavaşça vücut boşluğuna böbrek dönmek. Emilebilir 5-0 Vicryl dikiş kullanılarak karın vücut duvarı kapatın. Tamamlandığında, birlikte deri tabakası çekin ve w 2-3 koyunklipleri ound. Sağlamak klipleri sağlam ve eşit hiçbir yara pozlama sağlamak için aralıklı vardır. Önceki iyileşme için% 0.9 NaCl 500 ul ve deri altından, bir 25 G iğne kullanılarak Buprenorfin (0.01 mg / ml) 100 ul yönetmek. Rutin klip yerleştirme ve istikrar izlemek, ve 10 gün sonra kaldırın. </li></ol></li></ol> 2.. Nefrektomi / İlköğretim Tümör Temizleme <ol><li> Bölme (yukarıda) 1.2.1 ve 1.2.2 &#39;de tarif edildiği gibi fare Anestezi, hareketsizleştirme, kazıma, ve böbrek maruz için aynı protokol takip edin. </li><li> Yavaşça kuyruk ucundan bağlantı yağ dokusu ve böbrek kranial ucundan adrenal bezi kaldırarak böbrek izole etmek için forseps ikinci bir çift kullanın. Yavaşça böbrek tutmakta iken, bir üreter etrafında çift düğüm, renal arter ve ven yapmak için emilebilir 5-0 vicryl kullanın. Yavaş yavaş, güvenli ve daha sonra böbrek kaldırmak için düğüm yukarıdaki kesti. Hemen kan kaybı, ya da orada herhangi bir işaret yetersiz beklemeye riski iseüreter, arter ve ven sütür, sonra düğüm yukarıda kesmek için makas yerine cauterizer kullanın. </li><li> Böbrek çıkarıldıktan sonra, bağlı arterden herhangi bir kanama açısından dikkatle kontrol edin ve gerekirse cauterizer kullanın. 5-0 Vicryl kullanılarak abdominal gövde duvarını kapatın. Birlikte deri tabakası çekin ve 1.2.4 de tarif edildiği gibi, aşağıdaki önlemleri 2-3 yara klipleri yerleştirin. Yakından kanama sıkıntı belirtileri, ya da sınırlı hareketlilik cerrahisini takiben günlük hayvan izlemek. Güvenle hayvan için kurumsal yönergeleri izleyin. </li></ol> 3.. Endpoint de Metastatik Gelişmesini ve Yerelleştirme İzleme <ol><li> Metastatik hastalık ölçümü: biyoluminesen izleme <ol><li> Daha önce lusiferaz ile transfekte hücreler kullanılarak metastazı, izleme ve görüntüleme sistemi, Xenogen IVIS 11,12 kullanılarak nicelleştirilmiştir için Jüpiter açıklanan metodoloji bakınız. </li></ol></li><li> Metastatik dağılımını karşılaştırmalı değerlendirilmesi için görsel otopsi kılavuzution <ol><li> Vs sıkıntı belirtileri, zor nefes alma, kilo kaybı, gibi noktalar kullanılarak kurumsal kurallarına göre hayvanların Kurban Not: spontan metastatik hastalık son derece değişken ve hızlı olabilir gibi hayvanların yakın takibi önemlidir. </li><li> Alt çene için göğüs boşluğuna kadar devam üretranın üzerinde bir kesi başlatmak için cerrahi makas kullanın. Karın duvarının kas cilt ayırmak için kör uçlu makas kullanın. </li><li> Kollar ve bacaklar boyunca kesiler başlatın. Peel cilt uzakta. Yakından cilt fasya ve nodüller için karın duvarı incelemek, daha sonra yüzeysel lenf düğümleri: inguinal, brakiyal, aksiller ve yüzeysel servikal. </li><li> Karın duvarında bir kesi yapmak ve diyaframa kadar sağ ve sol yan kenarlarında kesilmiş. Bir yatay kesim ile iç organları çıplak karın duvarının ön kısmını kaldırın. </li><li> Iç organlar f rahatsız görünümünü inceleyinya fena halde önemli tümörler. Ayrıca, mide ve bağırsak içeriklerini not edin; onlar boş olup olmadığını, fare yemek mümkün olmayabilir. Içeriği karanlık ise, bu üst / alt gastrointestinal sistem kanaması kanıt gösterebilir. </li><li> Görsel olarak, her fare grubu için toplam puan tayin, tümör varlığında ya da yokluğunda her bir organ skoru (grup başına 4 hayvan Şekil 1D-i de örnek olarak kullanılmıştır.) Notlar: 1), lenf nodu büyümesi mutlaka bir tümör büyümesi olduğu anlamına gelmez; Bu, büyük ölçüde boyutlu, çok sağlam ve bir beyazımsı renkli ise, büyük olasılıkla bir metastatik nodül olduğunu. 2) Karında aşırı sütlü veya bulanık sıvı assit gösterir. Asit, özellikle karaciğer ve mide lob arasındaki karın organları üzerinde katı madde birikimleri içerebilir. 3) gibi akciğer gibi organlar için, birden fazla nodül (örneğin 13 bakınız) mevcut ve bireysel hayvanlar arasındaki karşılaştırmalar için sayılır olabilir. </li><li> Dikkatli bir fışkırtma şişeden çıkarmadan ve PBS ile yıkama yoluyla karaciğer, dalak, böbrekler ve pankreas: Bireysel karın organlarının brüt tümörler veya anormallikleri tespit. </li><li> Karın organları çıkarıldıktan sonra, lomber, sakral, renal ve mezenterik lenf nodu dahil abdominal lenf düğümleri, inceleyin. </li><li> Metastatik yayılım delil diyafram değerlendirin. Not: diyafram geniş yaymak yorucu veya nefes kaybı yol açan, onun kasılma kaybetmesine neden olabilir. </li><li> Diyaframı çıkarın ve akciğer ve kalp maruz ön kısmını kaldırarak, göğüs boşluğunda iki yanal kesiler yapmak. </li><li> Nazikçe tutup kaldırma yemek borusu ve kalp üzerinde trakea keserek akciğer ve kalp çıkarın. Nodüller için dokuları değerlendirin. Kalbini sıkıştırın. Yaylı tutarlılık eksikliği tümör mevcut gösterebilir. </li><li> Kafatası ile doğrusal olarak kesmek için, cerrahi makas kullanın. Yavaşça t kadar kafatası küçük parçalarını çıkartıno bütün beyin maruz kalmaktadır. Görünür nodül veya anormallikleri renklenmeler için beyin boyunca bakın. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics.">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li><li>Souza, B. M., Chaves, K. B., Chammas, R., Schor, N., Bellini, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endostatin+neoadjuvant+gene+therapy+extends+survival+in+an+orthotopic+metastatic+mouse+model+of+renal+cell+carcinoma.">Endostatin neoadjuvant gene therapy extends survival in an orthotopic metastatic mouse model of renal cell carcinoma.</a> Biomed. Pharmacother. 66, 237-241 (2012).</li><li>Amagai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+of+interleukin-2+and+sorafenib+improves+survival+benefits+and+prevents+spontaneous+pulmonary+metastasis+in+murine+renal+cell+carcinoma+models.">Combination therapy of interleukin-2 and sorafenib improves survival benefits and prevents spontaneous pulmonary metastasis in murine renal cell carcinoma models.</a> Jpn. J. Clin. Oncol. 40, 503-507 (2010).</li><li>Steeg, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+Drug+Development+Must+Consider+the+Impact+on+Metastasis.">Preclinical Drug Development Must Consider the Impact on Metastasis.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4529-4530 (2009).</li><li>Guerin, E., Man, S., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+postsurgical+advanced+metastatic+breast+cancer+more+accurately+replicates+the+clinical+efficacy+of+antiangiogenic+drugs.">A model of postsurgical advanced metastatic breast cancer more accurately replicates the clinical efficacy of antiangiogenic drugs.</a> Cancer Res. 73, 2743-2748 (2013).</li><li>Day, C. P., Carter, J., Bonomi, C., Hollingshead, M., Merlino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+therapeutic+response+of+residual+metastatic+disease+is+distinct+from+its+primary+tumor+of+origin.">Preclinical therapeutic response of residual metastatic disease is distinct from its primary tumor of origin.</a> Int. J. Cancer. 130, 190-199 (2012).</li><li>Ebos, J. M., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenic+therapy:+impact+on+invasion,+disease+progression,+and+metastasis.">Antiangiogenic therapy: impact on invasion, disease progression, and metastasis.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 210-221 (2011).</li><li>Naito, S., Walker, S. M., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+selection+of+human+renal+cell+carcinoma+cells+with+high+metastatic+potential+in+nude+mice.">In vivo selection of human renal cell carcinoma cells with high metastatic potential in nude mice.</a> Clin. Exp. Metastasis. 7, 381-389 (1989).</li><li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+implantation+in+essential+for+the+selection,+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice.">Orthotopic implantation in essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 9, 145-165 (1990).</li><li>Saiki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+invasive+and+metastatic+phenotype+in+human+renal+cell+carcinoma.">Characterization of the invasive and metastatic phenotype in human renal cell carcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 9, 551-566 (1991).</li><li>Mohanty, S., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+assay.">Experimental metastasis assay.</a> J. Vis. Exp. 42 (1942), (2010).</li><li>Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+serous+ovarian+cancer+in+immunocompetent+mice+for+in+vivo+tumor+imaging+and+monitoring+of+tumor+immune+responses.">An orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses.</a> J. Vis. Exp. (45), (2010).</li><li>Ebos, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+metastasis+after+short-term+treatment+with+a+potent+inhibitor+of+tumor+angiogenesis.">Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis.</a> Cancer Cell. 15, 232-239 (2009).</li><li>Yang, O. C., Maxwell, P. H., Pollard, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+cell+carcinoma:+translational+aspects+of+metabolism+and+therapeutic+consequences.">Renal cell carcinoma: translational aspects of metabolism and therapeutic consequences.</a> Kidney Int. 84 (4), 667-681 (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu protokolün amacı, implantasyon / rezeksiyon teknikleri tanımlamak için bir sinjeneik tümör fare modeli kullanılarak klinik olarak ilgili spontan metastatik hastalık değerlendirmektir. Şu anda, yeni deneysel tedaviler değerlendiren klinik öncesi çalışmaların çoğunluğu metastatik hastalık çalışma dahil değildir ve sadece birkaç primer tümör büyümesi, cerrahi rezeksiyon ve nihai spontan metastatik yayılma aşamaları özetlemek. Bugüne kadar, genetiği fare modelleri (GEMMs) spontan renal ...

Renal hücreli karsinom (RCC) olan hastalarda mortalitenin önemli nedeni genellikle böbrek büyüyen bir primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması sonrası ortaya sistemik metastatik hastalıktır. Bununla birlikte, farelerde deneysel terapötik değerlendirilmesi, çok az klinik öncesi modellerde tümör metastatik hastalığı, ve daha az hala sadakatle lokalize bir büyüme, cerrahi ve spontan mikro metastatik başlaması ve ilerlemesi 1-3 klinik aşamaları özetlemek. Test Bu boşluk bazen hayvan modellerinde görülen çarpıcı bir anti-tümör etkileri her zaman hastaların 4 benzer başarılı tedavisi tercüme değil, yeni tedavilerin değerlendirilmesinde giderek daha önemli hale gelmiştir. Sonuçlarında tür farklılıklar lokalize ektopik veya kadavradan primer tümör modelleri ve geç evre metastatik hastalık 5-7 arasında ayırıcı ilaç etkilerlere kaynaklanıyor olabilir. RCC durumunda, sadece bir kaç çalışma kurulmuş istihdam var, birgenellikle tümör taşıyan böbrekleri vardı taklit eden hastalar tamamen veya kısmen 2,3 kaldırıldı spontan tekrarlayan hastalığı vardır Nimal protokolleri. Fare modeli test Bu eksiklik için nedenleri değişir. İlk olarak, yüksek maliyet ve hayvan tümör hücre seçimi ve metastaz potansiyeli doğal değişkenlik vardır. (Örneğin, bir insan hücre hattı türetme 8-10 açıklamasına bakınız), örneğin, insan böbrek hücre çizgileri nadiren metastaz eğilimindedir ve ortotopik primer implantasyon ve sürekli olarak yaymak ve uzak bir lezyon meydana türevlerini elde etmek için metastatik seçimi birden fazla tur seçilmelidir . Tersine, bağışıklığı yeterli bir model fare hücreleri agresif olarak davranma eğilimi gösterirler, ve düşük hücre sayıları hemen sistemik yayılmasını 3 azaltmak için Matrigel ile enjekte edilmelidir. İkincisi, teknik doğru implantasyonu, cerrahi rezeksiyon (nefrektomi) performans ve izleme güçlüğü (ve miktarlarının ayarlanması) spontan metastatic büyüme zor olabilir ve (ayrıntılar için Tartışma) Bu tekniğin uygulanması sırasında birçok kritik değişkenler dikkate gerekir. Bu protokolün amacı ortotopik implantasyon, rezeksiyon (nefrektomi), ve spontan metastatik RCC hastalığın izlenmesi temel adımları (yanı sıra potansiyel tuzaklar) tanımlamak ve standart (ve daha yaygın) için bir rehber sunmak için bilimsel laboratuvarlar arasında kullanmaktır Bu deneysel terapötik etkinliğini değerlendirmek.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="830">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">DMEM-high glucose with Pyr. And L-Glutamine</td>
			<td style="width:147px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">10-013-CV</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">FBS</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">0.25% Trypsin EDTA</td>
			<td style="width:147px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">25-053-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">1x DPBS without Calcium &#38; Magnesium</td>
			<td style="width:147px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Matrigel</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">354234</td>
			<td>must be kept on ice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Artifical tears-lubricant opthalmic ointment</td>
			<td style="width:147px;">Akorn Animal Health</td>
			<td style="width:119px;">17478-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Pocket pro pet trimmer</td>
			<td style="width:147px;">Braintree scientific</td>
			<td style="width:119px;">CLP9931B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:397px;">Alcohol swab</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Betadine solution swab</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">67618-152-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MICRO DISSECTING sissors straight,blunt - 25mm blades - 4.5&#34;&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Southpointe surgical</td>
			<td style="width:119px;">RS-5982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Iris Forceps, serrated, curved, 10cm long</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS15915</td>
			<td>need two of these</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">10&#181;l Hamilton syringe</td>
			<td style="width:147px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">7635-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">30G, 45 degree, RN needle</td>
			<td style="width:147px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">7803-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:397px;">Sterile cotton tipped appicator</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10805-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">High temperature cautery kit</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">5-0 coated Vicryl, conventional cutting needle&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">J834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Reflex clip applier for 7mm clips</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Reflex clips, 7mm, non-sterile</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Removing forceps, 12cm lone</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500347</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">0.9% Sodium Chloride</td>
			<td style="width:147px;">Baxter Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">2B1322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Buprenorphine 0.01mg/mL</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">25G 5/8&#34; needle</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BD305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">1mL syringe w/out needle</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BD309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">D-Luciferin</td>
			<td style="width:147px;">Gold Bio technology</td>
			<td style="width:119px;">LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling spontaneous metastatic renal cell carcinoma (mrcc) in mice following nephrectomy

Renal hücreli karsinom (RCC) yeni deneysel tedavilerin gelişmiş test için önemli zorluklardan biri sadakatle erken ve geç evre metastatik hastalık ilerlemesini özetlemek modellerinin geliştirilmesidir. Tipik tümör implantasyonu modelleri ektopik veya kadavradan primer tümör implantasyonu kullanmak, ancak birkaç klinik ayarını taklit sistemik spontan metastatik hastalığı vardır. Bu protokol RCC hastalığın ilerlemesi hastalara benzer aşamaları geliştirmek için önemli adımlar açıklanır. İlk olarak, ortotopik tümör hücre implantasyonu göstermek için bir genetik olarak özdeş bir modelde yüksek düzeyde metastatik fare tümör hücre hattı kullanır. Yöntem sızıntı ve erken yayılmasını önlemek için Matrigel ile birlikte hücreler ile alt kapsül boşluğa yüzeysel ve iç implantasyonu içerir. Sonraki kritik öncesi ve ameliyat sonrası bakım ile fare, tümör taşıyan böbrek (nefrektomi) eksizyonu için prosedürler açıklanmaktadır. Son olarak, izlemek ve değerlendirmek için gerekli adımları özetliyorMikro-ve de biyolüminesens görüntüleme dahil olmak üzere makro-metastatik hastalık ilerlemesi, sistemik hastalık dağılımı puan için ayrıntılı görsel otopsi kılavuzu sağlar. Bu protokol açıklamanın amacı, gelecekteki tedavi test öngörü değerini artırmak için klinik olarak ilgili metastatik RCC modelleri yaygın kullanımını kolaylaştırmaktır.

Şekil 1A, bu protokol, özetle detaylı olarak açıklanan yöntemi gösteren bir şematik göstermektedir. Birçok önemli faktör, her adım için kabul edilmelidir. Örneğin, basamak 1&#39;de bu böbrek içine alt kapsül tümör hücre implantasyonu için iki yöntem gösterilmektedir. Tümör hücreleri iğne dikkatli çıkarılması ve swabbing fazla kaçan sıvı (Şekil 1B-i) ile önlenir sızıntı ile hücrelerin lokalize yerleşimini teyit küçük beyaz kabarcık ile alt k...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy at JoVE.com

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Spontan metastatik renal hücre karsinomu (RCC), hastalığın ilerlemesine modelleri klinik olarak anlamlı bir ortamda tedavi değerlendirmek için de kullanılabilir. Bu protokol, kadavradan böbrek tümör hücre implantasyonu, uygun nefrektomi için farklı prosedürler gösterir ve nihayet metastatik yükü ve lokalizasyon görsel ve biyolüminesens puanlama için bir otopsi rehber özetliyor.

Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

modeling-spontaneous-metastatic-renal-cell-carcinoma-mrcc-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

16.4K Görüntüleme.  Roswell Park Cancer Institute.  Spontan metastatik renal hücre karsinomu (RCC), hastalığın ilerlemesine modelleri klinik olarak anlamlı bir ortamda tedavi değerlendirmek için de kullanılabilir. Bu protokol, kadavradan böbrek tümör hücre implantasyonu, uygun nefrektomi için farklı prosedürler gösterir ve nihayet metastatik yükü ve lokalizasyon görsel ve biyolüminesens puanlama için bir otopsi rehber özetliyor. 

Video: Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Single Port Donor Nephrectomy

In 2007, Rane presented the first single port nephrectomy for a small non-functioning kidney at the World Congress of Endourology. Since that time, the use of single port surgery for nephrectomy has expanded to include donor nephrectomy. Over the next two years the technique was adopted for many others types of nephrectomies to include donor nephrectomy. We present our technique for single port donor nephrectomy using the Gelpoint device. We have successfully performed this surgery in over 100 patients and add this experience to our experience of over 1000 laparoscopic nephrectomies. With the proper equipment and technique, single port donor nephrectomy can be performed safely and effectively in the majority of live donors. We have found that our operative times and most importantly our transplant outcomes have not changed significantly with the adoption of the single port donor nephrectomy. We believe that single port donor nephrectomy represents a step forward in the care of living donors.

Single port laparoscopic surgery is changing the standard of care in surgical care like nothing since the laparoscopic technique was introduced 20 years ago. We present out technique of single port donor nephrectomy using the Gelpoint device. We have successfully performed this surgery in 100 patients.

Tek Port Donör nefrektomi

In 2007, Rane presented the first single port nephrectomy for a small non-functioning kidney at the World Congress of Endourology.  Since that time, the ...

Tıp

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular through transplantation of stromal cells and epithelial cells in the mammary gland of mice. Current transplantation models often involve the use of immunocompromised mice due to the different genetic backgrounds of stromal cells and epithelial cells. Extracellular matrices are often used to embed the two different cell types for consistent cell-cell interactions, but involve the use of Matrigel or rat tail collagen, which are immunogenic substrates. The lack of functional T cells from immunocompromised mice prevents accurate assessment of stromal cells on mammary tumor progression in vivo, with important implications on drug development and efficacy. Moreover, immunocompromised mice are costly, hard to breed and require special care conditions. To overcome these obstacles, we have developed an approach to orthotopically transplant stromal cell and epithelial cells into mice from the same genetic background to induce consistent tumor formation. This system involves harvesting normal, carcinoma associated fibroblasts, PyVmT mammary carcinoma cells and collagen from donor C57BL/6J mice. The cells are then embedded in collagen and transplanted in the inguinal mammary glands of female C57BL/6J mice. Transplantation of PyVmT cells alone form palpable tumors 30-40 days post transplantation. Endpoint analysis at 60 days indicates that co-transplantation with fibroblasts enhances mammary tumor growth compared to PyVmT cells transplanted alone. While cells and matrix from C57BL/6J mice were used in these studies, the isolation of cells and matrix and transplantation approach may be applied towards mice from different genetic backgrounds demonstrating versatility. In summary, this system may be used to investigate molecular interactions between stromal cells and epithelial cells, and overcomes critical limitations in immunocompromised mouse models.

In this report, we demonstrate a system to isolate and culture donor cells from the mouse mammary gland, and orthotopically transplant these cells in recipient mice to analyze stromal: epithelial interactions during mammary tumor development.

C57BL/6J Fare Stromal Cells ve Karsinomu Hücreler Meme Nakli

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related hospitalizations and for which no effective treatments are available to date1,2. Because of the heterogeneity of ICH in humans, various preclinical models are needed to thoroughly explore prospective therapeutic strategies3. Experimental ICH is commonly induced in rodents by intraparenchymal injection of either autologous blood or bacterial collagenase4. The appropriate model is selected based on the pathophysiology of hemorrhage induction and injury progression. The blood injection model mimics a rapidly progressing hemorrhage. Alternatively, bacterial collagenase enzymatically disrupts the basal lamina of brain capillaries, causing an active bleed that generally evolves over several hours5. Resultant perihematomal edema and neurofunctional deficits can be quantified from both models. In this study, we described and evaluated a modified double injection model of autologous whole blood6 as well as an ICH injection model of bacterial collagenase7, both of which target the basal ganglia (corpus striatum) of male CD-1 mice. We assessed neurofunctional deficits and brain edema at 24 and 72 hr after ICH induction. Intrastriatal injection of autologous blood (30 &mu;l) or bacterial collagenase (0.075U) caused reproducible neurofunctional deficits in mice and significantly increased brain edema at 24 and 72 hr after surgery (p&lt;0.05). In conclusion, both models yield consistent hemorrhagic infarcts and represent basic methods for preclinical ICH research.

Clinically relevant animal models of intracerebral hemorrhage (ICH) are needed to extend our knowledge of hemorrhagic stroke and to examine novel therapeutic strategies. In this study, we describe and evaluate two ICH models that implement unilateral injections of either autologous whole blood or bacterial collagenase into the basal ganglia (corpus striatum) of mice.

Farelerde Modelleme İntraserebral Kanama: Otolog Kan veya bakteriyel kollajenaz Enjeksiyon

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate the human disease provide a valuable platform for research into disease pathophysiology and for the preclinical evaluation of novel therapies. We present a variety of methods to generate subcutaneous or orthotopic human HCC xenografts in immunodeficient mice that could be utilized in a variety of research applications. With a focus on the use of primary tumor tissue from patients undergoing surgical resection as a starting point, we describe the preparation of cell suspensions or tumor fragments for xenografting. We describe specific techniques to xenograft these tissues i) subcutaneously; or ii) intrahepatically, either by direct implantation of tumor cells or fragments into the liver, or indirectly by injection of cells into the mouse spleen. We also describe the use of partial resection of the native mouse liver at the time of xenografting as a strategy to induce a state of active liver regeneration in the recipient mouse that may facilitate the intrahepatic engraftment of primary human tumor cells. The expected results of these techniques are illustrated. The protocols described have been validated using primary human HCC samples and xenografts, which typically perform less robustly than the well-established human HCC cell lines that are widely used and frequently cited in the literature. In comparison with cell lines, we discuss factors which may contribute to the relatively low chance of primary HCC engraftment in xenotransplantation models and comment on technical issues that may influence the kinetics of xenograft growth. We also suggest methods that should be applied to ensure that xenografts obtained accurately resemble parent HCC tissues.

Human tumor xenografts in immunodeficient mice are valuable tools to study cancer biology. Specific protocols to generate subcutaneous and intrahepatic xenografts from human hepatocellular carcinoma cells or tumor fragments are described. Liver regeneration induced by partial hepatectomy in recipient mice is presented as a strategy to facilitate intrahepatic engraftment.

Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy and/or cytotoxic chemotherapy. To induce bladder cancer, C57BL/6 mice (MUC1.Tg and wild type) were treated orally with the carcinogen N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine (OH-BBN) at 3.0 mg/day, 5 days/week for 12 weeks. To assess the effects of OH-BBN on serum cytokine profile during tumor development, whole blood was collected via submandibular bleeds prior to treatment and every four weeks. In addition, a MUC1-targeted peptide vaccine and placebo were administered to groups of mice weekly for eight weeks. Multiplex fluorometric microbead immunoanalyses of serum cytokines during tumor development and following vaccination were performed. At termination, interferon gamma (IFN-&#947;)/interleukin-4 (IL-4) ELISpot analysis for MUC1 specific T-cell immune response and histopathological evaluations of tumor type and grade were performed. The results showed that: (1) the incidence of bladder cancer in both MUC1.Tg and wild type mice was 67%; (2) transitional cell carcinomas (TCC) developed at a 2:1 ratio compared to squamous cell carcinomas (SCC); (3) inflammatory cytokines increased with time during tumor development; and (4) administration of the peptide vaccine induces a Th1-polarized serum cytokine profile and a MUC1 specific T-cell response. All tumors in MUC1.Tg mice were positive for MUC1 expression, and half of all tumors in MUC1.Tg and wild type mice were invasive. In conclusion, using a team approach through the coordination of the efforts of pharmacologists, immunologists, pathologists and molecular biologists, we have developed an immune intact transgenic mouse model of bladder cancer that expresses hMUC1.

An N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine-induced bladder cancer model was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic mice for the purpose of testing MUC1-directed immunotherapy. After administering a MUC1-targeted peptide vaccine, a cytotoxic T lymphocyte response to MUC1 was confirmed by measuring serum cytokine levels and T-cell specific activity.

Bağışıklık Sağlam İnsan MUC1 Transgenik Farelerde İnvaziv Geçici Hücre Mesane Karsinomu indüksiyon: immünoterapi Kalkınma İçin Bir Model

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

Meme Kanseri Bir Roman Transgenik Fare Modeli: Adenovirüs-Kretasedekine ile epiteli Hedefleme ile Metastatik Meme Kanseri Başlatma

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and progress in this site. The model presented in the current report utilizes human primary bone marrow stromal cells and osteoblasts as two representative cell types from the marrow niche that influence tumor cell phenotype. The in vitro co-culture conditions described for human leukemic cells with these primary niche components support the generation of a chemoresistant subpopulation of tumor cells that can be efficiently recovered from culture for analysis by diverse techniques. A strict feeding schedule to prevent nutrient fluxes followed by gel type 10 cross-linked dextran (G10) particles recovery of the population of tumor cells that have migrated beneath the adherent bone marrow stromal cells (BMSC) or osteoblasts (OB) generating a "phase dim" (PD) population of tumor cells, provides a consistent source of purified therapy resistant leukemic cells. This clinically relevant population of tumor cells can be evaluated by standard methods to investigate apoptotic, metabolic, and cell cycle regulatory pathways as well as providing a more rigorous target in which to test novel therapeutic strategies prior to pre-clinical investigations targeted at minimal residual disease.

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

The current report summarizes a protocol that can be utilized to model the influence of the bone marrow microenvironment niche on leukemic cells with emphasis placed on enrichment of the most chemoresistant subpopulation.