Periton diyalizinin fare modelleri için önceki protokoller, uzun süreli kullanımlarını engelleyen sınırlamalardan muzdariptir. Kateter sarılması ve yerinden çıkma gibi bu sınırlamalar bu çalışmada ele alınmıştır. Bu teknik, mekanik nedenlerle PD kateter arızasını önler ve periton fibrozu gibi patolojileri incelemek için daha uzun süre kullanılmalarına izin verir.
Bu teknik, periton fibrozunun moleküler patogenezini ve yeni terapötiklerini araştırmak için daha iyi bir fare modeli sağlayacaktır. İnsanlarda PD'nin önemli bir sınırlaması. PD, ESKD'li pediatrik hastalarda renal replasman tedavisinin temelini oluşturmaktadır.
Bu optimize edilmiş model, insanlarda PD ile ilgili tüm sorunları araştırmak için daha iyi bir test yatağı sağlayacaktır. Bir hayvan modelinin oluşturulmasının bir öğrenme eğrisi vardır. Bu adım adım video, bir bireyin periton diyalizi için başarılı bir şekilde dayanıklı bir model oluşturmak için bu tekniği uygulamasına yardımcı olacaktır.
Tamamen anestezi uygulanan sekiz ila 12 haftalık C57 siyah / 6J fareyi sol yanal pozisyona yerleştirmeye başlamak için. Fareyi el yazmasında belirtildiği gibi tıraş ettikten sonra, farenin sağ kanadını ısıtma battaniyesine maruz bırakarak cerrahi alanı dezenfekte edin. Ardından steril cerrahi örtüyü farenin üzerine yerleştirin.
Erişim bağlantı noktası cebini fare kuyruğunun bir santimetre yukarısına atayın. Kurulum segmentini, baskın olmayan işaret ve başparmak parmağınızla kuyruğun yakınındaki atanmış alanın üzerinde tutun. Kateteri cildin üzerine yerleştirin ve kateterin tüp yerleştirme yerinin karın boşluğuna yerleştirileceği yeri tahmin edin.
Ardından, ön orta hattın yakınındaki tüpün minimum bükülmesine saygı göstererek tüp yerleştirme için atanan yeri işaretleyin. Fare kulak etiketleyicisi ile rezervuar bölümünün çerçevesi üzerinde bir yan delik açın. Kuyruğun bir santimetre yukarısında yatay bir santimetre genişliğinde bir cilt kesisi yapın.
Daha sonra, kurulum portunun ideal port cebinde serbestçe oturmasını sağlamak için kateter yerleşimi için bir kese yapmak üzere subkutan düzlemi alttaki kas tabakasından açıkça diseke edin. Özelleştirilmiş yan delikten 3-0 dikişi geçin. Geçirilen dikişi sıkarak, tüp seyrini sefalad tutarak erişim portunu kas yatağına sabitleyin.
Orta çizginin yakınında resmi olarak işaretlenmiş alan üzerinde bir santimetrelik bir kesi yapın. Kesilmiş karın duvarı kasının etrafına 4-0 yuvarlak emilebilir dikiş ile gevşek bir çanta ipi dikişi yerleştirin. Sağ orta hatta yakın kas tabakası üzerinde bir santimetrelik bir kesi yapın ve kateterin proksimal hissini insizyonun içine geçirin.
Kateter tüpünü hazırlanan kanaldan geçirin. Hazırlanan çanta ipi dikişini tüpün etrafına sıkın, ikinci keçeyi kas tabakası üzerindeki çanta ipinin dışında tutun ve cildi 3-0 emilebilir dikişlerle kapatın. Yerleştirilen kateterin işlevsel olduğundan emin olun.
Bağlantı noktası için belirli Huber iğnesine bağlı bir mililitrelik bir şırınga ile işlevi kontrol edin. Kurulum portuna normal salin enjekte edin. Direnç için sıfır toleransla pürüzsüz bir akışı onayladıktan sonra, port rezervuarının etrafındaki cilt kesiklerini 3-0 emilebilir dikişlerle kapatın.
Huber iğnesiyle limana girin ve patent seyrini onaylamak için limana 100 mikrolitre normal salin enjekte edin. Daha sonra tüp sulama için 200 mikrolitre lipopolisakkarit, ardından 100 mikrolitre salin enjekte edin ve direnç olmadığından emin olun. Yedi günlük LPS enjeksiyonlarından ve iki haftalık kateter implantasyonundan sonra, periton biyopsisini planlayın.
Başarılı anesteziyi onayladıktan sonra, mesaneden subksifoide kadar orta hat cilt kesisi yapın. Daha sonra subfasyal düzlemi soğuk PBS ile perfüze edin. Peritonun bütünlüğünü bozmadan düzlemin tamamen disseke edildiğinden emin olun.
Hematoksilin ve eozin boyalı kesitlerin analizi, subperitoneal boşlukta hücre dışı matriks veya ECM'de önemli bir artış olduğunu göstermiştir. Kontrol farelerinin alt periton boşluğundaki ortalama ECM, LPS'ye maruz kalan farelerdekinin yarısı kadardı. Masson'un Trikrom boyaması, yüzey alanına normalleştirilmiş yoğunluk yoğunluğu olarak ölçülen fibrozu tespit eder.
Değişmiş vaskülarite ve subperitoneal boşluğun genişlemesi, endotel hücre belirteci CD31 kullanılarak analiz edildi ve rastgele seçilen yüksek güçlü alan görüntülerinde entegre yoğunluk olarak ölçüldü. Kontrol ile karşılaştırıldığında, LPS ile indüklenen fareler subperitoneal fibrozda üç kat artış, vaskülaritede yaklaşık sekiz ila dokuz kat artış ve SP olarak işaretlenmiş subperitoneal boşlukta iki kat artış gözlendi. Kateteri cildin üzerine yerleştirin ve tüpün bükülmesini önlerken kateter yerleştirme noktasını işaretleyin.
Yerleştirme iç orta çizgiye yakın olmalıdır. Daha dayanıklı murin PD kateter yerleştirme yönteminin sağlanması, araştırmacıların periton zarı yetmezliğini araştırmak ve hedeflemek için daha uzun vadeli deneyler tasarlamalarına ve yürütmelerine olanak sağlayacaktır.
