S. Chu H & E ve histoloji gerçekleştirmek için teşekkür ederiz; ve C. Wang ve A. McCarty yararlı tartışmalar için. Araştırma Virginia ve D. K. Ludwig Fonu kanser araştırma için fon aracılığıyla destek verdi; Ulusal Kalp, akciğer ve kan Enstitüsü (R01HL058770 ve U01HL099999); ve California Institute I.W. yr rejeneratif tıp (RC1 00354) hibe için desteklenen insan sınır bilim Program kariyer geliştirme Ödülü ' (CDA00017), Alman Araştırma Vakfı (RI 2787/1), Siebel kök hücre Enstitüsü tarafından ve Thomas ve Stacey Siebel Foundation (1119368-104-GHBJI). J.M.T. Yeni Amerikalılar için NIH (T32GM007365), Ulusal Araştırma hizmet Ödülü (1F30DK108561), Paul ve Daisy Soros bursu tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan deneyleri sıkı uygun olarak ileri değerlendirme ve Akreditasyon, laboratuvar hayvan bakımı International (AAALAC) ve Stanford Üniversitesi'nin yönetim paneli üzerinde laboratuvar hayvanı Derneği tarafından belirlenen kuralları ile yapılmıştır Bakım (APLAC), (protokol numarası #10266) ve Amerika Birleşik Devletleri'nde veya Avrupa hayvan refah Yasası, yönergesi 2010/63/EU. Protokol devlet Bavyera, Almanya, hayvan deneyleri Etik Komitesi tarafından onaylanmış ve Hayır izni aldı: 55.2-1-54-2532-150-2015.
1. hayvan hazırlık
<ol><li>Bir Isıtma yastık üzerinde uygun yatak takımları ile boş bir kafes hazırlayın.</li>
	<li>Eldiven hayvanlarla dokunmadan önce annenin yatak eldiven üzerine sür.</li>
	<li>Tüm pups onların anne ve yer boş kafesin içine çıkarın. Annenin yatak bazılarını kaldırın ve yavrular ile boş kafes yerleştirebilirsiniz.</li>
	<li>Cerrahi alan uzak ayrı, temiz, Kuru bir kafeste annesi yerleştirin.</li>
	<li>Cerrahi alan hazırlık önce Don yeni, temiz steril eldiven.</li>
</ol>2. cerrahi alan hazırlık
<ol><li>10 mL pipet kullanarak fosfat tamponlu tuz (PBS) 10 mL 10 cm Petri kabına için ekleyin.</li>
	<li>2 mL betadin veya eşdeğer bir anti-septik çözeltisi içinde 10 cm Petri kabına pipet.</li>
	<li>Parçalanmış bir kapsam cerrahi alana. Kapsam lamba dissekan açmak ve ışık için cerrahın konfor düzeyini ayarlamak. Bir yavru diseksiyon kapsam lamba altında cerrahi alanındaki yerleştirilebilir. Yeterli ışık gölgeler yavru fok ventral yüzeyinde yokluğunda tarafından onaylanabilir.</li>
	<li>İsoflurane anestezi odası hazırlamak ( Tablo malzemelerigörmek) burun konisi ile. Odası idrar veya dışkı kanıtı temizlenmelidir. Burun konisi ve ilişkili boru cerrahi alanındaki diseksiyon kapsam altına yerleştirin. Oksijen ve burun konisi için yalnızca isoflurane akışını başka yöne çek.</li>
	<li>Yaklaşık olarak 37 ° C'de ayarla bir ısıtma yastığı ile ameliyat sonrası kurtarma alan hazırlamak Ameliyat sonrası kurtarma gazlı bez ısıtma yastığını üzerine yerleştirilen 4 adet oluşmalıdır. Mümkünse, gazlı bez yastıkları annenin yatak, dışkı ve idrar anne kokusu korumak için RUB'dir. Not: Bu sıcaklık kontrol etmek zor yapar gibi a ısı lamba kullanmak anlayacaksın. Ateşi yükselen yenidoğan fareler ölüme neden.</li>
	<li>Hazırlamak ve bir otoklav ile tüm cerrahi aletler sterilize. Araçlarda: mikro diseksiyon makası, mikro-anatomi forseps, gazlı bez, hemostat ve herhangi bir 6-0 monofilament absorbe olmayan dikiş. Cerrahi aletler resterilzed herhangi bir cam boncuk ısıtıcı ile olabilir.</li>
</ol>3. kısmi Lobular Hepatectomy
<ol><li>Yavru fok onun geri ve yavaşça onun ayak ve ellerde yer çekimi üzerinde burun konisi yerleştirerek anestezi. Yavru köpek-meli var olmak almak %5 isoflurane oksijen.<ol>
<li>Bir ayak çimdik testi tarafından doğrulanabilir 5 dk ya kadar yeterli anestezi, oturup yavru izin.</li>
		<li>5 mg/kg carprofen subkutan kesi önce enjekte. Not: 30 dk Poorer çıktıları üzerinde 30 dk için genel anestezi altında olan yenidoğanlarda gözlenen daha tüm ameliyat uzun sürmeyecektir. Cerrahi kapsamlı alan hazırlık ile uzunluğu ve ıslatma kapatma önce deri dikiş indüklenen deri gözyaşı en aza indirmek için en aza indirmek önlemler alın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yavaşça posterior abdominal duvardan betadin ile ıslak bir küçük gazlı bez yastık ile temizleyin. 1 dakika kurumaya betadin izin.</li>
	<li>Göğüs kafesi altındaki sol orta klavikular 0.5 cm kesi mikro diseksiyon makası ve forseps ile olun. Yavaşça deri forseps kullanarak ayırın ve ikinci bir daha derin kesik periton boşluğuna (bkz: Şekil 1 c, sol ve merkez) yapmak</li>
	<li>Yavaşça sol lob dışında peritoneal kavite apeks zorlamak için sırt, künt biter mikro diseksiyon makası ve forseps kullanarak karın her iki taraftan lateral basınç uygulayın. Sol lob sol apeks-meli var olmak kolayca görüntülenmeyecektir (Şekil 1 c, sağ).</li>
	<li>
Tepe, kesmek ve kaldırılacak doku miktarını tartın.
	<ol>
<li>Mikro-diseksiyon makası kullanarak, yavaşça sol lob apeks dokudan istenilen miktarda kesmek.</li>
		<li>PBS ile dolu bir 1.5 mL tüp takma doku yerleştirin. Bir analitik denge kullanarak uzvunu doku tartmak ( Tablo malzemelerigörmek). Not: bir parça gazlı bez ya da kağıt üzerinde denge yer ve o Dara. O zaman uzvunu doku gazlı bez veya kağıt üzerine yerleştirin ve kütlesi ölçün.</li>
		<li>% 2 paraformaldehyde 1 h için oda sıcaklığında uzvunu alanında ve yer üzerinde kuru buz dondurulmuş bölüm analizi için en uygun kesme sıcaklığında (OCT) bileşik düzeltmek. Herhangi bir standart cryostat kullanma kesme 7-10 µm bölümlerine göre dondurulmuş bölümler analiz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gazlı bez rulo bir parça kullanılarak, yavaşça sol lob periton boşluğuna değiştirin. Gazlı bez boşluğunda kanama durur kadar bırakın.</li>
	<li>Gazlı bez çıkarın ve cerrahi sitesi ve çevresini PBS ile ıslatılmış gazlı bez ile ıslak.</li>
	<li>6-0 monofilament ile cerrahi sitesi, bir çalışan dikiş ile absorbe olmayan dikiş yakın. Karın zarını ve cilt ayrı olarak kapatılması gerekir. Not: Hafifçe PBS ile ıslatılmış gazlı bez ile deri ıslatma indüklenen dikiş gözyaşları en aza indirmek.</li>
	<li>Yavaşça ama iyice yavru fok PBS ile ıslatılmış gazlı bez ile temizleyin ve hiçbir kan veya betadin kalır emin olun. Batırılmış gazlı bez pad rulo ve herhangi bir kan veya betadin temiz yara işareti üzerine hafifçe fırçalayın. Not: Bu özellikle yetersiz temizlenir Eğer anne belgili tanımlık pups parçaladık kadar önemli olduğunu.</li>
	<li>Yavru fok burun konisi çıkarın ve annenin dışkı ve idrar maruz gazlı bez yastıkları içerir kurtarma alanında yerleştirin. Bir kez yavru fok kurtarır, boş kafeste yavru anne yatak ile değiştirin. Not: a ısı lamba kullanmayın. A ısı lamba kullanımını kardiyolojik aşırı ısınmasına neden olabilir.</li>
	<li>Yavrular için istediğiniz sayıyı yordamı yineleyin. Tüm pups kullanılabilmesine rağmen genellikle birkaç pups ile birlikte çalışan pups değiştirilmesi için ameliyat değil bırakmak tavsiye edilir.</li>
	<li>Tüm pups aynı anda annesinin yatak anne kafeste değiştirin.</li>
</ol>4. kurtarma ve analiz
<ol><li>
Fareler üzerinde her gün takip etmek.
	<ol>
<li>Yara kapalı kalır denetleyin ve herhangi bir ölü yavru varsa kaldırın.</li>
		<li>Yara yeniden açar, cerrahi sitesi ve kurtarma alanında daha önce açıklanan ve tekrar adımları 3,8-3.12 hazırlamanız.</li>
		<li>5 mg/kg carpofen subkutan 24 ve 48 h aşağıdaki yordamı enjekte.</li>
		<li>Pups 56 gün veya daha uzun süre izleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hayvanlar ameliyat sonrası gün istenilen miktarda sonra karbondioksit (CO2) maruz kalma ve servikal çıkığı tarafından ötenazi.<ol>
<li>İndüksiyon fareler koyun / ötenazi odası ve fareler kadar CO2 açmak stop nefes.</li>
		<li>Ötenazi servikal çıkığı tarafından emin olun. Ön-parmak ve başparmak kullanarak fare dorsal boynunda basın ve diğer el kullanarak, kuyruk üzerinde açılan menüden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tüm karaciğer en bloc kaldırmak ve tartmak.
	<ol>
<li>Dikkatle her lob ayırmak ve ayrı ayrı tartmak. Not: karaciğer tarafından diyafram ve hepatik ve portal damarları dikkatli diseksiyon kaldırın. Loblar birbirinden dikkatle her lob proksimal onun eki, anatomi tarafından ayırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Rejenerasyon ölçüde uzvunu sol lobda kitle bütün karaciğer ayine karşılaştırarak belirle. Zarar görmemiş bir sol lob bütün karaciğer yaklaşık % 30'dur.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+Regeneration.">Liver Regeneration.</a> Science. 276 (80), 60-66 (1997).</li><li>Ponfick, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+of+the+Liver.">Surgery of the Liver.</a> Lancet. 1, 881 (1890).</li><li>Higgins, G., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Pathology+of+the+liver.+Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal.">Experimental Pathology of the liver. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch. Pathol. 12, 186-202 (1931).</li><li>Miyaoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophy+and+unconventional+cell+division+of+hepatocytes+underlie+liver+regeneration.">Hypertrophy and unconventional cell division of hepatocytes underlie liver regeneration.</a> Curr. Biol. 22, 1166-1175 (2012).</li><li>Miyaoka, Y., Miyajima, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+divide+or+not+to+divide:+revisiting+liver+regeneration.">To divide or not to divide: revisiting liver regeneration.</a> Cell Div. 8, 8 (2013).</li><li>Tsai, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+hepatic+lobular+regeneration+by+central-vein-associated+lineage-restricted+progenitors.">Localized hepatic lobular regeneration by central-vein-associated lineage-restricted progenitors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 114, 3654-3659 (2017).</li><li>Porrello, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+regenerative+potential+of+the+neonatal+mouse+heart.">Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart.</a> Science. 331, 1078-1080 (2011).</li><li>Shyh-Chang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lin28+enhances+tissue+repair+by+reprogramming+cellular+metabolism.">Lin28 enhances tissue repair by reprogramming cellular metabolism.</a> Cell. 155, 778-792 (2013).</li><li>Yin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+tumor+necrosis+factor+alpha+in+alcohol-induced+liver+injury+in+mice.">Essential role of tumor necrosis factor alpha in alcohol-induced liver injury in mice.</a> Gastroenterology. 117, 942-952 (1999).</li><li>Gao, B., Bataller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcoholic+liver+disease:+pathogenesis+and+new+therapeutic+targets.">Alcoholic liver disease: pathogenesis and new therapeutic targets.</a> Gastroenterology. 141, 1572-1585 (2011).</li><li>Uesugi, T., Froh, M., Arteel, G. E., Bradford, B. U., Thurman, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+4+is+involved+in+the+mechanism+of+early+alcohol-induced+liver+injury+in+mice.">Toll-like receptor 4 is involved in the mechanism of early alcohol-induced liver injury in mice.</a> Hepatology. 34, 101-108 (2001).</li><li>Coen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrated+metabonomic+investigation+of+acetaminophen+toxicity+in+the+mouse+using+NMR+spectroscopy.">An integrated metabonomic investigation of acetaminophen toxicity in the mouse using NMR spectroscopy.</a> Chem. Res. Toxicol. 16, 295-303 (2003).</li><li>Oz, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+antioxidants+protect+against+acetaminophen+hepatotoxicity.">Diverse antioxidants protect against acetaminophen hepatotoxicity.</a> J. Biochem. Mol. Toxicol. 18, 361-368 (2004).</li><li>Ruepp, S. U., Tonge, R. P., Shaw, J., Wallis, N., Pognan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomics+and+proteomics+analysis+of+acetaminophen+toxicity+in+mouse+liver.">Genomics and proteomics analysis of acetaminophen toxicity in mouse liver.</a> Toxicol. Sci. 65, 135-150 (2002).</li><li>Gunawan, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=c-Jun+N-terminal+kinase+plays+a+major+role+in+murine+acetaminophen+hepatotoxicity.">c-Jun N-terminal kinase plays a major role in murine acetaminophen hepatotoxicity.</a> Gastroenterology. 131, 165-178 (2006).</li><li>Manibusan, M. K., Odin, M., Eastmond, D. a. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postulated+carbon+tetrachloride+mode+of+action:+a+review.">Postulated carbon tetrachloride mode of action: a review.</a> J. Environ. Sci. Health. C. Environ. Carcinog. Ecotoxicol. Rev. 25, 185-209 (2007).</li><li>Recknagel, R. O., Glende, E. a., Dolak, J. a., Waller, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+carbon+tetrachloride+toxicity.">Mechanisms of carbon tetrachloride toxicity.</a> Pharmacol. Ther. 43, 139-154 (1989).</li><li>Sell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+and+plasticity+of+hepatocyte+lineage+cells.">Heterogeneity and plasticity of hepatocyte lineage cells.</a> Hepatology. 33, 738-750 (2001).</li><li>Malato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+tracing+of+mature+hepatocytes+in+mouse+liver+homeostasis+and+regeneration.">Fate tracing of mature hepatocytes in mouse liver homeostasis and regeneration.</a> J. Clin. Invest. 121, 4850-4860 (2011).</li><li>Greene, A. K., Puder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+hepatectomy+in+the+mouse:+technique+and+perioperative+management.">Partial hepatectomy in the mouse: technique and perioperative management.</a> J. Invest. Surg. 16, 99-102 (2003).</li><li>Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+mechanisms+regulated+by+BMP+and+FGF+signaling+mediate+liver+regeneration+in+zebrafish+after+partial+hepatectomy.">Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy.</a> FASEB J. 23, 3516-3525 (2009).</li><li>Red-Horse, K., Ueno, H., Weissman, I. L., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+arteries+form+by+developmental+reprogramming+of+venous+cells.">Coronary arteries form by developmental reprogramming of venous cells.</a> Nature. 464, 549-553 (2010).</li><li>Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Global+Double-Fluorescent+Cre+Reporter+Mouse.">A Global Double-Fluorescent Cre Reporter Mouse.</a> Genesis. 605, 593-605 (2007).</li><li>Poley, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotionality+related+to+maternal+cannibalism+in+BALB+and+C57BL+mice.">Emotionality related to maternal cannibalism in BALB and C57BL mice.</a> Anim. Learn. Behav. 2, 241-244 (1974).</li><li>Smotherman, W. P., Bell, R. W., Starzec, J., Elias, J., Zachman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+responses+to+infant+vocalizations+and+olfactory+cues+in+rats+and+mice.">Maternal responses to infant vocalizations and olfactory cues in rats and mice.</a> Behav. Biol. 12, 55-66 (1974).</li></ol>

Yazarlar hiçbir açıklamalar var.

Akut karaciğer hasarı geleneksel kimyasal (asetaminofen, etanol, karbon tetraklorür) ya da cerrahi modelleri (% 70 kısmi hepatectomy) kullanarak çalışılmıştır. Rejeneratif yanıt % 70 kısmi hepatectomy sonra küresel hepatosit hipertrofisi ve hücre bölünmesi4,5birden fazla mermi dahil etmek ile karakterizedir. Büyük damarları rejenerasyon için anormal bir ortam bırakarak bakmaksızın gerekir gibi kanama durdurmak için ancak, bu model sınır...

Bir organ yeniden veya form ve fonksiyon, geri yüklemek için yetenek çoğunlukla evrimsel zamanla kaybolur düşünülmektedir. Yetişkin memeli karaciğer akut kimyasal veya fiziksel yaralanma sonra yeniden üretim potansiyelini hipertrofisi dalgaları ve hücre bölünmesi, işlevsel bir ama kaynaklanan kaç tur sonuçlanan tüm kalan tetkikine seferberlik dahil tespit edilmiştir mimari farklı organ1,2,3,4,5. Son zamanlarda, yaralanma yaşam6,7,8ayının ilk haftası içinde rejeneratif cevaben yenidoğan memeli organların karakterize etmek çalışmalar başladı. Bu çalışmalar yenidoğan geliştirme sırasında yaralı zaman bazı memeli organlar yerine telafi edici büyüme veya fibrozis7,8morfolojik yenilenme ile yanıt göstermiştir.
Son yıllarda yapılan çalışmalarda genel yapısı ve işlevi rejenerasyon erken neonatal dönem6,7,8sırasında oluştuğunu göstermiştir. Kimyasal yaralanma veya yönetim etanol9,10,11, asetaminofen12,13,14,15 kurulan karaciğer hasarı protokolleri içerir , karbon tetraklorür16,17,18,19, % 70 kısmi hepatectomy4,20,21veya sol kaldırılması ve medyan loblar. Kimyasal yönetim hepatosit hücre ölüme yol açar, ama genellikle mikro ve makro yapıları olduğu gibi bırakır. Genel olarak hepatik mimarisi değil oblitere gibi morfolojik rejenerasyon kolayca bu bağlamda okudu olamaz. % 70 kısmi hepatectomy dikiş tüp ligasyonu kanamayı durdurmak gerekli olan büyük gemilerin içerir ancak fizyolojik olmayan bir çevre damarlara kalıcı bozulma ile bırakır. Ayrıca, bu yöntem yalnızca yetişkin kemirgenler kullanılan ve yenidoğan bebeklerin onun uygulamaya Teknik olarak son derece zordur. Sol lob apeks 20-30 oranında bir yeni doğan P0 fare kaldırıldı bir yöntem bu düşünceyle geliştirdiğimiz (Şekil 1A-1B). Bu yöntem cerrahi olarak muhafazakar, minimal invaziv, teknik olarak zor ve morfoloji damarlara, rejenerasyon gerçekleşmesi için oda bırakarak ligasyonu olmadan kaybı brüt yol açar. Aşağıda açıklanan adım adım iletişim kuralı elde edilen herhangi bir araştırmacı bir kısmi lobular hepatectomy Doğum sonrası yaşam erken dönemlerinde memeli yenidoğan yenilenme eğitim için yenidoğan fareler üzerinde gerçekleştirmek izin verir. Gibi yaşamın daha sonraki evrelerinde karaciğerde kullanılabilmesi için bu yöntem aynı zamanda rejeneratif tıp ve kök hücre biyolojisi, karşılaştırmalı çalışmalar için açık uygulamaları var.
En yaygın akut karaciğer hasarı çalışmalar kimyasal kaynaklı hasar, Yetişkin karaciğer amputasyon veya % 70 kısmi hepatectomy vardır. Kimyasal hasar kez asetaminofen, karbon tetraklorür veya etanol intravenöz mayi veya sözlü yönetim içerir ve nispeten kolay ve non-invaziv yaralanma modelidir. Daha önce tartışılan, kimyasal zarar sonuçlarında hepatosit hücre ölümü, ama sık sık yaprakları stroma ve parankimi yapıları sağlam, morfolojik rejenerasyon hakkında iddiada zorlaştırır. Kimyasal zarar kez Hepatik damarları üzerinde mevcuttur ve hücre özgü yaralanma, eğitim için yararlı bir yöntem yapım merkezleri ancak aynı zamanda bütün organ düzeyinde, gemiler daha fazla--dan yer alan ve bu olabilir diğer nüfus sorgulamaya zorlaştırır yenilenmesine katkıda bulunur. Bu sınırlamaları rağmen kimyasal hasar hala bir fizyolojik açıdan son derece uygun ve faydalı yaralanma model kalır.
Yetişkin % 70 kısmi hepatectomy hepatik damarlara ligasyonu takip sol ve medyan loblar kaldırılmasını içerir. Hepatectomy cevaben de karakterize: uzvunu karaciğer 14 gün sonrası % 70 kısmi hepatectomy kalan sağ ve kaudat lob tetkikine özgün hasarsız lob bundan fena halde farklı bir mimari geliştirir hipertrofisi ve hücre bölünmesi4,5birkaç tur tabi. Bu kayıp kitle ve fonksiyonu, yapar ama iki uzvunu loblar yeniden oluşturmak başarısız olur ve bu nedenle brüt morfoloji yerini almaz. Sonuç olarak, % 70 kısmi hepatectomy yaralanma yanıt telafi edici büyüme mekanizmaları sınırlı yenilenme ile çalışmak yararlıdır.
Burada, tam bir yenidoğan kısmi lobular hepatectomy için bir protokol açıklayın. Uygun hayvan seçimi ve hazırlık, cerrahi alan hazırlık, cerrahi ve kurtarma yordamı içerir. En iyi duruma getirme ve bu adımların her biri uyum Protokolü'nün farklı uygulamalar için gerekli olabilir.
Biz kapsamlı bir şekilde gerçekleştirilen ve bu protokol üzerinde vahşi türü C57BL/6J pups (JAX 000664) en iyi duruma getirilmiş, ancak, farklı hücre popülasyonlarının ve mekanizmaları rejenerasyon çalışmaya, ayrıca çeşitli Cre yataklık fareler de dahil olmak üzere çeşitli transjenik hayvanlar kullanılır ve CreERT2 transgenes ve/veya knock-ins (Axin2CreERT2 JAX 018867, ve Sox9CreERT2 JAX 018829) gibi gökkuşağı ve mTmG sistemleri (R26VT2/GK3, floresan gazetecilere ile birlikte R26 mT/mG) 22 , 23. sağkalım sonuçları ya da yeniden üretim potansiyeli yok farklılıkları tespit edildi gibi farklı fare suşları, bu yöntemi değiştirmek gerek yok bulduk.
Farklı hayvan suşları kullanmaya ek olarak, biz de kısmi lobular hepatectomies 4-hidroksi-Tamoksifen ve 5-ethynyl-2 '-deoxyuridine (EdU) gibi küçük moleküller ile tedavi yenidoğan fareler üzerinde yapılır. O Mısır yağı morbidite önemli bir sebebi bulundu gibi dimetil sülfoksit (DMSO) ve etanol solvent kullanılmıştır. Aksi takdirde küçük moleküllerin mayi yönetim hayatta kalma veya rejeneratif sonuç etkilemedi bulduk. Bu iletişim kuralı yeniden oluşturma işlemi, çeşitli açılardan sorguya çekmek için diğer küçük moleküller ile kullanmak için adapte olacağını tahmin ediyorum.
Yenidoğan fare cerrahi teknik olarak zor olabilir ve hayvan işleme ve mikroskobik diseksiyon özel uzmanlık gerektirebilir. Hayvancılık uzmanlığı anne yamyamlık önlemek için gerekli cerrahi ve acil kurtarma süresi boyunca.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mother with litter of day 0 neonatal pups (any strain)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surrogate mother and surrogate litter (optional)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Serum (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Providine-iodine or equivalent antiseptic solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3mm straight spring micro scissors</td>
			<td>Vannas</td>
			<td>72932-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5SF Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>11252-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Kelly forceps</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>17-050G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>000771-810-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbott Labs</td>
			<td>0044-5260-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>1205S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze, 10.16 x 10.16cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-761-52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 monocryl sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>MCP489G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;S35839</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet-Aid, Plain, 110V</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>4-000-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mettler Toledo NewClassic ME Analytical Balances</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>01-912-402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Cost Induction Chamber</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SOMNO-0730</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

partial lobular hepatectomy: a surgical model for morphologic liver regeneration

Morfolojik organ rejenerasyon akut doku kaybı aşağıdaki alt Omurgalılar arasında yaygındır, ama memeli postnatal hayatta nadiren görülmektedir. Yetişkin karaciğer rejenerasyonu % 70 kısmi hepatectomy sonra kalan loblar restorasyon metabolik aktivite, ama kalıcı kaybı yaralı lob'ın Morfoloji ve mimarisi ile bazı çoğaltması ile hepatosit hipertrofisi sonuçları. Burada, fizyolojik bir çevre rejenerasyon için elverişli bırakır kardiyolojik yeni bir cerrahi yöntem ayrıntılı. Bu model sol lob tepe ve bir sonraki muhafazakar yönetimi rejimi amputasyon içerir ve ligasyonu önemli karaciğer damarlarını veya kimyasal yaralanma, nerede rejenerasyon oluşabilir fizyolojik bir ortam bırakmak için gerekliliğini yoksun. Biz bu protokol sırasında yaralı karaciğer tarafından hipertrofisi için telafi edici büyüme organ rejenerasyon geçişler Juvenil (P7-14) fareler üzerinde ampütasyonlar için uzatmak. Sunulmuştur, kısa 30 dk protokolü yeniden oluşturma işlemi, memeliler yılında yaş ilişkili düşüş ve sözde hepatik kök veya ataları karakterizasyonu mekanizmaları incelemek için bir çerçeve sağlar.

Şekil 1A yenidoğan kısmi lobular hepatectomy ( Şekil 1Badımında şematik) genel bir zaman çizelgesi ve rejenerasyon gözlenen beklemek beklenen süreyi ayrıntıları. Sol lob ince rejenerasyon gözlenen 7-14 gün sonrası cerrahi olabilir. Sonra 56 gün ameliyat sonrası tam rejenerasyon kez gözlendi. Fareler fizyolojik anormallik belirtisi yok ameliyattan sonra göstermelidir.
<p class="jove_content" fo:keep-togethe...

Watch this Scientific Journal Video about Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration at JoVE.com

Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Kısmi Lobular Hepatectomy: Morfolojik karaciğer rejenerasyonu için cerrahi bir Model

Burada, yenidoğan (0 gün) farelerde karaciğer sol lob kısmi rezeksiyon için yeni bir yöntem mevcut. Bu yeni iletişim kuralı akut karaciğer hasarı ve yaralanma yanıt yenidoğan ortamda çalışmak için uygundur.

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

partial-lobular-hepatectomy-surgical-model-for-morphologic-liver

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

12.0K Görüntüleme.  Stanford University School of Medicine. Burada, yenidoğan (0 gün) farelerde karaciğer sol lob kısmi rezeksiyon için yeni bir yöntem mevcut. Bu yeni iletişim kuralı akut karaciğer hasarı ve yaralanma yanıt yenidoğan ortamda çalışmak için uygundur.

Video: Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is the nephron. Mammals are able to repair existing nephrons after injury, but lose the ability to form new nephrons soon after birth. In contrast to mammals, adult fish produce new nephrons (neonephrogenesis) throughout their lives in response to growth requirements or injury. Recently, lhx1a has been shown to mark nephron progenitor cells in the adult zebrafish kidney, however mechanisms controlling the formation of new nephrons after injury remain unknown. Here we show our method for robust and reproducible injury in the adult zebrafish kidney by intraperitoneal (i.p.) injection of gentamicin, which uses a noninvasive visual screening process to select for fish with strong but nonlethal injury. Using this method, we can determine optimal gentamicin dosages for injury and go on to demonstrate the effect of higher temperatures on kidney regeneration in zebrafish.

Here we present a reliable method to study adult kidney regeneration by inducing acute kidney injury by gentamicin injection. We show that injury is dependent on gentamicin dosage and environmental temperature using in situ hybridization to label lhx1a+ developing new nephrons.

Gentamisin Kaynaklı Sakatlık tarafından Yetişkin Zebra balığı Böbrek Rejenerasyon

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

Gelişim Biyolojisi

Deriving Retinal Pigment Epithelium (RPE) from Induced Pluripotent Stem (iPS) Cells by Different Sizes of Embryoid Bodies

Pluripotent stem cells possess the ability to proliferate indefinitely and to differentiate into almost any cell type. Additionally, the development of techniques to reprogram somatic cells into induced pluripotent stem (iPS) cells has generated interest and excitement towards the possibility of customized personal regenerative medicine. However, the efficiency of stem cell differentiation towards a desired lineage remains low. The purpose of this study is to describe a protocol to derive retinal pigment epithelium (RPE) from iPS cells (iPS-RPE) by applying a tissue engineering approach to generate homogenous populations of embryoid bodies (EBs), a common intermediate during in vitro differentiation. The protocol applies the formation of specific size of EBs using microwell plate technology. The methods for identifying protein and gene markers of RPE by immunocytochemistry and reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) are also explained. Finally, the efficiency of differentiation in different sizes of EBs monitored by fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis of RPE markers is described. These techniques will facilitate the differentiation of iPS cells into RPE for future applications.

Deriving Retinal Pigment Epithelium RPE from Induced Pluripotent Stem iPS Cells by Different Sizes of Embryoid Bodies

The objective of this report is to describe the protocols to derive the retinal pigment epithelium (RPE) from induced pluripotent stem (iPS) cells using different sizes of embryoid bodies.

Embriyoid Kuruluşlarının Farklı Boyutları tarafından uyarılmış pluripotent kök gelen Retina pigment epiteli (RPE) türetilmesi (iPS) Hücreler

Pluripotent stem cells possess the ability to proliferate indefinitely and to differentiate into almost any cell type. Additionally, the development of ...

Hepatocyte-specific Ablation in Zebrafish to Study Biliary-driven Liver Regeneration

The liver has a great capacity to regenerate. Hepatocytes, the parenchymal cells of the liver, can regenerate in one of two ways: hepatocyte- or biliary-driven liver regeneration. In hepatocyte-driven liver regeneration, regenerating hepatocytes are derived from preexisting hepatocytes, whereas, in biliary-driven regeneration, regenerating hepatocytes are derived from biliary epithelial cells (BECs). For hepatocyte-driven liver regeneration, there are excellent rodent models that have significantly contributed to the current understanding of liver regeneration. However, no such rodent model exists for biliary-driven liver regeneration. We recently reported on a zebrafish liver injury model in which BECs extensively give rise to hepatocytes upon severe hepatocyte loss. In this model, hepatocytes are specifically ablated by a pharmacogenetic means. Here we present in detail the methods to ablate hepatocytes and to analyze the BEC-driven liver regeneration process. This hepatocyte-specific ablation model can be further used to discover the underlying molecular and cellular mechanisms of biliary-driven liver regeneration. Moreover, these methods can be applied to chemical screens to identify small molecules that augment or suppress liver regeneration.

To help assess the molecular mechanisms underlying zebrafish biliary-driven liver regeneration, we established a liver injury model in which the nitroreductase-expressing hepatocytes are genetically ablated upon metronidazole treatment. In this protocol, we describe how to adeptly manipulate, monitor and analyze hepatocyte ablation and biliary-driven liver regeneration.

Biliyer odaklı Karaciğer Rejenerasyon Eğitim Zebra balığı hepatosite özgü Ablasyon

The liver has a great capacity to regenerate. Hepatocytes, the parenchymal cells of the liver, can regenerate in one of two ways: hepatocyte- or ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading to cirrhosis with hepatocellular dysfunction. Among multiple hepatic insults, alcohol abuse can lead to significant health problems including liver failure and hepatocellular carcinoma. Nonetheless, the identity of endogenous cellular sources that regenerate hepatocytes in response to alcohol has not been properly investigated. Moreover, few studies have effectively modeled hepatocyte regeneration upon alcohol-induced injury. We recently reported on establishing an ethanol (EtOH)-induced fibrotic liver model in zebrafish in which hepatic progenitor cells (HPCs) gave rise to hepatocytes upon near-complete hepatocyte loss in the presence of fibrogenic stimulus. Furthermore, through chemical screens using this model, we identified multiple small molecules that enhance hepatocyte regeneration. Here we describe in detail the procedures to develop an EtOH-induced fibrotic liver model and to perform chemical screens using this model in zebrafish. This protocol will be a critical tool to delineate the molecular and cellular mechanisms of how hepatocyte regenerates in the fibrotic liver. Furthermore, these methods will facilitate potential discovery of novel therapeutic strategies for chronic liver disease in vivo.

Sustained fibrosis with deposition of excessive extracellular matrix proteins leads to cirrhosis. Alcohol abuse is one of the main causes of severe liver disease. We established an ethanol-induced zebrafish fibrotic liver model to study the mechanisms and strategies of promoting hepatocyte regeneration upon alcohol-induced injury.

Zebra balığı bir Etanol kaynaklı Fibrotik Karaciğer Modelinin Geliştirilmesi progenitör hücre-aracılı Hepatosit Rejenerasyon Eğitim

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. Although many efforts have been made to reveal the underlying mechanisms of decidualization, the exact signaling between the epithelial cells that are in contact with the embryo and the underlying stromal cells remains poorly understood. Therefore, studying decidualization in a way that takes both the epithelial and stromal cells into account could improve our knowledge about the molecular details of decidualization. For this purpose, in vivo models of artificial decidualization are physiologically the most relevant; however, manipulation of intercellular communication is limited. Currently, in vitro cultures of endometrial stromal cells are being used to investigate the modulation of decidualization by several signaling molecules. Conventionally, human or mouse endometrial stromal cells are used. However, the availability of human samples is very often limited. Furthermore, the use of murine tissues is accompanied with variety in the method of culturing. This study presents a validated and standardized method to obtain pure Endometrial Epithelial Cell (EEC) and Stromal Cell (ESC) cultures using adult intact mice treated with estrogen for three consecutive days. The protocol is optimized to improve the yield, viability, and purity of the cells and was further extended in order to study decidualization in a coculture of EEC and ESC. This model may be suitable to exploit the importance of both cell types in decidualization and to evaluate the contribution of significant signaling molecules secreted by EEC or ESC during the intercellular communication.

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

This study presents a standardized and validated method for the isolation and culture of primary mouse endometrial stromal and epithelial cells, which can be used in a coculture system to study in vitro decidualization.

Fare Endometrial stromal ve epitelyal hücrelerin izolasyonu için<em&gt; İn Vitro</em&gt; sidualizasyonu

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. ...

Surgical Ablation Assay for Studying Eye Regeneration in Planarians

In the study of adult stem cells and regenerative mechanisms, planarian flatworms are a staple in vivo model system. This is due in large part to their abundant pluripotent stem cell population and ability to regenerate all cell and tissue types after injuries that would be catastrophic for most animals. Recently, planarians have gained popularity as a model for eye regeneration. Their ability to regenerate the entire eye (comprised of two tissue types: pigment cells and photoreceptors) allows for the dissection of the mechanisms regulating visual system regeneration. Eye ablation has several advantages over other techniques (such as decapitation or hole punch) for examining eye-specific pathways and mechanisms, the most important of which is that regeneration is largely restricted to eye tissues alone. The purpose of this video article is to demonstrate how to reliably remove the planarian optic cup without disturbing the brain or surrounding tissues. The handling of worms and maintenance of an established colony is also described. This technique uses a 31 G, 5/16-inch insulin needle to surgically scoop out the optic cup of planarians immobilized on a cold plate. This method encompasses both single and double eye ablation, with eyes regenerating within 1-2 weeks, allowing for a wide range of applications. In particular, this ablation technique can be easily combined with pharmacological and genetic (RNA interference) screens for a better understanding of regenerative mechanisms and their evolution, eye stem cells and their maintenance, and phototaxic behavioral responses and their neurological basis.

This protocol shows how to consistently excise planarian eyes (optic cups) without disturbing surrounding tissues. Using an insulin needle and syringe, either one or both eyes can be ablated to facilitate investigations into the mechanisms regulating eye regeneration, the evolution of visual regeneration, and the neural basis of light-induced behavior.

Cerrahi Ablasyon Tahlili Planaryalar Göz Rejenerasyon incelenmesi için

In the study of adult stem cells and regenerative mechanisms, planarian flatworms are a staple in vivo model system. This is due in large part to their ...

Chemical Amputation and Regeneration of the Pharynx in the Planarian Schmidtea mediterranea

Planarians are flatworms that are extremely efficient at regeneration. They owe this ability to a large number of stem cells that can rapidly respond to any type of injury. Common injury models in these animals remove large amounts of tissue, which damages multiple organs. To overcome this broad tissue damage, we describe here a method to selectively remove a single organ, the pharynx, in the planarian Schmidtea mediterranea. We achieve this by soaking animals in a solution containing the cytochrome oxidase inhibitor sodium azide. Brief exposure to sodium azide causes extrusion of the pharynx from the animal, which we call &#34;chemical amputation.&#34;&#160;Chemical amputation removes the entire pharynx, and generates a small wound where the pharynx attaches to the intestine. After extensive rinsing, all amputated animals regenerate a fully functional pharynx in approximately one week. Stem cells in the rest of the body drive regeneration of the new pharynx. Here, we provide a detailed protocol for chemical amputation, and describe both histological and behavioral methods to assess successful amputation and regeneration.

Chemical Amputation and Regeneration of the Pharynx in the Planarian Schmidtea mediterranea

The planarian Schmidtea mediterranea is an excellent model for studying stem cells and tissue regeneration. This publication describes a method to selectively remove one organ, the pharynx, by exposing animals to the chemical sodium azide. This protocol also outlines methods for monitoring pharynx regeneration.

Kimyasal amputasyon ve yeniden oluşturulmasını Planarian Schmidtea mediterranea yutak

Planarians are flatworms that are extremely efficient at regeneration. They owe this ability to a large number of stem cells that can rapidly respond to ...

A Familial Hypercholesterolemia Human Liver Chimeric Mouse Model Using Induced Pluripotent Stem Cell-derived Hepatocytes

Familial hypercholesterolemia (FH) is mostly caused by low-density lipoprotein receptor (LDLR) mutations and results in an increased risk of early-onset cardiovascular disease due to marked elevation of LDL cholesterol (LDL-C) in blood. Statins are the first line of lipid-lowering drugs for treating FH and other types of hypercholesterolemia, but new approaches are emerging, in particular PCSK9 antibodies, which are now being tested in clinical trials. To explore novel therapeutic approaches for FH, either new drugs or new formulations, we need appropriate in vivo models. However, differences in the lipid metabolic profiles compared to humans are a key problem of the available animal models of FH. To address this issue, we have generated a human liver chimeric mouse model using FH induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived hepatocytes (iHeps). We used Ldlr-/-/Rag2-/-/Il2rg-/- (LRG) mice to avoid immune rejection of transplanted human cells and to assess the effect of LDLR-deficient iHeps in an LDLR null background. Transplanted FH iHeps could repopulate 5-10% of the LRG mouse liver based on human albumin staining. Moreover, the engrafted iHeps responded to lipid-lowering drugs and recapitulated clinical observations of increased efficacy of PCSK9 antibodies compared to statins. Our human liver chimeric model could thus be useful for preclinical testing of new therapies to FH. Using the same protocol, similar human liver chimeric mice for other FH genetic variants, or mutations corresponding to other inherited liver diseases, may also be generated.

Here, we present a protocol to generate a human liver chimeric mouse model of familial hypercholesterolemia using human induced pluripotent stem cell-derived hepatocytes. This is a valuable model for testing new therapies for hypercholesterolemia.

İndüklenmiş Pluripotent kök hücre kaynaklı tetkikine kullanarak ailesel hiperkolesterolemi insan karaciğer Chimeric fare modeli

Familial hypercholesterolemia (FH) is mostly caused by low-density lipoprotein receptor (LDLR) mutations and results in an increased risk of early-onset ...

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

Cells need to be able to regenerate their parts to recover from external perturbations. The unicellular ciliate Stentor coeruleus is an excellent model organism to study wound healing and subsequent cell regeneration. The Stentor genome became available recently, along with modern molecular biology methods, such as RNAi. These tools make it possible to study single-cell regeneration at the molecular level. The first section of the protocol covers establishing Stentor cell cultures from single cells or cell fragments, along with general guidelines for maintaining Stentor cultures. Culturing Stentor in large quantities allows for the use of valuable tools like biochemistry, sequencing, and mass spectrometry. Subsequent sections of the protocol cover different approaches to inducing regeneration in Stentor. Manually cutting cells with a glass needle allows studying the regeneration of large cell parts, while treating cells with either sucrose or urea allows studying the regeneration of specific structures located at the anterior end of the cell. A method for imaging individual regenerating cells is provided, along with a rubric for staging and analyzing the dynamics of regeneration. The entire process of regeneration is divided in three stages. By visualizing the dynamics of the progression of a population of cells through the stages, the heterogeneity in regeneration timing is demonstrated.

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

The giant ciliate, Stentor coeruleus, is an excellent system to study regeneration and wound healing. We present procedures for establishing Stentor cell cultures from single cells or cell fragments, inducing regeneration by cutting cells, chemically inducing the regeneration of membranellar band and oral apparatus, imaging, and analysis of cell regeneration.

Rejenerasyon Stentor içinde çalışma yöntemleri

Cells need to be able to regenerate their parts to recover from external perturbations. The unicellular ciliate Stentor coeruleus is an excellent model ...

A Simplified and Efficient Method to Isolate Primary Human Keratinocytes from Adult Skin Tissue

Primary human keratinocytes isolated from fresh skin tissues and their expansion in vitro have been widely used for laboratory research and for clinical applications. The conventional isolation method of human keratinocytes involves a two-step sequential enzymatic digestion procedure, which has been proven to be inefficient in generating primary cells from adult tissues due to the low cell recovery rate and reduced cell viability. We recently reported an advanced method to isolate human primary epidermal progenitor cells from skin tissues that utilizes the Rho kinase inhibitor Y-27632 in the medium. Compared with the traditional protocol, this new method is simpler, easier, and less time-consuming, and increases epithelial stem cell yield and enhances their stem cell characteristics. Moreover, the new methodology does not require the separation of the epidermis from the dermis, and, therefore, is suitable for isolating cells from different types of adult tissues. This new isolation method overcomes the major shortcomings of conventional methods and is more suitable for producing large numbers of epidermal cells with high potency both for laboratory and for clinical applications. Here, we describe the new method in detail.

Here we present a protocol to efficiently isolate primary human keratinocytes from adult skin tissues. This method simplifies the conventional procedure by using the ROCK Inhibitor Y-27632 in the inoculation medium to spontaneously separate epidermal cells from dermal cells.

Birincil insan Lenfositi yetişkin cilt dokusundan izole etmek için basit ve etkili bir yöntem

Primary human keratinocytes isolated from fresh skin tissues and their expansion in vitro have been widely used for laboratory research and for clinical ...