Çay dünya çapında en popüler içecekler biridir. Pestisitler bazen zararlılardan çay bitkileri korumak için kullanılır. Bazı sistemik pestisitler çay ağacında enzimler tarafından bunun için yapılabilir.
Ve sonra oksidasyon, hidroliz veya redüksiyon reaksiyonları ile entegre. Bitki hücresi süspansiyon kültürleri bir olarak kullanılabilir, kolayca pestisitlerin bitki metabolizması davranışı incelemek için. Bu yöntemin çeşitli avantajları vardır.
İlk olarak, serbest mikroorganizmaların koşulları üzerinde çalıştırılabilir, böylece, mikropların neden olduğu pestisit bozulması nın girişim kaçınarak. İkincisi, herhangi bir zamanda bizim için sabit malzeme sağlayabilir. Son olarak, aynı zamanda kolayca tek bir deneyde pestisit davranış teorileri karşılaştırmak için kullanılabilir.
Bu çalışmada çay yaprağının değişken renklerinden çay hücresi süspansiyon kültürleri oluşturmak. Hücre süspansiyonlarının en uygun kültürler durumu daha sonra altı pestisitin dağılma davranışını karşılaştırmak için kullanılmıştır. Bu deney Jiao Weiting ve Ge Guoqin tarafından yapılacaktır.
Bu eksplant kaynağı olarak çalışır bizim çay steril plantes. Makas kullanarak steril bir yaprağın orta kanadı boyunca kesin. Ve sonra, bir Petri kabında yaklaşık 0,3 kat 0,3 santimetre küçük parçalar halinde her yarısını bölmek.
Steril eksplaleri 2, 4-D ve KT içeren MS görsel ortamına yerleştirin. Altı ekspertiz 300 mililitrelik bir şişeye yerleştirilebilir. Kültür yaprak karanlıkta 25 derece santigrat sabit bir sıcaklıkta eksekti. 28 gün sonra, indüklenen nasır Ilk nesil seçin ve sonra taze şişe aktarın.
Üç ila dört alt kültürden sonra gevşek ve değişken nasır elde edin. Steril koşullar altında steril bir cerrahi bıçak kullanarak katı ortamdan büyük olanları, değişken ve gevşek nasırları küçük parçalara ayırın. Bir nasırın üç gramını bulduk.
Nasırı 2, 4-D ve KT içeren B5'e yerleştirin. Kültür karanlıkta sallayarak kuvöz sabit bir sıcaklıkta sıvı hücre süspansiyon. 7-10 gün kaldıktan sonra, kültür şişesini çıkarın ve birkaç dakika bekletin. Buradaki süpernatant'ı tortu olarak ele alalım, kültürü taze ortama zorlar.
Çökelmiş büyük nasırları çıkarın. Her biri 28 günlük dört ila üç alt kültür döngüsünden sonra son bakımlı hücre süspansiyon kültürünü edinin. Canlılık boyama önce kontrol hücresi olarak on dakika boyunca yüz santigrat derece canlı hücrelerin bir örnek tutun.
6 sekiz dakika boyunca tüm hücre süspansiyon kültürü santrifüj, 000 G.Hücreleri 5 mililitre PBS tampon içine askıya almadan önce supernatant çıkarın ve elle bir dakika sallayın. TTC çözeltisi 2,5 mililitre ekleyin ve tekrar elle sallayın. Karışımı 13 santigrat derecede ayakta duran bir kuluçka makinesinde bir saat kuluçkaya yatırın.
Tüm neonicotinoids Thiamethoxam, Asetinoprid, Imidacloprid ve Imideproxaz stok çözeltisi sterilize etmek için görünümünde dört yüz mikrolitre bir aliquot ekleyin. Hepsi organik ilk aşamaya. Dimethoate ve hücre süspansiyon kültürleri içine sırasıyla omethoate.
Sabit sıcaklıkta insektisitler ile hücre süspansiyonları Kültür örnekleri, ve inkübatör hızı sallayarak. Örnekleri farklı günlerde alın. Neonicotinoid içeren örneği test etmek için homojen hücre kültürünün 1 mililitrelik aliquot'u çıkarın.
1.5 mililitrelik plastik santrifüj tüpüne yerleştirin ve 4,000 G'de iki dakika santrifüj edin. HPLC-UV ve UPLC QTOF tarafından analiz edilmeden önce süpernatant'ı 0,22 mikrometre filtre membranından geçirin. Numuneyi test etmek için organik ilk aşamada devam edin.
Hücre kültürünün 500 mikrolitrelik aliquot çıkarın ve 35 mililitre santrifüj tüp veya 1.5 mililitre plastik santrifüj tüp içine yer. 500 mikrolitre numunenin 35 mililitrelik santrifüj tüpüne 0,1 gram sodyum klorür ve beş mililitre ekstrakt çözücü ekleyin. Karışımı bir dakikalığına girdaplayın.
Ve sonra 10 dakika dinlenmelerine izin verin. 10 mililitrelik cam bir tüp içine 2,5 mililitre supernatant alın ve 14 santigrat derecede bir azot buharlaştırıcı kullanarak yakın kuruluğa buharlaşır. Bir mililitre aseton ile kalıntı çözün.
Bir dakika için girdap, GC-FPD tarafından analiz önce 0.22 mikrometre filtre membran ı geçirin. On beş gün boyunca dört litreplastik tencere beş bitki koyun. Plastik kaplar içine Thiamethoxam veya dimethoaxe mililitre başına mililitre veya 100 mikrogram başına sıfır mikrogram ekleyin.
Önceden ıslatma dışında, önceki yönteme göre bozulmamış bitki örneğini hazırlayın ve orbitrap kütle spektrometresi ile analiz edin. 254 nanometre dalga boylarında Thiamethoxam ve Acetimoprid içeriği ve metabolik ürünleri tespit etmek için bir HPLCUV kullanın, ve Imidacloprid ve Imideproksaz 270 nanometre. Bir boru sütunkullanarak GC-FPD ile dimethoate ve omethoate içeriğini algılayın.
Karbon-18 sütunlu UPRC QTOF'u kullanarak hücre kültüründeki insektisit metabolitlerini tespit edin. UPLC Orbitrap kütle spektrometresi kullanarak test bitki ekstresinde böcek metabolitlerini tespit edin. Bir steril plantlet nasır daha düşük kontaminasyon esmerleme ama daha yüksek endüktivite olduğunu aldı çay yaprakları ndan nasır.
Steril yapraklardan elde edilen nasır her zaman parlak sarımsı, seçilmiş yapraklardan elde edilen nasır ise kahverengi lekelerle beyazdı. KT konsantrasyonu litrebaşına 0.1 miligram iken, nasır rengi sarımsı ve doku gevşek oldu. Kandus büyüme hızı en yüksek, kadar 61.5%zaman konsantrasyonu 2, 4-D litre başına bir miligram ve KT konsantrasyonu litre başına 0.5 miligram oldu.
Nasır büyüme verileri en iyi ve nasır büyüme oranı en yüksek ulaştı 46.9%Bu nedenle, bitki homent en iyi kombinasyonu 2 litre başına bir miligram oldu, 4-D ve çay nasır büyümesi için KT litre başına 0.1 miligram. Nasır yaprakları tamamen dördüncü alt kültürtarafından kapladı ve alt kültür döngüsü 28 gün iken. Nasır sarımsı renk ve gevşek doku ve hiçbir esmerlik ile şiddetle büyümüştü.
Nasırın brüt verileri ve hücre süspansiyonunun rengi karşılaştırıldıktan sonra, B5 sıvı ortamı hücre süspansiyon kültürü için daha uygundu. Hücre süspansiyon kültürünün OD değeri hücre büyüme miktarını temsil etmek için kullanılmıştır. Ekimin 75 günü boyunca, 40 mililitre başına 15 gramlık oranın diğer iki oranın kinden önemli ölçüde daha yüksek bir OD değerine sahipti.
Çay hücresi süspansiyon kültürü içinde hücre canlılığı TTC boyama ile test edildi. Renksiz TTC bileşiği canlı hücrelerin mitokondrisinde dehidrogenaz ile kırmızı formadin dönüştürülebilir, ancak ölü hücrelerde renk değiştirilemez. Ve bu bir çay hücresi süspansiyon kültürü kurma tüm sürecidir.
Bu bir hücre süspansiyon kültür tekniği kullanılarak çay farklı pestisitmetabolizması ilk karşılaştırmalı çalışmadır. Çeşitli pestisit metabolitleri tespit edildi ve bazıları daha fazla tutulan çay bitkileri araştırıldı. Bu yeni yöntem çay veya diğer bitkilerde pestisit metabolik çalışmalar için model olarak hizmet verebilir.
