Bu yöntem, karşı yüklü polimerlerin kendi kendine biraraya getirilmesinden oluşan nano partiküller olan polielektrolit kompleks misellerinin tasarımının, montajının ve karakterizasyonunun tam yolunu açıklar. Polielektrolit kendi kendine montaj ile bazı büyük zorluklar kinetik tuzakları kaçınarak ve nano tanecikleri karakterize vardır. Tarif ettiğimiz tuz tavlama tekniği, hem boyut hem de şekil olarak düşük dağılımlı misellerin tekrarlanabilir bir şekilde birleştirilmesine olanak sağlar ve ışık saçılımı, küçük açılı x-ışını saçılımı ve elektron mikroskobu gibi karakterizasyon yöntemlerini tanımlarız.
Terapötik nükleik asitlerin sağlanması nanotıp için uzun zamandır devam eden bir sorundur. Bu polielektrolit kompleks micelles nötr polimer korona nükleazlar ve bağışıklık yanıtı onları korur micelle çekirdeğinde onları tecrit etmek için nükleik asit güçlü negatif yük yararlanmak. Montaj yöntemi her türlü yüklü polimerler için geçerli olmalıdır.
Biz çeşitli polianions ve polikasyonlar ile test ettik ve karakterizasyon yöntemi yüzey aktif nano tanecikleri ve diğer hidrofobik tahrikli sistemler de dahil olmak üzere herhangi bir kendi kendine monte nano tanecikleri için geçerli olmalıdır. Oligonükleotid çözeltisini 70 derecede beş dakika kuluçkaya yatırarak başlayın. Kuluçkadan sonra, nükleik asitleri termal olarak anneal etmek için oda sıcaklığında 15 dakika soğutun, ardından 40 mikrolitre 20 milimolar yüklü konsantrasyon diblock kopolimer ekleyin.
Çözeltiyi hemen girdap layın ve oda sıcaklığında beş dakika kuluçkaya yatırın. Tuz anneal gerçekleştirmek için, bir azı dakikanihai konsantrasyonu için oligonükleotid çözeltisi sodyum klorür çözeltisi ekleyin ve maksimum hızda 10 saniye girdap. Karışımı oda sıcaklığında 10 dakika kuluçkaya yatırın, ardından diyaliz kartuşu içine yükleyerek devam edin.
Yüklemeden önce, kartuşları kalıcı işaretle etiketleyin ve membranları nemlendirmek için en az iki dakika arabellekte bekletin. Saat yönünün tersine bükerek kapağı çıkarın ve jel yükleme pipet ucu kullanarak numuneyi yükleyin. Fazla havayı gidermek ve kapağı değiştirmek için membranı hafifçe sıkın.
Kartuşları 1X PBS 0,5 azı kaşığı sodyum klorür diyaliz banyosuna koyun ve her iki membranda da banyoya maruz kalarak yüzerler. 24 saat sonra kartuşları 1X PBS'ye aktarın ve 24 saat daha bekletin. Son diyalizden sonra, kartuşları banyodan çıkararak, kapağı çıkararak ve jel yükleme pipet ucuyla numuneyi çıkararak numuneyi geri alın.
Numuneyi temiz bir 1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin ve kullanıma hazır olana kadar buzdolabında saklayın. Örneği el yazması talimatlara göre DLS enstrümanında hazırlayın, ardından sayım oranının tüm edinme süresi boyunca sabit olduğundan emin olmak için en az bir dakika veri alın. Otomatik korelasyon verilerini inceleyin.
Uzun süre taban çizgisi düz olmalı ve otokorelasyon eğrisi en az dağılımile pürüzsüz olmalıdır. Verilerdeki gürültü, daha fazla veri edinilerek geliştirilebilir. Irena kullanarak veri azaltma ve analiz gerçekleştirmek için, arka plan veri kümelerinde micelle alarak başlayın.
Bir günlük günlüğü ölçeğinde örneği ve arka planı birlikte çizin ve örneği arka plan oranına hesaplayın ve yüksek Q asimptot'u doğrulayın. Bu Q aralığı üzerindeki ortalama oranı hesaplayın ve hesaplanan oran ile arka planı ölçeklendirmek için veri işleme makrosu kullanın. Ardından arka plandaki çıkarılan sinyali Q'nun üzerine çizin ve orijinal verilerin üzerine yazmamaya emin olmak için verileri yeni bir adla kaydedin.
Modelleme makrosunun açın, ardından arka plan çıkarılan verileri yükleyin ve çizin. Polielektrolit kompleksi micelle veya PCM'nin dış yüzeyi için yaklaşık bir model bulmak için, veri denetimlerinde ılımlı Q aralığına akış seçin ve varsa salınımları içerdiğinden emin olun. Model denetimlerinde, ilk saçılma popülasyonunu seçin ve yalnızca onun kullanımda olduğundan emin olun.
Model için boyut dağılımını seçin, istenen dağıtım türünü seçin ve form faktörünü seçin. Bu örnek, kullanıcı formu faktörünün altına el ile eklenmesi gereken esnek bir silindir içindir. Esnek silindir form faktörünün karşıdan yüklendiği ve ekleyin, ardından silindirin uzunluğuna ve Kuhn uzunluğuna karşılık gelen birinci ve ikinci parametreler için işlev adlarını ve başlangıç değerlerini girdiniz.
Bu silindirler SAXS tarafından çözülebilecek kadar uzundur, böylece silindir uzunluğu parametresi büyük bir değerde sabitlenir. Ölçek, ortalama boyut ve genişlik alanlarına değerleri girerek aramanın ilk parametrelerini ayarlayın. Ardından, ortaya çıkan form faktörlerini çizmek için modeli hesapla'yı tıklatın.
Makul parametreler bulunduktan sonra, verilere uygun doğrusal olmayan en küçük kareler gerçekleştirmek için sığdır seçeneğini tıklatın. Ardından, PCM çekirdeğiiçindeki polimerlerin ayrı ayrı saçılmasını modellendirin. Aşırı saçılmanın oluştuğu Q aralığını seçmek için veri denetimlerini ayarlayın.
İkinci bir saçılma popülasyonu ekleyin ve yalnızca onun kullanımda olduğundan emin olun. Model için birleşik düzeyi seçin, modelin düşük Q'da aşırı dağılım öngörmediğinden emin olmak için GDA faktörlerini G ve RG'yi ayarlayın ve bu parametreler için ilk tahmin elde etmek için imleçler makrosu arasındaki uygun PB'yi kullanın. Form faktörüne gelince, birleşik düzey modeli için doğrusal olmayan bir uyum gerçekleştirin.
Kırınım tepe noktası varsa, Q ilgi aralığında kırınım tepe için üçüncü bir model ekleyin. Bireysel saçılma popülasyonları için yaklaşık uygun değerler elde edildikten sonra, üçünü birlikte açın ve birleştirilmiş uyumu optimize edin. Son olarak, her değerin fiziksel olarak makul olup olmadığını denetleyin ve klasördeki depoyu seçerek sığdırma kaydedin.
Bu yordamın sonucu, küçük açılı x-ışını saçılma verilerini çok çeşitli boyut ölçekleri üzerinde açıklayan kompozit bir model olmalıdır. Bu protokol, nükleik asit polielektrolit karmaşık misellerin veya PCM'lerin tasarımı, montajı ve karakterizei için kullanılmıştır.
Kısa tek iplikli oligonükleotidlerde nispeten uzun blok kopolimerlerden oluşan küresel PCM'ler için dinamik ışık saçılma verileri elde edilmiştir. Otomatik korelasyon işlevi, repIS boyut dağılımında tek boyutlu tepe noktasına ulaşan tek zaman ölçeği ile düz bir değere bozunur. Karmaşık küçük melek x-ışını saçılma veya SAXS yoğunluk spektrumları, mevcut olan birden fazla uzamsal korelasyon için modelleri birleştirerek doğru bir şekilde sığabilir ve çok açılı ışık saçılımı, saçılma ölçümlerini daha uzun uzunluk ölçeklerine genişletmek için kullanılabilir.
Farklı morfolojipcms de çekirdek yarıçapı ve şekli saxs veri uydurma elde edilen değerlerle tutarlı olduğunu doğrulamak için elektron mikroskobu ile görüntülenebilir. SAXS verilerini takarken, her saçılma özelliğini hesaba katmak ve doğru form faktörlerini kullandığınızdan emin olmak için TEM gibi ücretsiz yöntemler kullanmak önemlidir.
