Protokol, erişkin zebrabalığı kalp fonksiyonunun noninvaziv ve yüksek çözünürlüklü temsili ve analizine olanak tanır. Bu yöntem yetişkin kalp hastalığı modelleri ve potansiyel ilaç ekranlarının doğrulanması için kullanılabilir. Bu teknik, doğru görüntüleme için balığın hızlı konumlandırılmasına izin vererek doğru ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.
Bu noninvaziv ve balık hızlı kurtarma sağlayan sualtı yapılır. Görüntü edinme için platform kurmak için, saat 12 konumundaki bir süngerüzerinde kesi yapmak için küçük makas veya neşter kullanın. Bir cam kap ta sünger yerleştirin.
Çift taraflı bant kullanarak, ultrason platformunda sünger içeren cam kabı yapıştırın. Cam kabın platformun merkezinde olduğundan ve sıkıca bağlı olduğundan emin olun. Platform tutucunun sol tarafındaki ahzıkullanarak platformu yaklaşık 30 derece öne doğru yatırın.
Cam kabı, mililitre triain metansülfonat başına 0,2 miligram içeren yaklaşık 200 mililitre balık sistemi suyu ile doldurun. Transdüseri çalışan ray istasyonuna mikromanipülatör tutucunun içine yerleştirin ve transdüserin çifeniyi operatöre doğru çevirin. Sahne ile ilgili olarak çalışma tarafı uzunlamasına ile yere paralel dizi tutun.
X ve y-eksenleri boyunca hareket etmek için şimdi bağlı transdüser raylı sistem için her iki tarafta yaklaşık 10 santimetre yer bırakın. Kontrol yazılımına giriş yapın ve fareküçük damar seçin. Çalışmada indüklenen her hayvan için yeni bir çalışma yanı sıra yeni bir dizi oluşturun.
Tarayıcı sayfasında ekranın sol alt tarafında bulunan yeni çalışma düğmesine basın. Görünüm B modunda başlar. Bir balık ağı kullanarak, tricaine mililitre başına 0,2 miligram ile sistem suyu içeren küçük bir tankiçine balık aktarın.
Balık tamamen hiçbir hareket veya dokunmaya yanıt ile anestezi kadar bekleyin. Yavaşça ve hızlı bir şekilde yukarı bakan balık ventral tarafı ile daha önce yapılmış kesi içine sünger ile cam konteyner içine balık aktarın. Raylı sistemüzerindeki sapı kullanarak transdüseri yavaşça indirin ve balığın ventral tarafını operatöre bakacak kadar transdüserin çentikiyle kapatın.
Balıktan 2-3 milimetre açıklık bırakın. Balığın kalbi görselleşene kadar her üç eksendeki mikromanipülörü kullanarak platformu dönüştürücüye göre ayarlayın. Kalbi lokalize ettikten hemen sonra, B modunda kalın ve kalbe daha yakından bakmak için yakınlaştırarak alanı küçültün.
Gerekirse, dinamik aralığı 45-50 desibel olarak ayarlayarak görüntünün kalitesini veya kontrastını artırın. Daha fazla denetim seçeneğinde B modu denetimlerine gidin ve daha sonra değişikliği mod hazır ayarlarına kaydedin. Yeni bir seri resmine başlamadan önce her seferinde en iyi duruma getirilmiş görüntü edinme ayarını seçmek için mod hazır ayarlarına dokunun.
Uzun eksen düzleminde istediğiniz kadar görüntü alın. Sonra, kan akışı algılama ve edinimi için renk Doppler geçiş. Dokunmatik ekranı kullanarak, çeyreği atriyoventriküler valfin üzerine yerleştirin ve kırmızı renk sinyali ile ayırt edilen girişi yerelleştirin.
Kare hızını artırmak için mümkün olduğunca çeyrek alanını azaltın. Nabız dalgadoppler hareket örnek ventriküler kan giriş hızı etkinleştirin. Maksimum akış hızını algılamak için örnek hacim kapısını atriyoventriküler valfin ortasına yerleştirin.
Kırmızı renk sinyali daha sarımsı olur. Kan girişinin yönü ile hizalanır böylece parmakları kullanarak ekranda nabız dalga açısı ayarlayın. Ventriküle akan kanın hızını örneklemeye başlamak için başlat veya güncelleyin.
Ventrikül ve bulbus arasındaki kavşakta renk Doppler çeyreği yerleştirerek çıkış hızını belirleyin ve akışı yerelleştirin. Bu mavi renk sinyali ile ayırt edilir. Örnek hacim kapısını ventrikül bulbus kavşağından hemen önce yerleştirin ve açı düzeltme çizgisini kan akışının yönüyle eşleşecek şekilde ayarlayın.
Sinyal tepelerini tamamen algılamak ve izlemek için akış hızı panelinde anaçizgiyi yükselterek ayarlayın. En kısa sürede görüntü edinimi tamamlandığında, bir çay kaşığı kullanın ve düzenli sistem triaine ücretsiz havalandırılmış su içine balık aktarın ve balık kurtarmak sağlar. Kurtarma yardımcı olmak için, su ve oksijen transferi havalandırma teşvik etmek için bir transfer pipet kullanarak solungaçları üzerinde tekrar tekrar su fışkırtmak.
Genellikle solungaç hareketi ve yüzme devam etmek için iki dakika 30 saniye sürer. Görüntü analizi yazılımını açın. Bir resim seçin ve resim işleme simgesine tıklayın.
Ventriküler duvarların veya kan akış deseninin net bir şekilde görüntülenmesi için görüntünün parlaklığını ve kontrastını ayarlayın. B modu görüntüsünü kullanarak, kardiyak paket ölçümlerinde parasternal uzun eksen seçeneğinden açılır listeyi açın. Systole ve diastole ve diyastolik hacim ve son sistolik hacim ve son sistolik hacim ventriküler alan elde etmek için sisstole ve diastole de ventriküler iç duvar izlemek LV iz seçin.
Bu çalışmada, B-mod görüntüleri systole ve diastole ve oda ve duvar boyutları gibi boyutsal verilerin elde ve ventriküler iç duvarın izlenmesi için izin verdi. Kalp hızı, inme hacmi ve kardiyak debi gibi fonksiyonel verilerin yanı sıra fraksiyonel alan değişimi ve ejeksiyon fraksiyonu gibi ventriküler sistolik fonksiyon parametreleri de elde edildi. Renkli Doppler modu görüntüleri kullanarak atriyoventriküler kapak düzeyinde ölçümler de ventriküler giriş ve çıkış kan hızları sağladı.
Nabız dalga Doppler görüntü dayanarak, bir kalp hızı değeri üç ardışık aort akış zirveleri izleyerek oluşturuldu. En önemli şey doğru görüntüleme için ultrason platformu ve balık doğru konumlandırmak ve trikalin balık maruziyetini en aza indirmek tir. Bu prosedürü desteklemek için ek yöntemler aritmiler veya histoloji yöntemleri kalp dokusu yapısı veya hücre ölümü değerlendirmek için kalp disfonksiyonu hızlı tespiti için balık elektrokardiyogram içerir.
Bu teknikler zebrabalığı kalp fonksiyonunun değerlendirilmesine olanak sağlar ve zebrabalığı kalp hastalığı modellerinde kardiyak fenotip ilerler. Ayrıca yeni ilaçlar test etmek için izin verir, çalışma kalp hasarı ve rejeneratif kapasite. Tricaine MS-222 bir deri, göz ve solunum tahriş edici.
Trikain çözeltisi hazırlanırken koruyucu ekipmanlar bir toz maskesi, göz kalkanı ve eldiven içermelidir.
