Herkese merhaba. Ben Qixiao Jiang, Qingdao Üniversitesi Halk Sağlığı Okulu Toksikoloji Bölümü'nden Doçent. Araştırma grubum adına, kardiyo toksisite değerlendirmemizi geliştirmede tavuk embriyosunu kullanmanın varlıklarını sunacağım.
Tavuk embriyosu kolay manipülasyon, yüksek erişilebilirlik, kapalı bağımsız sistem vesaire gibi birden fazla avantajı olan klasik bir gelişim modelidir. Fenolik tannik asit gibi birden fazla çevresel kirletici ile çalışmak. Dizel egzoz, özellikle karbon nano tüpler üzerinde sorun.
Laboratuvarda birden fazla maruz kalma yöntemimiz var, ancak daha büyük bir nedenden dolayı, fonksiyonel değerlendirmeler de rutin olarak gerçekleştirilir. Bu videoda size pozlama yöntemlerinin ve morfolojik fonksiyonel değerlendirme yöntemlerinin ayrıntılarını göstereceğim. İlgileniyorsanız bizimle iletişime geçmek için çekinmeyin.
Teşekkürler. İşte size tanıtabileceğim maruz kalma yöntemlerimiz. Şimdi sunacağım ilk yöntem, doğrudan hava hücresine enjekte edeceğin bir hava hücresi enjeksiyonu.
Yumurtaların yüzeyini poli-iyot çözeltisi ile temizleyin. Bu, deiyonize su ile seyreltilmiş, 1/5 ticari olarak mevcut poli-iyodür çözeltisidir. Ve sonra, yumurta kabuğuu fırçalamadan kağıt mendille kurutuyorum.
Bu önemlidir, çünkü ovma kabuğun dışındaki koruyucu tabaka kaplamalarını kıracaktır. Karanlık odadaki tüm yumurtaları temizledim ve hava hücresini bir kalemle işaretledim. Kabukta çatlaklar olan yumurtaları hariç tutun.
Ayrıca yan tarafında hava hücreleri olan yumurtaları hariç tutun. Eğer bunun künt bir ucu varsa, bunların normal şekilde yumurtadan çıkma olasılığı oldukça düşüktür. Hava hücresi alanını ve metal probu %75 alkolle sterilize edin.
Onları kurulayın ve ardından sonda ile hava hücresi alanının merkezinde küçük bir delik açın. Sondayı hava hücresinin derinliklerine sokmayın. Bunun yerine, kabuğu sadece sondanın ucuyla kırın.
Delik hala yeterince büyük değilse, ucun yerleştirilmesine izin sağlayacak kadar büyük olana kadar kabuğu mevcut deliğin yakınında tekrar kırın. Pipet ucunu iç zara dokunan uçla deliğe yerleştirin. Yavaşça karışımı enjekte edin ve en az 10 saniye orada tutun.
Bu, dağıtılan yağın tamamen dağıtılmasını sağlamaktır. Sonra da ucunu çıkar. Şimdi, deliği bir fırça ve bir damla erimiş parafinle kapatın.
Erimiş parafinleri iç belleğe damlatmamaya dikkat edin. Mühürlendikten sonra, istenen embriyonik aşamaya ulaşana kadar inkübatöre yumurta yerleştirin. İkincisi, tanıtacağım yöntem mikro enjeksiyon.
Her şeyden önce, yumurtaların hava enjeksiyonu bölümünde açıklandığı gibi temizlenmesi ve işlenmesi gerekir. Bu işlemin sterilize edilmiş davlumbazda yapılması gerekir. Hava hücresi alanını ve aletleri asetonla sterilize edin.
Metal prob ile hava hücresi alanının merkezinde küçük bir delik açın. Probu hava hücresine derinlemesine sokmayın, aksi takmış olabilir. Ardından, çap yaklaşık iki milimetre olana kadar deliği dikkatlice büyütmek için aynı işlemi kullanın.
Bu, iç belleğin oran onayına izin verebilir. Daha sonra çözeltiyi mikro enjektöre yükleyin ve iğneyi delikten iç zara yaklaşık toplam üç milimetre boyunca dikkatlice yerleştirin. Çözeltiyi yavaşça dağıtın ve ardından iğneyi çıkarın.
İğneyi mümkün olduğunca dik tutun. İnce, deliği küçük bir bant parçasıyla kapatın. Embriyo dehidrasyonunu ve sonraki inkübasyon sırasında ölümü önlemek için deliği tamamen kapatın.
Sunacağım üçüncü yöntem hava hücresi infüzyonu. Hava hücresine gaz kirleticisi aşılarsınız. Hava hücresi enjeksiyon bölümünde açıklandığı gibi yumurtaları temizleyin ve işleyin.
Ve sonra embriyonik 17. Hava hücresi bölgesini işaretlemek için embriyonik 17. Embriyonik 18.
Ve sonra hava hücresinin iki tarafında dikkatlice iki küçük delik açın. Biri gaz veya aerosol enjeksiyonu içindir. Diğeri havamızı genişletmek için.
Deliklerin boyutunu dikkatlice kontrol edin, böylece enjeksiyon deliğinin tarafı kateter iğnesinin yerleştirilmesi için yeterlidir, genişleyen deliğin çapı biraz daha büyük olmalıdır. Yaklaşık bir milimetre çapında. Bu, hedef gazı veya aerosolü tutmak için kullandığımız örnek torba.
Kullandığınız cihazla değiştirebilirsiniz. Bir şırınd içine hafifçe 10 mL gaz veya aerosol dökün. Ve sonra, şırıngayı kateter iğnemize iç iğne uzaktan kumandası ile dikkatlice takın, böylece yumuşak olur.
Bu kateter iğnesini infüzyon deliğine yavaşça yerleştirin. İçeri girdikten sonra kateter iğneye basınç uygulayın. Bu, enjeksiyon bölgesinden sızıntıyı en aza indirmektir.
infüzyon onayınız için dışarı atma deliği ile başka bir parmak takılabilir. infüzyonu nazikçe yaparsanız, dışarı atılan delikten hava akışı kolayca hissedilmelidir. Hava hücresindeki orijinal hava dışarı atılıyor.
infüzyon yapıldığında, her iki deliği de hemen kapatın. Bu kasetler ve yumurtaları inkübatöre geri verin. Uç nokta değerlendirme sürecimizi tanıtabilirim.
Hayvanları pentobarbital 33 mg / kg ile tamamen uyuşturun. Açıklar tarafından test edilen IP enjeksiyonu. Daha sonra tavukları operasyon masasına yerleştirin.
Karın bölgesini ve elektrotları etanol ile sterilize edin. Daha sonra, karın alt kısmının iki tarafından sürekli olarak iki iğne elektrodu yerleştirin. Cildi biraz kaldırarak iğnelerin karın boşluğuna girmemesine dikkat edin.
İğneyi de oradan sok. Yerleştirildikten sonra, iğneyi göğüs boşluğunun kenarına ulaşana kadar dikkatlice ileri itin. İğnenin vücudun derinliklerine gitmediğinden veya ciltten dışarı çıkmadığından emin olun.
Daha sonra ölçümleri elektrokardiyografik bir aletle yapın. EKG yapabilen diğer seminer aletleri de kullanılabilir. Bu bizim ikinci uç nokta değerlendirme yöntemimiz Motrin için haritalamaktır.
Bu, HME yolundaki kalbin kesitleridir. Bu ölçümle ölçeceğimiz doğru karıncık. Bunu yapmak için iki cetvel kullanıyoruz.
Cetvel 1 ve cetvel 2. Şimdi cetvel birini ekrana kopyalıyoruz ve uygun boyuta yeniden boyutlandırıp döndürüyoruz. Ve yatay çizginin iki ucu 3 sağ ventrikül duvarının 2 ucuna dayanması için hareket ettiriyoruz.
Ve şimdi üç sağ ventrikül duvarımızdan geçen yedi ölçüm hattımız var. Şimdi ikincil cetveli de resme kopyalıyoruz. Ayrıca biraz yeniden boyutlandırırız ve benzer şekilde yerleştirilecek şekilde döndürüp değiştiririz.
Bu yatay çizgi sağ ventrikülün dış duvarına paralel gider. Ve dik olan, cetvelin beyaz madde çizgilerinin iç duvarla veya sağ karıncığın birleştiği noktaya gider. Ve daha sonra J.Bu işlemi örnek başına 7 kez tekrarlayarak sağ ventrikülümüzün temsili ölçümüyle ölçülebilmesi için ölçüm noktaları yapıyoruz.
Size mevcut sonuçların bir özetini göstereceğim. Bu, kuluçkadan önce yumurtaya PFOA enjeksiyonudur ve enjeksiyonun arttırılmasıyla serum konsantrasyonu LPF'nin serumdaki etkili bir şekilde arttığını görebilirsiniz. Gösteriye göre, mikro enjeksiyonun etkinliği.
A'nın kontrol olduğunu ve B'nin büyük floresan q proteini içeren antivirüs ekspresinin enjekte edildiği yer olduğunu görebilirsiniz. Güçlü bir floresan görebilirsiniz. Ve bu epitel infüzyonunun etkinliği için bir gösteridir.
infüzyon ile miyokard dokusunda dramatik lif optik değişiklikler gözlendiğini görebilirsiniz. Tamam. Ayrıca kuluçkalık tavukların R-R Aralıklarının 0, 1 ve 2 hafta olduğunu görebilirsiniz. Ayrıca dizel egzozlu infüzyondan sonra önemli ölçüde değişti.
Bu yöntemi hesaba katdığınızı gösterir. Burada, epitel infüzyonunun etkinliğini de bu örnekte görebilirsiniz. Dizel egzoz ile aerosol aşılandıktan sonra kalbin sağ ventriküllerinin etkili bir şekilde arttığını görebilirsiniz.
Ve tabii ki, burada histopomorfometrik yöntemleri kullanıyoruz. Sadece gösteriyoruz. Bu oldukça etkilidir. Tamam.
Sana sunacağım tüm yöntemler bunlar. Umarım bu, Gelişimsel Toksikoloji'de güçlü bir araştırma aracı olarak diğer insanların tavuk embriyosu ile çalışmalarını kolaylaştırabilir. İyi günler.
