Bu protokol, Drosophila tümör allotransplantasyonunda otoenjektör aparatının kullanımını tanımlayan ilk protokoller arasındadır. Son yıllarda popülaritesi artan bir konu. Bu yöntemin temel avantajı, tümör allotransplantasyonunun hızını, tutarlılığını ve verimini artırarak Drosophila'da kanser araştırmalarının etkinliğini arttırmasıdır.
Drosophila'da tümör allotransplantasyonu, ustalaşması zor olabilecek hassas bir tekniktir. Sabırlı olun ve uygulamanın mükemmelleştirdiğine güvenin. Sinekleri geçtikten ve yumurtaları altı gün boyunca 18 santigrat derecede kuluçkaya yatırdıktan sonra, yumurtadan çıkmış larvaları içeren şişeleri 29 santigrat derecede ayarlanmış bir inkübatöre aktarın.
Anestezi uygulanan vahşi tip veya mutant yetişkin sinekleri cinsiyetlerine göre sıralayın. Beş santimetre uzunluğunda bir sinek bandı parçasını, yapışkan tarafı yukarı bakacak şekilde mikroskop slaytına sabitleyin. Kanatlarını forseps ile banda yapıştırarak sinekleri hareketsiz hale getirin.
Kontrol kutusunu ve otomatik enjektörü, ışık mikroskobunun karşı taraflarına yerleştirin. Cam kılcal damarın bir ucunu dört adımlı bir mikro pipet çektirici kullanarak işleyin ve dar bir kapalı uca ısıtın. 3,5 inçlik bir cam kılcal damar hazırlamak için kılcal damarı yaklaşık 60 derecelik bir açıyla kesmek için forseps kullanın.
Enjektörün kapağını hafifçe sökün. Enjektör iğnesini toplam uzunluğunun% 70 ila% 80'i görünene kadar ilerletmek için boş düğmeyi basılı tutun. Cam kılcal damarı mineral yağ ile doldurmak için bir şırınga kullanın.
Larvalardan birini seçin ve SG hayali halka tümör diseksiyonuna hazırlanmak için 100 mikrolitre Schneider's Medium ile dolu bir diseksiyon plakasına aktarın. Larva gövdesinin orta bölümünü tutmak için bir çift forseps kullanarak, larva kafasını başka bir çift forseps kullanarak sıkıştırın ve uzunlamasına bir germe kuvveti uygulayın. Larvaların Y şeklindeki SG'sini bulun ve izole edin, ardından bitişik dokuyu çıkararak SG hayali halka tümörünü diseke edin.
Cam kılcal damarı, doldurma düğmesini basılı tutarak en üstteki 0,5 santimetrelik segmente kadar Schneider's Medium ile doldurun. Birincil bir tümörü bulun ve tümör kılcal damara emilene kadar doldurma düğmesine basın. Tümörün kılcal damarın ucunda veya kılcal damarın ucundan birkaç milimetre uzakta oturduğundan emin olun.
Banda hareketsiz hale getirilmiş yetişkin bir sinek bulun. Daha sonra alt karnı hafifçe tutmak ve karnın alt lateral kütikülünü kılcal damarla delmek için forseps kullanın. Tümör yeni konakçı karnına girene kadar boş düğmeye basın.
Forseps kullanarak, konağın kanatlarını banttan çıkarmak için yavaşça sıkıştırın. Sonra taze yiyeceklerle yeni bir şişeye yerleştirin. Allograftan yaklaşık 10 ila 14 gün sonra bir floresan mikroskobu kullanarak konakçı karınlarında büyümüş tümörlerin taranması ve yetiştirilen allogreftlenmiş tümörün iki çift forseps kullanılarak konakçıdan çıkarılması.
Karnı tutmak için bir çift forseps kullanın ve diğer çift karın kütikulasını kesmek için tahsis edilmiş tümörü açığa çıkarın. Tümörü bağlı konakçı dokulardan dikkatlice izole edin. Steril iğneler kullanın ve tümörleri kılcal boyuta uygun daha küçük parçalara ayırın.
Tümörün allotransplantasyonunu tamamlamak için yeni nesil yetişkin konakçılar için bu işlemi tekrarlayın. Tümör gelişim süreci, allotransplantasyon sonrası 10. günde erişkin bir konakçı karnında büyüyen birinci nesil SG hayali halka tümörünün canlı görüntülenmesi ile izlendi. Allotransplantasyon sonrası 10. günde konakçı karnın büyük bir bölümünü kaplayan altıncı jenerasyon SG hayali halka tümörü burada gösterilmiştir.
Bu aşamada görüntüleme, tümör büyüme paternlerinin yanı sıra göç ve invazyon davranışlarını ortaya çıkarmaya yardımcı olabilir. Tümör transplantasyonu, tümör progresyonu, evrimi ve metastazı için uzunlamasına çalışmalar için harika bir tekniktir. Tümör konakçı etkileşimlerini incelemek için büyük önem taşıyan sonuçlar.
Bu proto, Temodal ilaçlarını kullanan kanser ilaç taramalarında büyük potansiyele sahiptir. Bu tekniği kullanarak, araştırmacılar araştırmada önemli ölçüde zaman ve çaba tasarrufu sağlayabileceklerdir.
