Doğrudan kan dolaşımına verilmesi gereken bir bileşik için, intravenöz uygulamayı optimize etmek deneysel prosedürün önemli bir parçasıdır. Ayrıntılı protokolümüz, fare juguler veni yoluyla çoklu intravenöz bolus dozlamasının gerçekleştirilmesi ve fare hipoksi pulmoner arteriyel hipertansiyon modelinde doğru hemodinamik değerlendirme için arteriyel ve sağ ventrikül kateterizasyonlarının nasıl gerçekleştirileceği için adım adım talimatlar sağlar. Burada bulunan prosedürler, primer arter hipertansiyonu için bir tedavi geliştirmek için IV kök bileşik uygulama platformuyla ilgilenen araştırmacılar için önemli sonuçlardır.
Araştırmacılar, herhangi bir fare hastalığı modelinde ilaç geliştirme bileşiği taraması için bu juguler ven bolus enjeksiyon yöntemini kullanabilirler. Başarılı IV bolus enjeksiyonu ve kan basıncı ölçümleri çok fazla pratik gerektirir. Başlamak için, fareyi anestezi odasından çıkarın.
Anestezi uygulanmış fareyi diseksiyon mikroskobunun altındaki bir enjeksiyon platformuna sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Anesteziyi% 1.5 izofluran içeren bir burun konisi ile koruyun ve vücudu hareketsiz hale getirmek için dört bacağı yapışkan bantla hafifçe sabitleyin. Cerrahi alanı üç alternatif povidon iyot çözeltisi ve% 70 etanol ile üç kez nazikçe fırçalayın.
0,5 santimetre uzunlamasına bir kesi yaptıktan sonra, kas ve yağ dokularını ayırmak ve sağ dış juguler veni bulmak için forseps kullanın. Ardından şah damarına 28G steril bir iğne sokun. İğne eğimi yukarı bakacak şekilde.
Bileşiği damara enjekte etmek için şırınga pistonuna yavaşça bastırın. Geri akışı önlemek için iğnenin damar içinde 10 saniye daha kalmasına izin verin. İğneyi çıkarın ve kanamayı önlemek için enjeksiyon bölgesine basınç uygulamak için pamuklu çubuk kullanın.
Cildi 5/0 dikişle dikin ve hayvanı, kafes tabanı yataksız bir kağıt havluyla kaplı bir kurtarma kafesine yerleştirin. İlk olarak, kateter yerleştirme bölgesinden istenen kateter ucu konumuna olan mesafeyi ölçün. Yerleştirme derinliğinin görsel bir göstergesini sağlamak için iki kateter mesafe işaretini işaretleyin, kuruluğu önlemek için veteriner merhemini doğrudan fare gözlerinin oküler yüzeyine uygulayın.
Fareyi diseksiyon mikroskobunun altındaki bir enjeksiyon platformuna sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Cildi mandibuladan sternuma kestikten sonra, tükürük bezlerini ayırın ve trakeayı ortaya çıkarın. Karotis arteri manipüle ederken damar spazmı gelişimini yavaşlatmak için boşluğa 0,5 mililitre PBS koyun.
Arka plan olarak damarın altına bir parça beyaz kağıt yerleştirerek sağ karotis arterin beş milimetrelik bir bölümünü dikkatlice izole edin. 8-0 dikiş, damarın kraniyal ucunu kapatmak için kalıcı bir düğüm atın. Daha sonra, aorttan kan akışını geçici olarak engellemek için ilk gevşek düğümü bağlayın.
Sonra ikinci gevşek düğümü ilk iki dikiş arasına bağlayın. 25G'lik bir iğne kullanarak, kateteri kalıcı ve ikinci gevşek düğüm arasındaki damarla aynı hizada geçirecek kadar büyük küçük bir delik açın. Kateteri uçtan 1,5 inç uzakta tutun ve kateterin ucunu arter deliğinden yavaşça sokun.
Kateterin ve kateterin geçişine izin veren damarın etrafındaki ikinci gevşek düğümü sıkın. İlk gevşek düğümü yavaşça serbest bırakın. Basınç analizi arteriyel kan basıncı profili gösterene kadar kateteri kateter üzerindeki işarete göre çıkan aorta doğru yerleştirmeye devam edin.
Veri toplama sistemini ve yazılımını kullanarak sistemik kan basıncı verilerini kaydedin. Kateterin dışarı çekilmesine izin vermek için orta dikiş düğümünü gevşetin. Ardından kanamayı önlemek için ilk gevşek düğümü sabitleyin ve kateteri karotis arterden dışarı çekin.
Sağ dış juguler veni çevreleyen bağ dokusundan dikkatlice izole edin. 8-0 dikiş, tüm küçük dalları bağlayın ve damarın kraniyal ucunu kapatmak için kalıcı bir düğüm atın. Sonra kabın kaudal ucuna gevşek bir düğüm atın.
Kalıcı düğümün proksimalinde küçük bir delik açmak için 25G'lik bir iğne kullanın. Kateteri tutun ve kateteri damarın kesiğine yerleştirin ve kateter ve damarın etrafındaki kuyruk düğümünü sıkın. Kateteri yavaşça sağ kalbe itin.
Kateter işaretine göre kateter ucu derinliğini izleyin. Kateter ucu pozisyonunu yazılımdaki basınç dalgası izlemesine göre değerlendirin. Kateterin ucu sağ ventrikülde olduğunda, monitör tipik bir sağ ventrikül sistolik basınç izlemesi gösterecektir.
Kateteri sabit tutun ve verileri beş dakika boyunca toplayın. Kayıt tamamlandıktan sonra kateteri dikkatlice dışarı çekin ve basınç kaydı olmadığını gözlemleyin. Kuyruk düğümünü geminin etrafına bağlayın.
Kateteri tekrar PBS solüsyonuna yerleştirin. Normozi kontrollü C57 black six farede sağ ventrikül kateterizasyonu sırasında, venöz sistemin farklı bölgelerindeki hemodinamik dalga formundaki değişiklikte görüldüğü gibi başarılı sağ ventrikül odacığı erişimi elde edildi. Sistemik kan basıncı ve sağ ventrikül sistolik basıncı, hipoksi veya normoksiye maruz kaldıktan dört hafta sonra kapalı bir göğüs faresinde ölçüldü.
Normoksi grubu ile karşılaştırıldığında, hipoksi grubunda sağ ventrikül sistolik basıncı anlamlı olarak artmıştı. 7C1/let-7 mikro RNA bileşiği ile tedavi, hipoksi grubuna kıyasla sağ ventrikül sistolik basıncında önemli ölçüde azalma ile sonuçlanırken, sistemik kan basıncı hiçbir grupta değişmedi. Kapalı göğüs farelerinde kırmızı ventrikül sistolik basıncının değerlendirilmesi, karmaşık kırmızı ventrikül anatomisi nedeniyle zor bir iştir.
Araştırmacılar kırmızı ventrikül kateterizasyonunda uzun süreli ve tekrarlanan girişimlerden kaçınmalıdır. Juguler ve bolus dozlama prosedürümüz, herhangi bir fare hastalığı modelinde ilaç geliştirme bileşik taraması için kullanılabilir. Pulmoner arter hipertansiyonu için bir tedavi geliştirmek için IV kök bileşik uygulama platformunu kullanabiliriz.
