Para um composto que precisa ser administrado diretamente na corrente sanguínea, otimizar a administração intravenosa é a parte chave do procedimento experimental. Nosso protocolo detalhado fornece instruções passo a passo para realizar múltiplas doses intravenosas em bolus via veia jugular de camundongo e como realizar cateterismos arteriais e ventrículos direitos para avaliação hemodinâmica precisa em modelo de hipertensão arterial pulmonar com hipóxia em camundongos. Os procedimentos aqui apresentados são resultados importantes para investigadores interessados na plataforma de administração de compostos da raiz IV para desenvolver um tratamento para hipertensão arterial primária.
Os pesquisadores podem usar este método de injeção em bolus da veia jugular para a triagem de compostos do desenvolvimento de drogas em qualquer modelo de doença em camundongos. Injeção IV em bolus bem-sucedida e medições da pressão arterial exigem muita prática. Para começar, remova o mouse da câmara de anestesia.
Coloque o camundongo anestesiado em decúbito dorsal em uma plataforma de injeção sob um microscópio de dissecção. Manter a anestesia através de um cone nasal com isoflurano a 1,5% e conter suavemente as quatro pernas com fita adesiva para imobilizar o corpo. Esfregar suavemente a área cirúrgica três vezes com três rodadas alternadas de solução de iodopovidona e etanol a 70%.
Após fazer um corte longitudinal de 0,5 centímetro, utilizar pinça para separar o músculo e os tecidos adiposos e localizar a veia jugular externa direita. Em seguida, insira uma agulha estéril 28G na veia jugular. Com o bisel da agulha virado para cima.
Pressione lentamente o êmbolo da seringa para injetar o composto na veia. Deixe a agulha permanecer dentro da veia por mais 10 segundos para evitar o refluxo. Retire a agulha e use um cotonete para aplicar pressão no local da injeção para evitar sangramento.
Suture a pele com sutura 5/0 e coloque o animal em uma gaiola de recuperação com o fundo da gaiola coberto por um papel toalha sem cama. Primeiro, meça a distância do local de inserção do cateter até o local desejado da ponta do cateter. Marque duas marcações de distância do cateter para fornecer uma indicação visual da profundidade de inserção, aplique a pomada veterinária diretamente na superfície ocular dos olhos do camundongo para evitar o ressecamento.
Coloque o rato em decúbito dorsal numa plataforma de injeção por baixo de um microscópio de dissecção. Após incisar a pele da mandíbula até o esterno, separe as glândulas salivares e exponha a traqueia. Coloque 0,5 mililitros de PBS na cavidade para retardar o desenvolvimento de espasmo do vaso ao manipular a artéria carótida.
Isole cuidadosamente uma seção de cinco milímetros da artéria carótida direita, colocando um pedaço de papel branco sob o vaso como fundo. Usando um 8-0 sutura, amarre um nó permanente para fechar a extremidade cranial do vaso. Em seguida, amarre o primeiro nó solto para ocluir temporariamente o fluxo sanguíneo da aorta.
Em seguida, amarre o segundo nó solto entre as duas primeiras suturas. Usando uma agulha 25G, faça um pequeno orifício que seja grande o suficiente para passar o cateter em linha com o vaso entre o nó permanente e o segundo nó solto. Segure o cateter a 1,5 centímetros da ponta e insira suavemente a ponta do cateter através do orifício da artéria.
Aperte o segundo nó solto ao redor do cateter e vaso que ainda permite a passagem do cateter. Solte suavemente o primeiro nó solto. Continue a inserir o cateter em direção à aorta ascendente de acordo com a marcação no cateter até que a análise da pressão mostre um perfil de pressão arterial.
Registrar os dados de pressão arterial sistêmica usando o sistema de aquisição de dados e software. Solte o nó de sutura média para permitir que o cateter seja retirado. Em seguida, prenda o primeiro nó solto para evitar sangramento e puxe o cateter para fora da artéria carótida.
Isole cuidadosamente a veia jugular externa direita do tecido conjuntivo circundante. Usando um 8-0 suturar, ligar todos os pequenos ramos e amarrar um nó permanente para fechar a extremidade cranial do vaso. Em seguida, amarre um nó solto na extremidade caudal do vaso.
Use uma agulha 25G para fazer um pequeno orifício proximal ao nó permanente. Segure o cateter e insira o cateter no corte da veia E aperte o nó caudal ao redor do cateter e do vaso. Empurre lentamente o cateter para o coração direito.
Monitorar a profundidade da ponta do cateter com base na marca do cateter. Avaliar a posição da ponta do cateter de acordo com o traçado de onda de pressão no software. Quando a ponta do cateter estiver no ventrículo direito, o monitor mostrará um traçado típico da pressão sistólica do ventrículo direito.
Manter o cateter estável e coletar os dados por cinco minutos. Após o término do registro, puxe cuidadosamente o cateter para fora e observe que não há registro de pressão. Amarre o nó caudal ao redor do vaso.
Coloque o cateter novamente em solução PBS. Durante a cateterização do ventrículo direito em camundongo C57 preto seis controlado com normóxia, obteve-se sucesso no acesso à câmara ventricular direita, visto pela mudança na forma de onda hemodinâmica em diferentes regiões do sistema venoso. A pressão arterial sistêmica e a pressão sistólica do ventrículo direito foram medidas em um camundongo torácico fechado quatro semanas após a exposição à hipóxia ou normóxia.
Em comparação com o grupo normóxia, a pressão sistólica do ventrículo direito estava significativamente aumentada no grupo hipóxia. O tratamento com composto de micro RNA 7C1/let-7 resultou em redução significativa da pressão sistólica do ventrículo direito em comparação com o grupo hipóxia, enquanto a pressão arterial sistêmica não se alterou em nenhum dos grupos. A avaliação da pressão sistólica do ventrículo vermelho em camundongos fechados de tórax é um desafio devido à complexa anatomia do ventrículo vermelho.
Os pesquisadores devem evitar tentativas prolongadas e repetidas de cateterismo do ventrículo vermelho. Nosso procedimento de dosagem jugular e em bolus pode ser usado para triagem de compostos de desenvolvimento de drogas em qualquer modelo de doença em camundongos. Podemos usar a raiz IV da plataforma de administração de compostos para desenvolver um tratamento para hipertensão arterial pulmonar.
