血流に直接投与する必要がある化合物の場合、静脈内投与の最適化は実験手順の重要な部分です。私たちの詳細なプロトコルは、マウス頸静脈を介して複数の静脈内ボーラス投与を実施するためのステップバイステップの指示と、マウス低酸素肺動脈高血圧症モデルで正確な血行動態評価のために動脈および右心室カテーテル検査を実行する方法を提供します。ここで紹介する手順は、原発性動脈性高血圧症の治療法を開発するための化合物投与プラットフォームのIVルートに関心のある研究者にとって重要な結果です。
研究者は、この頸静脈ボーラス注入法を使用して、あらゆるマウス疾患モデルにおける医薬品開発化合物スクリーニングを行うことができます。IVボーラス注射と血圧測定を成功させるには、多くの練習が必要です。まず、マウスを麻酔室から取り出します。
麻酔をかけたマウスを、解剖顕微鏡の下の注射台に仰臥位で置きます。1.5%イソフルランのノーズコーンで麻酔を維持し、粘着テープで4本の脚を静かに拘束して体を固定します。ポビドンヨード溶液と70%エタノールを交互に3回使用して、手術部位を3回優しくこすります。
縦に0.5センチの切開を行った後、鉗子を使用して筋肉と脂肪組織を分離し、右の外頸静脈を見つけます。次に、28Gの滅菌針を頸静脈に挿入します。針の斜角を上に向けて。
シリンジプランジャーをゆっくりと押して、コンパウンドを静脈に注入します。.逆流を防ぐために、針をさらに10秒間静脈内にとどめます。針を外し、綿棒で注射部位に圧力をかけ、出血を防ぎます。
5/0縫合糸で皮膚を縫合し、ケージの底を寝具なしでペーパータオルで覆った状態で動物を回収ケージに入れます。まず、カテーテル挿入部位から所望のカテーテル先端位置までの距離を測定する。挿入深さを視覚的に示すために2つのカテーテル距離マーキングをマークし、乾燥を防ぐためにマウスの眼の表面に動物用軟膏を直接塗布します。
マウスを仰臥位にして、解剖顕微鏡の下の注射台に置きます。下顎骨から胸骨までの皮膚を切開した後、唾液腺を分離し、気管を露出させます。0.5ミリリットルのPBSを腔内に入れて、頸動脈を操作しながら血管のけいれんの発生を遅らせます。
右頸動脈の5ミリメートルの切片を、背景として血管の下に白い紙を置いて慎重に分離します。8-0 を使う縫合糸、永久結び目を結び、血管の頭蓋端を閉じます。次に、最初の緩い結び目を結び、大動脈からの血流を一時的に遮断します。
次に、最初の2つの縫合糸の間に2番目の緩い結び目を結びます。25Gの針を使用して、永久結び目と2番目の緩い結び目の間の血管に沿ってカテーテルを通すのに十分な大きさの小さな穴を開けます。カテーテルの先端から1.5インチの位置を保持し、カテーテルの先端を動脈の穴からそっと挿入します。
カテーテルと血管の周りの2番目の緩い結び目を締めて、カテーテルの通過を許可します。最初の緩んだ結び目をそっと解放します。圧力分析で動脈血圧プロファイルが示されるまで、カテーテルのマークに従ってカテーテルを上行大動脈に向かって挿入し続けます。
データ収集システムとソフトウェアを使用して全身血圧データを記録します。中央の縫合糸節を緩めて、カテーテルを引き抜くことができます。次に、出血を防ぐために最初の緩い結び目を締め、カテーテルを頸動脈から引き出します。
右外頸静脈を周囲の結合組織から慎重に隔離します。8-0 を使う縫合し、すべての小さな枝を結紮し、永久結び目を作って血管の頭蓋端を閉じます。次に、容器の尾端に緩い結び目を作ります。
25Gの針を使用して、永久結び目の近位に小さな穴を開けます。カテーテルを保持し、カテーテルを静脈の切り口に挿入し、カテーテルと血管の周りの尾の結び目を締めます。カテーテルをゆっくりと右心臓に押し込みます。
カテーテルマークに基づいてカテーテル先端の深さを監視します。ソフトウェアの圧力波トレースに従って、カテーテル先端の位置を評価します。カテーテルの先端が右心室にある場合、モニターには典型的な右心室収縮期血圧トレースが表示されます。
カテーテルを安定させ、5分間データを収集します。記録が完了したら、カテーテルを慎重に引き出し、圧力記録がないことを確認します。尾の結び目を容器の周りに結びます。
カテーテルをPBS溶液に戻します。正常酸素制御C57ブラックシックスマウスの右心室カテーテル検査中に、静脈系のさまざまな領域での血行動態波形の変化に見られるように、右心室へのアクセスが成功しました。全身血圧と右心室収縮期血圧は、低酸素症または正常酸素症への曝露から4週間後の閉鎖胸部マウスで測定されました。.
正常酸素群と比較して、低酸素群では右心室収縮期血圧が有意に上昇した。7C1/let-7マイクロRNA化合物による治療では、低酸素群と比較して右心室収縮期血圧が有意に低下しましたが、全身血圧はどの群でも変化しませんでした。閉鎖胸部マウスにおける赤心室収縮期血圧の評価は、赤心室の解剖学的構造が複雑なため、困難である。
研究者は、赤心室カテーテル法の長期的かつ反復的な試みを避ける必要があります。.当社の頸動脈およびボーラス投与手順は、あらゆるマウス疾患モデルにおける医薬品開発化合物スクリーニングに使用できます。化合物投与プラットフォームのIVルートを使用して、肺動脈性肺高血圧症の治療法を開発することができます。
