بالنسبة للمركب الذي يجب إعطاؤه مباشرة في مجرى الدم ، فإن تحسين الإدارة عن طريق الوريد هو الجزء الأساسي من الإجراء التجريبي. يوفر بروتوكولنا التفصيلي تعليمات خطوة بخطوة لإجراء جرعات متعددة من البلعة الوريدية عبر الوريد الوداجي للفأر ، وكيفية إجراء قسطرة البطين الشرياني والأيمن لإجراء تقييم ديناميكي دقيق في نموذج ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي لنقص الأكسجة في الفأر. الإجراءات الموجودة هنا هي نتائج مهمة للمحققين المهتمين في الجذر الوريدي لمنصة الإدارة المركبة لتطوير علاج لارتفاع ضغط الدم في الشريان الأساسي.
يمكن للباحثين استخدام طريقة حقن بلعة الوريد الوداجي هذه لفحص مركب تطوير الأدوية في أي نماذج لمرض الفئران. يتطلب حقن البلعة الوريدية الناجحة وقياسات ضغط الدم الكثير من الممارسة. للبدء ، قم بإزالة الماوس من غرفة التخدير.
ضع الفأر المخدر في وضع ضعيف على منصة حقن أسفل مجهر التشريح. الحفاظ على التخدير عن طريق مخروط الأنف مع 1.5 ٪ إيزوفلوران ، وتقييد بلطف الأرجل الأربعة بشريط لاصق لشل حركة الجسم. افرك المنطقة الجراحية برفق ثلاث مرات بثلاث جولات متناوبة من محلول اليود البوفيدون و 70٪ إيثانول.
بعد إجراء قطع طولي 0.5 سم ، استخدم ملقط لفصل العضلات والأنسجة الدهنية وتحديد موقع الوريد الوداجي الخارجي الأيمن. ثم أدخل إبرة معقمة 28 جيجا في الوريد الوداجي. مع توجيه شطبة الإبرة لأعلى.
اضغط ببطء على مكبس المحقنة لحقن المركب في الوريد. اترك الإبرة تبقى داخل الوريد لمدة 10 ثوان إضافية لمنع التدفق العكسي. قم بإزالة الإبرة واستخدم قطعة قطن للضغط على موقع الحقن لمنع النزيف.
خياطة الجلد مع خياطة 5/0 ووضع في قفص الانتعاش مع أسفل القفص مغطاة بمنشفة ورقية دون الفراش. أولا ، قم بقياس المسافة من موقع إدخال القسطرة إلى موقع طرف القسطرة المطلوب. ضع علامة على علامتين لمسافة القسطرة لتوفير مؤشر مرئي لعمق الإدخال ، ضع المرهم البيطري مباشرة على سطح العين لعيون الفأر لمنع الجفاف.
ضع الماوس في وضع ضعيف على منصة حقن أسفل مجهر التشريح. بعد شق الجلد من الفك السفلي إلى القص ، افصل الغدد اللعابية وفضح القصبة الهوائية. ضع 0.5 ملليلتر من PBS في التجويف لإبطاء تطور تشنج الأوعية أثناء التلاعب بالشريان السباتي.
اعزل بعناية مقطعا يبلغ طوله خمسة ملليمترات من الشريان السباتي الأيمن عن طريق وضع قطعة من الورق الأبيض أسفل الوعاء كخلفية. باستخدام 8-0 خياطة ، وربط عقدة دائمة لإغلاق نهاية الجمجمة من السفينة. بعد ذلك ، اربط أول عقدة فضفاضة لعرقلة تدفق الدم مؤقتا من الشريان الأورطي.
ثم اربط العقدة الثانية السائبة بين أول غرزتين. باستخدام إبرة 25G ، قم بعمل ثقب صغير كبير بما يكفي لتمرير القسطرة بما يتماشى مع الوعاء بين العقدة السائبة الدائمة والثانية. أمسك القسطرة على بعد 1.5 بوصة من الطرف وأدخل طرف القسطرة برفق من خلال فتحة الشريان.
شد العقدة الثانية المفكوكة حول القسطرة والوعاء الذي لا يزال يسمح بمرور القسطرة. حرر برفق أول عقدة فضفاضة. استمر في إدخال القسطرة باتجاه الشريان الأورطي الصاعد وفقا للعلامة الموجودة على القسطرة حتى يظهر تحليل الضغط صورة ضغط الدم الشرياني.
تسجيل بيانات ضغط الدم النظامية باستخدام نظام الحصول على البيانات والبرمجيات. قم بفك عقدة الخياطة الوسطى للسماح بسحب القسطرة. ثم اربط العقدة السائبة الأولى لمنع النزيف واسحب القسطرة من الشريان السباتي.
اعزل بعناية الوريد الوداجي الخارجي الأيمن عن النسيج الضام المحيط. باستخدام 8-0 خياطة ، ربط جميع الفروع الصغيرة وربط عقدة دائمة لإغلاق نهاية الجمجمة من الوعاء. ثم اربط عقدة فضفاضة على الطرف الذيلي للسفينة.
استخدم إبرة 25G لعمل ثقب صغير بالقرب من العقدة الدائمة. امسك القسطرة وأدخل القسطرة في قطع الوريد وشد العقدة الذيلية حول القسطرة والوعاء. ادفع القسطرة ببطء إلى القلب الأيمن.
راقب عمق طرف القسطرة بناء على علامة القسطرة. قم بتقييم موضع طرف القسطرة وفقا لتتبع موجة الضغط في البرنامج. عندما يكون طرف القسطرة في البطين الأيمن ، ستظهر الشاشة تتبعا نموذجيا للضغط الانقباضي للبطين الأيمن.
حافظ على استقرار القسطرة واجمع البيانات لمدة خمس دقائق. بعد اكتمال التسجيل ، اسحب القسطرة بعناية ولاحظ عدم وجود تسجيل ضغط. اربط العقدة الذيلية حول الوعاء.
ضع القسطرة مرة أخرى في محلول PBS. أثناء قسطرة البطين الأيمن في فأر C57 الأسود الذي تسيطر عليه normoxia ، تم الحصول على وصول ناجح إلى غرفة البطين الأيمن كما يتضح من التغيير في شكل موجة الدورة الدموية في مناطق مختلفة من الجهاز الوريدي. تم قياس ضغط الدم النظامي والضغط الانقباضي البطين الأيمن في فأر صدر مغلق بعد أربعة أسابيع من التعرض لنقص الأكسجة أو normoxia.
بالمقارنة مع مجموعة normoxia ، زاد الضغط الانقباضي البطين الأيمن بشكل ملحوظ في مجموعة نقص الأكسجة. أدى العلاج بمركب الحمض النووي الريبي الصغير 7C1 / let-7 إلى انخفاض كبير في الضغط الانقباضي للبطين الأيمن مقارنة بمجموعة نقص الأكسجة ، في حين أن ضغط الدم النظامي لم يتغير في أي مجموعة. يمثل تقييم الضغط الانقباضي للبطين الأحمر في فئران الصدر المغلقة تحديا بسبب تشريح البطين الأحمر المعقد.
يجب على الباحثين تجنب المحاولات المطولة والمتكررة لقسطرة البطين الأحمر. يمكن استخدام إجراء الجرعات الوداجية والبلعة الخاصة بنا لفحص مركب تطوير الأدوية في أي نماذج لأمراض الفئران. يمكننا استخدام الجذر الوريدي لمنصة الإدارة المركبة لتطوير علاج لارتفاع ضغط الدم في الشريان الرئوي.
