Name: a murine model of group b streptococcus vaginal colonization
Uploaded: 2016-11-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.

Tutto il lavoro animale è stato approvato dall&#39;Ufficio di Lab Animal Care a San Diego State University e condotta sotto gli standard veterinari riconosciuti. Topi femmina, età 8 - 16 settimane, sono stati utilizzati per lo sviluppo di questo metodo. 1. Preparazione e intraperitoneale Iniezione di β-estradiolo <ol><li> Misurare β-estradiolo (0,5 mg / topo) su carta pesare indossando dispositivi di protezione adeguati (DPI). ATTENZIONE: β-estradiolo può essere assorbito attraverso la p...

Per promuovere l&#39;avanzamento della comprensione delle interazioni GBS con lo sia l&#39;host e altri microbi nell&#39;ambito dell&#39;ospite, è necessario un modello animale. Questo lavoro descrive gli aspetti tecnici di stabilire GBS colonizzazione vaginale nei topi. Questo protocollo raggiunge&gt; 90% colonizzazione topi senza l&#39;uso di anestetici per inoculare i batteri o per raccogliere campioni di tampone, immuno-soppressori per consentire la colonizzazione, vaginale prelavaggio, o additivi per addensare l&#...

Streptococcus agalactiae, streptococco di gruppo B (GBS), è un incapsulato batterio Gram-positivi che spesso viene isolato dal intestino e tratto genito-urinario degli adulti sani. Nel 1970, GBS è emerso come l&#39;agente principale di mortalità neonatale infettiva, con oltre 7.000 casi di malattia neonatale all&#39;anno 1. Precoce della malattia di GBS (EOD) si verifica nelle prime ore o giorni di vita, si pone come polmonite o distress respiratorio, e spesso si sviluppa in sepsi, mentre la malattia ad esordio tardivo (LOD) ne consegue dopo diversi mesi e si presenta con batteriemia, che spesso anticipi a meningite 2. A partire dal 2002, i Centri per il Controllo e la Prevenzione delle Malattie raccomanda lo screening universale per GBS colonizzazione vaginale a fine gestazione e la profilassi antibiotica intrapartum (IAP) per le madri GBS-positivi 1. Nonostante la riduzione della malattia ad esordio precoce a circa 1.000 casi negli Stati Uniti ogni anno a causa di IAP,GBS rimane la principale causa di sepsi neonatale ad esordio precoce e tardiva comparsa rimane inalterato 1. Sia in utero, durante il travaglio, o anche nei casi ad esordio tardivo, l&#39;esposizione neonatale a GBS richiede la sopravvivenza, trasversale attraverso una serie di ambienti e barriere di accoglienza, evasione immune, e, nel caso di meningite, attraversamento del sangue- altamente regolamentato encefalica 2. A monte di queste interazioni virulenti nel neonato è la colonizzazione iniziale del tratto vaginale materno. Materna GBS tassi di colonizzazione vaginale vanno 8-18% nei paesi sviluppati e in via di sviluppo, con un tasso medio stimato del 12,7% 3,4. GBS colonizzazione del tratto vaginale durante la gravidanza può essere costante, intermittente, o di natura transitoria tra singole donne 5. È interessante notare che, a materni di età&gt; 36 anni è associata con la colonizzazione persistente 6. Numerosi fattori di rischio biologici e socio-economici per la colonizzazione GBS vaginaleè stato identificato. Fattori biologici includono gastrointestinale colonizzazione GBS e l&#39;assenza di Lactobacillus all&#39;interno dell&#39;intestino. Tuttavia, l&#39;etnia, l&#39;obesità, l&#39;igiene e l&#39;attività sessuale sono stati anche associati con GBS trasporto vaginale 7. Anche se noti per causare infezioni neonatali, GBS provoca anche una varietà di infezioni materne sia peri-parto e dopo il parto. GBS carrello viene aumentata in donne che presentano una vaginiti 8 e, in alcuni casi, può anche essere l&#39;entità della malattia 9. Inoltre, GBS ascensione del tratto riproduttivo durante la gravidanza può causare infezioni intra-amniotico o corionamnionite 10. Inoltre, fino al 3,5% delle gravidanze, GBS diffonde alla vescica urinaria per provocare una infezione delle vie urinarie o batteriuria asintomatica 11. bacteriuria GBS durante la gravidanza è associato ad un aumentato rischio di febbre intrapartum, corionamnionite, parto prematuro, e premature rottura delle membrane 12. Presi insieme, la presenza di GBS nel tratto vaginale è legata ad infezioni di più tessuti dell&#39;ospite, e la capacità di eliminare GBS da questa nicchia è fondamentale per la salute materna e neonatale. Fino a poco tempo, la maggior parte del lavoro esaminare interazioni GBS con il tratto cervicovaginale era limitato a modelli cellulari in vitro 13-15. Questi esperimenti in vitro hanno rivelato fattori batterici che sono importanti per l&#39;adesione, tra cui proteine di superficie come una pili e ricco di serina ripete 17,18, così come i sistemi di regolazione a due componenti 15,19 e la risposta trascrizionale globale dell&#39;epitelio vaginale GBS 19. Tuttavia, per chiarire completamente le interazioni ospite-microbo all&#39;interno del tratto vaginale, un modello animale robusto è necessario. I primi lavori hanno dimostrato che GBS può essere recuperato dal tratto vaginale di topi inoculati 20,21 e ratti &lt;sup&gt; 22 sia in condizioni di gravidanza e non gravide. Nel 2005, a breve termine la colonizzazione GBS vaginale è stato modellato nei topi per esaminare l&#39;efficacia di un enzima fago litico per il trattamento di GBS vaginale nel corso di un periodo di 24 ore 23. Diversi anni dopo, un modello di topo GBS colonizzazione vaginale a lungo termine è stato sviluppato per studiare i fattori di accoglienza e batteriche che disciplinano GBS persistenza. Questo modello ha identificato numerosi fattori che contribuiscono alla GBS colonizzazione, comprese le appendici superfici 17,18 e GBS sistemi a due componenti 19,24. Questo modello ha contribuito alla identificazione dei meccanismi di risposta dell&#39;ospite 19,25 ed è stato utilizzato per testare diverse strategie terapeutiche, tra cui peptidi immunomodulatori 26 e probiotici 27. Questo protocollo fornisce le indicazioni necessarie per inoculare GBS nel tratto vaginale mouse e per monitorare successivamente colonizzazione e raccogliere campioni per ulteriori analisi.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="592">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Sesame oil&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S3547-250ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:216px;">&#946;-Estradiol&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E8875-1G</td>
			<td>CAUTION: Wear appropriate PPE. &#946;-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">200 &#956;L gel loading pipette tips&#160;</td>
			<td style="width:91px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1252-0610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs</td>
			<td style="width:91px;">Puritan</td>
			<td style="width:119px;">25-801 A 50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">CHROMagar StrepB</td>
			<td style="width:91px;">DRG International</td>
			<td style="width:119px;">SB282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Todd Hewitt Broth</td>
			<td style="width:91px;">Hardy Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">7161C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 G, 1.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">26 G, 0.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.45 &#956;m PVDF syringe filters</td>
			<td style="width:91px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">6900-2504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1X</td>
			<td style="width:91px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of group b streptococcus vaginal colonization

Streptococcus agalactiae (streptococco di gruppo B, GBS), è un Gram-positivi, colonizzatore asintomatico del tratto gastrointestinale umano e del tratto vaginale del 10 - 30% degli adulti. Negli individui immunocompromessi, compresi i neonati, donne incinte e gli anziani, GBS può passare a un patogeno invasivo provocando sepsi, artrite, polmonite e la meningite. Perché GBS è un batterio patogeno leader di neonati, la profilassi corrente è composto di uno screening in ritardo di gestazione per GBS colonizzazione vaginale e la successiva terapia antibiotica peri-parto delle madri GBS-positivi. Heavy GBS onere vaginale è un fattore di rischio per entrambe le malattie neonatali e la colonizzazione. Purtroppo, poco si sa circa l&#39;host e fattori batterici che incoraggiare o consentire GBS colonizzazione vaginale. Questo protocollo descrive una tecnica per stabilire persistente GBS colonizzazione vaginale utilizzando un unico β-estradiolo pre-trattamento e campionamento giornaliero per stabilire loa battericad. La comunicazione precisa inoltre particolari metodi per somministrare terapie o reagenti di interesse aggiuntivi e per raccogliere vaginale liquido di lavaggio e tessuti dell&#39;apparato riproduttivo. Questo modello di topo favorirà la comprensione dell&#39;interazione GBS-host all&#39;interno dell&#39;ambiente vaginale, che porterà a potenziali bersagli terapeutici per il controllo materno colonizzazione vaginale durante la gravidanza e per prevenire la trasmissione al neonato vulnerabili. Sarà anche essere di interesse per aumentare la nostra comprensione delle interazioni generali batterico-ospite nel tratto vaginale femminile.

Durante lo sviluppo di questo modello, sono state fatte diverse osservazioni per quanto riguarda i fattori che influenzano la durata della GBS colonizzazione vaginale. Per determinare fase estrale come ad impatti di inoculazione GBS persistenza batterica, i topi sono stati in scena il giorno della inoculazione mediante liquido di lavaggio vaginale. La Figura 1 illustra le quattro fasi del ciclo estrale mouse, come determinato da wet-montare liquido di lavaggio vaginale, ...

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A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Lo scopo di questo protocollo è di imitare gruppo umano B Streptococcus (GBS) la colonizzazione vaginale in un modello murino. Questo metodo può essere usato per studiare risposta immunitaria e fattori batterici contribuiscono GBS persistenza vaginale, nonché per testare strategie terapeutiche.

Un modello murino di Gruppo B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Colonizzazione vaginale

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Murine Model of CD40-activation of B cells

Modello murino di CD40-attivazione delle cellule B

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Ricerca

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