Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Мы признаем Хенг Lin Yeap, Крис Патон, Petrina Джонсон и Клэр Дойг за их вклад в развитие наших методов поддержания колонии и три анонимные отзывы за их предложения, которые помогли улучшить рукопись. Наши исследования поддерживается программы грантов и стипендий для ААА от национального здравоохранения и Совет медицинских исследований и перевод грант от Уэллком траст. PAR является получателем Австралийской правительство исследований подготовки программы стипендий.

Крови кормление комаров на человеке был одобрен в университете Мельбурна человеческой этики Комитета (утверждение #: 0723847). Все добровольцы условии сообщил письменного согласия.
1. личиночной воспитания
Примечание: Комаров проводятся в 26 ± 0,5 ° C и 50-70% относит...

После протокола, представленные здесь для поддержания Wolbachia-инфицированных А.е. aegypti следует обеспечить здоровые комаров неизменного качества производятся для экспериментов и открыть поле релизов. В отличие от других протоколов, которые приоритеты производства массовых кол?...

Комары Aedes aegypti несут ответственность за некоторые из наиболее важных арбовирусов в мире, включая денге и чикунгунья, Зика1передачи. Эти вирусы становятся растущей угрозой для глобального здравоохранения, как широкое распространение А.е. aegypti в тропиках продолжает расширяться2,3,4. Женщины А.е. aegypti преференциально питаются человеческой кровью5 и таким образом, как правило, живут в непосредственной близости от людей, особенно в городских районах, где население наиболее плотной. Через этой тесной связи с людьми они также адаптированы к породе в искусственной среде обитания, включая шины, горшки, желобов и водных резервуаров6,7. А.е. aegypti также легко адаптироваться к лабораторных сред, где они могут соблюдаться без каких-либо специальных требований после собираются непосредственно из поля, в отличие от некоторых других видов рода Aedes 8, 9,10. Их простота в обслуживании видел их широко изучены в лаборатории в широкий спектр областей, в конечном счете целью уничтожения комаров заболеваний могут передавать.
Традиционно арбовирусами управления сильно зависит от использования инсектицидов для сокращения популяций комаров. Однако существует растущий интерес к подходов, где выращены в лабораторных условиях и затем выпустили в природных популяциях измененных комаров. Выпущенные комаров может быть генетически модифицированных11,12,13, биологически14,15, через облучения16, химическая обработка17,18, или с совмещенной19 методы подавления популяций комаров или заменить их на комаров, которые являются тугоплавкие арбовирусами передачи20.
Wolbachia являются бактерии, которые в настоящее время используются в качестве биологического контроля агента для арбовирусов. Несколько штаммов Wolbachia были недавно внесены в А.е. aegypti экспериментально с использованием эмбриональных микроинъекции21,,2223,24. Эти штаммы снижают способность арбовирусов распространения и тиражирования в комаров, уменьшая их передачи потенциальных23,25,26,27,28 . Wolbachia инфекции передаются от матери к потомству, однако некоторых штаммов вызвать бесплодие при инфицированных мужчин спариваться с неинфицированных женщин22. Wolbachia-инфицированных мужчин, поэтому могут быть освобождены в больших количествах для подавления населения естественный комаров, как недавно продемонстрировано в других видов Aedes 15,29. Однако поскольку Wolbachia также препятствовать арбовирусами передачи в А.е. aegypti, комаров также может быть освобожден для замены коренного населения бедных векторов. А.е. aegypti экспериментально зараженных Wolbachia теперь выпускаются в поле в нескольких странах, используя этот последний подход14,30,31.
Wolbachia-основанные подходы для арбовирусами управления опираться на четкое понимание взаимодействия между Wolbachia, комаров и окружающей среды. Wolbachia происходят естественно в широком диапазоне насекомых, и штаммы, введены комаров разнообразны в их эффекты32. Как в А.е. aegypti24вводятся новые типы Wolbachia инфекции, необходимо охарактеризовать каждого штамма для их воздействия на комаров фитнес, размножение и арбовирусами вмешательства под ряда условий. Поэтому строгие эксперименты в лабораторных условиях требуется оценить потенциал для Wolbachia штаммов для достижения успеха в области.
Открытое поле релизы А.е. aegypti с Wolbachia инфекций может часто требуют тысячи, десятки тысяч комаров за релиз зоны, чтобы быть выращены каждую неделю14,30,31. Успех первоначального релизы могут быть улучшены путем выпускать комаров большого размера для максимизации их плодовитость33 и34,спаривания успех35. Комаров, также должны быть адаптированы к условиям, которые они будут испытывать в этой области, однако долгосрочные Лаборатория воспитания могут вызвать изменения в поведении и физиологии, которые могут повлиять на поле производительности36,37, 38.
Мы опишем простой протокол для выращивания А.е. aegypti в лаборатории с использованием основного оборудования. Этот протокол предназначен для обеих одичал типа и Wolbachia-инфицированных комаров, последний из которых могут потребовать особого внимания как некоторые штаммы Wolbachia имеют существенные последствия для комаров истории жизни черты39, 40. воспитание условия избежать переполненности и конкуренция за питание производить комаров постоянный размер, который имеет решающее значение для векторных компетентности и фитнес экспериментов и гарантирует, что комары являются здоровыми для поля релиз41 . Мы также принимаем меры предосторожности для сведения к минимуму Лаборатория адаптации и инбридинга путем уменьшения селективного давления, и обеспечения того, чтобы следующее поколение выборку из случайных большой бассейн. Однако лабораторных сред, заметно отличаются от полевых условиях, и долгосрочное обслуживание льготных условиях может уменьшить фитнес комаров после освобождения в поле37,42,43 . Мы поэтому Крест женщин из лаборатории линий на поле собранные мужчины периодически, приводит в колониях, которые генетически аналогичны для экспериментальных сравнения и что адаптированы к целевой области населения39. Методы не требуют какого-либо специализированного оборудования и может масштабироваться задней десятки тысяч людей в неделю для поля релизов. Протокол также устанавливает приоритеты фитнес комаров внутри и между поколениями, важным фактором для насекомых, предназначенных для создания в природных популяциях. Протокол подходит для большинства лабораторий, которые требуют обслуживания А.е. aegypti, особенно для экспериментальных сравнений, где важны стабильное качество комаров и relatability в поле.

<table width="1661">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">Wild type Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:1087px;">Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w Mel-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w AlbB-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w MelPop-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Instant dried yeast</td>
			<td style="width:168px;">Lowan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">5 L plastic tub</td>
			<td style="width:168px;">Quadrant</td>
			<td style="width:119px;">Q110950</td>
			<td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td>
			<td style="width:168px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">16152</td>
			<td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic containers</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Clicker counter</td>
			<td style="width:168px;">RS Pro</td>
			<td style="width:119px;">710-5212</td>
			<td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rearing trays</td>
			<td style="width:168px;">Gratnells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cages</td>
			<td style="width:168px;">BugDorm</td>
			<td>DP1000</td>
			<td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td style="width:119px;">AA272225</td>
			<td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup lid</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td>GB030005</td>
			<td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cotton wool</td>
			<td style="width:168px;">Cutisoft</td>
			<td style="width:119px;">71841-13</td>
			<td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">White Sugar</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rope</td>
			<td style="width:168px;">M Recht Accessories</td>
			<td>C323C/W</td>
			<td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic cup (large)</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Sandpaper</td>
			<td style="width:168px;">Norton Master Painters</td>
			<td>CE015962</td>
			<td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Filter paper</td>
			<td style="width:168px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-150</td>
			<td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Latex gloves</td>
			<td style="width:168px;">SemperGuard</td>
			<td>Z560979</td>
			<td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

Комары Aedes aegypti , экспериментально зараженных Wolbachia используются в программах по борьбе с распространением арбовирусов денге и чикунгунья Зика. Wolbachia-инфицированных комаров может быть выпущен в поле либо сокращения размеров населения через несовместимые вязки или преобразовать населения с комаров, которые являются тугоплавкие для передачи вируса. Для этих стратегий для достижения успеха комаров, выпущенный в поле из лаборатории должны быть конкурентоспособными с родной комаров. Однако ведение комаров в лабораторных условиях может привести к инбридинга, генетического дрейфа и лабораторных адаптации, который может уменьшить их пригодности в области и может посрамить результаты экспериментов. Для проверки пригодности различных инфекций Wolbachia для развертывания на местах, необходимо поддерживать комаров в контролируемой лабораторной среде через несколько поколений. Мы опишем простой протокол для поддержания А.е. aegypti комаров в лаборатории, которая подходит для обоих Wolbachia-дикого типа и инфицированных комаров. Методы минимизации Лаборатория адаптации и осуществлять ауткроссинга увеличить актуальность экспериментах поля комаров. Кроме того колонии поддерживаются при оптимальных условиях для максимизации их пригодности для открытого поля релизов.

Рисунок 4 демонстрирует эффекты субоптимальные питания на развитие А.е. aegypti личинок. Когда контейнеры предоставляются с 0,25 мг продовольствия на личинки в день или меньше, время разработки увеличивает для мужчин и женщин, и менее синхронного чем в ?...

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Поддержание инфицированных комаров Aedes aegypti с Wolbachia

Комары Aedes aegypti , инфицированных Wolbachia выпускаются в природных популяциях для подавления передачи арбовирусов. Мы описываем методы задней А.е. aegypti с Wolbachia инфекции в лаборатории для экспериментов и поля релиз, принимая меры предосторожности для сведения к минимуму Лаборатория адаптации и отбора.

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia Бактериальные инфекции у дрозофилы

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Инъекция дсРНК в женский А. Комары aegypti

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Микроинъекция А. Эмбрионы aegypti получить Трансгенные комары

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

Протокол денге инфекций в Комары (A. aegypti) и определение инфекции Фенотип

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

Поддержание Wolbachia в бесклеточных среднего

In this video protocol, procedures are demonstrated to (1) purify Wolbachia symbionts out of cultured mosquito cells, (2) use a fluorescent assay to ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Препарирование Средняя кишка и слюнных желез от Ae. aegypti комаров

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

Строительство Лучше Mosquito: Идентификация генов Включение малярия и лихорадка денге Сопротивления в gambiae А. и А. aegypti комаров

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-опосредованной Нокдаун гена и<em&gt; В Vivo</em&gt; Анализ Диурез в взрослых женщин<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Комары

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Физиологические Записи и РНК Секвенирование Вкусовые придатков Желто-лихорадки комаров<em&gt; Комар желтолихорадочный</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Жир тела орган культуры системы в Aedes Aegypti, вектор вируса Зика

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...