Method Article
بروتوكول لدينا توضح كيفية تشريح الفئران الغدة الثديية في البطن وكيفية الاستعداد يتصاعد الغدة الثديية كلها. فهو يصف أيضا كيفية تحليل الغدة الثديية التشكل باستخدام ثلاث نقاط في نهاية (عدد البراعم نهاية طرفية ، استطالة الظهارية والتمايز) واستخدام هذه النتائج للتنبؤ خطر الاصابة بسرطان الثدي لدى الفئران التي تعرضت لتعديلات الغذائية في الرحم أو أثناء مقتبل البلوغ.
دراسات في نماذج من القوارض تبين ان سرطان الثدي التعرض للعوامل الغذائية / الهرمونية في الرحم خلال فترة البلوغ وعندما الغدة الثديية يخضع النمذجة واسعة وإعادة النمذجة ، القابلية للتغيير مسرطنة بفعل أورام الثدي. وقد وصفت نتائج مماثلة على البشر : على سبيل المثال ، يزيد من خطر ارتفاع الوزن عند الولادة في وقت لاحق من الاصابة بسرطان الثدي ، والمدخول الغذائي من فول الصويا خلال الطفولة ينخفض خطر الاصابة بسرطان الثدي. ويعتقد أن هذه التعديلات قبل الولادة وبعدها تحدث تغييرات شكلية الغذائية المستمرة في الغدة الثديية التي بدورها تعديل احتمال الاصابة بسرطان الثدي لاحقا في الحياة. هذه التغيرات المورفولوجية تعكس على الأرجح مدى تعديلات جينية ، مثل التغيرات في الحامض النووي ، والتعبير histones ميرنا التي تؤثر ثم النسخ الجيني. نحن في هذه المقالة تصف كيف يمكن للتغييرات في مورفولوجية الغدة الثديية يمكن التنبؤ خطر الاصابة بسرطان الثدي لدى الفئران. بروتوكول يصف لنا على وجه التحديد كيفية تشريح الفئران وإزالة الغدة الثديية في البطن وكيفية الاستعداد يتصاعد الغدة الثديية كلها. فهو يصف أيضا كيفية تحليل الغدة الثديية التشكل وفقا لنقطة نهاية الثلاثة (عدد البراعم نهاية طرفية ، استطالة الظهارية وتمايز) ، واستخدام البيانات للتنبؤ لخطر الاصابة بسرطان الثدي.
1. إزالة الغدة الثديية في البطن وإعداد جبل الجامعة
2. تحليل الغدة الثديية المورفولوجيا جبل الجامعة
ويتم تحليل الغدة الثديية مورفولوجيا يتصاعد كله وفقا للنقاط التالية النهائي والنتائج مرتبطة مع خطر الاصابة بسرطان الثدي.
3. الجس والأورام الثديية في الفئران القياس والارتباط لالمورفولوجيا الغدة الثديية
4. ممثل النتائج
سوف تشريح دقيق للوحة الدهون الثديية وتجهيز لwholemount تسمح بتقييم الدولة التنموية من الغدة الثديية. عندما يتم كل خطوة بشكل صحيح ، وكلها شجرة الثدي الظهارية مرئيا بوضوح داخل وسادة من الدهون ، وهذا يسمح بسهولة تحديد عدد TEBs وحساب كثافة براعم السنخية والفصيصات. قد عثرات في إعداد wholemounts تشمل عدم تشريح لوحة كاملة الدسم ، وتحديد غير كافية ، وتبادل المعلومات غير كافية.
وتقييم التشكل الغدة الثديية تقديم معلومات عن عدد من الهياكل الحالية التي يمكن أن تؤدي إلى أورام الثدي (TEBs) ، ودرجة التمايز لهياكل الظهارية (براعم السنخية والفصيصات) ، وقياس النمو (استطالة الأقنية). من المهم أن TEBs منفصلة لغايات المحطة ؛ وتقع هذه الأخيرة في نهاية البعيدة للظهارة ، على غرار TEBs ، لكنها أصغر من TEBs ولا تؤدي إلى أورام خبيثة. وينظر أيضا في تاريخ المحطة شجرة الظهارية.
الشكل 1 : نتيجة ممثل إعدادا جيدا الغدة الثديية جبل بأكمله وكانت كل مكونات تشريح الغدة بشكل صحيح والقرمز تلطيخ هو الأمثل.
الشكل 2 : نتيجة الممثل من غير مهيأة لشن الغدة الثديية كاملة الغدة تم تشريح بشكل صحيح (الجزء القاصي للغدة مفقود) ، لم تمتد بشكل صحيح وإزالة الشحميات لم يحدث تماما.
ويمكن استخدام تقييم الغدة الثديية المورفولوجية النقاط النهائية ونمو الشجرة الظهارية التنبؤ بما اذا كانت المناورات في وقت مبكر الحياة الغذائية أو غيرها من المعالجات التي تغير في البيئة الرحم أو الهرمونية سابق للبلوغ ، وتعديل في وقت لاحق خطر الاصابة بسرطان الثدي. منذ يبدأ سرطان الثدي في البشر في الهياكل الثديية (وحدات محطة مفصص الأقنية ، TDLUs) مشابهة لTEBs في الفئران ، ويمكن استخدام هذه التقنية لتحديد احتمالات التعرض الحياة المبكرة تؤثر على خطر الاصابة بسرطان الثدي. كذلك ، في المرأة كثافة عالية mammographic يزيد من خطر الاصابة بسرطان الثدي بنسبة 4-6 أضعاف ، ويمكن استخدامها في تقييم نمو شجرة الثدي الظهارية للتعرف على العوامل التي تحدد كثافة mammographic والعوامل التي تحد من هذه الكثافة. للحصول على هذه المعلومات ، ينبغي تشريح الغدة الثديية بالكامل ، امتدت بشكل صحيح على شريحة زجاجية حتى يتسنى لجميع مكوناته يمكن تصور تحت المجهر. بالإضافة إلى ذلك ، سوف السليم القرمز تلطيخ وإزالة الشحميات في توفير الزيلين يتصاعد بأكملها التي هي مناسبة لسرطان الثدي تقييم المخاطر.
NCI (U54 CA00100970) ، NCI (1 CA150040 R03 - 01) ، ACS (116602 - PF - 09 - 018 - 01 - CNE)
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Glacial acetic acid | Electron Microscopy Sciences | AX0073-9 | Carnoy’s Fixative |
Absolute ethanol | The Waner-Graham Co. | 64-17-5 | Carnoy’s Fixative |
Carmine | Sigma-Aldrich | C1022 | Carmine solution |
Aluminum potassium sulfate | Sigma-Aldrich | A7167 | Carmine solution |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved