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我々のプロトコルは、ラット腹部乳腺を細かく分析し、どのように乳腺全体のマウントを準備する方法について説明します。また、3つのエンドポイント(終端蕾の数、上皮伸長と分化)を使用して、乳腺の形態を分析し、食事の修飾にさらされたラットで乳腺がんのリスクを予測するためにこれらの結果を使用する方法について説明します。子宮内でまたは思春期前の時期の間に。
子宮と思春期の時の食事/ホルモン因子へのエクスポージャーその乳がんショーの齧歯類モデルでの研究は、乳腺が広範なモデリングとリモデリングを受けるとき、発癌物質誘発性乳腺腫瘍の感受性を変化させる。同様の知見がヒトに記載されている:例えば、高い出生時体重は、乳がんの発症後のリスク増大、および小児期の大豆の摂取は乳癌リスクを減少させる。それはこれらの出生前および出生後の食事の変更が順番に人生の後半で乳がんのリスクを変更することを乳腺の永続的な形態変化を誘導すると考えられている。これらの形態学的変化は、おそらくそのようなDNAメチル化の変化、ヒストンし、遺伝子の転写に影響を与えるmiRNAの発現などのエピジェネティックな変更を、反映している。この記事では、乳腺の形態の変化がラットで乳腺がんのリスクを予測する方法について説明します。我々のプロトコルは、特に細かく分析し、除去ラット腹部乳腺を、どのように乳腺全体のマウントを準備する方法について説明します。また、3つのエンドポイント(終端蕾の数、上皮伸長と分化)することと乳腺癌を発症するリスクを予測するためにデータを使用するに応じて乳腺の形態を分析する方法について説明します。
1。腹部乳腺の除去と全山の準備
2。乳腺全山のモルフォロジーの解析
乳腺の全体のマウントの形態は、以下のエンドポイントと乳癌リスクとの相関結果に基づいて分析されます。
3。触診とラットと乳腺の形態との相関性の乳腺腫瘍の測定
4。代表的な結果
乳腺脂肪体とwholemountにその処理を慎重に解剖は乳腺の発達状態の評価が可能になります。各ステップが正しく完了すると、全体の乳腺上皮ツリーは、明らかに脂肪パッド内に表示されており、これはTEBsと肺芽や小葉の密度の計算の数を容易に決定することができます。準備wholemountsの失策は、全体の脂肪パッド、不十分な固定、および不十分なクリアを解明するため、障害が含まれる場合があります。
乳腺の形態の評価は、乳腺腫瘍(TEBs)、上皮構造(歯槽の芽と小葉)の分化の程度、および成長の尺度(管伸長)を生じさせることができる構造の現在の数に関する情報を提供します。後者は、上皮の遠位端に配置されて、同様にTEBsに、彼らはTEBsより小さく、悪性腫瘍を生じさせることはありません。それは、ターミナルの端にTEBsを分離することが重要です。ターミナルの端は、上皮ツリー内で見られている。
図1:よく準備乳腺全体のマウントの代表的な結果は、腺のすべてのコンポーネントが適切に解剖されており、カルミン染色は最適です。
図2:不十分な準備乳腺全体のマウントの代表的な結果は腺が正しく適切に引き伸ばされていないと脱脂が完全に発生していない、(腺の先端部分が欠落している)解剖されています。
乳腺の形態学的エンドポイントおよび上皮木の成長の評価は、初期の生活食事の操作、または子宮内あるいは思春期前のホルモン環境に変化させる他の操作は、後で乳癌のリスクを変更するかどうかを予測するために使用することができます。ヒトの乳がんは、ラットにおけるTEBsに似て乳腺構造(端子乳管小葉単位、TDLUs)で開始されるため、この手法は乳癌リスクに影響を与える初期生活の暴露の可能性を決定するために使用することができます。さらに、女性に高いマンモグラフィ密度は4〜6倍に乳癌のリスクを増加し、乳腺上皮木の成長の評価は、マンモグラフィ濃度とこの密度を下げる要因を決定する要因を特定するために使用することができます。この情報を取得するには、乳腺が完全に、解剖し適切にそのすべてのコンポーネントは、顕微鏡下で可視化できるように、スライドガラス上に引き伸ばすことがあります。さらに、適切なカルミン染色とキシレンに脱脂は、乳癌のリスク評価に適している全体のマウントを提供します。
NCI(U54 CA00100970)、NCI(1 R03 CA150040 - 01)、ACS(116602 - PF - 09 - 018 - 01 - CNE)
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Glacial acetic acid | Electron Microscopy Sciences | AX0073-9 | Carnoy’s Fixative |
Absolute ethanol | The Waner-Graham Co. | 64-17-5 | Carnoy’s Fixative |
Carmine | Sigma-Aldrich | C1022 | Carmine solution |
Aluminum potassium sulfate | Sigma-Aldrich | A7167 | Carmine solution |
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