Method Article
Bizim protokol sıçan karın meme bezi nasıl incelemek ve meme bezi bütün bağlar hazırlamak için nasıl açıklamaktadır. Aynı zamanda üç uç noktaları (terminal sonuna tomurcukları sayısı, epitel uzama ve farklılaşma) kullanılarak meme bezi morfolojisi analiz etmek ve bu sonuçlar, diyet değişiklikleri maruz kalan farelerde meme kanseri riskini tahmin etmek için kullanmak nasıl açıklar In utero Veya prepuberty sırasında.
Meme kanseri gösterisi kemirgen modellerinde yapılan çalışmalar sırasında utero ve pubertal dönem, diyet / hormonal faktörler maruziyet meme bezi kapsamlı modelleme ve yeniden modelleme uğrar, kanserojen bağlı meme tümörlerinde duyarlılık değiştirmek. Benzer bulgular insanlarda tarif edilmiştir: örneğin, yüksek doğum ağırlığı, daha sonra meme kanserine yakalanma riski artar, ve çocukluk döneminde soya besin alımı meme kanseri riskini azaltır. Bu doğum öncesi ve doğum sonrası diyet değişiklikleri, daha sonra da yaşamın meme kanseri riskini değiştirmek meme bezi kalıcı morfolojik değişikliklere neden olduğu düşünülmektedir. Bu morfolojik değişiklikler büyük olasılıkla DNA metilasyon değişiklikleri, histon ve sonra gen transkripsiyonunu etkileyen miRNA ifadesi gibi epigenetik modifikasyonlar yansıtmaktadır. Bu yazıda, meme bezi morfolojisi değişiklikler sıçanlarda meme kanseri riskini tahmin nasıl açıklar. Bizim protokol özellikle incelemek ve kaldırmak sıçan karın meme bezi ve meme bezi bütün bağlar nasıl hazırlamak için nasıl açıklamaktadır. Aynı zamanda üç uç noktaları (terminal uç tomurcukların sayısı, epitel uzama ve farklılaşma) ve meme kanseri gelişme riskini tahmin etmek için veri kullanmak göre meme bezi morfolojisi nasıl çözümleneceği anlatılmaktadır.
1. Karın Meme Bezi kaldırılması ve Tüm Dağı hazırlanması
2. Meme Bezi Tüm Dağı Morfoloji Analizi
Meme bezi bütün bağlar morfolojisi aşağıdaki uç noktaları ve meme kanseri riski ile ilişkili sonuçlar göre analiz edilir.
3. Palpasyon ve Sıçanlar ve Meme Bezi Morfoloji Korelasyon Meme Tümör Ölçüm
4. Temsilcisi Sonuçlar
Meme yağ yastığı ve wholemount işleme dikkatli diseksiyon meme bezinin kalkınmacı devlet değerlendirme sağlayacaktır. Her adımı doğru bir şekilde yapıldığında, tüm meme epitel ağacı yağ yastığı içinde açıkça görülebilir ve bu TEBS sayısı ve yoğunluğu alveoler tomurcukları ve lobülleri hesaplama kolay belirliyor. Hazırlanması wholemounts missteps tüm yağ yastığı, yetersiz sabitleme ve yetersiz takas incelemek için başarısızlık içerebilir.
Meme bezi morfolojisi değerlendirilmesi meme tümörleri (TEBS), epitelyal yapılar (alveoler tomurcukları ve lobüller) farklılaşma derecesi ve büyüme ölçüsü (duktal uzama) ortaya çıkmasına neden olabilir yapılar mevcut sayısı hakkında bilgi verecektir. TEBS terminal ucuna ayrı önemlidir; ikincisi benzer TEBS epitel distal ucunda bulunan, ancak TEBS daha küçük ve habis tümörlere yol açmaz. Terminal uçları da epitel ağaç içinde görülür.
Şekil 1: iyi hazırlanmış meme bezi bütün montaj Temsilcisi sonucu bezinin tüm bileşenlerini düzgün bir şekilde diseke edilmiş ve karmin boyama en uygunudur.
Şekil 2: kötü hazırlanmış meme bezi bütün montaj Temsilcisi sonucu bezinin düzgün, (bezinin distal eksik) disseke olmuştur düzgün gerilmiş olmamıştır ve delipidation tamamen oluştu değil.
Meme bezinin morfolojik son noktaları ve epitel ağacının büyüme değerlendirilmesi, erken yaşam diyet manipülasyonlar, ya da diğer manipülasyonlar utero veya prepubertal hormonal ortamda değiştiren, daha sonra meme kanseri riskini değişiklik olmadığını tahmin etmek için kullanılabilir. Insanlarda meme kanseri, sıçanlarda TEBS benzer meme yapıları (terminal duktal lobüler birimleri, TDLUs) başlatılan olduğundan, bu tekniğin, meme kanseri riskini etkilemez hayatın erken döneminde maruz kalma potansiyeli belirlemek için kullanılır. Ayrıca, kadınlarda mamografik yoğunluğu yüksek meme kanseri riski 4-6 kat artar, meme epitel ağacının büyüme değerlendirilmesi ve mamografik yoğunluğu ve bu yoğunluk azaltan faktörleri belirlemek faktörleri belirlemek için kullanılabilir. Bu bilgileri elde etmek için, meme bezi tamamen disseke düzgün bir cam slayt tüm bileşenleri bir mikroskop altında görüntülenir böylece gergin olmalıdır. Buna ek olarak, uygun karmin boyama ve ksilen içinde delipidation, meme kanseri risk değerlendirmesi için uygun olan bütün bağlar sağlayacaktır.
NCI (U54 CA00100970), NCI (1 R03 CA150040-01), ACS (116.602-PF-09-018-01-CNE)
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Glacial acetic acid | Electron Microscopy Sciences | AX0073-9 | Carnoy’s Fixative |
Absolute ethanol | The Waner-Graham Co. | 64-17-5 | Carnoy’s Fixative |
Carmine | Sigma-Aldrich | C1022 | Carmine solution |
Aluminum potassium sulfate | Sigma-Aldrich | A7167 | Carmine solution |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır