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Nosso protocolo descreve como dissecar o rato glândula mamária e abdominal como preparar montagens glândula mamária todo. Ele também descreve como analisar a morfologia da glândula mamária por meio de três pontos finais (número de gemas fim terminal, alongamento e diferenciação epiteliais) e usar estes resultados para prever o risco de câncer mamário em ratos que foram expostos a modificações dietéticas In utero Ou durante a pré-puberdade.
Estudos em modelos de roedores de câncer de mama mostram que a exposição aos fatores dietéticos / hormonal durante o in utero e períodos de puberdade, quando a glândula mamária sofre de modelagem ampla e remodelação, alterar a susceptibilidade a substância cancerígena induzida por tumores mamários. Achados similares têm sido descritas em seres humanos: por exemplo, peso elevado aumenta mais tarde risco de desenvolver câncer de mama e ingestão de soja durante a infância diminui risco de câncer de mama. Pensa-se que essas modificações na dieta pré-natal e pós-natal persistente induzir mudanças morfológicas na glândula mamária que por sua vez, modificar o risco de câncer de mama mais tarde na vida. Essas mudanças morfológicas provavelmente refletem modificações epigenéticas, tais como alterações na metilação do DNA, histonas e expressão miRNA que então afetam a transcrição do gene. Neste artigo vamos descrever como as mudanças na morfologia da glândula mamária pode prever risco de câncer de mama em ratos. Nosso protocolo descreve especificamente como dissecar e remover a glândula abdominal de ratos mamária e como preparar montagens glândula mamária todo. Ele também descreve como analisar a morfologia da glândula mamária de acordo com três pontos finais (número de gemas fim terminal, alongamento e diferenciação epiteliais) e usar os dados para prever o risco de desenvolver câncer de mama.
1. A remoção da glândula mamária e abdominal Preparando um monte inteiro
2. Análise da morfologia mamária Monte Gland Whole
Glândula mamária toda morfologia monta é analisado de acordo com os seguintes pontos finais e os resultados correlacionados com o risco de câncer mamário.
3. Palpação e medição do tumor mamário em ratos e Correlação de Morfologia da glândula mamária
4. Resultados representante
Dissecção cuidadosa da almofada mamárias gordura e seu processamento para wholemount vai permitir a avaliação do estado de desenvolvimento da glândula mamária. Quando cada passo é feito corretamente, a árvore inteira epiteliais mamárias é claramente visível dentro do bloco de gordura, e isto permite a determinação fácil de o número de TEBS e cálculo da densidade de brotos alveolar e lóbulos. Erros em wholemounts preparando podem incluir a falha de dissecar o bloco inteiro de gordura, fixação insuficiente, inadequada e limpeza.
Avaliação da morfologia da glândula mamária irá fornecer informações sobre o número das actuais estruturas que podem dar origem a tumores mamários (TEBS), grau de diferenciação das estruturas epiteliais (brotos alveolar e lóbulos), ea medida do crescimento (alongamento ductal). É importante separar TEBS para fins terminal, este último estão localizados na extremidade distal do epitélio, à semelhança do TEBS, mas eles são menores do que TEBS e não dar origem a tumores malignos. Termina terminal também são vistos dentro da árvore epiteliais.
Figura 1:. Resultado Representante do bem preparado montar toda glândula mamária Todos os componentes da glândula foram devidamente dissecados e coloração carmim é o ideal.
Figura 2:. Representante resultado de uma montagem de todo mal preparados glândula mamária A glândula foi devidamente dissecado (a porção distal da glândula em falta), não foi devidamente esticada e delipidation não foi completamente ocorreu.
Avaliação morfológica da glândula mamária de pontos finais e do crescimento da árvore epitelial pode ser usado para prever se manipulações início da vida na dieta, ou outras manipulações que alteram no útero ou pré-púberes ambiente hormonal, modificar o risco de câncer de mama mais tarde. Como o câncer de mama em humanos seja iniciada em estruturas mamárias (unidades de terminal lobular ductal, TDLUs) semelhante ao TEBS em ratos, esta técnica pode ser usada para determinar o potencial de exposição precoce a afetar o risco de câncer de mama. Além disso, em mulheres de alta densidade mamográfica aumenta o risco de câncer de mama por 4-6 vezes, e avaliação do crescimento da árvore epiteliais mamárias pode ser usado para identificar os fatores que determinam densidade mamográfica e os fatores que reduzem a esta densidade. Para obter essas informações, glândula mamária deve ser totalmente dissecado, devidamente esticado sobre uma lâmina de vidro, para que todos os seus componentes podem ser visualizadas em um microscópio. Além disso, a coloração carmim adequada e delipidation em xileno irá fornecer toda monta que são adequados para avaliação de risco de câncer mamário.
NCI (U54 CA00100970), NCI (1 CA150040 R03-01), ACS (116602-PF-09-018-01-CNE)
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Glacial acetic acid | Electron Microscopy Sciences | AX0073-9 | Carnoy’s Fixative |
Absolute ethanol | The Waner-Graham Co. | 64-17-5 | Carnoy’s Fixative |
Carmine | Sigma-Aldrich | C1022 | Carmine solution |
Aluminum potassium sulfate | Sigma-Aldrich | A7167 | Carmine solution |
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