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El protocolo describe cómo diseccionar la rata de las glándulas mamarias abdominales y la forma de preparar montajes de la glándula mamaria completa. También se describe la forma de analizar la morfología de la glándula mamaria con tres puntos finales (número de yemas terminales de final, la elongación y la diferenciación del epitelio) y utilizar estos resultados para predecir el riesgo de cáncer de mama en ratas que fueron expuestas a modificaciones en la dieta En el útero O durante la prepubertad.
Los estudios en modelos de roedores de cáncer de mama muestran que la exposición a factores de la dieta / hormonal durante el período en el útero y la pubertad, cuando la glándula mamaria sufre de modelado amplia y re-modelado, alterar la susceptibilidad a carcinógenos inducida por tumores mamarios. Hallazgos similares han sido descritos en los seres humanos: por ejemplo, peso al nacer aumenta más alto riesgo de desarrollar cáncer de mama y la ingesta de soja durante la infancia reduce el riesgo de cáncer de mama. Se cree que estas modificaciones en la dieta prenatal y postnatal persistente inducir cambios morfológicos en la glándula mamaria que, a su vez modificar el riesgo de cáncer de mama en el futuro. Estos cambios morfológicos probablemente se deben a modificaciones epigenéticas, como los cambios en la metilación del ADN, histonas y la expresión de miRNA que luego afectan la transcripción de genes. En este artículo se describe cómo los cambios en la morfología de la glándula mamaria puede predecir el riesgo de cáncer de mama en ratas. El protocolo se describe específicamente cómo analizar y eliminar las ratas de la glándula mamaria abdominal y la forma de preparar montajes de la glándula mamaria completa. También se describe la forma de analizar la morfología de la glándula mamaria de acuerdo con tres puntos finales (número de yemas terminales de final, la elongación y la diferenciación del epitelio) y utilizar los datos para predecir el riesgo de desarrollar cáncer mamario.
1. Extirpación de la glándula mamaria abdominal y Preparación de un monte se
2. Análisis de la morfología de la glándula mamaria monte entero
Toda la glándula mamaria se monta la morfología se analiza de acuerdo a los siguientes criterios de valoración y los resultados correlacionados con el riesgo de cáncer de mama.
3. Palpación y valoración del tumor de mama en ratas y la correlación con morfología de la glándula mamaria
4. Resultados representante
Disección cuidadosa de la almohadilla de grasa mamaria y su procesamiento para wholemount permitirá evaluar el estado de desarrollo de la glándula mamaria. Cuando cada paso se realiza correctamente, el conjunto de árboles epiteliales mamarias es claramente visible en la almohadilla de grasa, lo que permite determinar fácilmente el número de TEBS y el cálculo de la densidad de brotes alveolares y lobulillos. Errores en la preparación de wholemounts pueden incluir falta de analizar toda la almohadilla de grasa, la fijación insuficiente, y la limpieza inadecuada.
Evaluación de la morfología de la glándula mamaria proporcionará información sobre el número de las actuales estructuras que pueden dar lugar a tumores de mama (TEBS), grado de diferenciación de las estructuras epiteliales (brotes alveolares y lóbulos), y la medida del crecimiento (alargamiento ductal). Es importante separar TEBS a los fines de terminales, este último se encuentra en el extremo distal del epitelio, de manera similar a TEBS, pero son más pequeños que TEBS y no dan lugar a tumores malignos. Extremos terminales también se ven en el árbol del epitelio.
Figura 1:. Representante de resultado bien preparado montar toda la glándula mamaria Todos los componentes de la glándula han sido debidamente disecados y manchas de carmín es óptima.
Figura 2:. Representante resultado de un mal preparados montar toda la glándula mamaria La glándula ha sido debidamente disecada (la porción distal de la glándula no se encuentra), no se ha estirado bien y delipidación no se ha producido por completo.
Evaluación de la glándula mamaria morfológicas puntos finales y el crecimiento del árbol epiteliales se puede utilizar para predecir si las manipulaciones tempranas de la vida la dieta, u otras manipulaciones que alteran el medio ambiente en el útero o prepuberal hormonal, modificar el riesgo de cáncer de mama más tarde. Dado que el cáncer de mama en humanos se inicia en las estructuras mamarias (unidades de terminal ductal lobular, TDLUs), similar a TEBS en ratas, esta técnica se puede utilizar para determinar el potencial de las exposiciones de la primera infancia para afectar el riesgo de cáncer de mama. Además, en las mujeres la densidad mamográfica de alta aumenta el riesgo de cáncer de mama por 4-6 veces, y la evaluación del crecimiento de árboles epiteliales mamarias se puede utilizar para identificar los factores que determinan la densidad mamográfica y los factores que reducen la densidad. Para obtener esta información, la glándula mamaria debe estar completamente disecados, bien tirante en un portaobjetos de vidrio de modo que todos sus componentes pueden ser visualizados con un microscopio. Además, adecuada coloración carmín y delipidación en xileno proporcionará toda monta que son adecuados para la evaluación del riesgo de cáncer de mama.
Instituto Nacional del Cáncer (U54 CA00100970), Instituto Nacional del Cáncer (1 R03 CA150040-01), ACS (116602-PF-09-018-01-CNE)
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Glacial acetic acid | Electron Microscopy Sciences | AX0073-9 | Carnoy’s Fixative |
Absolute ethanol | The Waner-Graham Co. | 64-17-5 | Carnoy’s Fixative |
Carmine | Sigma-Aldrich | C1022 | Carmine solution |
Aluminum potassium sulfate | Sigma-Aldrich | A7167 | Carmine solution |
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