A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
القدرة على التعامل مع الإنسان الجذعية العصبية / السلائف الخلايا (hNSPCs) في المختبر يسمح للتحقيق في فائدتها وزرع الخلايا لأغراض علاجية واستكشاف التنمية العصبية البشرية. هذا البروتوكول يمثل طريقة زراعة وhNSPCs الركض وتأمل في زيادة استنساخ الإنسان من أبحاث الخلايا الجذعية.
القدرة على التعامل مع الإنسان الجذعية العصبية / السلائف الخلايا (hNSPCs) في المختبر يوفر وسيلة لتحقيق فائدتها وزرع الخلايا لأغراض علاجية وكذلك لاستكشاف العديد من العمليات الأساسية للتنمية البشرية وعلم الأمراض العصبية. هذا البروتوكول يمثل طريقة بسيطة للزراعة وhNSPCs الركض وتأمل في توحيد هذه التقنية وزيادة استنساخ الإنسان من أبحاث الخلايا الجذعية. وقد عزل hNSPCs نستخدمها من جثي قشرات الدماغ بعد الولادة من قبل الإنسان الجذعية العصبية الوطنية الموارد ونمت الخلايا والثقافات ملتصقة على قوارير مغلفة مع فبرونيكتين (بالمر وآخرون ، 2001 ؛. شوارتز وآخرون ، 2003). نحن ثقافتنا hNSPCs في DMEM : F12 المصل خالية من وسائل الإعلام تستكمل مع EGF ، جمعية جيل المستقبل ، ولهم والمرور PDGF 01:02 تقريبا كل سبعة أيام. باستخدام هذه الظروف ، فإن الغالبية العظمى من الخلايا في ثقافة الحفاظ على التشكل الثنائي القطب وأعرب عن علامات المفاضلة الخلايا الجذعية العصبية (مثل nestin وsox2).
ملاحظة : للحصول على زراعة الروتيني للhNSPCs دينا ، ونحن تغيير 5-10 ٪ من وسائل الإعلام كل يوم والمرور عليها عادة 1:02 مرة في الأسبوع. وسائل الإعلام على الثقافة بت 9500 بنسبة 20 ٪ ، 1X عوامل المضادات الحيوية / مضاد فطري ، والنمو (EGF ، جمعية جيل المستقبل ، ولكل PDGF في 40 نانوغرام / مل) في DMEM : وسائل الإعلام قاعدة F12.
إعداد قارورة المغلفة وعدم الربط بين الخلايا
الطرد المركزي ، إعادة التعليق ، وخلايا التصفيحات
لقد وجدنا أن هذا البروتوكول يتيح الثقافات موثوق hNSPCs. أحد العوامل الحاسمة لخلايانا هو أنها تحتاج إلى أن تبقى ، لأن الحضارات كثيفة الى حد ما ولا يمكن passaged إلى النقطة التي كانت الخلايا متفرق. في أيدينا ، والثقافات متفرق تنمو ببطء شديد أو الكف تماما عن الانقسام. لهذا السبب ، فإننا عا?...
الكتاب الامتنان الدكتور فيليب H. شوارتز من العصبية الوطنية الجذعية البشرية الموارد خلية في مستشفى للأطفال ، أورانج كاونتي معهد البحوث لتوفير التعليم الأولي وhNSPCs في زراعة بهم.
Name | Company | Catalog Number | Comments | |
BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin) | Reagent | Stem Cell Technologies | 09500 | |
Antibiotic-Antimycotic | Reagent | Invitrogen | 15240-062 | |
DMEM:F12 (1X) | Reagent | Invitrogen | 11330-032 | |
EMEM (1X) | Reagent | Mediatech, Inc. | MT-10-010-CV | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
Fetal Bovine Serum | Reagent | Invitrogen | 10437-028 | |
FGF, human basic recombinant | Reagent | PeproTech Inc | 100-18B | |
PDGF-AB | Reagent | PeproTech Inc | 100-00AB | |
EGF, human recombinant | Reagent | BD Biosciences | CB40052 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
Cell Culture Flask, 25 cm2 | Tool | Corning | 10-126-28 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
Fibronectin, human, natural | Reagent | BD Biosciences | CB40008A | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
Human Neural Stem/Precursor Cells | Cells | National Human Neural Stem Cell Resource | ||
Cell Dissociation Buffer | Reagent | Invitrogen | 13150-016 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved