Method Article
نحن هنا وصف منخفضة التكلفة، والسريع، وإجراء تثبيت للرقابة وموحدة تستخدم لامتصاص العرق 4٪ perfused عبر الأوعية الدموية: من خلال قلب فأر للحصول على الحفاظ على أفضل وجه ممكن من الدماغ.
هدف التثبيت هو بسرعة وبشكل موحد المحافظة على الأنسجة في حالة الحياة مثل. في حين وضع الأنسجة مباشرة في أعمال مثبت جيدا لقطع صغيرة من الأنسجة، وعينات أكبر مثل الدماغ سليمة تشكل مشكلة لتثبيت غمر لأن مثبت لا تصل الى جميع مناطق الأنسجة في نفس المعدل 5،7. في كثير من الأحيان، والتغيرات في الاستجابة لنقص الأكسجة تبدأ قبل أن تتمكن من الحفاظ على النسيج 12. ميزة perfusing مباشرة مثبت من خلال الدورة الدموية هو أن هذه المادة الكيميائية يمكن أن تصل بسرعة كل ركن من أركان الحي باستخدام شبكة الطبيعية الأوعية الدموية. من أجل الاستفادة من الدورة الدموية أكثر فاعلية، لا بد من الحرص على تطابق الضغوط الفسيولوجية 3. من المهم أن نلاحظ أن الضغوط النفسية هي التي تعتمد على الأنواع المستخدمة. تقنيات لتثبيت نضح تختلف تبعا للنسيج إلى أن تكون ثابتة، وكيف ستتم معالجة الأنسجة تثبيت التالية. في هذا الفيديو، ونحن تصف منخفضة التكلفة، والسريع، وإجراء تثبيت للرقابة وموحدة تستخدم لامتصاص العرق 4٪ perfused عبر الأوعية الدموية: من خلال قلب فأر للحصول على الحفاظ على أفضل وجه ممكن من الدماغ لالمناعية. والميزة الرئيسية لهذه التقنية (مقابل بالجاذبية النظم) هو أن يتم استغلال الدورة الدموية بأكبر قدر من الفعالية.
1. إعداد مثبت
(انظر الجدول مثبت والمخازن.)
2. إعداد المخازن الإرواء
(انظر الجدول مثبت والمخازن.)
3. إعداد أجهزة والتخدير
4. نضح جراحة
اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية .
5. نضح
6. تشريح 4،11
7. بعد تثبيت وتخزين
8. ممثل النتائج
مؤشر أولي للنجاح نضح هو تطهير الحدود القصوى مثل الأنف والأذنين، والكفوف والأعضاء الداخلية مثل الكبد والغدة الصعترية (IHC العالم).تفتيش الإجمالية للدماغ يكشف عن فراغ الاوعية الدموية من الدم (أبيض إلى ظهور اللون الأصفر الشاحب). هذا سوف يكون صحيحا أيضا في المقاطع النسيجية خصص لتلطيخ والمناعية. المؤشر النهائي لنتائج نضح هو الشرط من التركيب الدقيق في الأنسجة. 1،6،7،8
إعداد مثبت: |
تعد 8٪ الأوراق المالية لامتصاص العرق |
|
تعد 0،2 فوسفات الصوديوم العازلة م، ودرجة الحموضة 7.4 |
|
إعداد 4٪ مثبت لامتصاص العرق |
|
إعداد الإرواء والمخازن التخزين: |
التخزين المؤقت إعداد الفوسفات المالحة، ودرجة الحموضة 7.4 |
|
التخزين المؤقت HEPES هانكس الحل (HBHS) مع درجة الحموضة أزيد الصوديوم 7.4 |
|
الجدول رقم 1. إعداد تثبيتي، والمخازن.
الشكل 1. جهاز الإرواء مع عناصر وصفت.
الشكل 2. إعداد الإرواء أولا جهاز بيغن مع خط مثبت. تدفق أنابيب من فقاعات الهواء وملء مع عازلة عن طريق طرد سريعا وسحب العازلة في حقنة وذلك من خلال خط. إغلاق صمام في نهاية إبرة قبالة. وضع خط مثبت في زجاجة مثبت دون إدخال فقاعات الهواء.
الشكل 3. إعداد جهاز الإرواء الثاني. 1. فتح صمام في نهاية إبرة. 2. تحويل صمام العازلة (الأزرق) إلى موقف لتدفق. 3. تدفق أنابيب من فقاعات الهواء وملء مع عازلة عن طريق طرد سريعا وسحب العازلة مع الحقنة. 4. غلق صمام في نهاية إبرة. وضع أنابيب في زجاجة العازلة. اختبار الضغط للتأكد من اغلاق النظام الصحيحلاي من خلال تضخيم لمبة مقياس ضغط الدم ويراقب المقياس. الجهاز جاهز الآن لإجراء نضح.
الشكل 4. جهاز الإرواء في موقف لتسليم العازلة.
الشكل 5. الإرواء جراحة أولا أ) جعل شق جانبي طريق إهاب وجدار البطن. ب) إجراء شق في الحجاب الحاجز وخفض عبر الحجاب الحاجز تعريض القلب. إجراء تخفيضات موازية على جانبي الأضلاع حتى الترقوة. ج) المشبك غيض من القص مع مرقئ ووضع مرقئ على رأسه.
الشكل 6. الإرواء الثاني الجراحة. أ) أن يجتاز إبرة نضح من خلال خفض البطين إلى الشريان الأبهر الصاعد. ب) تأميننضح إبرة استخدام مجموعة واحدة من المرقأة إلى تضييق القلب. ويمكن أيضا أن هناك مجموعة ثانية من مرقئ تعديل لاستخدامها لتضييق الشريان الأبهر حول الطرف إبرة لمنع التسرب. باستخدام مقص قزحية جعل شق صغير في نهاية الخلفي من البطين الأيسر.
الشكل 7. الإرواء مع مضخة الاحتياطي لمبة مقياس ضغط الدم إلى خلق ضغط في السطر. فتح صمام (1) ونعلق على محور إبرة. من المهم جدا للتأكد من تقديم أي فقاعات الهواء. ضخ ما يصل لمبة مقياس ضغط الدم إلى الضغط من 80 ملم زئبق، ويحافظوا على هذا الضغط في جميع أنحاء المنطقة العازلة فترة التسريب.
الانتهاء تقريبا الرقم 8. الإرواء مع مثبت مرة واحدة العازلة (200 مل) تبديل صمام العازلة (1) لإتاحة الفرصة لتثبيتي في التدفق. ويمكن تدريجيا من الضغط يمكن زيادة تصل إلىالحد الأقصى من 130 ملم زئبق.
الشكل 9. أولا تشريح أ) إزالة الرأس باستخدام زوج من مقص. ب) إجراء شق في الجلد على طول خط الوسط من الرقبة إلى الأنف وفضح الجمجمة. ج) تقليم قبالة عضلة الرقبة المتبقية حتى إن ما يتعرض له قاعدة الجمجمة. عقد رئيس بحيث فتحة كبيرة في سطح الجمجمة (ماغنوم الثقبة) يمكن الوصول إليه. إدراج بعناية في نهاية حادة من مقصا قزحية في ماغنوم الثقبة وإحداث القطع. كرر نفس المناورة عن الجانب المقابل. استخدام rongeurs لمسح بعيدا الجمجمة حول المخيخ.
الرقم 10. الثاني تشريح. أ) الشريحة بعناية في المقص على طول السطح الداخلي للجمجمة. ترفع على الحافة كما كنت قطع لمنع تلف الدماغ. تكرر الشيء نفسه بالنسبة لالجانب المعاكس. استخدم rongeurs قشر الجمجمة بعيدا عن الدماغ. ب) مع التوضيح في الجمجمة وإزالة يتعرض الدماغ. ج) استخدام ملعقة لقطع بصيلات الشم والتوصيلات العصبية في الموقع معظم الأمامي من الدماغ. الدليل بعناية غيض ملعقة على طول الجانب السفلي من الدماغ إلى قطع الاتصالات لسهولة إزالة. إزالة الدماغ ووضعه في قارورة من مثبت.
ملاحظات إضافية لعملية جراحية ناجحة:
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مركز تكنولوجيا الاتصالات العصبية (CNCT)، ومركز الموارد P41 بتمويل من المعهد الوطني للتصوير الطبية الحيوية والهندسة الحيوية (NIBIB، P41 EB002030) وبدعم من المعاهد الوطنية للصحة (NIH).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
معدات | شركة | فهرس العدد | تعليقات |
التخدير: | |||
الكيتامين / زيلازين خليط (تخدير قد تختلف في مختبر / مؤسسة) | Ketaset | NDC 0856-2013-01 | 10 مل فيال |
الجراحة: | |||
إبرة معلومات سرية، 27 GA × 1.25 " | عتاد الخدمات | 25251 | |
كبير كليل / كليل مقص منحني (~ 14.5 سم) | أدوات العلم غرامة | 14519-14 | |
مستقيم قزحية مقص | أدوات العلم غرامة | 14058-11 | |
قياسي ملاقط | أدوات العلم غرامة | 11027-12 | |
زوج من ملاقط (غريف) غرامة | أدوات العلم غرامة | 11050-10 | |
1 ملقط مرقئ كبير - منحنية أو مستقيمة (~ 19 سم) | surgicaltools.com | 17.21.51 | |
2 ملقط مرقئ القياسية - مسنن مستقيم (14 سم) | أدوات العلم غرامة | 13013-14 | |
1 مرقئ تعديل (15 عيار ثقب المودعة عن طريق طرف) | أدوات العلم غرامة | 13013-14 | |
15-قياس إبرة حادة أو الزيتون يميل-(إبرة نضح) | Fisnar | 5601137 | |
رذاذ: | |||
نظام HyPerfusion أو ما يعادلها | |||
الفوسفات مخزنة المالحة، ودرجة الحموضة 7.4 | |||
4٪ لامتصاص العرق في مخزن الفوسفات 0،1 متر، ودرجة الحموضة 7.4 | |||
الضحلة الزجاج أو علبة من البلاستيك، ما يقرب من 10 "× 10" | |||
سحق الجليد | |||
حمام الماء (37 درجة مئوية) | |||
مؤقت | |||
50 مل حقنة | ميدلاين صناعات | NPMJD50LZ | |
تشريح: | |||
السلطة الفلسطينيةالأشعة تحت الحمراء من مقص معيار مستقيم حاد / فظة (~ 12 سم) | أدوات العلم غرامة | 14054-13 | |
متوسط rongeurs منحني أو مستقيم (14-16 سم) أو إزالة عظم الجمجمة كماشة | أدوات العلم غرامة | 16020-14 | |
مستقيم قزحية مقص (~ 9 سم) | أدوات العلم غرامة | 14058-11 | |
الدقيقة ملعقة (مزدوج 2 "تاريخ شقة واحدة مدورة، واحد مدبب إلى 1/8") | أدوات العلم غرامة | 10091-12 | |
بعد التثبيت والتخزين: | |||
50 قنينة زجاج مل | |||
40 مل HEPES-التخزين المؤقت هانكس الحل (HBHS) مع أزيد الصوديوم (90mg / لتر) |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved