قياسات الوقت الحقيقي من البروتين غشاء: مستقبلات التفاعلات عن طريق مأكل السطح الرنين (SPR)

Summary

سطح مأكل مثل الطحين الرنين (SPR) هو وسيلة خالية من التسمية للكشف عن التفاعلات الحيوية الجزيئية في الوقت الحقيقي. هنا، على بروتوكول لبروتين الغشاء: وصفت التجربة تفاعل مستقبلات، أثناء مناقشة إيجابيات وسلبيات هذه التقنية.

Abstract

Protein-protein interactions are pivotal to most, if not all, physiological processes, and understanding the nature of such interactions is a central step in biological research. Surface Plasmon Resonance (SPR) is a sensitive detection technique for label-free study of bio-molecular interactions in real time. In a typical SPR experiment, one component (usually a protein, termed 'ligand') is immobilized onto a sensor chip surface, while the other (the 'analyte') is free in solution and is injected over the surface. Association and dissociation of the analyte from the ligand are measured and plotted in real time on a graph called a sensogram, from which pre-equilibrium and equilibrium data is derived. Being label-free, consuming low amounts of material, and providing pre-equilibrium kinetic data, often makes SPR the method of choice when studying dynamics of protein interactions. However, one has to keep in mind that due to the method's high sensitivity, the data obtained needs to be carefully analyzed, and supported by other biochemical methods.

SPR is particularly suitable for studying membrane proteins since it consumes small amounts of purified material, and is compatible with lipids and detergents. This protocol describes an SPR experiment characterizing the kinetic properties of the interaction between a membrane protein (an ABC transporter) and a soluble protein (the transporter's cognate substrate binding protein).

Introduction

تفاعلات البروتين البروتين (PPI)؛ تشكيل والتفكك المجمعات البروتين، هي الأحداث الرئيسية في العديد من العمليات البيولوجية (على سبيل المثال، والنسخ، والنسخ والترجمة والإشارات والاتصالات خلية خلية). وغالبا ما تجرى دراسات شبه الكمية للPPI باستخدام التجارب المناعية هطول الأمطار المنسدلة أو. ومع ذلك، فإن هذه (وما شابهها) التقنيات محدودة في حدود الانتماءات التي يمكن قياسها (منخفض مكرومولي وأعلى النسب) وذلك بسبب خطوات الغسيل التي هي ملازمة لمثل هذه التقنيات. هذه التقنيات "نقطة النهاية" لا يمكن تحديد التفاعلات تقارب عابرة أو المنخفضة التي غالبا ما تكون من العواقب البيولوجية كبيرة. وبالإضافة إلى ذلك، فإن القرار الزماني لهذه النهج محدودة جدا، وعادة أوامر من حجم أبطأ من معدلات التفاعل. SPR يتغلب على هذه العيوب نتيجة لحالة من الحساسية وقراره الصدغي العلوي ^1،2. SPR هي طريقة خالية من التسمية، وعلى هذا النحوويمكن قياس التفاعل الجزيئي (طالما أن يتم الكشف عن التغييرات الكتلة). بالإضافة إلى مؤشر أسعار المنتجين، وقد تم استخدامه على نطاق واسع لوصف البروتين يجند والبروتين المخدرات (أو جزيء صغير)،-DNA والبروتين، وتفاعلات البروتين RNA ^3-5. وتسجل النتائج وتآمر في الوقت الحقيقي، والذي تمكن من تعديل السريع للظروف تجريبية والتصميم التجريبي مرونة.

مبدأ المادية وراء أدوات SPR مقرها هو الاستفادة من النظام البصري الذي يقيس تغيير معامل الانكسار على سطح استشعار على تغيير كتلة ^2. ويجمد أحد الشركاء التفاعل (الآخرة يجند) على شريحة البوليمر المصفوفة والجزيء الثاني (الآخرة الحليلة) وتدفقت على السطح. الحليلة ملزمة ليجند يغير كتلة على سطح رقاقة. ويرتبط هذا كتلة التغيير مباشرة وبشكل متناسب مع التغيرات في معامل الانكسار من السطح. يتم رسم النتائج في الوقت الحقيقي، وكما عرضت وحدة استجابة (RU) بوصفها وظيفة من الزمن. ويطلق على مثل هذه المؤامرة على sensogram (على سبيل المثال، الشكل 1). منذ SPR يتبع دوام كامل للتفاعل، وتستمد قبل التوازن الثوابت معدل الحركية، بالإضافة إلى التوازن الانتماءات. كما هو مفصل أدناه، سلوك ما قبل توازن نظام معين يحمل الكثير من المعلومات، ويوفر وجهة نظر مختلفة جدا من التوازن وحدها. مرة واحدة يتم معايرة النظام، والتجارب سريعة جدا وتتطلب كميات صغيرة فقط من مادة البروتين (ميكروجرام لنانوغرام كميات). جمع المعلومات الحركية الكاملة لنظام معين لا يمكن أن يتحقق في غضون أيام. حساسية عالية من SPR تتيح القياسات التي لا يمكن استخدام أي تقنية أخرى ^(6). ومع ذلك، هذه الحساسية العالية هو "سيف ذو حدين" لأنه يمكن أن تكون مصدرا رئيسيا للبيانات إيجابية كاذبة. يتم تسجيل أي عامل يؤثر على مؤشر يعكس وتآمر على sensogram. على هذا النحو، ا ف بيجب استخدام الضوابط مالئمة للقضاء على ايجابيات كاذبة، وينصح للغاية بدعم من نهج تكميلية.

ويوضح الشكل (1) تطور تجربة البرنامج الخاصة باستخدام رقاقة الاستشعار NTA المغلفة. وsensogram في لوحة ويظهر حقن أيونات النيكل على مصفوفة NTA (بيانات unsubtracted)، والألواح BD عرض البيانات بعد طرح إشارة المشتقة من خلية مراقبة سلبية. الأحمر والأسهم الزرقاء تظهر حقن بداية ونهاية، على التوالي. الشلل في يجند على رقاقة يغير تدريجيا كتلة حتى يتم إنهاء الحقن. الهضبة مستقرة لوحظ بعد انتهاء الحقن يجند لتعكس جمعية مستقرة من يجند إلى السطح (الشكل 1B، دورة 2). مرة واحدة يتم التوصل إلى خط الأساس مستقر يتم حقن منطقة عازلة على يجند والخلية المرجعية (1B الشكل، دورة 3) يخدم حقن .هذا ك "السيطرة على بياض"، وسيكونتطرح أثناء التحليل. على حقن، يتم تسجيل التغييرات الطفيفة، مما يعكس تدفق كتلة من خلال رقاقة. ثم في دورة منفصلة (1B الشكل، ودورة 4)، يتم حقن الحليلة. الزيادة التدريجية في RU تمثل جمعية الحليلة ليجند. مواقع الربط تصبح احتلت تدريجيا حتى يتم التوصل إلى التوازن. حالما ينتهي الحقن، وانخفاض البرازيلية يعكس تفارق المجمع. من مثل sensograms قبل التوازن، والتوازن الثوابت معدل يمكن أن تستمد (انظر لاحقا). الشكل 1 يصور التفاعل عابرة بين يجند وتحليلها. عندما يكون التفاعل أكثر استقرارا، وانخفاض في مستوى RU أبطأ، ما يعكس انخفاض ك _د.

هنا، نحن تصف تجربة البرنامج الخاصة التي تهدف إلى تحديد خصائص التفاعل بين نقل الغشاء (المنظفات تذوب) وشريك وظيفية لها، ركيزة لها وما شابه ذلك البروتين ^6،7 ملزمة. وزارة الدفاع المختارنظام ايل هو ATP كاسيت ملزمة (ABC) نقل، ModBC-A من Archeaglobus fulgidus. وقد تم اختيار هذا النظام لنتائجها استنساخه للغاية، إشارة إلى ارتفاع نسبة الضوضاء، والكلاسيكية "تشغيل / إيقاف" أسعار الفائدة. بالإضافة إلى ذلك، تتوفر لخدمة ضوابط السلبية أهمية عن النقل المتماثلات ABC. الناقل، يتم استخراج ModBC (يجند A) من الغشاء باستخدام المنظفات وتنقيته وثبتوا على رقاقة. من ذوبان شريك التفاعل، مودا، هو الحليلة. كعنصر تحكم يجند سلبي، يتم استخدام مختلف RbsBC نقل ABC ("يجند B").

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

1. عينة البروتين وإعداد العازلة

1. نموذج إعداد: تنقية البروتينات من الفائدة وتأكد من إزالة جميع الركام، عن طريق حقن البروتين قبل التجربة على عمود هلام الترشيح أو عن طريق تنبيذ فائق (عادة 10 دقيقة في 100،000 x ج كافية).
   ملاحظة: على الرغم من المرغوب فيه، والأعمال التحضيرية البروتين النقي للغاية ليست لا بد منه. تم SPR استخدمت بنجاح مع التنقيات أقل من الكمال، وحتى مع إجمالي استخراج ^8،9.
2. إعداد العازلة:
   1. إعداد المخزن المؤقت للتجربة (وهو ما يسمى "تشغيل عازلة"، أو RB). لبروتوكول الموصوفة هنا، استخدم 50 ملي تريس، حمض الهيدروكلوريك درجة الحموضة 7.5، 150 مم كلوريد الصوديوم و 0.05٪ (ث / ت) DDM (ن-دوديسيل β-D-مالتوزيد). نضع في اعتبارنا أن اختيار تركيبة عازلة يمكن تعديلها بسهولة وفقا لنظام دراستها.
   2. تصفية جميع المخازن وعينات البروتين باستخدام مرشحات 0.22 ميكرون. تأكد مقدما أن المرشحات بروتينمتوافقة. بشكل عام، ومنصات SPR تسويقها مؤخرا تحتوي على دي جاسر في الخط؛ إذا لم تكن هذه هي الحالة، الغاز دي المخازن المؤقتة السابقة للاستخدام.
   3. Dialyze بين عشية وضحاها أو تمييع عينات ضد RB لتجنب عدم التطابق العازلة. غسيل الكلى (أو أي طريقة أخرى لصرف عازلة) ينصح وخاصة عند استخدام المواد الكيميائية من اللزوجة العالية (على سبيل المثال، والسكروز، الجلسرين، DMSO). قبل توصيل زجاجة RB إلى مدخل المضخة تبقي جانبا 10 مل من RB في أنبوب منفصل.
3. تمييع الأسهم يجند المركز إلى RB إلى تركيز النهائي من ~ 20 ميكروغرام / مل. وكقاعدة عامة من الإبهام، لمستقر تجميد يجند، واستخدام تركيزات منخفضة يجند مع حقن أطول في التدفق المنخفض، بدلا من تركيزات عالية، وتدفق عالية وحقن أقصر.
4. تمييع الحليلة في RB إلى التركيز المطلوب. عادة، اختبار مجموعة من تركيزات لنظام تقارب غير معروف من 10 ميكرومتر إلى 10 نانومتر في التخفيفات عشرة أضعاف. تبدأ دائمامع انخفاض تركيزات أولا.

2. رقاقة الاستشعار

1. اختيار رقاقة: استخدام nitrilotriacetic الحمضيه (NTA) رقاقة بالإضافة مناسبة لالتقاط البروتينات مع علامة، بنسبة ضئيلة الحامض الاميني.
2. استخدام رقاقة:
   1. عند استخدام شريحة جديدة، واتخاذ رقاقة الخروج من غمد، وشطف بلطف بالماء المقطر مزدوج (DDW)، تجف من السوائل المتبقية بعناية باستخدام ممسحات الحساسة، والتأكد من عدم لمس سطح طبقة الذهب. وضع رقاقة مرة أخرى إلى غمده في الاتجاه الصحيح (والإدراج على نحو سلس عندما يتم وضع رقاقة بشكل صحيح).
   2. عندما إعادة استخدام شريحة، واخراج رقاقة تخزينها من المخزن المؤقت، وشطف جيدا مع أحواض دبي الجافة العالمية والجافة بلطف كما ذكر أعلاه، ومكان في غمد الأصلي.
      ملاحظة: تراكم المواد غير المرغوب فيه غير محددة على رقاقة يمكن أن تؤثر في 'جدوى'. هذا يمكن رصدها من خلال مقارنة روس قبل تجميد يجند وبعد تجريد. على الرغم من العديد من القياسات يمكن أن يكونيتم ذلك باستخدام نفس NiNTA رقاقة، قضية طول العمر ليست "واضحة المعالم" وتختلف اختلافا كبيرا بين رقائق مختلفة.
3. رقاقة لرسو السفن: فتح الباب رقاقة الاستشعار ووضع رقاقة في غمده. عند استخدام شريحة جديدة، والرقم التسلسلي إدخال رقاقة للحفاظ على سجل الاستخدام. أغلق الباب واضغط على "رقاقة قفص الاتهام".

3. ضبط درجة الحرارة

1. ضبط درجة الحرارة خلية رقاقة إلى 25 درجة مئوية (أو درجة حرارة التجربة المفضلة).
2. اختياري: تعيين مقصورة عينات إلى 7 ° C للحفاظ على البروتينات مستقرة في كافة مراحل التجربة.

4. حلول لتحميل وتجريد

إعداد الحلول التالية لتحميل وتجريد: 0.5 ملي NiCl ₂ في RB، 350 ملي EDTA في RB (إضافة المنظفات لحل EDTA إلى التركيز النهائي كما هو الحال في RB)، 0.25٪ SDS في H ₂ O، و 100 ملم حمض الهيدروكلوريك في H ₂ O. عند استخدام الحوض الصغير الطرد المركزيوفاق وليس SPR أنابيب المعينة، لا تنسى أن قطع قبعات من الأنابيب.

5. رئيس الصك SPR مع RB

6. بدء تشغيل جديد

1. ضبط معدل تدفق التي سيتم استخدامها أثناء التجربة. للحصول على النتائج الموضحة هنا ضبط تدفق إلى 50 ميكرولتر / دقيقة.
   ملاحظة: يمكن تعديل هذه المعلمة أثناء التجربة.
2. تحديد مسارات تدفق والطرح المرجعية. للحصول على النتائج الموضحة هنا تعيين مسارات التيسير = 1 و FC = 2 والطرح التيسير = 2-1.
   ملاحظة: سيقوم البرنامج عرض في الوقت الحقيقي الطرح خليتين قياسها. نضع في اعتبارنا أن هذه المعلمة لا يمكن تغييرها أثناء التجربة.
3. اختيار العينة رف مناسب (أنها يمكن أن تؤثر على استهلاك حجم العينة).
4. حفظ الملف النتائج.

7. دورات تجربة

ويتكون كل تجربة من دورات، الاحتفاظ بسجل واضح لحقن به في EAدورة الفصل، والفصل بين تحميل وبروابط، حقن فارغة في المخزن المؤقت، وحقن تحليلها في دورات مختلفة.

1. دورة 1: إعداد رقاقة والنيكل تحميل
   1. تأكد من ضبط تدفق والمسارات وفقا للخطوة 6.1 و 6.2.
   2. ضخ 350 ملي EDTA لمدة 1 دقيقة ليغسل بقايا الطعام.
   3. ضبط تدفق إلى 10 ميكرولتر / دقيقة.
   4. ضخ 0.5 ملي NiCl ₂ لمدة 2 دقيقة.
      ملاحظة: الآن وهي مغلفة الراتنج رقاقة من أيونات النيكل.
2. دورة 2: بروابط تجميد
   1. تدفق مجموعة إلى 15 ميكرولتر / دقيقة، ومسار تدفق التيسير = 2.
   2. حقن يجند وحتى الوصول إلى القيم RU التي هي 10-20 أضعاف وزنه الجزيئي. على سبيل المثال، تحميل ليجند من 50 كيلو دالتون إلى 500-1،000 البرازيلية. الاحتفاظ بسجل من قيمة RU تحقيقها.
   3. تدفق مجموعة إلى 15 ميكرولتر / دقيقة، ومسار تدفق التيسير = 1.
   4. حقن يجند ب (مراقبة) ما يصل إلى نفس القيمة RU كما ان من يجند A. مراقبة sensogram الطرح (FC = 2-1) على الخط لمساعدة في السيطرة علىطول الحقن.
   5. تدفق مجموعة إلى 50 ميكرولتر / دقيقة، ومسار تدفق التيسير = 1 و FC = 2، وغسل نظام 5-20 دقائق حتى خط الأساس (FC = 2-1) تستقر.
3. دورة 3: حقن فارغ. هذا وسوف حقن مناصبهم لالطرح فارغة، وبالتالي تشمل كافة المكونات التي سيتم حقنها مع الحليلة، باستثناء الحليلة نفسها.
   ملاحظة: طول حقن يمكن أن تختلف اعتمادا على الوقت الذي يستغرقه للوصول إلى التوازن (إشارة الهضاب).
   1. تدفق مجموعة إلى 15 ميكرولتر / دقيقة، ومسار تدفق التيسير = 1 و FC = 2، التيسير = 2-1 الطرح.
   2. إدراج الأمر "الانتظار" (يشار إليها فيما يلي باسم 'الانتظار') لمدة 30 ثانية (أن يكون لها خط الأساس مستقر).
   3. ضخ 15 ثانية RB.
      ملاحظة: إن مدة الحقن تختلف بين أنظمة مختلفة، اعتمادا على ما قبل التوازن الثوابت الحركية الخاصة بهم (ومعظمهم من ك _أ).
   4. الانتظار 120-600 ثانية لتسجيل مرحلة التفكك.
      ملاحظة: طول هذه الخطوة يختلف وفقا ل ك _د: أبطأ التفكك وتعد هذه الخطوة يجب أن يكون. للمجمعات النأي بطيئة جدا (ك _د <10 ^-4 ثانية ^-1)، وانتظر 10-15 دقيقة ثم المضي قدما إلى السطح تجديد (انظر لاحقا).
4. دورة 4: حقن الحليلة
   1. نسخ / لصق الظروف المحددة المستخدمة في الحقن المرجعية (دورة 3) لذلك هذه الحقن اثنين يمكن أن تطرح في وقت لاحق. تغيير مكان فتحة في رف واحد من عقد الحل سيطرة لأحد أن يحمل الحل تحليلها. اختيار تركيز هذا هو أعلى قليلا من K _D المتوقع. إذا لم يكن هناك معرفة سابقة هي المتاحة، اختر 1 ميكرومتر كنقطة انطلاق جيدة.
5. دورة 5: حقن العازلة
   1. كرر دورة 3.
6. دورة 6: حقن الحليلة
   1. كرر دورة 4.
7. دورة 7: تشيب تجريدها
   1. ضبط تدفق إلى 50 ميكرولتر / دقيقة.
   2. ضخ 350 ملي EDTA لمدة 1 دقيقة. كرر هذه الخطوة مرتين أخريين. لا تستخدم حقنة واحدة من 3 دقائق لأن ذلك قد يؤدي إلى تلف رقاقة.
   3. ضخ 0.25٪ SDS لمدة 1 دقيقة. كرر هذه الخطوة مرتين أخريين. لا تستخدم حقنة واحدة من 3 دقائق لأن ذلك قد يؤدي إلى تلف رقاقة.
   4. إذا لم يتم التوصل إلى مستوى خط الأساس، وضخ 100 ملم حمض الهيدروكلوريك لمدة 1 دقيقة كخطوة تجريد إضافية.
   5. إدراج الأمر "نهاية المدى" أن بالتبديل إلى وضع الاستعداد.
8. تخزين رقاقة
   1. إرساء رقاقة الاستشعار وإخراجها من الصك.
   2. خذ استشعار الخروج من غمده، وتجنب لمس السطح، وشطف مع أحواض دبي الجافة العالمية، ومكان في أنبوب 50 مل تحتوي على RB. تخزينها في 4 ° C.

8. تحليل البيانات باستخدام مخصصة للبرامج التقييم

1. نفذ الخطوات التالية لمعالجة البيانات الخام التي تحصل عليها SPR قبل اشتقاق المعلمات الحركية.
   1. باستخدام برنامج التقييم، مفتوحةملف النتائج، حدد دورات 3-6 التيسير = 2-1 (المرجع تطرح البيانات).
   2. محور التحول:
      1. دورات عرض 3-6.
      2. الصفر قيمة Y-محور خط الأساس (30 ثانية وقت الانتظار الأولي في كل دورة) لجميع المنحنيات الأربعة.
   3. محاذاة محور X- من المنحنيات الأربعة. اختيار الميزات وضوحا (على سبيل المثال، والمسامير من بداية الحقن أو النهاية) لمحاذاة تماما منحنيات أربعة على طول محور X. ضبط الوقت من بداية الحليلة (أو عازلة السيطرة) إلى الصفر.
2. إشارة الطرح
   1. طرح استجابة الخلفية من خلال طرح منحنى دورة 3 من منحنى دورة 4 ومنحنى دورة 5 من منحنى دورة 6. استخدام العملية منحنى الطرح التي يمكن العثور عليها في المحور Y القائمة التحولات.
      ملاحظة: من المهم لتنفيذ هذه الخطوة لأنه يلغي أي مكونات غير محددة (لا علاقة لها الحليلة) التي ربما تكون قد أثرت على مؤشر الانكسار السطح.
      1. حفظ منحنيات تطرح في تيكان ورقة المشروع تحت اسم مختلف.
   2. الرجوع إلى هذه المنحنيات باسم "منحنيات طرح مضاعف": الطرح الأول هو الطرح 2-1 أجريت على كل من الحقن، والثاني هو الطرح من منحنى واحد من آخر.
      ملاحظة: هذا المراجع مزدوج هو معيار الذهب في التجارب SPR.
   3. تراكب منحنيات تطرح عن طريق إجراء تحول محور كما هو موضح من قبل.
3. تحديد حركية الثوابت ونموذج المناسب
   1. إجراء التجربة الحركية
      1. حقن سلسلة من 6-7 تركيزات حليلة أن يكون موثوقة من البيانات لتحديد الثوابت الحركية. اختر تركيزات تحليلها من 10 أضعاف فوق إلى 10 أضعاف أقل من المقدر K _D، في التخفيفات 2-3 أضعاف. تشمل "الصفر" التركيز، واستخدامها لاحقا لمضاعفة الطرح المرجعية (انظر أعلاه). إجراء الحقن في يثلث وبترتيب عشوائي.
      2. محاذاةوطرح كل المنحنيات فيما يتعلق Y-محور ومحور X-قبل محاولة النموذج المناسب.
   2. تركيب نموذج
      1. تحديد برنامج تحليل مناسب.
         ملاحظة: معظم برامج تركيب المتاحة تقدم العديد من النماذج التي يمكن تطبيقها لتركيب وتحديد الثوابت الحركية.
      2. تطبيق أبسط نموذج (انجميور) بافتراض عكسها 1: 1 التفاعل بين الحليلة ويجند للتركيب. ما لم إقناع البيانات يتوفر من وسائل تجريبية أخرى عن وجود تفاعل أكثر تعقيدا، ودائما استخدام نموذج انجميور بسيط.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

في النظام الموصوفة هنا، يتم استخدام رقاقة NiNTA لشل حركة نقل غشاء صاحب الموسومة ^6،7. كونه وطي-ديمر، هي المعلمة كل نقل مضاعف، وتحسين لها صفة الإلزام للرقاقة NiNTA. التالية النيكل التحميل، يجند ألف (نقل من الفائدة) وثبتوا على التيسير = 2، وتصل إلى ~ 3،500 RU (دورة بروتوكول 2، <...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

SPR هو وسيلة حساسة للغاية لدراسة التفاعلات الجزيئية، وغالبا ما يكون النهج الوحيد الذي يوفر رصد في الوقت الحقيقي من عابر (بعد مهمة) التفاعلات. ومن الأمثلة على ذلك التفاعل عابرة المقدمة في هذه الوثيقة، التي لا يمكن الكشف عنها بواسطة أي وسيلة أخرى (المقايسات المنسدلة، ال?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Biacore T200	GE Healthcare	28-9750-01
Sensor Chip NTA	GE Healthcare	14100532
BIAevaluation	GE Healthcare
Biacore T200 Software	GE Healthcare
Nickel chloride	Sigma	N6136
Sodium tungstate dihydrate	Sigma	T2629
Sodium Chloride	Bio-Lab LTD.	19030591
Trizma base	Sigma	T1503
Ethyldiamine-tetraacetic acid disodium salt dihydrate (EDTA)	Sigma	E5134
n-Dodecyl-β-D-Maltopyranoside (DDM)	Affymetrix	D310
Sodium dodecyl sulfate solution	Sigma	05030
Kimwipes KIMTECH	Kimberly-Clark	34120
Hydrochloric acid	GADOT	7647-01-0
Nylon (NY) Membrane Filter	Sartorius	25007--47------N
ModBC ABC transporter	Lewinson lab
RbsBC ABC transporter	Lewinson lab
ModA Substrate Binding Protein	Lewinson lab