A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
We present the technique to measure with high precision zinc isotope ratios in mouse organs.
نقدم إجراء لقياس بدقة عالية نسب الزنك النظائر في أجهزة الماوس. يتكون الزنك من 5 نظائر مستقرة (64 الزنك، الزنك 66، 67 الزنك، الزنك 68 و 70 الزنك) والتي مجزأة بشكل طبيعي بين أجهزة الماوس. وتبين لنا أولا كيفية حل الأجهزة المختلفة من أجل تحرير ذرات الزنك. يتحقق هذه الخطوة من خلال مزيج من HNO 3 و H 2 O 2. نحن بعد ذلك تنقية ذرات الزنك من جميع العناصر الأخرى، ولا سيما من التدخلات إسوي الضغط (على سبيل المثال، ني)، من خلال أنيون تبادل اللوني في تمييع دورية هارفارد / HNO 3 متوسطة. يتم تنفيذ هذه الخطوات الأولى والثانية في مختبر نظيفة استخدام المواد الكيميائية عالية النقاء. وأخيرا، يتم قياس نسب النظائر باستخدام متعدد جامع إضافة بالحث-البلازما كتلة-مطياف، في دقة منخفضة. يتم حقن العينات باستخدام غرفة الرش وتجزئة النظائر الناجمة عن-مطياف الكتلة هو correcتيد بمقارنة نسبة العينات إلى نسبة معيار (تقنية أقواس القياسية). ينتج هذا الإجراء نموذجي كامل نسبة النظائر مع 50 جزء في المليون (2 SD) التكاثر.
قياس درجة عالية من الدقة وكان (أفضل من 100 جزء في المليون / وحدة الكتلة الذرية) الزنك تكوين نظائر مستقرة ممكنا إلا لنحو 15 عاما وذلك بفضل تطور متعددة جامع البلازما المصدر كتلة-الطيف ومنذ ذلك الحين تم تطبيق معظمها في الأرض وعلوم الكواكب. تطبيقات على المجال الطبي هي رواية ولها إمكانات قوية والمؤشرات الحيوية للأمراض التي تعديل التمثيل الغذائي من الزنك (على سبيل المثال، مرض الزهايمر). تقدم هذه الورقة طريقة لقياس بدقة عالية نسب النظائر المستقرة الطبيعية من الزنك في مختلف أجهزة الماوس. والشيء نفسه ينطبق على عينات من الإنسان. يتكون أسلوب حل الأجهزة، وتنقية المواد الكيميائية الزنك من بقية الذرات، ومن ثم تحليل نسبة النظائر على-مطياف الكتلة.
جودة القياسات النظائر الزنك تعتمد على نوعية تنقية المواد الكيميائية (نقاء الزنك، وانخفاض شركات فارغةعرب كورب لكمية من الزنك الموجود في العينة، والغلة العالية الكيميائي للإجراءات)، وعلى السيطرة على التحيز فعال. هناك حاجة إلى نقاء عالية من الزنك جزء النهائي لإزالة كل التدخلات إسوي الضغط والتدخل غير إسوي الضغط الذي خلق تأثير المصفوفة. النويدات إسوي الضغط تخلق التدخلات المباشرة (على سبيل المثال، 64 ني). التدخلات غير إسوي الضغط تولد ما يسمى "المصفوفة" تأثير وتغير الدقة التحليلية القياسات عن طريق تغيير حالة التأين مقارنة مع مستوى الزنك النقي الذي يتم مقارنة العينات إلى 1. A منخفض فارغة (<10 نانوغرام) يشير إلى أنه لا يوجد أي تلوث عينات من قبل الزنك الخارجية التي من شأنها أن التحيز تكوين النظائر قياسها. كما النظائر الزنك يمكن مجزأة خلال التبادل الأيوني اللوني 2، وجمع كل ذرات الزنك يضمن أن لا تجزئة النظائر يحدث، وهو ما يعني أنه ينبغي أن يكون الإجراء الكيميائية العائد الكامل. أخيرا، ويتم تصحيح تجزئة النظائر دور فعال خلال قياس مطياف الكتلة عبر برنامج "بين أقواس القياسية" الأسلوب.
ولذلك، فإن الصعوبات الرئيسية للحصول على قياسات دقيقة والسيطرة على التلوث الخارجي (أي منخفضة فارغة)، مما ينتج عنه تنقية الكيميائية العائد الكامل الذي هو نظيفة من أي ذرات أو جزيئات أخرى، وتصحيح تجزئة النظائر فعال على-مطياف الكتلة. في هذه الورقة فإننا سوف تصف بروتوكول التحليلي لدينا لفصل الزنك من أجهزة الماوس وكذلك القياسات مطياف الكتلة.
ويتم استخراج باستخدام كمية منخفضة من الأحماض المخففة (دورية هارفارد / HNO 3 وسائل الاعلام) على أعمدة صغيرة (0.5 ميكرولتر و 0.1 ميكرولتر) من راتنج أنيون الصرف. أنه يحتوي على العائد الكامل والقياسات لها استنساخ الخارجي أفضل من 50 صفحة في الدقيقة على نسبة الزنك 66 الزنك / 64. ميزة أخرى من المنهجياتالتطوير التنظيمي هو أنه سريع جدا. ولذلك هو الأسلوب تتكيف بشكل جيد للغاية لالعلوم الطبية، في أي واحد يحتاج إلى تحليل عدد كبير من العينات مقارنة مع العلوم الجيولوجية، حيث تم تطوير هذه الأساليب التحليلية.
وقد تمت الموافقة على الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة باريس ديدرو: ملاحظة.
1. إعداد المواد
إعداد 2. عينة
3. الكيميائية تنقية
4. مطياف الكتلة القياس
في 1.5 N دورية هارفارد، والأنواع الرئيسية الزنك (ZnBr3-) أشكال المجمعات قوية جدا مع أنيون راتنج التبادل، في حين أن معظم عناصر أخرى لا تتفاعل مع الراتنج. ثم يتم استرداد الزنك عن طريق تغيير على المديين المتوسط وHNO 3 المخفف، وتغيير أنواع جديدة من الزنك لزد 2+ الت?...
يتم تقييم استنساخ القياسات من خلال التحليلات تكرارها من نفس العينات التي نفذت خلال جلسات تحليلية مختلفة. على سبيل المثال 6، ونحن قد تتكرر نفس الصخور الأرضية 7 مرات وحصلنا على النتائج المدرجة في الجدول 2.
كما هو متوق?...
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
يعترف FM بتمويل من وكالة المخابرات الوطنية من خلال CHAIRE دي التميز آيدكس جامعة السوربون باريس سيتي، وINSU من خلال منحة PNP، المعهد الجامعي فرنسا فضلا عن برنامج Labex UniverEarth في جامعة السوربون باريس سيتي (ANR-10-LABX-0023 وكالة الاستخبارات الوطنية -11-آيدكس-0005-02). نشكر أيضا بتمويل من مجلس البحوث الأوروبي في إطار الجماعة الأوروبية H2020 البرنامج الإطاري / ERC اتفاقية المنحة # 637503 (البكر).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Multi-collection inductively-coupled-plasma mass-spectromter | Thermo-Fisher | ||
Anion-exchange resin AG1 X8 200-400 | Bio-Rad | 140-1443-MSDS | |
teflon beakers | Savillex | 200-015-12 | |
Home-made teflon colunms made with shrinkable teflon |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved