Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

الأسلوب الموصوفة هنا هو بروتوكول عزلة حويصلة جديدة، مما يسمح لتنقية المقصورات الخلوية حيث تتم معالجة المستضدات خارجية المنشأ بتدهور هيولى المرتبطة في العرض التقديمي عبر.

Abstract

الخلايا الجذعية (DCs) قادرون على درجة عالية من تجهيز وتقديم المستضدات خارجية المنشأ المدخلة على الفئة الرئيسية هيستوكومباتيبيليتي (MHC) أنا جزيئات تعرف أيضا باسم الصليب-العرض التقديمي (CP). CP يلعب دوراً هاما ليس فقط في تحفيز السذاجة CD8+ تي الخلايا وذاكرة CD8+ تي الخلايا للمعدية وحصانة الورم بل أيضا في المنظمة سيلفاكتينج الخلايا السذاجة تي استعطال خلية T أو حذف خلايا T. على الرغم من أن الآلية الجزيئية الحرجة من حزب المحافظين توضيح، تراكم الأدلة تشير إلى أن تتم معالجة المستضدات خارجية المنشأ عن طريق المرتبطة هيولى تدهور (أراد) بعد التصدير غير الكلاسيكية اندوسيتيك الأجزاء الأخرى. الأوصاف لهذه المقصورات اندوسيتيك حتى وقت قريب، كانت محدودة لأن هناك لا علامات جزيئية محددة خلاف المستضدات خارجية المنشأ. الأسلوب الموصوفة هنا هو بروتوكول عزلة حويصلة جديدة، مما يسمح لتنقية هذه المقصورات اندوسيتيك. باستخدام هذا ميكروسومي المنقي، نحن تشكيلها أراد مثل النقل، أوبيكويتينيشن، وتجهيز مستضد خارجية في المختبر، مما يوحي بأن نظام ubiquitin-بروتوزوم معالجة مستضد خارجية بعد التصدير من هذا حجرة الخلوية. يمكن تطبيق هذا البروتوكول كذلك لأنواع الخلايا الأخرى لتوضيح الآلية الجزيئية لحزب المحافظين.

Introduction

MHC أنا يعبر عن الجزيئات على السطح لكافة الخلايا المنواه، مع الببتيدات مستضدي قصيرة مستمدة من المستضدات الذاتية، التي تتم معالجتها بواسطة نظام ubiquitin-بروتوزوم في سيتوسول1. بعد المعالجة، تنقل الناقل الببتيد الصنبور الببتيدات المستضديه في التجويف هيولى (ER). في التجويف ER، سلسلة من مرافقين محددة مساعدة في تحميل الببتيد والطي الصحيحة من MHC أنا معقدة. هذه السلسلة من الجزيئات تسمى مجمع الببتيد-تحميل (PLC)، مشيراً إلى أن لائحة حجرة مركزية الببتيد تحميل عند MHC2. بعد تحميل، ببتيد MHC أنا الجزيئات يتم نقلها إلى سطح الخلية وتلعب دوراً رئيسيا في النظام المناعي التكيفي كعلامات الذاتية، وتمكن CD8+ اللمفاويات T السامة للخلايا (CTLs) للكشف عن الخلايا السرطانية أو العوامل المعدية بمولده الببتيدات من البروتينات غير المتمتعة بالحكم الذاتي3.

في مستضد تقديم الخلايا (APC)، الببتيدات مستضدي من المستضدات خارجية المنشأ كما عرضت عليها MHC أنا4،5،6،،من78 عبر حزب المحافظين، الذي يتم أساسا من قبل وحدات تحكم المجال Dc10،،من911. CP أمر ضروري سواء بالنسبة لتنشيط السذاجة CD8+ تي الخلايا وذاكرة CD8 الخلايا+ تي في مكافحة الأمراض المعدية ومكافحة الأورام CTLs12،13، وفي الحفاظ على التسامح المناعية قبل يخمد من الذاتي بالإنابة السذاجة تي الخلايا14،15. حزب المحافظين يلعب العديد من الأدوار الهامة في النظام المناعي التكيفي، إلا أن الآليات الجزيئية لحزب المحافظين ولم توصف بالتفصيل. وكشفت الدراسات السابقة لحزب المحافظين أن المستضدات خارجية المنشأ كانت المترجمة لائحة ودخلول على حد سواء، وتم معالجتها بواسطة أراد، مما يوحي بأن تنقل المستضدات خارجية المنشأ من دخلول إلى لائحة للتجهيز مثل أراد والببتيد تحميل16 . ومع ذلك، تشير الأدلة تراكم إلى الاضطلاع بتحميل الببتيد CP لا لائحة وإنما في أماكن اندوسيتيك غير الكلاسيكية، التي لديها أيضا السمات المميزة لل ER (الشكل 1)17،18 ،19،،من2021. لتجنب تدهور السلائف ببتيد مستضدي بنشاط أمينوبيبتيداسي عالية يحدث22 في سيتوسول والتجهيز والببتيد تحميل في حزب المحافظين في المنطقة القريبة من هذه المقصورات اندوسيتيك غير الكلاسيكية (الشكل 1). على الرغم من أن الأوصاف من هذه المقصورات اندوسيتيك مثيرة للجدل، وهناك لا جزيئات محددة موجودة عدا المستضدات خارجية المنشأ في هذه المقصورة.

أراد هو مسار خلوية، وعلى وجه التحديد إلى إزالة البروتينات تجمعات لائحة. في مسار أراد، تنقل عبر غشاء ER إلى السيتوبلازم ريتروجراديلي تجمعات البروتينات ومعالجتها بواسطة نظام ubiquitin-بروتوزوم23،24،25. عندما يتم نقل الجزيئات الكبيرة، مثل البروتينات، عن طريق بلير الدهن، هذه الجزيئات المرور عبر جهاز جزيئي يسمى ترانسلوكون، مثل مجمع Sec61 وديرلان المعقدة في أية26، ومجمع توم وتيم المعقدة في 27من الميتوكوندريا. عندما أضيف مناشئ المستضدات تنقل عبر غشاء ER، أنهم يجب أن تخترق bilayer الدهني في المجمع مع ترانسلوكونس، مثل مجمع Sec61. الأسلوب الموصوفة هنا تنقية حويصلة المستهدفة باستخدام هذه الجزيئات اختراق الغشاء كعلامات للمقصورات اندوسيتيك.

الأسلوب الموصوفة هنا بروتوكول تنقية حويصلة جديدة تستخدم في الخلية مثل العاصمة خط DC2.428 وبيوتينيلاتيد أوفالبومين (بوفا) مستضد خارجية. تم تنقية المقصورات اندوسيتيك من ستريبتافيدين (SA)-المغناطيسي الخرز استخدام بوفا اختراق الغشاء كصانع. في هذا ميكروسومي المنقي، بعض مناشئ أضيف بوفا المحافظة لا تزال في غشاء الكسور ولكن نقلها إلى الخارج من ميكروسومي ومن ثم أوبيكويتيناتيد ومعالجتها في المختبر29. هذا المنقي ميكروسومي الواردة اندوسيتيك الخاصة بحجرة البروتينات ليس فقط، بل أيضا البروتينات ER-المقيم أراد والببتيد تحميل المعقدة؛ مما يدل على أن حجرة الخلوية حجرة اندوسيتيك المحتملين لحزب المحافظين29. هذا البروتوكول لا يتوقف على نوع المستضدات خارجية المنشأ، وينطبق أيضا لمجموعات فرعية DC الأخرى وأنواع الخلايا الأخرى، مثل الضامة وخلايا ب وخلايا بطانية، لتوضيح إليه الجزيئي الدقيق لوحدات تحكم المجال Dc CP يتقن.

Protocol

1-زراعة الخلايا وإضافة المستضدات خارجية المنشأ

بوفا
  1. تحضير تستخدم وصفها بروتين البيوتين كيت بعد الشركة المصنعة ' بروتوكول s.
    ملاحظة: عادة، بوفا يحتوي على البيوتين م 2 الواحدة 1 "متر البويضات" في المتوسط-
  2. الخلايا DC2.4 تنمو في ربمي-1640 تستكمل مع مم 2 لتر-الجلوتامين، بيروفات صوديوم 1 مم والأحماض الأمينية غير الأساسية 0.1 مم، 100 يو/مليلتر البنسلين-ستربتوميسين، 55 مم 2-mercaptoethanol، 10 مم حبيس (درجة الحموضة 7.5) ومصل العجل الجنين 10% (يشار إليها فيما بعد ربمي) عند 37 درجة مئوية في 5 % CO 2 في حاضنة هوميديفيد (يشار إليها فيما بعد دون ذكر، الخلايا هي المحتضنة في هذا الشرط). من الممكن أيضا استخدام دميم وتستكمل مع 10% مصل العجل الجنين، 3.7 غرام/لتر ناكو 3 (يشار إليها فيما بعد دميم) بدلاً من ربمي.
  3. في اليوم قبل تنقية، تقسيم الخلايا إلى ربمي إلى 1 × 10 5 خلايا/مل في صفيحة زراعة الأنسجة. تجنب حفظ الخلايا في دولة المتلاقية. خلايا DC2.4 يمكن إدراج الغاية المستضدات خارجية المنشأ حتى دولة شبه المتلاقية، ولكن تفقد القدرة بسرعة بعد التوصل إلى إقامة دولة روافد الإفراط.
    4. خلايا
  4. قبل DC2.4 شبه المتلاقية وإضافة 250 ميكروغرام/مل من بوفا 1 × 10 6 خلايا/مل واحتضانها حاء – 2-4
    ملاحظة: أثناء تجارب المصب، كافة المخازن المؤقتة والمواد الكاشفة وتحفظ في 4 درجات مئوية ما لم يبين خلاف ذلك.

2. إعداد ميكروسوميس

  1. حصاد الخلايا DC2.4 من بيبيتينج رقيقة من لوحة النسيج في أنبوب 50 مل مخروطية الشكل جديد.
  2. الطرد المركزي في غ س 1,000 لمدة 5 دقائق، 4 درجة مئوية، وإزالة بعناية المتوسطة مع بوفا بتطلع.
  3. تغسل الخلايا DC2.4 مرتين مع 40 مل من برنامج تلفزيوني المخزن المؤقت (1.37 ملم كلوريد الصوديوم، 8.1 مم نا 2 هبو 4 مم 2.68 بوكل، 1.47 م خ 2 ص 4) باستخدام الطرد المركزي في 1,000 س ز لمدة 5 دقائق، 4 درجة مئوية، وتجاهل المادة طافية في كل مرة بتطلع.
  4. ريسوسبيند بيليه في الخطوة 2، 3 في 1-2 مل (1/20-1/10 حجم الثقافة المتوسطة) من متوسطة التجانس (0.25 م السكروز، 1 مم يدتا، 10 مم حبيس-هيدروكسيد الصوديوم [الأس الهيدروجيني 7.4]) مع حجم 1/1,000 الكوكتيل مثبط البروتياز ونقل DC2.4 ريسوسبينديد الخلايا في المثلج دونس الخالطون-
    5. تعطيل
  5. الخلايا DC2.4 ريسوسبينديد بلطف من 10-20 السكتات الدماغية مع الخالطون دونس المثلج.
    ملاحظة: أثناء الخطوة التعطيل، الخالطون دونسي يتم تبريده في مدت
  6. نقل تعليق تعطلت الخلية إلى أنبوب مخروطي 15 مل جديدة.
  7. إضافة المتوسطة التجانس مل 8-9 إلى 10 مل مجموع والطرد المركزي الأنبوبة المخروطية لمدة 10 دقائق في 000 2 × ز و 4 درجة مئوية.
  8. نقل المادة طافية إلى أنبوب 15 مل مخروطية الشكل جديد لإزالة الخلايا غير منقطعة ونوى، والطرد المركزي الأنبوبة المخروطية مرة أخرى لمدة 10 دقيقة في 000 2 × ز و 4 درجة مئوية.
  9. نقل المادة طافية في أنبوب تنبيذ فائق جديد وجهاز الطرد المركزي لمدة 45 دقيقة في 000 100 × ز و 4 درجة مئوية.
  10. نضح المادة طافية وريسوسبيند بيليه بعناية في 1-2 مل متوسطة التجانس مع حجم 1/1,000 الكوكتيل مثبط البروتياز التي بيبيتينج الحل صعودا وهبوطاً عدة مرات لجعل جزء ميكروسومي لتجارب المتلقين للمعلومات-
  11. نقل الكسر ميكروسومي في أنبوب أسفل 5 مل جولة جديدة-
    ملاحظة: بعد هذه الخطوة، فمن الممكن لإثراء موضوعي ميكروسوميس بكثافة إيوديكسانول التدرج الطرد المركزي وفقا للشركة المصنعة ' بروتوكول s، لإزالة ميكروسوميس غير محددة. الكسور الذروة المستضدات خارجية المنشأ وتم جمعها وتعرض ثم انتقل إلى الخطوة التالية لتنقية (الخطوة 3)-

3. تنقية ميكروسوميس مع بوفا "أراد تمر"

الخرز SA المغناطيسي
  1. حجم إضافة 1/100 من جديد لكسر ميكروسومي خطوة 2.11 في 5 مل جولة الأنبوبة السفلي.
    ملاحظة: قبل هذه الخطوة، أنه من الممكن قبل مسح جزء ميكروسومي بالخرز التحكم المغناطيسي لتقليل التلوث microsomes غير محددة.
  2. بلطف المزيج جيدا وتدوير أنبوب أسفل جولة ببطء لمدة 30 دقيقة في 4 ° C.
  3. إضافة 2-3 مل من تجانس المتوسطة لمجموع 4 مل في أنبوب أسفل جولة ولطف مزيج جيد.
  4. وضع أنبوب أسفل جولة على الوقوف مغناطيسية واحتضان لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية. منذ الخرز منضمة إلى الحويصلات تنجذب إلى المغناطيس، الخرز الصغير البنى سوف تتراكم تدريجيا على جدار الأنبوبة الأقرب إلى المغناطيس.
  5. مع الأنبوب المتبقية في موقف المغناطيسي، بعناية تجاهل في supernatants بالتطلع إزالة الحويصلات غير منضم.
  6. أغسل الخرز المغناطيسي ملزمة للحويصلات مرتين مع 5 مل متوسطة التجانس المغناطيسي الوقوف لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية وتجاهل المادة طافية في كل مرة بتطلع بعناية.
    ملاحظة: دون الوقوف المغناطيسي، تنقية قبل سينتريفوجيشنز في 2,000 س ز لمدة 10 دقائق، 4 درجة مئوية يتوفر أيضا.
  7. الخرز المغناطيسي منضم إلى الحويصلات بعناية في 100 ميليلتر التجانس المتوسطة حسب بيبيتينج الحل صعودا وهبوطاً عدة مرات ريسوسبيند-
  8. نقل الحويصلات ريسوسبينديد إلى microtube جديد ميكروسومي المنقي لتجارب المتلقين للمعلومات-
    ملاحظة: عادة، 50 ميليلتر ميكروسومي جزء يحتوي على 5-20 ميكروغرام البروتينات من 1 × 10 7 الخلايا يمكن أن تكون معزولة.

4. تحليل Microsomes تنقية

  1. ريسوسبيند المغناطيسي الخرز منضمة إلى الحويصلات من 3.8 خطوة 100-200 ميليلتر من TNE المخزن المؤقت (20 مم تريس-HCl الأس الهيدروجيني 7.4، 150 مم كلوريد الصوديوم، يدتا 0.5 M، 1% P-40 نونيديت) بحجم 1/1,000 الكوكتيل مثبط البروتياز بدلاً من المتوسطة التجانس.
  2. نقل من الخطوة 4، 1 إلى microtube 1.5 مل جديدة.
  3. تحديد تركيز البروتين من الخطوة 4، 2 باستخدام مجموعة أدوات مقايسة اتفاق التعاون الأساسي للشركة المصنعة ' بروتوكول s-
    ملاحظة: عادة ما يكون 5-10 ميليلتر من الخطوة 4، 2 ما يكفي لتحديد تركيز البروتين.
  4. نقل من الخطوة 4، 2 (2 ميكروغرام من البروتين لتلطيخ فضية و 10 ميكروغرام من البروتين النشاف الغربية) إلى microtubes الجديدة-
  5. وضعت في microtubes على كتلة حرارة في البروتينات 95 درجة مئوية، ويغلي في 1 × مخزونات النشر الاستراتيجي جل تحميل المخزن المؤقت (100 ملم تريس-HCl الأس الهيدروجيني 6.8، 200 ملم ديثيوثريتول، الحزب الديمقراطي الصربي 4%، 0.2% بروموفينول الأزرق، والغليسيرول 20 ٪) للحد الأدنى 5
  6. الطرد المركزي microtubes لمدة 10 دقائق في 21,500 س ز و 4 درجة مئوية. جمع في سوبيرناتانتس إلى microtubes جديدة لإزالة أجزاء غير قابلة للذوبان.
  7. تحليل البروتينات حلها في خطوة 4.6 (2 ميكروغرام) من صفحة SD القياسية.
  8. تصور عدة نطاقات البروتين بالفضية التلوين باستخدام صبغة الفضة عقب الشركة المصنعة ' بروتوكول s-
  9. تحليل البروتينات حلها في خطوة 4.6 (10 ميكروغرام) صفحة SD القياسية والنشاف الغربية. استخدام الكاشف (SA-برنامج الصحة الإنجابية) لكل الشركة المصنعة ' s البروتوكول وتصور طريق فلوروجرافي-

5. في المختبر إعادة تشكيل "أوبيكويتينيشن أراد" من بوفا "استخدام تنقية ميكروسوميس"

ميكروسوميس
  1. نقل تنقية (5-10 ميكروغرام من البروتين) من الخطوة 3.8 بحجم خلية شبكية ليستي (RL)، 50% في 1 س رد فعل المخزن المؤقت (50 مم تريس الأس الهيدروجيني 7.4، 3 مم ATP، 0.5 مم مجكل 2)، و 12:02 م معلم العلم أوبيكويتين في microtube جديد. الحجم النهائي لهذه التجربة هو ميليلتر 20-40-
  2. إينكوباتي microtube ح 2 في 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: إذا كان مقدار بوفا أوبيكويتيناتيد في الخطوة 5، 12 صغير جداً للكشف عن طريق النشاف الغربية، إضافة 10 ميكرون من MG132 أو 2 ميكرومتر من لاكتاسيستين تحول دون معالجة بوفا أوبيكويتيناتيد من بروتيسوميس-
  3. وقف رد الفعل بوضع microtube على مدت
  4. حل في microsomes بإضافة 500 ميليلتر TNE من المخزن المؤقت بحجم 1/1,000 الكوكتيل مثبط البروتياز.
  5. الطرد المركزي microtube لمدة 10 دقائق في 21,500 x ز و 4 درجة مئوية. جمع في supernatants في microtube جديدة لإزالة الكسور غير قابلة للذوبان، التي تتضمن بوفا أوبيكويتيناتيد في DC2.4 قبل الفحص في المختبر أوبيكويتينيشن.
  6. نقل المادة طافية microtube جديدة وإضافة المجلد 1/100 من حبات SA المغناطيسي الجديد (عادة 5 ميليلتر ل 500 ميليلتر من سوبيرناتانتس).
  7. المزيج جيدا بلطف وتدوير microtube ببطء لمدة 30 دقيقة في 4 ° C.
  8. الطرد المركزي microtube لمدة 10 دقائق في 21,500 س ز و 4 ° جيم تجاهل المادة طافية بالتطلع استرداد بوفا وأوبيكويتيناتيد بوفا ملزمة مع الخرز سا-المغناطيسية-
  9. يغسل مرتين الخرز سا-المغناطيسية التي تم جمعها مع 1 مل من TNE المخزن المؤقت باستخدام الطرد المركزي لمدة 10 دقائق في 21,500 س ز و 4 ° جيم تجاهل المادة طافية في كل مرة بتطلع.
  10. غلى الخرز سا-المغناطيسية في 1 س جل الحزب الديمقراطي الصربي تحميل المخزن المؤقت لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية في حرارة كتلة حل البروتينات المنقاة بالخرز سا-المغناطيسية-
  11. الطرد المركزي microtube لمدة 10 دقائق في 21,500 س ز و 4 درجة مئوية. جمع في supernatants في microtube جديدة لإزالة أجزاء غير قابلة للذوبان.
    12. تحليل
  12. SA المغناطيسي الخرز ملزمة للبروتينات بصفحة SD القياسية والنشاف الغربية. استخدام الأجسام المضادة (المضادة العلم ومكافحة--متعددة--يو بي الماوس المضادة IgG-برنامج الصحة الإنجابية) والكاشف (SA-HRP) كل الشركة المصنعة ' بروتوكول s وتصور طريق فلوروجرافي-

النتائج

لتوضيح هذه الآلية الجزيئية لحزب المحافظين، من الضروري تحديد المقصورات الخلوية، حيث يخضع المستضدات خارجية المنشأ أراد مثل النقل والتجهيز. بينما حددت ملاحظاتها بالفحص المجهري إيممونوفلوريسسينت أو بواسطة المجهر الإلكتروني حجرة الخلوية حيث تراكمت المستضدات خارجية المنش...

Discussion

في الدراسات السابقة لحزب المحافظين، تراكمت المستضدات خارجية المنشأ مدرجة في المنطقة المحظورة من دخلول المتأخرة أو ER بالفحص المجهري إيمونوفلوريسسينت16،30،،من3132. ومن المقدر أن أراد مثل النقل والتجهيز من المستضدات خارجي...

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

هذا العمل معتمد من قبل جامعة تاكاساكي للصحة والرعاية الاجتماعية.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
RPMI 1640gibco by life technologies11875-093
Fetal bovine serumEquitech bioSFB30
Sodium pyruvategibco by life technologies11360-070
MEM non-essential amino acidsgibco by life technologies11140-050
HEPESgibco by life technologies15630-080
2-mercaptoethanolgibco by life technologies21985-023
L-glutaminegibco by life technologies25030-164
Penisicillin-Sreptomycingibco by life technologies15140-122
DMEMgibco by life technologies12100-46
OVASIGMAA5503
Biotin-protein labelling kitThermo Fisher ScientificF6347
MG-132 Santa Cruz Biotechnology201270
lactacystin SIGMAL6785
Dounce homogenizerIUCHI131703
protease inhibitor cocktails SIGMAP8340
iodixanol Cosmo bio1114542
SA-magnetic beads New England Biolabs201270
control magnetic beadsChemagenM-PVA012
magnetic standBD Biosciences552311
BCA protein assay kitThermo Fisher Scientific23225
silver staining kitsCosmo bio423413
Reticulocyte LysatePromega1730714
Flag-tagged ubiquitin SIGMAU5382
anti-ovalbumin (OVA,mouse)Antibody ShopHYB 094-06
ant-multi-ubiquitin (mouse)MBLD058−3
anti-Flag (mouse)SIGMAF3165
trypsinSIGMA85450C

References

  1. van Endert, P. Providing ligands for MHC class I molecules. Cell Mol Life Sci. 68 (9), 1467-1469 (2011).
  2. Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. . Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , (2001).
  3. McDevitt, H. O. Discovering the role of the major histocompatibility complex in the immune response. Annu Rev Immunol. 18 (1), 1-17 (2000).
  4. Bedoui, S., et al. Cross-presentation of viral and self antigens by skin-derived CD103+ dendritic cells. Nat Immunol. 10 (5), 488-495 (2009).
  5. Segura, E., Villadangos, J. A. Antigen presentation by dendritic cells in vivo. Curr Opin Immunol. 21 (1), 105-110 (2009).
  6. Cheong, C., et al. Microbial stimulation fully differentiates monocytes to DC-SIGN/CD209(+) dendritic cells for immune T cell areas. Cell. 143 (3), 416-429 (2010).
  7. Henri, S., et al. CD207+ CD103+ dermal dendritic cells cross-present keratinocyte-derived antigens irrespective of the presence of Langerhans cells. J Exp Med. 207 (2), 189-206 (2010).
  8. Shortman, K., Heath, W. R. The CD8+ dendritic cell subset. Immunol. Rev. 234 (1), 18-31 (2010).
  9. Carbone, F. R., Kurts, C., Bennett, S. R., Miller, J. F., Heath, W. R. Cross-presentation: a general mechanism for CTL immunity and tolerance. Immunol Today. 19 (8), 368-373 (1998).
  10. Nair-Gupta, P., Blander, J. M. An updated view of the intracellular mechanisms regulating cross-presentation. Front Immunol. , (2013).
  11. Joffre, O. P., Segura, E., Savina, A., Amigorena, S. Cross-presentation by dendritic cells. Nat Rev Immunol. 12 (8), 557-569 (2012).
  12. Kurts, C., et al. Constitutive class I-restricted exogenous presentation of self antigens in vivo. J Exp Med. 184 (3), 923-930 (1996).
  13. Kurts, C., Kosaka, H., Carbone, F. R., Miller, J. F., Heath, W. R. Class I-restricted cross-presentation of exogenous self-antigens leads to deletion of autoreactive CD8(+) T cells. J Exp Med. 186 (2), 239-245 (1997).
  14. Bonifaz, L., et al. Efficient targeting of protein antigen to the dendritic cell receptor DEC-205 in the steady state leads to antigen presentation on major histocompatibility complex class I products and peripheral CD8+ T cell tolerance. J Exp Med. 196 (12), 1627-1638 (2002).
  15. Heath, W. R., Carbone, F. R. Cross-presentation in viral immunity and self-tolerance. Nat Rev Immunol. 1 (2), 126-134 (2001).
  16. Imai, J., Hasegawa, H., Maruya, M., Koyasu, S., Yahara, I. Exogenous antigens are processed through the endoplasmic reticulum-associated degradation (ERAD) in cross-presentation by dendritic cells. Int Immunol. 17 (1), 45-53 (2005).
  17. Houde, M., et al. Phagosomes are competent organelles for antigen cross-presentation. Nature. 425 (6956), 402-406 (2003).
  18. Guermonprez, P., et al. ER-phagosome fusion defines an MHC class I cross-presentation compartment in dendritic cells. Nature. 425 (6956), 397-402 (2003).
  19. Burgdorf, S., Scholz, C., Kautz, A., Tampe, R., Kurts, C. Spatial and mechanistic separation of cross-presentation and endogenous antigen presentation. Nat Immunol. 9 (5), 558-566 (2008).
  20. Lizée, G., et al. Control of dendritic cell cross-presentation by the major histocompatibility complex class I cytoplasmic domain. Nat Immunol. 4 (11), 1065-1073 (2003).
  21. Basha, G., et al. A CD74-dependent MHC class I endolysosomal cross-presentation pathway. Nat Immunol. 13 (3), 237-245 (2012).
  22. Saveanu, L., Carroll, O., Hassainya, Y., van Endert, P. Complexity, contradictions, and conundrums: studying post-proteasomal proteolysis in HLA class I antigen presentation. Immunol Rev. 207 (1), 42-59 (2005).
  23. Wiertz, E. J., et al. Sec61-mediated transfer of a membrane protein from the endoplasmic reticulum to the proteasome for destruction. Nature. 384 (6608), 432-438 (1996).
  24. Hampton, R. Y. ER-associated degradation in protein quality control and cellular regulation. Curr Opin Cell Biol. 14 (4), 476-482 (2002).
  25. Tsai, B., Ye, Y., Rapoport, T. A. Retro-translocation of proteins from the endoplasmic reticulum into the cytosol. Nat Rev Mol Cell Biol. 3 (4), 246-255 (2002).
  26. Nyathi, Y., Wilkinson, B. M., Pool, M. R. Co-translational targeting and translocation of proteins to the endoplasmic reticulum. Biochim Biophys Acta. 1833 (11), 2392-2402 (2013).
  27. Varabyova, A., Stojanovski, D., Chacinska, A. Mitochondrial protein homeostasis. IUBMB Life. 65 (3), 191-201 (2013).
  28. Shen, Z., Reznikoff, G., Dranoff, G., Rock, K. L. Cloned dendritic cells can present exogenous antigens on both MHC class I and class II molecules. J Immunol. 158 (6), 2723-2730 (1997).
  29. Imai, J., Otani, M., Sakai, T., Hatta, S. Purification of the subcellular compartment in which exogenous antigens undergo endoplasmic reticulum-associated degradation from dendritic cells. Heliyon. , (2016).
  30. Kovacsovics-Bankowski, M., Rock, K. L. A phagosome-to-cytosol pathway for exogenous antigens presented on MHC class I molecules. Science. 267 (5195), 243-246 (1995).
  31. Ackerman, A. L., Giodini, A., Cresswell, P. A role for the endoplasmic reticulum protein retro translocation machinery during cross presentation by dendritic cells. Immunity. 25 (4), 607-617 (2006).
  32. Ackerman, A. L., Kyritsis, C., Tampé, R., Cresswell, P. Early phagosomes in dendritic cells form a cellular compartment sufficient for cross presentation of exogenous antigens. Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (22), 12889-12894 (2003).
  33. Saveanu, L., et al. IRAP identifies an endosomal compartment required for MHC class I cross-presentation. Science. 325 (5937), 213-217 (2009).
  34. Zehner, M., et al. The translocon protein Sec61 mediates antigen transport from endosomes in the cytosol for cross-presentation to CD8(+) T cells. Immunity. 42 (5), 850-863 (2015).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

126

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved