التصوير مورفولوجيا الجذر الشعر شتلات نبات في منصة موائع جزيئية طبقتين

Jayde A. Aufrecht; Jennifer M. Ryan; Sahar Hasim; David P. Allison; Andreas Nebenführ; Mitchel J. Doktycz; Scott T. Retterer

doi:10.3791/55971

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Summary

يوضح هذا المقالة كيفية الثقافة شتلات نبات التمويل في منصة طبقتين موائع جزيئية أن يحصر الجذر الرئيسي والشعر الجذر لطائرة بصري واحد. يمكن استخدام هذا البرنامج للتصوير الضوئي في الوقت الحقيقي مورفولوجيا الجذر غرامة كذلك أما بالنسبة للتصوير عالي الدقة بوسائل أخرى.

Abstract

زيادة الشعر الجذر جذر المساحة السطحية لامتصاص المياه أفضل وامتصاص العناصر الغذائية بالنبات. لأنها صغيرة الحجم وغالباً ما تحجب ببيئتهم الطبيعية، مورفولوجيا الجذر الشعر والدالة صعبة لدراسة وغالباً مستبعدة من بحوث النبات. في السنوات الأخيرة، عرضت منصات موائع جزيئية طريقة لتصور نظم الجذور بدقة عالية دون إزعاج الجذور أثناء نقلها إلى نظام تصوير. قدم منصة موائع جزيئية هنا يبني على البحوث النباتية على رقاقة السابقة بإدراج جهاز طبقتين حصر جذر نبات التمويل الرئيسي لنفس الطائرة الضوئية كجذر الشعر. يتيح هذا التصميم للتحديد الكمي للشعر الجذر على هاتف خلوي وعضيه المستوى وأيضا يمنع محور ع الانجراف أثناء إضافة علاجات تجريبية. ونحن تصف كيفية تخزين الأجهزة في بيئة الواردة ورطب، دون الحاجة لمضخات فلويديك، مع الحفاظ على بيئة جنوتوبيوتيك للشتلات. بعد تجربة التصوير الضوئي، يمكن تفكيكها الجهاز والمستخدمة كركيزة للقوة الذرية أو المسح الضوئي المجهر الإلكتروني مع الحفاظ على هياكل الجذر غرامة سليمة.

Introduction

ميزات الجذر غرامة زيادة المياه واقتناء المواد المغذية للنبات، استكشاف مساحات جديدة من التربة وزيادة مساحة السطح الجذر مجموع. دوران هذه الميزات الجذر غرامة يلعب دوراً رئيسيا في تنشيط السلسلة الغذائية تحت الأرض¹ وعدد جذور غرامة في بعض الأنواع النباتية من المتوقع أن يتضاعف تحت مرتفعة من ثاني أكسيد الكربون الجوي². جذور غرامة عموما تعرف بأنها تلك أصغر من 2 مم في القطر، وعلى الرغم من أن تعريفات جديدة للدعوة لوصف جذور غرامة على الدالة³. مثل العديد من جذور غرامة، توفير وظيفة امتصاص واستيعاب جذر الشعر لكن تحتل مساحة أصغر من ذلك بكثير مع أقطار يقارب ميكرون. بسبب صغر حجمها، يصعب على الصورة في الموقع الشعر الجذر وكثيراً ما يتم التغاضي عنها كجزء من بنية الجذرية الشاملة في تجارب على المستوى الميداني والنماذج.

الدراسات، مثل اعتبارا من الشتلات المزروعة في لوحات أجار السابقين تيرا جذر الشعر، قدمت الأوساط العلمية بمعلومات قيمة عن النمو الخلوي والنقل⁴^،⁵. بينما لوحات أجار تسمح أنظمة الجذر تصويرها غير المدمر وفي الوقت الحقيقي، أنها لا توفر الرقابة البيئية العالية لإضافة علاجات تجريبية مثل المواد الغذائية، والهرمونات النباتية، أو البكتيريا. وقد حلاً ناشئة لتسهيل التصوير عالية الدقة مع إتاحة مراقبة البيئة الحيوية أيضا ظهور منصات موائع جزيئية للدراسات النباتية. ومكنت هذه المنصات بالنمو غير المدمرة والتصور للعديد من الأنواع النباتية للإنتاجية العالية phenotyping⁶^،⁷^،^،من⁸⁹، العلاجات الكيميائية المعزولة ¹⁰وقوة القياسات¹¹^،¹²، وإضافة الكائنات الدقيقة¹³. تصاميم منصة موائع جزيئية تركز على استخدام طبقات فلويديك مساحة مفتوحة واحدة التي قد تنتشر الجذور، السماح للشعر الجذر الانجراف داخل وخارج التركيز البصري أثناء النمو أو العلاج.

نقدم هنا إجراء لتطوير منصة طبقتين موائع جزيئية باستخدام صور وأساليب الطباعة الحجرية الناعمة أن يبني على التصاميم النباتية على رقاقة السابقة بقصره الشعر الجذر الشتلات على نفس الطائرة التصوير كالجذر الرئيسي. وهذا يسمح لنا بتتبع التنمية الشعر الجذر في الوقت الحقيقي، بدقة عالية، وفي جميع مراحل عملية العلاج التجريبي. تسمح أساليب عملنا وتثقيف شتلات نبات التمويل أن نامي من البذور ضمن المنهاج ومثقف لتصل إلى أسبوع في محيط رطب والعقيمة التي لا تتطلب استخدام معدات الحقن مضخة. مرة واحدة وخلص الوقت الفاصل بين التصوير التجربة، يمكن فتح النظام الأساسي المعروض هنا دون الإخلال بموقف السمات الجذرية الدقيقة. وهذا يسمح باستخدام أساليب التصوير الأخرى عالية الدقة. هنا نقدم نتائج تمثيلية للقياس الكمي والتصور مورفولوجيا الجذر الشعر في هذا النظام الأساسي من المسح الضوئي، والمجهر الإلكتروني (SEM)، والقوة الذرية تقنيات الفحص المجهري (فؤاد).

Protocol

1-طبقتين تصنيع منصة

تصنيع شرائح رئيسية متعددة الطبقات
1. تدور معطف مقاوم الضوء السلبية على أساس الإيبوكسي (المواد الصلبة ~63.45%، 1,250 لجنة العلم والتكنولوجيا) وفقا لمواصفات الجهة المصنعة (2,000 لفة في الدقيقة 45 s) على رقاقة سيليكون قطرها 4 بوصة للحصول على الارتفاع المطلوب من 20 ميكرومتر لطبقة التصميم الأولى.
2. لينة-خبز رقائق مغلفة مقاومة لمدة 4 دقيقة عند 95 درجة مئوية. السماح ليفر بارد لفضح دقيقة 5 يفر إلى الأشعة فوق البنفسجية الخفيفة لمدة 15 ق (~ 150 مللي جول/سم² في 365 نانومتر) من خلال النبائط في الأشعة فوق البنفسجية اتصل راصفة لتعريف هندسة الطبقة السفلي.
3. خبز بعد التعرض يفر لمدة 5 دقائق في 95 درجة مئوية. دون تطوير، العودة يفر المغطى تدور وتدور على طبقة ثانية من مقاوم الضوء السلبية على أساس الإيبوكسي (المواد الصلبة ~76.75%، 80,000 لجنة العلم والتكنولوجيا) في 3000 دورة في الدقيقة لتحقيق ارتفاع طبقة ثانية من 150-200 ميكرون.
4. السماح ليفر الراحة لمدة 5 دقائق قبل نقل إلى هوتبلت 95 درجة مئوية لمدة 45 دقيقة. بعد الخبز على هوتبلت، إزالة يفر وتسمح مقاومة لتبرد وتتصلب في درجة حرارة الغرفة لآخر 5 دقائق على سطح مسطح مستو. محاذاة وفضح يفر إلى النبائط الطبقة الثانية لمدة 30 ثانية في الأشعة فوق البنفسجية اتصال راصفة (جرعة من حوالي 300 مللي جول/سم²).
5. القيام خبز بعد تعرض بوضع يفر على هوتبلت لمدة 15 دقيقة عند 95 درجة مئوية وتسمح ثم يفر تبرد على سطح مسطح مستو لمدة 5 دقائق قبل وضع.
6. وضع كل طبقات مقاومة في الوقت نفسه بوضع يفر إلى طبق بلاستيك وغمر الرقاقة في المطور المناسب (انظر الجدول المواد). روك بلطف الطبق أحياناً لغسل المطور جديدة أكثر الرقاقة.
7. وبعد 17 دقيقة، شطف يفر مع الايزوبروبانول (IPA). إذا كان فيلم أبيض يظهر، تواصل التكرار بين الشطف الرقاقة مع المطور وأصد حتى يختفي الفيلم. رقاقة السيليكون منقوشة بالنيتروجين الجاف.
بولي دايمثيل سيلوكسان لينة-الطباعة الحجرية
1. تعريض رقاقة السيليكون لبلازما هواء لمدة 30 ثانية في بلازما أنظف تعيين على ارتفاع (انظر الجدول المواد) لتنظيف. سيلانيزي يفر مع سيلاني ثلاثي الكلور (ح 1، ح 1، ح 2، ح 2-perfluoro-n-أوكتيل) في غطاء كيميائية في هوتبلت أدناه اشتعال silane (85 درجة مئوية) ح 2.
2. من أجل نسبة 10:1 من بولي دايمثيل سيلوكسان (PDMS) لعلاج عامل على رقاقة رئيسية السليكون. ديغا PDMS مختلطة في فراغ غرفة وعلاج ثم البوليمر في فرن 70 درجة مئوية لح 1 أو حتى يشفي تماما PDMS.
3. استخدام مشرط، قطع أجهزة PDMS وقشر منهم من يفر الرئيسي السليكون. استخدام لكمه خزعة 1.5 مم لإنشاء مداخل البذور والعلاج، اللكم مدخل البذور بزاوية 45 درجة لتشجيع النمو الجذري في القناة الرئيسية.
4. استخدم شريط لاصق واضحة لإزالة الحطام من الجهاز PDMS ووضع الجانب تصميم الجهاز لأسفل على ساترة زجاج. اﻷوتوكﻻف الأجهزة المجمعة.

2-زرع أجهزة

إعداد بذور نبات التمويل
1. سطح تعقيم البذور (أ) التمويل في [ميكروفوج] أنابيب مع إيجاد حل للتبييض المتوفرة تجارياً 30% المخفف في إزالة المتأين المنظفات "تريتون العاشر" المياه و 0.1% للحد الأدنى 7 أغسل البذور 4 مرات مع الماء المعقم.
2. التجهيزة البذور بالتبريد [ميكروفوج] أنابيب بين عشية وضحاها أو حتى في أسبوع في 4 درجات مئوية.
إعداد الجهاز
1. وضع الأجهزة معقمة في فراغ ولﻵﻻت الدائرة لإزالة الهواء من الغاز نفاذية PDMS وقنوات فلويديك لتحسين سهولة التعبئة.
2. إزالة الأجهزة من فراغ الغرفة وتغرق فورا الأجهزة في طبق بتري مليئة بالسائل قوام ¼ النباتات على أساس وسائل الإعلام على درجة الحموضة 5.7.
3. استخدام ماصة، سحب السائل من خلال مداخل لملء الجهاز. تأكد من أن يظل لا فقاعات الهواء داخل قنوات بالمعاينة البصرية.
4. نقل الأجهزة الفردية إلى أطباق بتري جافة جديدة. صب أو ماصة أجار الساخنة حول الجهاز حتى مستوى أجار تدفق تقريبا مع الجزء العلوي من الجهاز PDMS. تسمح أجار يصلب.
  ملاحظة: الأجهزة جاهزة الآن لغرس بذور أو يمكن تخزينها في 4 درجات مئوية حتى حاجة.
زرع بذور داخل الأجهزة
1. في بيئة معقمة، نقل بذور معقمة واحد إلى المدخل لكل جهاز باستخدام ماصة صغيرة.
2. غطاء صحن بيتري مع الشمع فيلم (انظر الجدول المواد) ووضع في غرفة النمو ركوب الضوء/الظلام أو سيلز في درجة حرارة الغرفة. توجيه الطبق بيتري حيث تكون الأجهزة الرأسية والجاذبية سوف يشجع الجذور تنمو من خلال القناة.

3-معاملة

علاجات تجريبية
1. وفي الوقت المطلوب في التنمية الشتلات، إضافة العلاج التجريبي للشتلات بإضافة كمية محددة من العلاج لكل من المنافذ الجانبية 8 عبر ماصة.
2. ختم طبق بيتري والعودة إلى دائرة النمو أو حافة النافذة.
3. المضي قدما في تصوير العينات في الوقت المطلوب التقاط النقاط الزمنية الفردية أو البدء في التصوير بمرور الوقت.

4-بصري تصوير

انخفاض تصوير القرار (4-20 X)
1. ضع طبق بيتري كاملة تحتوي على الجهاز والشتلات تحت مجهر مقلوب حقل مشرق لحقل مشرق القرار (4-20 X) أقل أو تصوير التباين (DIC) التدخل التفاضلية. تحسين ظروف الإضاءة توضيح السمات المورفولوجية للاهتمام بضبط التعرض مرات وسطوع المصباح والفتحة والأقطاب من الضوء. محرك المرحلة إلى المنطقة المطلوبة من الجذر والتركيز على الجذر أو root hair(s) للفائدة.
2. الحصول على نقطة مرة واحدة أو سلسلة زمنية من الصور. تصور نمو الشعر الجذر، صورة متزايدة جذر الشعر مرة واحدة كل دقيقة. أن تصور نمو الجذر الرئيسي، اكتساب صورة واحدة كل 30 دقيقة من عودة طبق بيتري والشتلات لدائرة النمو أو سيلز في وضع عمودي بعد الانتهاء من التصوير.
التصوير العالي بالقرار (س 20-63)
1. بمجرد الشتلات نمت لوقت المطلوب، استخدم الملقط لإزالة ساترة والجهاز من أجار. تنظيف قبالة الجزء السفلي من ساترة استخدام إيثانول تبلل الأنسجة المختبرية.
2. تطبيق وسائل الإعلام الغمر الموصى بها إلى الهدف كما اقترحت الشركة المصنعة عدسة المجهر. ضع ساترة أسفل في مرحلة مجهر ورفع مرحلة الاتصال بوسائط الإعلام الانغماس في الهدف. تحسين ظروف الإضاءة بضبط التعرض مرات وسطوع المصباح، والفتحة والأقطاب من الضوء. محرك المرحلة إلى المنطقة المطلوبة، والتركيز على root hair(s) للفائدة.
  ملاحظة: هناك حاجة إلى DIC لتصور لقطات هيولى، وعلامات فلورية ضرورية لتصور حركة عضية.
3. لقياس نمو جذور الشعر مع مرور الوقت، الحصول على صورة واحدة كل دقيقة. تصور حركة عضية، تقليل الوقت التعرض fluorescence بينما لا يزال الإبقاء على إشارة fluorescence شخصية من العضيات. الحصول على صور من العضيات بسرعة كما يسمح وقت التعرض. لفترة أطول من الوقت الفاصل بين التصوير، استخدم حاضنة مرحلة تصوير خلية يعيش للحفاظ على درجة الحرارة المحيطة والرطوبة.
  ملاحظة: من المستحسن هدفا نفط X 63 للتصوير الشعر الجذر العضيات.

5-غير بصرية تصوير

إعداد الجهاز
1. مرة نمت الشتلات للوقت المطلوب،

قم بإزالة الجهاز وساترة من طبق بيتري.

اقلب الجهاز وقشر بلطف بعيداً ساترة حيث أن يبقى الجذر داخل القناة PDMS.

المضي قدما في استخدام الجهاز PDMS كركيزة للجذر في أعلى القرار القوة الذرية أو المسح الضوئي المجهر الإلكتروني.

المسح الضوئي المجهر الإلكتروني

إيداع رقيقة (~ 20 nm) طبقة من الكروم على الجذر والمحيطة PDMS استخدام "غرفة التبخر شعاع الإلكترون بندقية مزدوجة".
نقل الجذر وجهاز PDMS إلى دائرة المسح الإلكتروني المجهري.
ملاحظة: التصوير الشروط، أي الجهد، المسافة الحالية والعمل ستحتاج إلى أن يكون الأمثل لتحقيق الدقة المطلوبة لتطبيق محدد.

مجهر القوة الذرية (AFM)

تحميل الجانب جذر جهاز PDMS حتى على صاحب عينة فؤاد. لزيادة التباين في الكاميرا وأكثر بسهولة تمييز الجذر من PDMS، وضع الجهاز PDMS على الركازة عاكس مسطح (مثل ميكا مطلية بالذهب) قبل تركيب الجهاز على صاحب العينة فؤاد.
تأمين ارتباط جيدا سائل على رأس الجهاز PDMS وملئه بالمياه للحفاظ على جذور رطب أثناء التصوير.
تحميل صاحب العينة إلى فؤاد. ضبط z لسمك الجهاز PDMS ودفع ناتئ في المنطقة لمصلحة في الجذر باستخدام كاميرا للتوجيه.
قم بمحاذاة الليزر بطرف ناتئ. للحصول على نتائج أفضل مع تصوير وضع الاتصال، استخدم cantilevers مع الثوابت الربيع من 0.01 أو 0.03 N/m إلى ممارسة الحد الأدنى من القوة على الجذر أثناء المسح الضوئي.
انخفاض ببطء إليه المسح حتى ناتئ فقط يجعل الاتصال مع العينة. قم بضبط حجم المسح الضوئي للمنطقة المطلوبة واختر سرعة المسح الضوئي من سطر 1/s مع نقاط الجهد 256 كل سطر. الحصول على المسح الضوئي.

النتائج

وقد طبقتين PDMS موائع جزيئية الأجهزة الموضحة هنا قناة عالية 200 ميكرومتر لجذر نبات الرئيسي وغرفة عالية 20 ميكرومتر قصر المتزايد أفقياً جذر الشعر (الشكل 1A). هذا التصميم يمكن أن تستخدم للأنواع النباتية مع أقطار جذر مماثلة التمويل نبات ويمكن سهولة تعدي...

Discussion

الطريقة الموضحة في هذه المقالة لإنشاء منصة معمل على رقاقة فريدة من نوعها في هذا التصميم طبقتين حدود قد فككت الشعر الجذر إلى طائرة واحدة تابعة لتصوير والمنهاج والمستخدمة كركيزة للتصوير غير الضوئية عالية الدقة . استخدام التصوير غير الضوئية عالية الدقة يمكن أن توفر معلومات قيمة عن الأنسجة ا...

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

هذه المخطوطة وقد تم تأليف UT-Battelle، شركة ذات مسؤولية محدودة تحت "رقم العقد" دي-AC05-00OR22725 مع وزارة الطاقة في الولايات المتحدة. وتحتفظ "حكومة الولايات المتحدة" والناشر، بقبول المادة للنشر، تعترف بأن "حكومة الولايات المتحدة" يحتفظ بترخيص غير حصري، المدفوع، ولا رجعة فيه، على نطاق العالم لنشر أو استنساخ النموذج المنشور من هذه المخطوطة، أو السماح للآخرين بالقيام بذلك، لأغراض "حكومة الولايات المتحدة". إدارة الطاقة سيوفر إمكانية وصول الجمهور إلى نتائج هذه البحوث التي ترعاها الحكومة الاتحادية وفقا "خطة وصول الجمهور" الفلاني (http://energy.gov/downloads/doe-public-access-plan).

بتأييد هذا العمل جزئيا ببرنامج علوم الجينوم، ووزارة الطاقة في الولايات المتحدة، ومكتب العلوم والبيولوجية والبحوث البيئية، كجزء من "مصنع ميكروب الواجهات العلمية مجال التركيز" (http://pmi.ornl.gov). تصنيع منصات موائع جزيئية أجريت في "مختبر أبحاث النانومترى" في المركز "علوم المواد نانوفاسي"، وهو "منشأة" الكيان التشغيلي المعين للمستخدم مكتب العلوم. جا مدعومة زمالة أبحاث الدراسات عليا NSF تأيين-1452154

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Silicon Wafer	WRS Materials	100mm diameter, 500-550um thickness, Prime, 10-20 resistivity, N/Phos<100>
Quintel Contact Aligner	Neutronix Quintel Corp	NXQ 7500 Mask Aligner
Fluorescent Microscope	Nikon	Eclipse Ti-U
laboratory tissue	Kimberly Clark	Kimwipe KIMTECH SCIENCE Brand, 34155
Negative Photoresist Epoxy	Microchem	SU-8 2000s series
Photoresist developer	Microchem	Su-8 developer
trichloro(1H,1H,2H,2H-perfluoro-octyl)silane	Sigma Aldrich		use in chemical hood
Air Plasma Cleaner	Harrick Plasma
PDMS	Dow Corning	Sylgard 184 Silicone elastomer base
PDMS curing agent	Dow Corning	Sylgard 184 Silicone elastomer curing agent
Dessicator	Bel-Art	F42010-000
Scalpel	X-acto knife
Biopsy Punch	Ted Pella	15110-15
Adhesive tape	Staples	Invisible Tape
Microfuge tube	Eppendorf
Triton X	J.T.Baker XI98-07
Bleach	Chlorox	concentrated
Plant-Based Media	Phyto Technology Laboratories	M524
Agar	Teknova	A7777
Wax film	Parafilm
microscope	Olympus	IX51
Atomic Force Microscope	Keysight Technologies	5500 PicoPlus AFM
Petri dish	VWR
Scanning Electron Microscope	JEOL	7400
Dual Gun Electron Beam Evaporator	Thermionics	Custom Dual Electron Gun Evaporation System

References

Pritchard, S. G. Soil organisms and global climate change. Plant Pathol. 60 (1), 82-99 (2011).
Norby, R. J., Ledford, J., Reilly, C. D., Miller, N. E., O'Neill, E. G. Fine-root production dominates response of a deciduous forest to atmospheric CO2 enrichment. Proc. Natll. Acad. Sci. USA. 101 (26), 9689-9693 (2004).
McCormack, M. L., et al. Redefining fine roots improves understanding of below-ground contributions to terrestrial biosphere processes. New Phytol. 207 (3), 505-518 (2015).
Mangano, S., Juarez, S. P. D., Estevez, J. M. ROS regulation of polar-growth in plant cells. Plant Physiol. 171 (3), 1593-1605 (2016).
Ketelaar, T., Emons, A. M. The Actin Cytoskeleton in Root Hairs: A Cell Elongation Device. Root Hairs. , 211-232 (2009).
Grossmann, G., et al. The RootChip: an integrated microfluidic chip for plant science. Plant Cell. 23 (12), 4234-4240 (2011).
Grossmann, G., et al. Time-lapse fluorescence imaging of Arabidopsis root growth with rapid manipulation of the root environment using the RootChip. J. Vis. Exp. (65), (2012).
Jiang, H., Xu, Z., Aluru, M. R., Dong, L. Plant chip for high-throughput phenotyping of Arabidopsis. Lab Chip. 14 (7), 1281 (2014).
Busch, W., et al. A microfluidic device and computational platform for high-throughput live imaging of gene expression. Nat. Methods. 9 (11), (2012).
Meier, M., Lucchettta, E., Ismagilov, R. Chemical Stimulation of the Arabidopsis thaliana Root using Multi-Laminar Flow on a Microfluidic Chip. Lab Chip. 10 (16), 2147-2153 (2010).
Ozoe, K., Hida, H., Kanno, I., Higashiyama, T., Notaguchi, M. Early characterization method of plant root adaptability to soil environments. Proc. of 28th IEEE Interntl. Conf. Micro. Electro Mech. Syst. , (2015).
Sanati Nezhad, A. Microfluidic platforms for plant cells studies. Lab on a chip. , 3262-3274 (2014).
Parashar, A., Pandey, S. Plant-in-chip: Microfluidic system for studying root growth and pathogenic interactions in Arabidopsis. App. Phys. Lett. 98 (26), 2009-2012 (2011).
Rigas, S., et al. Root gravitropism and root hair development constitute coupled developmental responses regulated by auxin homeostasis in the Arabidopsis root apex. New Phytolol. 197 (4), 1130-1141 (2013).
Bengough, A. G., McKenzie, B. M., Hallett, P. D., Valentine, T. A. Root elongation, water stress, and mechanical impedance: A review of limiting stresses and beneficial root tip traits. J. Exp. Bot. 62 (1), 59-68 (2011).
Sia, S. K., Whitesides, G. M. Microfluidic devices fabricated in poly(dimethylsiloxane) for biological studies. Electrophor. 24 (21), 3563-3576 (2003).
Millet, L. J., Stewart, M. E., Sweedler, J. V., Nuzzo, R. G., Gillette, M. U. Microfluidic devices for culturing primary mammalian neurons at low densities. Lab chip. 7 (8), 987-994 (2007).
Nelson, B. K., Cai, X., Nebenführ, A. A multicolored set of in vivo organelle markers for co-localization studies in Arabidopsis and other plants. Plant J. 51 (6), 1126-1136 (2007).
Talbot, M. J., White, R. G. Cell surface and cell outline imaging in plant tissues using the backscattered electron detector in a variable pressure scanning electron microscope. Plant Methods. 9 (1), 40 (2013).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

126

This article has been published

Video Coming Soon

Keep me updated: