العلاج التجديدي بخلية سوبراتشورويدال أوتوجرافت في الجافة المرتبطة بالسن البقعي: تقرير أولى في فيفو

Summary

والهدف من هذه الدراسة تقييم ما إذا كان يمكن تحسين الاختلاس سوبراتشورويدال الخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية المدرجة في كسر الأوعية الدموية stromal والصفائح الدموية المستمدة من البلازما الغنية بالصفائح الدموية "تقنية ترميم الشبكية ليمولي" البصر و استجابات حساسية الشبكية في العينين المتأثرة بالجفاف المرتبطة بالسن البقعي.

Abstract

هذه الدراسة تهدف إلى بحث ما إذا كان يمكن تحسين طعم سوبراتشورويدال من خلايا ذاتي أفضل تصحيح البصر (بكفا) والردود على ميكروبيريميتري (بلدي) في عيون تتأثر الجافة المرتبطة بالسن تنكس القرنية (AMD) على مر الزمن من خلال إنتاج وإفراز عوامل النمو (GFs) في الأنسجة المحيطة. وانتدب المرضى عشوائياً لكل فريق الدراسة. جميع المرضى الذين تم تشخيص مع أية أم دي الجاف وبكفا مساوية أو أكبر من 1 اللوغاريتم من زاوية الحد الأدنى من القرار (لوجمار). طعم ذاتي سوبراتشورويدال بتقنية ترميم الشبكية (لررت) ليمولي أجريت في المجموعة أ، التي شملت عيون 11 من 11 مريضا. وكان يؤديها التقنية غرس adipocytes، الخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية التي تم الحصول عليها من كسر الأوعية الدموية stromal، والصفائح الدموية من البلازما الغنية بالصفائح الدموية في الفضاء سوبراتشورويدال. واستخدمت المجموعة باء، بما في ذلك 14 عيون 14 مريضا، على العكس من ذلك، كمجموعة مراقبة. لكل مريض، وكان التحقق من التشخيص [كنفوكل] منظار ليزر المسح الضوئي والتصوير المقطعي التماسك الضوئية المجال الطيفي (SD--أكتوبر). في المجموعة أ، بكفا تحسين 0.581 إلى 0.504 في غضون 90 يوما، ولوجمار 0.376 في غضون 180 يوما (+32.20 ٪) بعد. وعلاوة على ذلك، زاد بلدي اختبار 11.44 dB إلى 12.59 dB في غضون 180 يوما. أنواع الخلايا المختلفة المطعمة خلف المشيمية كانت قادرة على ضمان إفراز فرنك غيني المستمر في تدفق تشورويدال. ونتيجة لذلك، تشير النتائج إلى أنه يمكن زيادة الحدة البصرية (خامسا) في المجموعة المطعمة أكثر في السيطرة على المجموعة بعد ستة أشهر.

Introduction

العلاج الخلية، تتكون من حقن الخلايا الجذعية/السلف في منطقة المصاب لعلاج أمراض مزمنة متعددة، النظمية أو المحلية الانتباه الوثيق في العقد الماضي¹. وقد درست منذ التسعينات، عوامل النمو (GFs) لدورها العلاجي يحتمل أن تكون في ضمور الشبكية². وفي الواقع، يمكن أن تنتج العديد من الخلايا البشرية إحصاءات المالية الحكومية، التي هي بروتينات معينة قادرة على منع أو إبطاء المبرمج، أي، وموت الخلايا³المبرمجة.

ومن المعروف أن الجافة المرتبطة بالسن البقعي (AMD) وهو مرض شبكية ضامر التي ينطوي فيها موت الخلايا تدريجيا ولا رجعة فيه على الضرر اللاحق بطبقة مستقبله، وبالتالي فقدان الوظيفة البصرية المركزية⁴. أية أم دي هي السبب الرئيسي للعمى في الأشخاص أكثر من 55 عاماً عمر في البلدان المتقدمة النمو وتمثل 80 في المائة من جميع تنكسات البقعي، الذي يفتقر إلى علاج فعال حتى الآن.

وقد أظهرت دراسات عديدة أن هناك مصادر مختلفة يمكن من خلالها الحصول على ذاتي إحصاءات المالية الحكومية. وهذه تشمل أنواع مختلفة من الخلايا، بما في ذلك الخلايا الدهنية stromal المستمدة من الدهون المداري والصفائح الدموية المستمدة من البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP) والخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (أدسكس) وشملت في كسر الأوعية الدموية stromal (SVF) من الأنسجة الدهنية^{5 ،،}من⁶⁷. مجموعة فرنك غيني الحالية يضمن نيوروينهانسيمينت الشبكية، والبحث الذي أجراه فيلاتوف، ميدوري، بيلايز، وأثبت ليمولي أن زرع الدهون الذاتي (الخلف) هو فعال^8،،من⁹¹⁰.

وعلاوة على ذلك، أظهرت دراسة سابقة تحسينات كبيرة في البيانات اليكتروريتينوجرام (ERG)، سجلت وظيفة سوبراتشورويدال ذاتي الاختلاس، في العيون الجافة المتضررة من أية أم دي¹¹. والتضمين الأنسجة المطعمة جراحيا في الفضاء سوبراتشورويدال paracrine إفراز خلايا الشبكية، تأخير على المبرمج^6،،من⁷¹². نظراً لسمك الطبقة الخارجية النووية، أظهرت دراسة نسيجية شبكية خنازير غينيا أن إحصاءات المالية الحكومية يمكن أن يكون تأثير التغذوية على الشبكية. ولذلك، استخدام إحصاءات المالية الحكومية المباشرة أو غير المباشرة يمكن أن يحتمل أن يحقق فوائد العلاجية من خلال علاقة متوازنة بين مستحثات الجزيئية ومثبطات^6،،من⁷¹².

والغرض من هذا الأسلوب تقييم ما إذا كان يمكن تحسين الاختلاس سوبراتشورويدال من adipocytes، أدسكس في صندوق التبرعات الخاص والحزب الثوري أفضل تصحيح البصر (بكفا) والردود ميكروبيريميتري (بلدي) في العيون الجافة المتضررة من AMD. تهدف هذه الدراسة إلى إثبات التأثير العلاجي من أوتوجرافت على أساس إنتاجها فرنك غيني، وفقا للأدبيات المذكورة^6،7،،من¹²¹³.

Protocol

تمت الموافقة على البروتوكول دراسة لجنة الأخلاقيات التابعة لأكاديمية الرؤية المنخفضة وجميع المواضيع وقعت موافقة مكتوبة وفقا "إعلان هلسنكي". وتلقى هذه الدراسة البحثية الموافقة الأخلاقية من لوفبورو جامعتي شيفيلد.

ملاحظة: معايير اشتمال واستبعاد الجافة المرتبطة بالسن البقعي المرضى لتلقي سوبراتشورويدال ذاتي الاختلاس بتقنية استعادة ليمولي الشبكية (لررت) يرد في الجدول 1.

1-تشخيص المرضى الجافة المرتبطة بالسن البقعي

1. التأكد من التشخيص مع منظار ليزر المسح [كنفوكل]، والتنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، ولي.
2. تقييم بكفا كل مجموعة للآن وقرب المسافة. خامسا التدبير لرؤية القريب (مقرب) في النقاط (Pts). قياس بكفا الوقت 0 (T0) 90 (T90)، و 180 يوما (T180) مقارنة بالعلاج المبكر اعتلال الشبكية السكري دراسة الخرائط (ادترس) في 4 أمتار في لوجمار.
3. سجل ميسوبيك الظلامية، الكهربائية، ونشاط الخلية فوتوبيك، أو أرج فلاش، وفقا للمعايير التي حددها "المجتمع الدولي" للكهربية السريرية للرؤية (إيسسيف)¹¹في عام 2009.

2-أنيسثيتيزيشن

ملاحظة: معيار الذهب في التخدير أثناء لررت تخدير موضعي، معززة بتسلل sub الحفرة تينون البنج والتخدير. وفي حالات محددة، التخدير العام المفضل.

1. الحصول على القرنية والتخدير مايوجد بتطبيق المخدرات الموضعية الموضعية نفوس dropwise 15-20 دقيقة قبل الجراحة مع يدوكائين في 4% وروبيفاكيني % 1.
2. حقن التخدير بتسلل مباشرة إلى sub-مايوجد وممنوع في سوبتينون.
3. استخدام تسلل المحلية على حد سواء في منطقة البطن، قبل أن يتم استخراج الأنسجة الدهنية، وفي sub-مايوجد وممنوع الفرعي الحفرة تينون، 12 مم من ليمبوس. اعتماد مخدر موضعي كاربوكيني أو ماركين مختلطة مع أدرينالين 1,200 وحدة دولية.
4. يقدم التخدير الموضعية عن طريق المخدر، التي يمكن القيام بها بشكل صحيح باستخدام شيفتشنكو كالمسكنات مخدرة عن طريق بولي الصغيرة المتكررة. عموما الجرعة 0.025 ملغ شيفتشنكو مع 1 مغ الميدازولام الواحدة بلعه.

3-ليمولي الشبكية استعادة تقنية إعداد

ملاحظة: يمثل هذا الأسلوب البديل التدخل في بيلايز الذي هو زرع الدهون الذاتي المداري في سوبسكليرال مساحة^1،،من^67،12. يمكن أن تنتج الخلايا جراحيا المطعمة العديد من إحصاءات المالية الحكومية مع خصائص نيوروتروفيك وأنجيوتروفيك في الأنسجة المحيطة، المشيمية والشبكية^18،19،،من^{2021،22 ،،}من^2324،25. في لررت، يتم تقليل المسافة بين خلايا ذاتي المطعمة والمشيميه عن طريق سكليريكتومي العميق، وهو توسيع منطقة الاتصال بين ساق والمشيميه لتعزيز إفراز الخلية ذاتي paracrine إلى تدفق تشورويدال^{9، ،}من ¹⁰¹⁴.

1. إجراء التعقيم السليم لكل عين قبل الجراحة مع تطعيم الخلوية بين المشيمية والصلبة، وإجراء استدعاء الأسلوب إعادة الشبكية ليمولي (لررت)^15،،من¹⁶¹⁷.
2. Graft أدسكس، التي حصلت عليها كولمان et al. وتقنية لورانس (الشكل 1) من الدهون في منطقة البطن، في صندوق التبرعات الخاص في الفضاء سوفراتشورويدال^15،،من¹⁶¹⁷.
3. بيديكلي الدهنية ارتشاح مع الصفائح الدموية المستمدة من جل الحزب الثوري التي تم الحصول عليها من خلال الخطوات التالية.
4. الطرد المركزي الدم^6،12 وجمع البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP). الحافز تحبب الصفائح الدموية يسبب الإفراج عن فرنك غيني في^6،بيديكلي الدهنية¹².

4-المواصفات واستراتيجية

ملاحظة: يتم جمع الأنسجة الدهنية وتنقيته من الطبقة تحت الجلد البطني من المرضى، وفقا للورانس وكولمان تقنية¹⁷(جدول المواد).

1. يدوياً حصاد 10 مل أنسجة الدهنية من طبقة تحت الجلد البطني لكل مريض، باستخدام قنية كليلة 3 مم متصلاً بحقنه تأمين، طبقاً للورانس وكولمان تقنية¹⁷ (الأرقام 2A/2B).
2. فصل التبرعات نقية من الأنسجة الدهنية من الدم، والدهون، والنفط، والسائل بالطرد المركزي لمدة 5 دقائق في س 1,500 ز عند 20 درجة مئوية (الشكل 2-ج). صندوق التبرعات الخاص غنية جداً من أدسكس¹⁷.
3. جمع 8 مل دم المحيطي البشري بإبرة ز 22 وفي أنبوب مستقل لإعداد الحزب الثوري.
4. الطرد المركزي الدم التي تم جمعها لمدة 5 دقائق في 1,500 س ز عند 20 درجة مئوية (الشكل 2د). في لررت، نتيجة التغييرات التي تلت ذلك في البقاء على قيد الحياة أفضل من الاختلاس الدهون الذاتي، انتشار آخر، التي تفضل زيادة التروية تشورويدال، وتحوير أكثر شمولاً لعمل تلك العوامل التي هي يفرز فقط من الدهون^{7، 11،17}.
5. بناء على جيب سوبراتشورويدال (مزيد من التفاصيل في الخطوة 4، خاصة 4.4 و 4.5) لاستيعاب الاختلاس التي تم الحصول عليها من الدهون المداري وتشبع حجم المتبقي من هذا الجيب بمزيج أدسكس من صندوق التبرعات الخاص والحزب الثوري، التي تم الحصول عليها وفقا لورانس و تقنية كولمان¹⁷.

5-سوبراتشورويدال أوتوجرافت من لررت (تقنية ترميم الشبكية ليمولي): إجراء العمليات الجراحية والتفاصيل التقنية

1. مذيع الصلبة العينية مع خياطة الحرير 6-0، قرب ليمبوس أدنى الزمانية.
2. فتح مساحة سبكونجنكتيفال وسوبتينونيان في 11 مم من ليمبوس أدنى الزماني، استخدام مقص منحنى وستكوت تينيتومي 5.5 ".
3. إدراج ضام مايوجد بازيل ليمولي في هذا الفضاء لجعل حقل جراحية سكليرال.
4. استخدام سكين هلال 5 مم زاوية مجسم مشطوف الحواف، قبل قطع رفرف على الجانب في الصلبة العينية في 8 مم، من ليمبوس. المفصلي رفرف دائماً شعاعي، وإلى اليسار من الجراح.
5. في رباعي أدنى الزمانية، في 8 مم من ليمبوس، فتح باب scleral عميقة حوالي 5 مم على الجانب من المفصلات شعاعي باستخدام سكين الهلال الزاوية مجسم مشطوف الحواف أعلى. القيام سكليريكتومي في عمق كاف لعرض لون الاردواز المشيمية.
6. خلق فجوة بإزالة operculum قليلاً في الجزء القاصي من رفرف، بغية تسهيل الدورة الدموية في أوتوجرافت سوبراتشورويدال اللاحقة.
7. استخراج مع الملقط العيون الدهون المداري من فجوة أعلاه عضلة مائلة أقل شأنا. تأكد من الدهون المستخرجة من vascularized بما فيه الكفاية للسماح له بالبقاء على قيد الحياة بعد أن غرس.
8. بلطف ضع رفرف الدهون الذاتي على سرير تشورويدال وخياطة مع ألياف بوليجلاكتين 6/0 تشورويدال عند الحافة القريبة من الباب.
9. خياطة رفرف سكليرال تجنب الضغط على بيديكلي الدهون أو على سفنها المغذيات.
10. التسلل ستروما بيديكلي الدهون مع 1 مل جل الحزب الثوري (التي تم الحصول عليها بالطرد المركزي للمواد الدموية، وفصل المكونات، والصفائح الدموية تحبب²⁶) باستخدام قنية زاوية (30 °) 30 غ.
11. إعداد جانبي الملتحمة خياطة الجروح. ثم، قم بإزالة ضام مايوجد.
12. خياطة الملتحمة، استخدام الألياف بوليجلاكتين 6/0.
13. قبل أن اختتم كلمتي، اترك مساحة لإدراج في الفضاء سوبسكليرال، بين رفرف والمشيميه في أوتوجرافت تشورويدال، أنبوب بلاستيك مرنة صغيرة مع الفساد الدهون الذاتي.
14. تشبع المساحة المتبقية بين الاختلاس الدهون الذاتي والمشيميه، واللوحات سكليرال مع 0.5 سم مكعب من صندوق التبرعات الخاص (ريتش أدسكس)، معدّة مسبقاً في الخطوة 3، 2، من أنبوب بلاستيكي مرن صغير، إدراجها في جيب سكليرال.
15. بعد تشبع المساحة المتبقية، أغلق خياطة الجروح.
16. بعد الجراحة، وإدارة ثلاثة أيام علاج بالمضادات الحيوية مع الأزيتروميسين 500 مغ. كما توفر العلاج بقطرة العين مع مجموعة المضادات الحيوية والمنشطات، مثل الكلورامفينيكول والبيتاميتازون، لحوالي 15-20 يوما.
    ملاحظة: أوتوجرافت التي تتألف من الخلايا الدهنية، أدسكس من صندوق التبرعات الخاص، والحزب الثوري الآن حصل²⁶. تقليل المسافة بين خلايا ذاتي المطعمة والمشيميه من سكليريكتومي العميقة لتحفيز إفراز paracrine خلايا ذاتي في تدفق تشورويدال. لنفس الغرض، قم بتوسيع مجال الاتصال بين ساق والمشيميه.

النتائج

استخدام الإجراء المعروضة هنا، مجموعتين من المرضى الجافة المتضررة من AMD، مع بكفا مساوية أو أكبر من 1 اللوغاريتم من زاوية الحد الأدنى من القرار (لوجمار)، التحق بالدراسة. المجموعة ألف، بما في ذلك عيون 11 11 مريضا، سوبراتشورويدال تلقي ذاتي الاختلاس التي ليمولي الشبكية استعادة ?...

Discussion

وكان الغرض الأساسي من هذه الدراسة لتقييم ما إذا كان يمكن أن يحسن الاختلاس سوبراتشورويدال من adipocytes، أدسكس في صندوق التبرعات الخاص، والحزب الثوري خامسا وحساسية الشبكية في العيون الجافة المتضررة من AMD مع مرور الوقت. وكان الهدف الرئيسي آخر لإثبات الآثار العلاجية الممكنة لهذه الخلايا، تستند ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blunt cannula, 3 mm.	Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.	RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge	RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0	IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope	Nidek Inc, Fremont, CA	Nidek F10
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography	Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany	SD-OCT
Maia 100809 Microperimetry	CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system,	C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy		Retimax for ERG