Une thérapie régénératrice par autogreffe de cellules Suprachoroidal à sec Age-related Macular Degeneration : préliminaire In Vivo rapport

Résumé

L’objectif de cette étude est d’évaluer si la greffe de suprachoroidal des cellules souches dérivées d’adipeux inclus dans la fraction stroma vasculaire et plaquettes dérivés du plasma riche en plaquettes par la Technique de restauration Leblond rétinienne peut améliorer l’acuité visuelle et réponses de sensibilité rétinienne chez les yeux affectés par la dégénérescence maculaire sèche liée à l’âge.

Résumé

Cette étude vise à examiner si une greffe de suprachoroidal de cellules autologues peut améliorer mieux l’acuité visuelle corrigée (MAvC) et réponses aux microperimetry (MY) yeux affectés par sécher la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA) au fil du temps grâce à la la production et la sécrétion de facteurs de croissance (GFs) sur les tissus environnants. Les patients ont été assignés au hasard à chaque groupe d’étude. Tous les patients ont été diagnostiqués avec la DMLA sèche et MAVC égale ou supérieure à 1 logarithme de l’angle minimal de résolution (logMAR). Une greffe autologue de suprachoroidal par Leblond rétinienne restauration Technique (LRRT) a été réalisée sur un groupe, qui comprenait 11 eyes de 11 patients. La technique a été réalisée par l’implantation des adipocytes, les cellules souches dérivées d’adipeux obtenus au stroma vasculaire fraction et de plaquettes, de plasma riche en plaquettes dans l’espace suprachoroidal. À l’inverse, groupe B, y compris les 14 yeux 14 patients, a été utilisé comme un groupe de contrôle. Pour chaque patient, diagnostic a été vérifiée par l’ophtalmoscope de laser scanning confocal et tomographie en cohérence optique domaine spectral (SD-OCT). Groupe a, MAVC améliorée par 0.581 à 0,504 à 90 jours et à 0.376 logMAR à 180 jours (+32.20 %) après l’opération. En outre, mon test augmenté de 11,44 dB à 12,59 dB à 180 jours. Les différents types de cellules greffées derrière la choroïde ont été en mesure d’assurer la sécrétion GF constante dans la circulation choroïdienne. Par conséquent, les résultats indiquent que l’acuité visuelle (VA) dans le groupe greffé peut augmenter plus que dans le groupe témoin après six mois.

Introduction

Thérapie cellulaire, consistant en l’injection systémique ou locale des souches/progénitrices dans la zone lésée pour traiter des troubles chroniques multiples, a attiré une grande attention dans la dernière décennie¹. Depuis les années 1990, les facteurs de croissance (GFs) ont été étudiés pour leur rôle potentiellement thérapeutique à l’atrophie de la rétine². En fait, beaucoup de cellules humaines peuvent produire des GFs, qui sont des protéines spécifiques qui sont en mesure de bloquer ou ralentir l’apoptose, c'est-à-dire, la mort programmée de cellules³.

On sait que sec dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA) est une maladie de la rétine atrophique où la mort cellulaire progressive et irréversible implique un dommage à la couche des photorécepteurs et, par conséquent, la perte de la fonction visuelle centrale⁴. La DMLA est la principale cause de cécité chez les plus de 55 ans dans les pays développés et représente 80 % de toutes les dégénérescences maculaires, qui n’ont pas un traitement efficace à ce jour.

Plusieurs études ont montré qu’il existe diverses sources d'où peuvent provenir les GFs autologues. Elles composent de différents types de cellules, y compris les cellules stromales adipeuses dérivés de graisse orbitale, des plaquettes provenant de plasma riche en plaquettes (PRP) et adipeux dérivées des cellules souches (ADSCs) inclus dans la fraction stroma vasculaire (SVF) du tissu adipeux^{5 ,6,7}. L’ensemble actuel de GF assure neuroenhancement rétinienne et les recherches menées par Filatov, Montana, Pelaez et Leblond a démontré que l’autogreffe de graisse (AFT) est efficace^8,9,10.

Par ailleurs, une étude antérieure a montré des améliorations significatives dans les données de l’électrorétinogramme (ERG), enregistré post greffe autologue de suprachoroidal, dans les yeux secs touchés par AMD¹¹. Le tissu greffé chirurgicalement dans l’espace suprachoroidal modulé la sécrétion paracrine des cellules rétiniennes, retardant leur apoptose^6,7,12. Compte tenu de l’épaisseur de la couche nucléaire externe, l’examen histologique de la rétine des cochons d’Inde a montré que GFs pourraient avoir un effet trophique sur la rétine. Par conséquent, l’utilisation directe ou indirecte de GFs peut apporter potentiellement des bienfaits thérapeutiques grâce à une relation équilibrée entre moléculaires inducteurs et inhibiteurs^6,7,12.

Le but de cette méthode est d’évaluer si le greffon suprachoroidal des adipocytes, ADSCs de SVF et PRP peut améliorer mieux corrigé l’acuité visuelle (MAvC) et microperimetry (MY) réponses chez AMD touchés par la sécheresse des yeux. Cette étude vise à démontrer l’effet thérapeutique de l’autogreffe, sur la base de sa production de GF, selon la littérature citée^6,7,12,13.

Protocole

Le protocole de l’étude a été approuvé par le Comité d’éthique de l’Académie de Vision faible et tous les sujets ont signé un consentement écrit conformément à la déclaration d’Helsinki. Cette étude a reçu l’approbation éthique de Loughborough et universités de Sheffield.

Remarque : Les critères d’inclusion et d’exclusion des patients sèche de la dégénérescence maculaire liée à l’âge de recevoir suprachoroidal greffe autologue de Leblond rétinienne restauration Technique (LRRT) est décrit dans le tableau 1.

1. le diagnostic des Patients sec Age-related Macular Degeneration

1. Établir le diagnostic avec l’ophtalmoscope de laser scanning confocal, SD-OCT et MY.
2. Évaluer MAVC chaque groupe de loin et de près de distance. Mesure VA pour la vision de près (gros plan) en points (Pts). Mesurer la MAVC au temps 0 (T0), 90 (T90), et 180 jours (T180) par rapport aux premières études de la rétinopathie diabétique traitement graphiques (EDTRS) à 4 mètres en logMAR.
3. Record mésopique scotopique, électrique et l’activité des cellules photopique ou ERG flash, conformément aux normes établies en 2009 par la société internationale d’électrophysiologie clinique de la Vision (ISCEV)¹¹.

2. anesthetization

Remarque : L’étalon-or en anesthésie au cours de la LRRT est anesthésie topique, renforcée par l’infiltration de sub-tenon d’anesthésie et de sédation. Dans certains cas, l’anesthésie générale est préférable.

1. Obtenir cornée et conjonctive anesthésie en appliquant les anesthésiques topiques locaux instillée goutte à goutte 15-20 min avant la chirurgie avec lidocaïne à 4 % et de ropivacaïne à 1 %.
2. Injecter l’anesthésie par infiltration directement en sub-conjonctivale et espaces de subtenon.
3. Utilisez une infiltration locale dans la région abdominale, avant que le tissu adipeux est extraite, tant dans le sub-conjonctivale et des espaces de sub-tenon, 12 mm à partir du limbe. Adopter un anesthésique local de carbocaïne ou marcain mélangé avec 1 200 IU épinéphrine.
4. Fournir peropératoire sédation par le biais de l’anesthésie, qui peut être effectuée correctement à l’aide de fentanyl comme un analgésique narcotique par boli petit répétée. La posologie est généralement de 0,025 mg de fentanyl avec 1 mg de midazolam par bolus.

3. Leblond rétinienne restauration Technique préparation

NOTE : Cette technique représente une variante de l’intervention de Pelaez par lequel orbitale graisse autologue est transplantée dans le subscleral espace^1,6,7,12. Cellules greffées chirurgicalement peuvent produire de nombreux GFs avec propriétés neurotrophiques et angiotrophic dans le tissus environnants, la choroïde et la rétine^{18,19,20,21,22 ,23,24,25}. Par LRRT, la distance entre les cellules autologues greffées et choroïde est réduite au moyen de la sclérectomie profonde, et la zone de contact entre la tige et la choroïde est développée pour favoriser la sécrétion de cellules autologues paracrine dans la circulation choroïdienne^{9, 10,14}.

1. Effectuer une désinfection appropriée de chaque œil avant la chirurgie avec greffe cellulaire entre la choroïde et la sclérotique, une procédure appelée Technique de restauration pour le rétinal Leblond (LRRT)^15,16,17.
2. Greffer les ADSCs, obtenus par Coleman et al. et une technique de Lawrence (Figure 1) de la graisse abdominale, dans le SVF dans le sovrachoroidal espace^15,16,17.
3. Infiltration adipeuse pédicule avec plaquettes dérivées de PRP gel obtenue par les étapes suivantes.
4. Centrifuger le sang^6,12 et recueillir le plasma riche en plaquettes (PRP). Le stimulus à la dégranulation des plaquettes provoque GF libération dans le tissu adipeux pédicule^6,12.

4. spécifications techniques et la stratégie

Remarque : Le tissu adipeux est recueilli et purifié à partir de la couche sous-cutanée abdominale des patients, selon le Lawrence et Coleman technique¹⁷(Table des matières).

1. Récolte 10 mL de tissu graisseux de la couche sous-cutanée abdominale de chaque patient, en utilisant une canule émoussée 3 mm connecté manuellement une verrouillage seringue, selon le Lawrence et Coleman technique¹⁷ (Figures 2 a/2 b).
2. Séparer le SVF pure du tissu graisseux de sang, graisse, huile et liquide par centrifugation pendant 5 min à 1 500 g à 20 ° C (Figure 2C). Le SVF est très riche en ADSCs¹⁷.
3. Recueillir 8 mL de sang périphérique humain avec une aiguille de 22 G et dans une éprouvette pour préparation de PRP.
4. Centrifuger le sang collecté pendant 5 min à 1 500 g à 20 ° C (Figure 2D). Dans LRRT, le résultat de changements qui ont suivi dans une survie de la greffe de graisse autologue, prolifération ADSC, qui favorise une perfusion choroïdienne accrue, et une modulation plus globale de l’action de ces facteurs qui sont sécrétées qu’en matières grasses^{7, 11,17}.
5. Construire la poche suprachoroidal (plus de détails à l’étape 4, en particulier 4.4 et 4.5) pour accueillir la greffe provenant de graisse orbitale et saturer le volume résiduel de cette poche avec un mélange de ADSCs de SVF et PRP, obtenu selon le Lawrence et Technique de Coleman¹⁷.

5. Suprachoroidal autogreffe de LRRT (Technique de restauration Leblond rétinienne) : intervention chirurgicale et détails techniques

1. La sclérotique avec suture de soie de 6-0, près du limbe inférieure-temporelle de l’ancre.
2. Ouvrir l’espace sous-conjonctivale et subtenonian à 11 mm de la limbe inférieure-temporelle, à l’aide de 5.5" Westcott Tenetomy ciseaux courbés.
3. Insérer le rétracteur conjonctival Leblond-Basile dans cet espace pour faire un champ opératoire scléral.
4. À l’aide d’un biseau angle 5 mm couteau croissant vers le haut, Prédécoupez un rabat sur le côté dans la sclérotique à 8 mm, à partir du limbe. La charnière de Rabat est toujours radiales et vers la gauche du chirurgien.
5. Dans le quadrant inférieur-temporelle, à 8 mm du limbe, ouvrir une porte sclérale profond d’environ 5 mm sur le côté de charnière radiale à l’aide d’un couteau du Croissant-Rouge, l’angle en biseau vers le haut. Réaliser la sclérectomie à une profondeur suffisante pour afficher la couleur ardoise de la choroïde.
6. Créer un espace en enlevant un petit opercule dans la partie distale de la poitrine, afin de faciliter la circulation sanguine dans l’autogreffe suprachoroidal ultérieure.
7. Extraire avec une pince ophtalmologique la graisse orbitale d’un écart au-dessus du muscle oblique inférieur. Veillez à ce que la matière grasse extraite est suffisamment vascularisée pour lui permettre de survivre après son implantation.
8. Placez délicatement le rabat graisse autologue sur les hôtes choroïdienne suture avec choroïdienne fibre de polyglactin 6/0 au bord proximal de la porte.
9. Suture le rabat scléral pour éviter la compression sur le pédicule fat ou sur ses navires en éléments nutritifs.
10. S’infiltrer dans le stroma du pédicule gras avec 1 mL de gel PRP (obtenu par centrifugation de la matière de sang, la séparation de la composante et plaquettes dégranulation²⁶) à l’aide d’une canule d’angle (30 °) de 30 G.
11. Préparer les côtés de la conjonctive à la suture. Ensuite, retirez le rétracteur conjonctival.
12. Suture de la conjonctive, à l’aide de fibre de polyglactin 6/0.
13. Avant de terminer, laisser un espace pour insérer dans l’espace de subscleral, entre le clapet, la choroïde et l’autogreffe choroïdienne, un petit tube de plastique flexible avec la greffe de graisse autologue.
14. Saturer l’espace de survie entre la greffe de graisse autologue, choroïde et rabats sclérales avec 0,5 cc de SVF (riche de ADSCs), préalablement préparé à l’étape 3.2, par un petit tube de plastique souple, insérée dans le renfoncement scléral.
15. Après saturant l’espace résiduel, fermer la suture.
16. Après la chirurgie, administrer trois jours de traitement antibiotique azithromycine 500 mg. En outre, fournir collyre thérapie avec une combinaison aux antibiotiques et de stéroïdes, comme le chloramphénicol et la bétaméthasone, pour environ 15-20 jours.
    Remarque : Une autogreffe constitué de cellules adipeuses, ADSCs de SVF et PRP a maintenant obtenu²⁶. Réduire la distance entre les greffes de cellules autologues et de la choroïde par sclérectomie profonde afin de stimuler la sécrétion paracrine de cellules autologues dans la circulation choroïdienne. Dans le même but, étendre la zone de contact entre la tige et la choroïde.

Résultats

À l’aide de la procédure présentée ici, deux groupes de secs patients touchés par AMD, avec MAVC égale ou supérieure à 1 logarithme de l’angle minimal de résolution (logMAR), ont participé à l’étude. Groupe A, dont les 11 yeux de 11 patients, greffe autologue suprachoroidal reçus par Leblond rétinienne restauration Technique (LRRT), alors que le groupe B, y compris les 14 yeux 14 patients, a été utilisé comme un groupe de contrôle.

Discussion

L’objectif principal de cette étude était d’évaluer si le greffon suprachoroidal des adipocytes, ADSCs de SVF et PRP pourrait améliorer la sensibilité rétinienne en AMD touchés par la sécheresse des yeux et VA au fil du temps. Un autre visait principalement à démontrer les effets thérapeutiques possibles de ces cellules, selon la littérature récente, puisque plusieurs études précliniques ont suggéré que la thérapie axée sur la GF pourrait être utile pour les soins aux patients dans plusieurs malad...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blunt cannula, 3 mm.	Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.	RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge	RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0	IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope	Nidek Inc, Fremont, CA	Nidek F10
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography	Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany	SD-OCT
Maia 100809 Microperimetry	CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system,	C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy		Retimax for ERG