Suprachoroidal 세포 Autograft 건조 연령 관련 황 반 변성에 의해 재생 치료: 예비 Vivo에서 보고서

요약

이 연구의 목표는 stromal 혈관 분수에 포함 된 지방 유래 줄기 세포와 혈소판 Limoli 망막 복원 기술에 의해 혈소판이 풍부한 혈장에서 파생 된 suprachoroidal 이식 시력을 향상 시킬 수 있는지를 평가 하 고 건조 연령 관련 황 반 변성에 의해 영향을 눈에 망막 감도 응답.

초록

이 연구 목적으로 검사 suprachoroidal 이식 autologous 세포의 최고의 교정된 시력 (BCVA)을 향상 시킬 수 있습니다 및 눈에 영향을 microperimetry (내)에 대 한 응답을 통해 시간이 지남에 연령 관련 황 반 변성 (AMD) 건조 여부는 생산 및 주변 조직에 성장 인자 (GFs)의 분 비. 환자는 각 연구 그룹에 무작위로 지정 되었다. 모든 환자는 건식 AMD와 BCVA 해상도 (logMAR)의 최소 각도의 1 대 이상의 진단 했다. 11 환자에서 11 눈을 포함 하는 그룹 A에 suprachoroidal 헌 이식 Limoli 망막 복원 기술 (LRRT)에 의해 실시 됐다. 기술은은 adipocytes, stromal 혈관 분수, 및 suprachoroidal 공간에서 혈소판이 풍부한 혈장에서 혈소판에서 얻은 지방 유래 줄기 세포를 이식 하 여 수행 되었다. 반대로, 그룹 B, 14 환자의 14 눈을 포함 하 여 컨트롤 그룹으로 사용 되었다. 각 환자에 대 한 진단 검사 confocal 레이저 ophthalmoscope 및 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월)에 의해 확인 했습니다. 그룹 A, BCVA 향상 0.581 0.504 0.376 logMAR를 90 일에서 180 일에서 (+32.20%) postoperatively. 또한, 내 테스트 12.59 db 11.44 dB에서 180 일에서 증가. 맥락 막 뒤에 투입 하는 다른 세포 유형 상수 GF 분 비 안 흐름에서을 확인 할 수 있었다. 따라서, 결과 이식할된 그룹에서 시각 예민 (VA) 증가 수 나타냅니다 이상 6 개월 후 제어 그룹에서에서.

서문

세포 치료, 여러 만성 질환을 치료 하는 부상된 지역에 있는 줄기/뿌리 세포의 조직 또는 지방 주입의 구성 된 지난 10 년간¹에 세심 한 관심을 받고 있다. 1990 년대 이후, 성장 인자 (GFs)가 그들의 잠재적으로 치료 역할 망막 위축²에 대 한 연구 되었습니다. 사실, 많은 인간 세포 GFs, 차단 또는 apoptosis, 즉, 셀³의 프로그램 된 죽음을 늦출 수 있는 특정 단백질을 생산할 수 있다.

그것은 건조 연령 관련 황 반 변성 (AMD)은 어디 점진적이 고 돌이킬 수 없는 세포 죽음 관련 포토 리셉터 레이어 및, 따라서, 중앙 시각 기능⁴의 손실에 부상 위축 한 망막 질환으로 알려져 있습니다. AMD는 선진국 및 모든 황 반 유년까지 효과적인 치료 부족의 80%에 대 한 계정에 55 세 이상의 사람에서 실명의 주요 원인입니다.

몇 가지 연구는 다양 한 소스에서 헌 GFs 얻어질 수 있다 나타났습니다. 이 구성 하는 다른 세포 유형, 궤도, 혈소판 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)에서 파생 된 지방과 지방 유래 줄기 세포 (줄기)의 지방 조직^{5 stromal 혈관 분수 (SVF)에 포함 된에서 파생 된 지방 기질 세포를 포함 하 여 ,,67}. 현재 GF 세트 망막 neuroenhancement, 및 Filatov, Meduri, Pelaez, 연구 및 Limoli는 자가 지방 이식 (후미) 효과적인^8,,910은 설명 했다.

또한, 건조 AMD의 영향을 받는 눈¹¹게시물 suprachoroidal 헌 이식, 기록 이전 연구 electroretinogram (에) 데이터에 상당한 개선을 보여주었다. Suprachoroidal 공간에서 수술로 이식할된 조직을 망막 세포, 그들의 apoptosis^6,,712연기의 paracrine 분 비 변조. 외부 핵 층 두께 고려 하면 기니 피그의 망막의 조직학 검사 GFs 망막에 영양 영향을 미칠 수 있습니다 나타났습니다. 따라서, GFs의 직접 또는 간접 사용 잠재적으로 분자 inducers 억제제^6,,712사이의 균형된 관계를 통해 치료 혜택을 가져올 수 있다.

이 방법의 목적은 시력 (BCVA) 및 microperimetry (내) 응답 건조 AMD 영향을 눈에 수정 adipocytes, 줄기 SVF와 PRP의 suprachoroidal 이식 가장 향상 시킬 수 있는지를 평가 하는. 이 연구 autograft는 인용된 문학^6,7,,1213에 따르면 그것의 GF 생산 기초의 치료 효과 입증 하는 것을 목표로.

프로토콜

연구 프로토콜 낮은 비전 아카데미의 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 고 모든 과목 헬싱키 선언에 따라 서 면된 동의 서명 했다. 이 연구는 러프와 셰필드 대학에서 윤리적인 승인을 받고 있다.

참고: 드라이 연령 관련 황 반 변성 환자를 받을 suprachoroidal 헌 이식 Limoli 망막 복원 기술 (LRRT)에 의해의 포함 및 제외 기준 표 1에 설명 되어 있습니다.

1. 건조 연령 관련 황 반 변성 환자 들의 진단

1. 공초점 레이저 스캐닝 레이저 ophthalmoscope, SD-10 월, 그리고 내 진단을 확인 합니다.
2. 각 그룹의 BCVA까지 고 거리 근처에 대 한 평가. 측정 포인트 (Pts) 근처 비전 (근접)에 대 한 VA. BCVA 시간 0 (T0), 90 (t 90), 측정 및 180 일 (T180) 비해 초기 치료 당뇨병 성 망막 증 연구 logMAR에 4 미터 (EDTRS) 차트.
3. 기록 전기 scotopic, mesopic photopic 세포 활동, 또는 임상 전기 생리학의 비전 (ISCEV)¹¹국제 사회에 의해 2009 년에 설정 된 표준 규격에 따라 플래시에.

2입니다. anesthetization

참고: LRRT 동안 마 취에서 황금 표준 국 소 마 취, 마 취 및 진정의 하위-장부의 침투에 의해 강화 됩니다. 특정 경우에 전신 마 취가 좋습니다.

1. 각 막을 conjunctival 마 취 국 소 로컬 마 취약을 적용 하 여 얻은 lidocaine 4%와 1 %ropivacaine 수술 전에 dropwise 15-20 분 합니다.
2. 하위 conjunctival에 직접 침투 하 여 마 취 주사와 subtenon의 공간.
3. 복 부 지역, 지방 조직, 추출 전에 하위 conjunctival 및 하위-장부의 공간, 12 m m는 limbus에서 지역 침투를 사용 합니다. Carbocaine 또는 marcain 1200 IU 피 네 프 린 혼합 지역 마 취 제를 채택 한다.
4. 반복 된 작은 boli 통해 마약 진통제로 펜타닐을 사용 하 여 제대로 실행 될 수 있는 마 취를 통해 자가 진정을 제공 합니다. 복용량은 일반적으로 bolus 당 midazolam의 1 mg와 펜타닐의 0.025 mg 이다.

3. Limoli 망막 복원 기술 준비

참고:이 기술을 나타냅니다는 궤도 헌 지방 subscleral 공간^1,6,,712이주 Pelaez의 개입의 변종을. 수술로 이식할된 세포 주변 조직, 맥락 막, 및 망막^{18,,1920,21,22 科 및 angiotrophic 속성을 가진 많은 GFs를 생산할 수 있는 ,23,,2425}. LRRT에서 이식할된 헌 셀 및 맥락 막 사이의 거리 깊은 sclerectomy에 의하여 감소 되 고 줄기와 맥락 막 사이의 접촉 영역 확장 안 흐름^{9, paracrine 헌 세포 분 비를 촉진 하 10,14}.

1. 맥락 막 그리고 sclera, Limoli 망막 복원 기술 (LRRT)^15,,1617를 호출 하는 프로시저 간의 세포 이식으로 수술 하기 전에 각각의 눈의 적절 한 소독을 수행 합니다.
2. 콜맨 외 및 복 부 지방에서 sovrachoroidal 공간^15,,1617SVF에서 로렌스의 기술은 (그림 1)에 의해 얻은 줄기 이식
3. 혈소판과 침투 많은 작은 꽃 자루는 다음 단계를 통해 얻은 PRP 젤에서 파생.
4. 혈액^6,12 원심 및 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)을 수집 합니다. 혈소판 degranulation 자극 많은 작은 꽃 자루^6,12에 GF 릴리스를 발생합니다.

4. 기술 사양 및 전략

참고: 지방 조직 수집 이며 로렌스와 콜맨 기술¹⁷(테이블의 자료)에 따르면, 환자의 복 부 피하 층에서 정화.

1. 수동으로 수확 10 mL 3 m m 무딘 정을 사용 하 여 각 환자의 복 부 피하 층에서 살 찐 티슈의 로렌스와 콜맨 기술¹⁷ (그림 2A/2B)에 따라 잠금 주사기에 연결.
2. 20 ° c에서 (그림 2C) 1500 x g에 5 분 동안 원심 분리 하 여 혈액, 지방, 기름, 그리고 액체에서 살 찐 티슈의 순수한 SVF를 구분 합니다. SVF 줄기¹⁷의 매우 풍부 하다.
3. PRP 준비를 위한 별도 튜브 22 G 바늘와 인간의 말 초 혈액의 8 mL를 수집 합니다.
4. 20 ° c에서 (그림 2D) 1500 x g에 5 분에 대 한 수집 된 혈액 원심 LRRT, 자가 지방 이식, ADSC 확산, 증가 안 관류, 호의의 더 나은 생존 및 지방^{7만 분 비는 그 요인의 행동의 더 포괄적인 변조에 뒤이어 변화 결과에 11,17}.
5. 궤도 지방에서 얻은 이식 고이 포켓의 잔류 볼륨 SVF는 로렌스에 따르면 얻은 PRP에서 줄기의 혼합물으로 포화 suprachoroidal 포켓 (자세한 내용은 4 단계에서 특정 4.4 및 4.5)을 구축 하 고 콜맨 기술¹⁷.

5. Suprachoroidal LRRT (Limoli 망막 복원 기술)에 의해 Autograft: 수술 및 기술 세부 사항

1. 6-0 비단 봉합 사, 열 등 한 일시적인 limbus 근처와 sclera 앵커.
2. 5.5"Westcott Tenetomy 곡선된가 위를 사용 하 여 열 등 한 일시적인 limbus에서 11 m m 부근의 subtenonian 공간을 엽니다.
3. Limoli-바 실 conjunctival 견인 scleral 외과 분야를 만들기 위하여이 공간에 삽입 합니다.
4. 5 mm 초승달 칼 각도 경사를 사용 하 여 미리 잘라 플랩에는 limbus에서 8 m m에서 sclera에 측면. 플랩 경첩은 항상 방사형 및 외과 의사의 왼쪽에.
5. Limbus에서 8 m m에서 열 등 한 일시적인 사분면에서 초승달 모양의 칼, 각도 경사를 사용 하 여 방사형 경첩에 의해 측면에 약 5 mm의 깊은 scleral 도어를 엽니다. 맥락 막의 슬레이트 색상을 보려면 적절 한 깊이에서 sclerectomy을 실시 합니다.
6. 후속 suprachoroidal autograft에 혈액 순환을 촉진 하기 위하여는 플랩의 원심 부분에 약간 operculum를 제거 함으로써 간격을 만듭니다.
7. 안과 집게와 궤도 지방에서에서 추출 열 등 한 비스듬한 근육 위에 간격. 추출 된 지방 그것의 주입 후 살아남을 수 있도록 충분히 나가도록는 다는 것을 확인 하십시오.
8. 부드럽게 안 침대와 문 근 위 가장자리에 안 6/0 polyglactin 섬유와 봉합에 헌 지방 플랩을 놓습니다.
9. 피하기 위해 압축 또는 그것의 영양 혈관에 지방 작은 꽃 자루에 scleral 플랩 봉합
10. PRP 젤 (혈액 소재의 원심 분리, 구성 요소, 및 혈소판 degranulation²⁶분리 하 여 얻은)의 1 mL와 함께 지방 작은 꽃 자루의 기질에 침투 30 G 각도 (30 °) 정 맥을 사용 하 여.
11. 결 막의 양쪽을 봉합에 대 한 준비. 그런 다음, conjunctival 견인 제거.
12. 6/0 polyglactin 섬유를 사용 하 여 결 막 봉합
13. 폐관, 플랩, 맥락 막, 및 안 autograft 사이의 subscleral 공간에 자가 지방 이식 작은 유연한 플라스틱 튜브를 삽입 하는 공간을 남겨 주세요.
14. 자가 지방 이식, 맥락 막, scleral 플랩 사이의 잔여 공간 0.5 포화 cc SVF (줄기의 리치)의 이전 scleral 포켓에 삽입 작은 유연한 플라스틱 튜브에 의해 단계 3.2에서에서 준비.
15. 잔여 공간을 포화 후 봉합을 닫습니다.
16. 수술 후 3 일간 500 mg azithromycin 항생제 치료의 관리. 또한, 항생제 및 스테로이드 조합으로, 페니 등 디, 약 15-20 일 동안 눈 드롭 치료를 제공 합니다.
    참고:는 autograft SVF, 그리고 PRP에서 줄기 지방 세포로 이루어진 지금 되었습니다 취득 했다²⁶. 깊은 sclerectomy paracrine 안 흐름으로 헌 세포의 분 비를 자극 하 여 이식할된 헌 세포와 맥락 막 사이의 거리를 줄일 수 있습니다. 같은 목적을 위해 줄기와 맥락 막 사이의 접촉의 영역을 확장 합니다.

결과

여기에 제시 된 절차를 사용 하 여, 환자의 건조 AMD 영향, BCVA 해상도 (logMAR)의 최소 각도의 1 대 이상 두 그룹 연구에 등록 했다. 그룹 A, 그룹 B, 14 환자의 14 눈을 포함 한 반면 11 환자, 받은 suprachoroidal 헌 이식 Limoli 망막 복원 기술 (LRRT)에 의해의 11 눈을 포함 하 여, 컨트롤 그룹으로 사용 되었다.

스튜던트 t-검정 및 치 평방 테스...

토론

이 연구의 주된 목적은 adipocytes, SVF, PRP에 줄기의 suprachoroidal 이식 버지니아 및 건조 AMD 영향을 눈에 망막 감도 시간이 지나면서 개선 수 여부를 평가 했다. 또 다른 주요 목적은 여러 전 임상 연구 GF에 기초를 둔 치료 여러 가지 질병에 환자 치료에 도움이 될 수 있는 제안 이후 최근 문학에 따라 이러한 세포의 가능한 치료 효과 입증 했다.

실제로, 일부 연구 자가 인간 유도 만?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blunt cannula, 3 mm.	Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.	RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge	RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0	IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope	Nidek Inc, Fremont, CA	Nidek F10
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography	Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany	SD-OCT
Maia 100809 Microperimetry	CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system,	C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy		Retimax for ERG