Terapia regenerativa pela célula Suprachoroidal Autograft em seco Degeneration Macular Age-related: relatório preliminar na Vivo

Resumo

O objetivo deste estudo é avaliar se o enxerto de suprachoroidal de células-tronco derivadas adiposo incluídas na fração do estroma vascular e plaquetas derivadas de plasma rico em plaquetas através da técnica de restauração Limoli Retinal pode melhorar a acuidade visual e respostas de sensibilidade da retina nos olhos afetados pela seca degeneration macular age-related.

Resumo

Este estudo visa examinar se um enxerto de suprachoroidal das células autólogas pode melhorar melhor acuidade visual corrigida (BCVA) e respostas para microperimetry (MY) nos olhos afetados pela seca Degeneração Macular relacionada à idade (DMRI) ao longo do tempo através do produção e secreção de fatores de crescimento (GFs) no tecido circundante. Os pacientes foram aleatoriamente para cada grupo de estudo. Todos os pacientes foram diagnosticados com DMRI seca e com BCVA igual ou maior que 1 logaritmo do ângulo mínimo de resolução (logMAR). Um enxerto autólogo de suprachoroidal por Limoli Retinal restauração técnica (LRRT) foi realizado no grupo A, que incluiu 11 olhos de 11 pacientes. A técnica foi realizada pela implantação de adipócitos, células-tronco adiposo-derivados obtidos a partir da fração vascular do estroma e plaquetas de plasma rico em plaquetas no espaço suprachoroidal. Por outro lado, grupo B, incluindo 14 olhos de 14 pacientes, utilizou-se como um grupo de controle. Para cada paciente, o diagnóstico foi verificado por oftalmoscópio de laser confocal digitalização e tomografia de coerência óptica-domínio espectral (SD-OCT). No grupo A, BCVA melhorado por 0.581 para 0.504 em 90 dias e a 0.376 logm em 180 dias (+32.20%) no pós-operatório. Além disso, o meu teste aumentou 11,44 dB dB 12,59 em 180 dias. Os diferentes tipos de células enxertados para trás a coroide foram capazes de assegurar a constante secreção de GF no fluxo da coroide. Consequentemente, os resultados indicam que a acuidade visual (VA) no grupo transplantado pode aumentar mais do que no grupo controle após seis meses.

Introdução

Terapia celular, que consiste da injeção de células tronco/progenitoras na área lesada para tratar várias doenças crônicas, sistêmica ou local atraiu muita atenção na última década¹. Desde a década de 1990, fatores de crescimento (GFs) têm sido estudados por seu papel potencial terapêutico na atrofia da retina². Na verdade, muitas células de origem humanas podem produzir GFs, que são proteínas específicas que são capazes de bloquear ou retardar a apoptose, ou seja, a morte programada de células³.

É conhecido que o degeneration macular age-related seco (AMD) é uma doença da retina atrófica, onde a morte celular gradual e irreversível envolve prejuízo para a camada de fotoreceptor e, consequentemente, a perda da função visual central⁴. AMD é a principal causa de cegueira em pessoas de mais de 55 anos de idade em países desenvolvidos e responsável por 80% de todos os degenerations maculares, que carecem de um tratamento eficaz até à data.

Vários estudos têm demonstrado que existem várias fontes das quais autólogos GFs podem ser obtidas. Estas incluem diferentes tipos de células, incluindo células do estroma adiposas derivadas de gordura orbital, plaquetas derivadas de plasma rico em plaquetas (PRP) e derivados adiposo as células-tronco (ADSCs) incluídas na fração do estroma vascular (SVF) do tecido adiposo^{5 ,6,7}. O atual conjunto GF garante neuroenhancement da retina e a investigação conduzida por Filatov, Meduri, Pelaez, e Limoli tem demonstrado que o transplante de gordura autóloga (popa) é eficaz^8,9,10.

Além disso, um estudo prévio mostrou melhorias significativas nos dados electroretinogram (ERG), gravado post suprachoroidal enxerto autólogo, em olhos secos afetadas AMD¹¹. O tecido enxertado cirurgicamente no espaço suprachoroidal modulada a secreção parácrina de células da retina, atrasando sua apoptose^6,7,12. Tendo em conta a espessura da camada nuclear exterior, o exame histológico da retina de cobaias mostrou que o GFs poderiam ter um efeito trófico sobre a retina. Portanto, a utilização directa ou indirecta de GFs potencialmente pode trazer benefícios terapêuticos através de uma relação equilibrada entre moleculares indutores e inibidores^6,7,12.

A finalidade desse método é avaliar se o enxerto de suprachoroidal dos adipócitos, ADSCs em SVF e PRP pode melhorar melhor corrigida a acuidade visual (BCVA) e microperimetry (MY) respostas nos olhos afetados AMD secos. Este estudo tem como objetivo demonstrar o efeito terapêutico do auto-enxerto com base na sua produção de GF, de acordo com a literatura citada^6,7,12,13.

Protocolo

O protocolo de estudo foi aprovado pelo Comitê de ética da Academia de baixa visão e todos os sujeitos assinaram um consentimento por escrito em conformidade com a declaração de Helsínquia. Este estudo de investigação recebeu aprovação ética de Loughborough e universidades de Sheffield.

Nota: Os critérios de inclusão e exclusão de pacientes de degeneration macular age-related seca para receber o enxerto autólogo de suprachoroidal por Limoli Retinal restauração técnica (LRRT) é descrita na tabela 1.

1. diagnóstico de pacientes de Degeneration Macular Age-related seco

1. Apurar o diagnóstico com o oftalmoscópio de laser scanning confocal, SD-OCT e MY.
2. Avalie BCVA cada grupo para longe e perto de distância. Medida VA para visão de perto (close-up) nos pontos (Pts). Medir a BCVA no tempo 0 (T0), 90 (T90), e 180 dias (T180) em relação ao estudo de retinopatia diabética tratamento inicial dos gráficos (EDTRS) 4 metros em logm.
3. Registro mesópica escotópica, elétrica e atividade de célula fotópica ou flash ERG, de acordo com as normas estabelecidas em 2009 pela sociedade internacional de eletrofisiologia clínica da visão (ISCEV)¹¹.

2. anesthetization

Nota: O padrão-ouro em anestesia durante LRRT é anestesia tópica, reforçada pela infiltração do subespiga de anestesia e sedação. Em casos específicos, a anestesia geral é preferencial.

1. Obter corneal e conjuntival anestesia através da aplicação tópica de anestésicos locais instilado gota a gota 15-20 min antes da cirurgia com lidocaína a 4% e ropivacaína a 1%.
2. Injetar a anestesia por infiltração diretamente no subconjuntival e espaços do subtenon.
3. Uso de infiltração local, tanto na região abdominal, antes que o tecido adiposo é extraído e o subconjuntival e espaços do subespiga, 12 mm do limbo. Adote o anestésico local de carbocaine ou marcain misturado com 1.200 IU epinefrina.
4. Fornece a sedação intra-operatória através do anestésico, que pode ser executada corretamente usando fentanil como um analgésico narcótico através de repetidas boli pequeno. A dosagem geralmente é 0,025 mg de fentanil com 1 mg de midazolam por bólus.

3. Limoli Retinal restauração técnica preparação

Nota: Esta técnica representa uma variante da intervenção do Pelaez, pelo qual a gordura autóloga orbital é transplantada no espaço subscleral^1,6,7,12. Células transplantadas cirurgicamente podem produzir muitos GFs com propriedades neurotrophic e angiotrophic no tecido circundante, coroide e retina^{18,19,20,21,22 ,23,24,25}. Em LRRT, a distância entre células autólogas enxertadas e coroide é reduzida por meio de sclerectomy profundo, e a área de contato entre a haste e a coroide é expandida para promover a secreção de células autólogas parácrina para o fluxo da coroide^{9, 10,14}.

1. Realize a desinfecção adequada de cada olho antes da cirurgia com enxerto celular entre a coroide e esclera, um procedimento chamado Limoli Retinal restauração técnica (LRRT)^15,16,17.
2. Enxerto da ADSCs, obtidos por Coleman et al e técnica de Lawrence (Figura 1) da gordura abdominal, no SVF no espaço de sovrachoroidal^15,16,17.
3. Pedículo de tecido adiposo infiltrado com plaquetas derivadas de gel de PRP obtida através dos seguintes passos.
4. Centrifugar o sangue^6,12 e coleta de plasma rico em plaquetas (PRP). O estímulo a degranulação plaquetária provoca liberação GF no pedículo adiposa^6,12.

4. estratégia e especificações técnicas

Nota: Tecido adiposo é recolhido e purificado a partir da camada subcutânea abdominal de pacientes, de acordo com o Lawrence e Coleman técnica¹⁷(Tabela de materiais).

1. Manualmente colheita 10 mL de tecido adiposo da camada subcutânea abdominal de cada paciente, usando uma cânula romba 3 mm ligado a uma seringa de bloqueio, de acordo com o Lawrence e Coleman técnica¹⁷ (figuras 2A/2B).
2. Separe puro SVF do tecido gordo do sangue, gordura, óleo e líquido por centrifugação por 5 min a 1.500 x g a 20 ° C (Figura 2C). O SVF é muito rica em ADSCs¹⁷.
3. Colete 8 mL de sangue periférico humano com uma agulha de 22 G e num tubo separado para a preparação do PRP.
4. Centrifugar o sangue coletado por 5 min a 1.500 x g a 20 ° C (Figura 2D). Em LRRT, o resultado de mudanças que se seguiu no melhor sobrevivência do enxerto gordura autóloga, proliferação ADSC, que favorece o aumento da perfusão da coroide, e uma modulação mais abrangente da ação desses fatores que são secretadas apenas pela gordura^{7, 11,17}.
5. Construir o bolso de suprachoroidal (mais detalhes na etapa 4, em particular 4.4 e 4.5) para acomodar o enxerto obtido de gordura orbital e saturar o volume residual de bolso com uma mistura de ADSCs de SVF e PRP, obtidos de acordo com o Lawrence e Coleman técnica¹⁷.

5. Suprachoroidal Autograft por LRRT (técnica de restauração Limoli Retinal): procedimento cirúrgico e detalhes técnicos

1. Ancore a esclera com sutura seda 6-0, próximo ao limbo inferior-temporal.
2. Abra o espaço subconjuntival e subtenonian a 11 mm do limbo inferior-temporal, usando curva tesoura Westcott Tenetomy 5.5".
3. Inserir o retractor conjuntival Limoli-Basile neste espaço para fazer um campo cirúrgico scleral.
4. Usando um bisel Ângulo crescente faca de 5 mm, corte previamente uma aba no lado na esclera em 8 milímetros, do limbo. A dobradiça flap é sempre radial e para a esquerda do cirurgião.
5. No quadrante inferior-temporal, a 8 mm do limbo, abra uma porta profunda scleral de cerca de 5 mm no lado por dobradiça radial, usando uma faca crescente, bisel ângulo acima. Realize sclerectomy a uma profundidade adequada para exibir a cor de ardósia da coroide.
6. Crie uma lacuna, removendo o opérculo um pouco na parte distal do retalho, para facilitar a circulação de sangue no auto-enxerto suprachoroidal subsequentes.
7. Extrai com fórceps oftalmológico a gordura orbital de uma lacuna acima do músculo oblíquo inferior. Certifique-se que a gordura extraída é vascularizada suficientemente para permitir a sobrevivência após sua implantação.
8. Coloque delicadamente o flap de gordura autólogo na cama da coroide e sutura com fibra de Poliglactina 6/0 da coroide na borda proximal da porta.
9. Suture o retalho escleral para evitar compressão no pedículo gordo ou em seus vasos nutrientes.
10. Infiltrar o estroma do pedículo gordo com 1 mL de gel PRP (obtido por centrifugação do material sangue, separação do componente e plaquetas degranulação²⁶) usando uma cânula angulada (30 °) de 30 G.
11. Prepare os lados da conjuntiva para a sutura. Em seguida, remova o retractor conjuntival.
12. Sutura de conjuntiva, usando fibra de Poliglactina 6/0.
13. Antes de fechar, deixe um espaço para inserir-se no espaço subscleral, entre o retalho, a coroide e o autoenxerto da coroide, um pequeno tubo de plástico flexível com o enxerto autólogo de gordura.
14. Saturar o espaço residual entre o enxerto autólogo de gordura, coroide e retalhos scleral com 0,5 cc de SVF (rico de ADSCs), previamente preparado no passo 3.2, por um pequeno tubo de plástico flexível, inserido no bolso scleral.
15. Depois de saturar o espaço residual, feche a sutura.
16. Após a cirurgia, administre três dias de antibioticoterapia com 500 mg de azitromicina. Além disso, fornece colírio terapia com uma antibiótica e esteroide combinação, tais como cloranfenicol e betametasona, por cerca de 15-20 dias.
    Nota: Um auto-enxerto constituído por células de gordura, ADSCs de SVF e PRP agora se obteve²⁶. Reduza a distância entre as células autólogas enxertadas e coroide por profunda sclerectomy para estimular a secreção parácrina de células autólogas no fluxo da coroide. Para a mesma finalidade, expanda a área de contato entre a haste e a coroide.

Resultados

Usando o procedimento apresentado aqui, dois grupos de pacientes afetados por AMD secos, com BCVA igual ou maior que 1 logaritmo do ângulo mínimo de resolução (logMAR), foram incluídos no estudo. Grupo A, incluindo 11 olhos de 11 pacientes, enxerto autólogo de suprachoroidal recebidos por Limoli Retinal restauração técnica (LRRT), Considerando que o grupo B, incluindo 14 olhos de 14 pacientes, utilizou-se como um grupo de controle.

Discussão

O objetivo principal deste estudo foi avaliar se o enxerto de suprachoroidal dos adipócitos, ADSCs em SVF e PRP poderia melhorar VA e sensibilidade da retina nos olhos afetados AMD secos ao longo do tempo. Outro objetivo principal foi demonstrar possíveis efeitos terapêuticos dessas células, com base na literatura recente, uma vez que vários estudos pré-clínicos têm sugerido que a terapia baseada em GF poderia ser útil para o tratamento do paciente em várias doenças.

De fato, alguns...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blunt cannula, 3 mm.	Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.	RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge	RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0	IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope	Nidek Inc, Fremont, CA	Nidek F10
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography	Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany	SD-OCT
Maia 100809 Microperimetry	CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system,	C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy		Retimax for ERG