משובי טיפול על ידי תא Suprachoroidal בשתל ב ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש: דוח ראשוני In Vivo

Summary

מטרת מחקר זה היא להעריך האם השתל suprachoroidal של שומן, נגזר תאי גזע הכלולים השבר בכלי הדם סטרומה, טסיות נגזר טסית דם עשיר פלזמה בטכניקת שיקום רשתית Limoli יכול לשפר את חדות הראייה, תגובות רגישות הרשתית בעיניים מושפע ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש.

Abstract

מחקר זה נועד לבחון אם שתל suprachoroidal של תאים עצמיים יכול לשפר בצורה הטובה ביותר המתוקן חדות ראייה (BCVA) ואת התגובות microperimetry (שלי) בעיניים מושפע יבש הקשורות לגיל ניוון מקולרי (AMD) לאורך זמן באמצעות ייצור והפרשת גורמי גדילה (GFs) על הרקמה שמסביב. המטופלים חולקו באופן אקראי לקבוצת הלימוד כל אחד. כל החולים אובחנו עם AMD יבש ועם BCVA שווה או גדול מ- 1 לוגריתם של הזווית המינימלית של רזולוציה (logMAR). שתל אוטולוגי suprachoroidal על ידי טכניקת השחזור רשתית Limoli (LRRT) בוצע על קבוצה א' שכלל 11 עיניים מ- 11 מטופלים. הטכניקה בוצעה על ידי השתלת adipocytes, נגזר שומן בתאי גזע המתקבל על סטרומה השבר בכלי הדם, וכן טסיות של טסיות דם עשיר פלזמה במרחב suprachoroidal. לעומת זאת, קבוצה B, כולל העיניים 14 מתוך 14 חולים, שימש כקבוצת בקרה. עבור כל מטופל, האבחנה אומתה על ידי קונאפוקלית ophthalmoscope לייזר סריקה ו טומוגרפיה ספקטרלי תחום-אופטית קוהרנטית (SD-אוקטובר). קבוצה a, BCVA משופרת על ידי 0.581 כדי 0.504-90 יום, 0.376 logMAR-180 ימים (+32.20%) במשככי. יתר על כן, המבחן שלי עלה ב- dB 11.44 ל 12.59 dB ב 180 ימים. סוגי תאים שונים הושתל מאחורי דמית הצליחו להבטיח קבוע הפרשת GF בזרם חיבור. כתוצאה מכך, התוצאות מצביעות על כי חדות חזותית (וי אי) בקבוצה המושתל יכול להגביר יותר מאשר בקבוצת הביקורת לאחר שישה חודשים.

Introduction

טיפול בתאי, המורכב הזרקה מקומית או מערכתית של גזע/ובתאים באזור הפגוע לטיפול בהפרעות כרוניות מרובות, מה משך תשומת לב בעשור האחרון¹. מאז שנות ה-90, גורמי גדילה (GFs) נחקרו על תפקידו טיפולית פוטנציאל ניוון רשתית². למעשה, תאים אנושיים רבים יכול לייצר GFs, שהינם חלבונים ספציפיים מסוגלים לחסום או להאט אפופטוזיס, כלומר, מוות מתוכנת של תאים³.

זה ידוע כי יבש הקשורות לגיל ניוון מקולרי (AMD) הוא מחלה ברשתית מנוונת איפה מוות תאי הדרגתית ובלתי הפיכה כרוכה פגיעה בשכבת קולט אור, וכתוצאה מכך איבוד תפקיד הראייה המרכזית⁴. AMD היא הגורם המוביל לעיוורון בקרב אנשים מעל גיל 55 המדינות המפותחות, חשבונות עבור 80% של כל degenerations מקולרי, שחסרה טיפול יעיל עד כה.

מספר מחקרים הראו כי ישנם מקורות שונים שמהם ניתן להשיג GFs עצמיים. אלה מהווים לסוגי תאים שונים, לרבות אדיפוז סטרומה תאים שמקורם שומן מסלולית טסיות נגזר טסית דם עשיר פלזמה (PRP), נגזר שומן בתאי גזע (ADSCs) כלול השבר בכלי הדם סטרומה (SVF) של רקמת שומן^{5 6, ,7}. בערכה GF הנוכחית מבטיחה neuroenhancement ברשתית, מחקר שנערך על ידי Filatov, Meduri, פלאז ולאחר Limoli הוכיחה כי השתלת שומן עצמיים (AFT) הוא יעיל^8,9,10.

יתר על כן, מחקר קודם הראה שיפור משמעותי בנתונים electroretinogram (ארג), הקליט שתל אוטולוגי של suprachoroidal פוסט, יובש בעיניים מושפעות AMD¹¹. הרקמה בניתוח המושתל בחלל suprachoroidal מאופנן הפרשה paracrine של תאים ברשתית, עיכוב שלהם אפופטוזיס^6,7,12. בהתחשב עובי השכבה החיצונית גרעינית, בחינה היסטולוגית של הרשתית של שרקנים הראו כי GFs יכולת השפעה עם מחלות על הרשתית. לכן, השימוש ישיר או עקיף של GFs יכול להביא פוטנציאל היתרונות הטיפוליים באמצעות יחס מאוזן בין מולקולרי inducers מעכבי^6,7,12.

המטרה של שיטה זו היא להעריך השתל suprachoroidal של adipocytes, ADSCs SVF ו PRP יכול לשפר את הטוב מתוקן חדות ראייה (BCVA) ותגובות microperimetry (שלי) בעיניים מושפעות AMD יבש. מחקר זה נועד להפגין את האפקט הטיפולי של בשתל על בסיס הייצור GF שלה, על פי הספרות מצוטט^6,7,12,13.

Protocol

פרוטוקול המחקר אושרה על ידי ועדת האתיקה של האקדמיה ראייה נמוכים, בכל המקצועות חתם על הסכמה בכתב על פי הצהרת הלסינקי. זה מחקר קיבלה אישור מוסרי פתח תקווה וגם אוניברסיטאות שפילד.

הערה: הקריטריונים והדרה של חולי ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש לקבל שתל אוטולוגי של suprachoroidal על ידי טכניקת השחזור רשתית Limoli (LRRT) מתוארת בטבלה1.

1. אבחון של חולי ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש

1. לברר את האבחנה עם קונאפוקלית סריקת לייזר ophthalmoscope, SD-אוקטובר שלי.
2. הערך BCVA של כל קבוצה עבור ומרחוק מרחק. מדד VA החזון ליד (תקריב) בנקודות (נק). BCVA בזמן 0 (T0), 90 (T90), וכולן 180 ימים (T180) לעומת לימוד רטינופתיה סוכרתית טיפול מוקדם (EDTRS) תרשימים 4 מטרים logMAR.
3. Mesopic scotopic, חשמליות הרשומה, פעילות התאים photopic, או ארג פלאש, על-פי בסטנדרטים שנקבעו בשנת 2009 על ידי האגודה הבינלאומית קליניים אלקטרופיזיולוגיה של חזון (ISCEV)¹¹.

2. ההרדמה

הערה: תקן הזהב בהרדמה במהלך LRRT היא הרדמה מקומי, מחוזקת על-ידי sub-לגלף קוצים של הסתננות של הרדמה וטשטוש. במקרים מסוימים, הרדמה כללית היא עדיפה.

1. להשיג את הקרנית, הרדמה conjunctival על-ידי החלת הרדמה מקומית אקטואלי החדירו dropwise 15-20 דקות לפני הניתוח עם לידוקאין ב 4%, ropivacaine-1%.
2. להזריק הרדמה על-ידי הסתננות ישירות לתוך sub-conjunctival של subtenon רווחים.
3. השתמש חדירה מקומי באזור הבטן, לפני ובינות לרקמה מופק, והן את תת-conjunctival ו- sub-לגלף קוצים של הרווחים, 12 מ מ לימבוס. לאמץ הרדמה מקומית של carbocaine או marcain מעורבב עם 1200 IU אפינפרין.
4. לספק הרגעה פוסט ניתוחית דרך ההרדמה, אשר יכול להתבצע כראוי באמצעות פנטניל כמו משכך כאבים נרקוטיים דרך boli קטנות חוזרות ונשנות. המינון הוא בדרך כלל 0.025 mg פנטניל עם 1 מ ג של midazolam לכל בולוס.

3. Limoli רשתית שיקום טכניקת הכנה

הערה: טכניקה זו מייצגת משתנה של ההתערבות של פלאז שבו השומן autologous מסלולית מושתלים ב subscleral שטח^1,6,7,12. תאי המושתל בניתוח יכול לייצר GFs רבים עם neurotrophic ו- angiotrophic הרקמה הסובבת, דמית העין ולאחר רשתית^{18,19,20,21,22 ,23,24,25}. LRRT, המרחק בין תאים עצמיים המושתל דמית העין הוא מופחת על-ידי sclerectomy עמוק, ועל איזור המגע בין גבעול דמית העין היא מורחבת כדי לקדם את הפרשה תא עצמיים paracrine לתוך זרימת חיבור^{9, 10,14}.

1. ביצוע חיטוי נאות של כל עין לפני הניתוח עם הרכבה הסלולר בין דמית העין ו בסקלרה, הליך שנקרא בטכניקת שיקום רשתית Limoli (LRRT)^15,16,17.
2. להשתיל את ADSCs, מתקבל על ידי קולמן. et al. , הטכניקה של לורנס (איור 1) של שומן בבטן, ב SVF^16,1715,שטח sovrachoroidal.
3. Pedicle אדיפוז לחדור עם טסיות נגזר ג'ל PRP מושגת באמצעות השלבים הבאים.
4. צנטריפוגה^6,דם¹² ולאסוף טסיות דם עשיר פלזמה (PRP). הגירוי degranulation טסיות גורמת לשחרור GF pedicle אדיפוז^6,12.

4. פרטים טכניים ואסטרטגיה

הערה: רקמת השומן נאסף, מטוהרים מן השכבה התת עורית בטן של המטופלים, על פי ה לורנס וקולמן טכניקה¹⁷(טבלה של חומרים).

1. באופן ידני קציר 10 מ"ל של רקמות שומן מן השכבה התת עורית הבטן של כל מטופל, השימוש בצינורית בוטה של 3 מ מ מחובר מזרק נעילה, על פי ה לורנס וקולמן טכניקה¹⁷ (דמויות 2A/2B).
2. הפרד SVF טהור של רקמת שומן בדם, שמן, שמן, נוזל על ידי צנטריפוגה למשך 5 דקות ב g 1,500 x ב- 20 ° C (איור 2C). SVF הוא עשיר מאוד של ADSCs¹⁷.
3. לאסוף 8 מ"ל של דם היקפיים אנושי עם מחט 22 גר', בשפופרת נפרד להכנה PRP.
4. Centrifuge הדם שנאספו במשך 5 דקות ב g x 1,500 ב- 20 ° C (איור 2D). ב- LRRT, התוצאה שינויים שהתפתח יותר ההישרדות של השתל שומן עצמיים, התפשטות ADSC, אשר מעדיף זלוף חיבור מוגברת, ו של אפנון מקיף יותר של הפעולה של גורמים אלו המופרשים רק שומן^{7, 11,17}.
5. לבנות את הכיס suprachoroidal (פרטים נוספים בשלב 4, 4.4 מסוים ואת 4.5) כדי להכיל את השתל המתקבל שומן מסלולית וירווה נפח שיורית זו כיס בתערובת של ADSCs לבין SVF PRP, שהושג על-פי לורנס ו קולמן טכניקה¹⁷.

5. Suprachoroidal בשתל מאת LRRT (טכניקת השחזור Limoli רשתית): הליך כירורגי, פרטים טכניים

1. לעגן את sclera 6-0 בתפר משי, ליד לימבוס נחות-טמפורלית.
2. תפתח את החלל מתחת ללחמית ו- subtenonian ב- 11 מ מ לימבוס נחות-זמנית, באמצעות 5.5" מספריים מעוגלים ווסטקוט Tenetomy.
3. הכנס את המדחק conjunctival Limoli-באזיל במרחב הזה כדי להפוך לשדה כירורגי scleral.
4. מראש באמצעות סכין סהרון 5 מ מ זווית שיקוע, לחתוך דש בצד בסקלרה-8 מ מ, מ לימבוס. הציר דש היא תמיד רדיאלי, בצד שמאל של המנתח.
5. ברביע נחות-טמפורלית, ב- 8 מ מ לימבוס, לפתוח דלת scleral עמוק של-5 מ"מ בצד על ידי ציר רדיאלי באמצעות עם הסכין חרמש, המשופעת בזווית למעלה. לבצע את sclerectomy בעומק נאותה כדי להציג את צבע צפחה דמית.
6. ליצור פער על-ידי הסרת operculum קטן בחלקו האחורי של הכנף, על מנת להקל על זרימת הדם בשתל suprachoroidal הבאים.
7. לחלץ עם מלקחיים ophthalmological השומן מסלולית מפרצה מעל השריר המלוכסן נחות. ודא שהשומן שחולצו vascularized הוא מספיק כדי לאפשר לו לשרוד לאחר ההשתלה שלו.
8. הנח בעדינות הכנף שומן עצמיים על המיטה חיבור ו התפר עם חיבור סיבי polyglactin 6/0 בקצה הפרוקסימלית של הדלת.
9. תפר הכנף scleral כדי להימנע דחיסה pedicle השמן או על הקערות התזונתי.
10. לחדור stroma של pedicle שמן עם 1 מ ל ג'ל PRP (מתקבל על ידי צנטריפוגה של החומר בדם, ההפרדה של רכיב, ושל טסיות degranulation²⁶) באמצעות בצינורית זוויתי (30 מעלות) של 30 גרם.
11. להכין את הצדדים של הלחמית התפר. לאחר מכן, הסר את המדחק conjunctival.
12. תפר הלחמית, באמצעות סיבים polyglactin 6/0.
13. לפני הסגירה, השאר רווח כדי להוסיף לתוך המרחב subscleral, בין הכנף, דמית בשתל חיבור, צינורית קטנה פלסטיק גמיש עם השתל שומן עצמיים.
14. להרוות את החלל שיורית בין השתלת שומן עצמיים, דמית העין, scleral מדפים עם 0.5 cc SVF (עשיר של ADSCs), שהוכנו בעבר שלב 3.2, על ידי צינורית פלסטיק גמיש קטנה, מוכנס לתוך הכיס scleral.
15. לאחר קולח המרחב שיורית, סגור את התפר.
16. לאחר הניתוח, לנהל שלושה ימים של טיפול אנטיביוטי עם 500 מ ג azithromycin. בנוסף, מספקים העין ושחרור טיפול בשילוב אנטיביוטיקה, סטרואידים, כגון כלורמפניקול ו- Betamethasone, בערך 15-20 ימים.
    הערה: בשתל מורכב של תאי שומן, ADSCs מתוך SVF ולאחר PRP עכשיו התקבל²⁶. לצמצם את המרחק בין תאים עצמיים המושתל דמית העין מאת sclerectomy עמוק כדי לעורר הפרשת paracrine תאים עצמיים לזרם חיבור. לאותה מטרה, הרחב את שטח המגע בין גבעול דמית העין.

תוצאות

באמצעות ההליך המובאת כאן, שתי קבוצות המטופלים יבש מושפעות AMD, עם BCVA השווה או גדול מ- 1 לוגריתם של הזווית המינימלית של רזולוציה (logMAR), נרשמו המחקר. קבוצה A, כולל העיניים 11 מתוך 11 חולים, שתל אוטולוגי suprachoroidal שהתקבלו על-ידי Limoli רשתית שיקום טכניקה (LRRT), ואילו קבוצה ב', כולל 14 עיני 14 ח...

Discussion

המטרה העיקרית של מחקר זה היה להעריך השתל suprachoroidal של adipocytes, ADSCs SVF ולאחר PRP יכול לשפר VA ורגישות הרשתית בעיניים מושפעות AMD יבש לאורך זמן. המטרה העיקרית נוספת הייתה להפגין תופעות טיפוליות אפשריות של תאים אלה, בהתבסס על הספרות האחרונות, מאז פרה מספר מחקרים הראו כי טיפול מבוסס-GF יכול להיות שימושי ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blunt cannula, 3 mm.	Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.	RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge	RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0	IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope	Nidek Inc, Fremont, CA	Nidek F10
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography	Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany	SD-OCT
Maia 100809 Microperimetry	CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system,	C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy		Retimax for ERG