脉络细胞自体移植治疗老年性黄斑变性的再生疗法: 初步体内报告

摘要

本研究的目的是评估脉络移植的脂肪干细胞是否包含在基质血管和血小板丰富的血浆 Limoli 视网膜恢复技术, 可以提高视力和老年黄斑变性患者眼内视网膜敏感反应的影响。

摘要

本研究的目的是检查自体细胞脉络移植是否能提高最佳矫正视力 (BCVA) 和对 microperimetry (我) 的眼睛的反应, 在受干旱年龄相关的黄斑变性 (AMD) 期间通过生长因子 (GFs) 在周围组织的生产和分泌。患者随机分配给每个研究组。所有患者均确诊为干性 AMD, BCVA 等于或大于1对数的最小分辨率 (logMAR)。采用 Limoli 视网膜修复技术 (LRRT) 在 a 组脉络自体移植, 其中包括11例11眼。该技术是通过植入脂肪细胞, 从基质血管分数获得的脂肪干细胞, 以及富含血小板的血浆在脉络空间中的血小板进行的。相反, B 组, 包括14眼14例患者, 被用作对照组。对于每位患者, 通过共焦扫描激光检眼镜和光谱域光学相干层析成像 (SD OCT) 验证诊断。在 A 组, 术后 BCVA 改善0.581 至 0.504 90 天, 0.376 logMAR 180 天 (升 32.20%)。此外, 我的测试在180天内增加了11.44 分贝到12.59 分贝。脉络膜后接枝的不同细胞类型能够保证其在脉络流中的恒定分泌。结果表明, 在六月后, 嫁接组的视力 (VA) 可比对照组增加多。

引言

细胞治疗, 包括全身或局部注射在受伤地区的茎/祖细胞治疗多种慢性疾病, 已引起密切注意在过去十年¹。自二十世纪九十年代以来, 研究了生长因子 (GFs) 在视网膜萎缩症的潜在治疗作用²。事实上, 许多人类细胞可以生产 GFs, 这是特定的蛋白质, 能够阻止或减缓细胞凋亡,即, 程序性死亡的细胞³。

众所周知, 干燥年龄相关的黄斑变性 (AMD) 是一种萎缩性视网膜疾病, 其中渐进和不可逆转的细胞死亡涉及感光层损伤, 因此, 中央视觉功能丧失⁴。AMD 是发达国家55岁以上人群失明的主要原因, 占所有黄斑退化的 80%, 至今尚无有效治疗。

有数项研究显示, 有多种来源可供自体飞行情报队获得。这些构成不同的细胞类型, 包括来自眼眶脂肪的脂肪基质细胞, 富含血小板的血浆 (PRP) 的血小板, 以及脂肪来源的干细胞 (干细胞) 包括在脂肪组织的基质血管分数 (SVF) 中^{5 ,6,7}。目前的 GF 集确保视网膜 neuroenhancement, 和菲拉托夫, Meduri, 佩洛斯和 Limoli 进行的研究表明, 自体脂肪移植 (尾部) 是有效的^8,9,10。

此外, 一项先前的研究显示, 在干燥的 AMD 受影响的眼睛中, 视网膜电图 (脉络) 的数据有显著的改善, 记录后的自体移植,¹¹。脉络空间的手术移植组织调节视网膜细胞的分泌分泌, 延缓其凋亡^6,7,12。考虑外核层厚度, 豚鼠视网膜组织学检查显示, GFs 对视网膜有营养作用。因此, 直接或间接使用 GFs 可以通过分子诱导剂和抑制剂之间的平衡关系带来治疗好处^6,7,12。

该方法的目的是评估脂肪细胞, 干细胞在 SVF 和 PRP 的脉络移植是否能提高最佳矫正视力 (BCVA) 和 microperimetry (我) 反应在干燥的 AMD 受影响的眼睛。本研究的目的是在其 GF 生产的基础上, 展示自体移植的治疗效果, 根据引用文献^6,7,12,13。

研究方案

该研究协议经低视力学院道德委员会批准, 所有受试者均按照《赫尔辛基宣言》签署书面同意书。本研究已获得拉夫博勒和谢菲尔德大学的伦理认同。

注: 在表 1中描述了与干燥年龄相关的黄斑变性患者接受脉络自体移植的 Limoli 视网膜修复技术 (LRRT) 的纳入和排除标准。

1. 干燥年龄相关黄斑变性患者的诊断

1. 确定用共焦扫描激光检眼镜、SD OCT 和我的诊断。
2. 评估每组 BCVA 的距离和远近。测量 VA 为近视觉 (特写) 在点 (临时)。测量 BCVA 在时间 0 (T0), 90 (T90) 和180天 (T180) 比较早期治疗糖尿病视网膜病变研究 (EDTRS) 图表在4米在 logMAR。
3. 记录电子暗、中间和明细胞活动, 或闪光视网膜电, 根据国际视觉临床电生理 (ISCEV)¹¹2009年制定的标准。

2. 麻醉

注: LRRT 麻醉中的金标准为局部麻醉, 经亚榫麻醉和镇静剂的渗透增强。在特定情况下, 一般麻醉是首选。

1. 应用局部麻醉药, 在4% 和罗哌卡因1% 时, 采用局部麻醉剂注入滴状 15-20 分钟, 获得角膜和结膜麻醉。
2. 将麻醉直接渗入亚结膜和 subtenon 的空间。
3. 使用局部浸润在腹部区域, 在脂肪组织被提取之前, 并且在亚结膜和子榫的空间, 12 毫米从角膜缘。采用局部麻醉 carbocaine 或 marcain 混合1200内肾上腺素。
4. 通过麻醉提供术中镇静剂, 通过重复小的口服芬太尼作为麻醉镇痛剂, 可以正确的进行。用量一般为0.025 毫克芬太尼, 每丸1毫克咪达唑仑。

3. Limoli 视网膜修复技术的制备

注意: 此技术代表佩洛斯的一种变体, 在 subscleral 空间^{1、6、7、12}中移植了眼眶自体脂肪。经手术移植的细胞可在周围组织、脉络膜和视网膜上产生多种神经营养和 angiotrophic 特性的 GFs,^{18,19,20,21,22 ,23,24,25}。在 LRRT 中, 移植自体细胞与脉络膜之间的距离通过深巩膜降低, 茎与脉络膜的接触面积扩大, 促进分泌自体细胞分泌进入脉络膜流^{9, 10,14}。

1. 在脉络膜和巩膜之间进行细胞移植手术前, 对每只眼睛进行适当的消毒, 这一过程称为 Limoli 视网膜恢复技术 (LRRT)^15,16,17。
2. 移植干细胞, 由科尔曼et 等和劳伦斯的技术 (图 1) 从腹部脂肪, 在 SVF 在 sovrachoroidal 空间^15,16,17。
3. 通过以下步骤, 从 PRP 凝胶中提取血小板浸润脂肪蒂。
4. 离心血液^6,12和收集富含血小板的血浆 (PRP)。刺激血小板脱粒导致 GF 释放脂肪蒂^6,12。

4. 技术规格和战略

注: 根据劳伦斯和科尔曼技术¹⁷(材料表), 从患者腹部皮层收集和纯化脂肪组织。

1. 根据劳伦斯和科尔曼技术¹⁷ (图 2 a/2 b), 从每个病人的腹部皮下手动收获10毫升脂肪组织, 使用3毫米钝套管连接到锁定注射器。
2. 在20摄氏度 (图 2C) 上, 用离心法将脂肪组织从血液、脂肪、油和液体中分离出来, SVF 1500 x g 的5分钟。SVF 是非常丰富的干细胞¹⁷。
3. 收集8毫升的人外周血与22克针, 并在一个单独的管为 PRP 准备。
4. 在20摄氏度 (图 2D) 上, 离心收集的血液在 1500 x g 处为5分钟。在 LRRT, 随后的变化导致更好的生存自体脂肪移植, ADSC 增殖, 这有利于增加脉络膜灌注, 并更全面的调节作用的那些因素, 只分泌脂肪^{7, 11,17}。
5. 建立脉络口袋 (步骤4中的更多细节, 特别是4.4 和 4.5), 以容纳从眼眶脂肪获得的移植物和饱和的剩余体积的干细胞从 SVF 和 PRP, 获得根据劳伦斯和科尔曼技术¹⁷。

5. LRRT 脉络自体移植 (Limoli 视网膜修复技术): 外科手术及技术细节

1. 锚定巩膜与6-0 丝缝合, 近颞缘。
2. 用 5.5 "保罗·韦斯科特 Tenetomy 弯剪刀" 将结膜和 subtenonian 空间从下颞缘处打开11毫米。
3. 在这个空间插入 Limoli 巴西莱结膜牵引器, 做一个巩膜手术场。
4. 用5毫米的新月形刀倾斜, 在8毫米的巩膜上, 从角膜缘处切开一侧的皮瓣。瓣铰链总是径向和在外科医生的左侧。
5. 在下颞象限, 在8毫米从角膜缘, 打开一个深巩膜门大约5毫米在侧面由径向铰链用一把新月刀, 倾斜的斜角。在适当的深度进行巩膜, 以查看脉络膜的石板色。
6. 通过去除皮瓣远端部分的小笼盖, 以促进脉络自体移植后的血液循环, 从而产生间隙。
7. 用眼科钳提取从下斜肌上方间隙的眼眶脂肪。确保提取的脂肪有足够的血管化, 使其能够在植入后存活下来。
8. 轻轻地将自体脂肪瓣放在脉络膜床上, 在门近端脉络膜 6/0 polyglactin 纤维缝合。
9. 缝合巩膜瓣以避免在脂肪蒂或其营养血管上受压迫。
10. 采用30克角 (30°) 套管, 渗透1毫升 PRP 凝胶 (通过血液材料的离心、组分分离和血小板脱粒²⁶) 的脂肪蒂的基质。
11. 准备的结膜两侧的缝合。然后, 取出结膜牵引器。
12. 用 6/0 polyglactin 纤维缝合结膜。
13. 在关闭前, 留出一个空间插入到 subscleral 的空间, 在皮瓣, 脉络膜和自体脉络膜之间, 一个小的灵活的塑料管与自身脂肪移植。
14. 将自体脂肪移植、脉络膜和巩膜瓣与0.5 毫升的 SVF (丰富的干细胞) 的剩余空间饱和, 以前在步骤3.2 中制备, 由一个小的柔性塑料管插入巩膜口袋。
15. 在将剩余空间饱和后, 关闭缝合线。
16. 手术后, 用500毫克阿奇霉素进行三天的抗生素治疗。此外, 还提供了抗生素和类固醇结合, 如氯霉素和倍他米, 约 15-20 天滴眼疗法。
    注意: 由脂肪细胞、SVF 干细胞和 PRP 组成的自体移植现在已获得²⁶。通过深巩膜降低移植自体细胞与脉络膜之间的距离, 刺激自体细胞分泌分泌进入脉络膜流。为了同样的目的, 扩大茎和脉络膜之间的接触区域。

结果

使用这里提出的程序, 两组的干燥 AMD 受影响的病人, 与 BCVA 等于或大于1对数的最低分辨率 (logMAR), 被登记在该研究。a 组, 包括11眼11例, 接受脉络自体移植 Limoli 视网膜修复技术 (LRRT), 而 B 组, 包括14眼14例患者, 被用作对照组。

学生的 t 检验和卡方测试分别用于比较两个研究组之间的平均年龄和性别分布 (表 2)。LRRT ...

讨论

本研究的主要目的是评估脂肪细胞、干细胞在 SVF 和 PRP 中的脉络移植是否能改善长期干性 AMD 影响眼中的 VA 和视网膜敏感度。另一项主要目的是根据最近的文献证明这些细胞可能的治疗效果, 因为一些临床前研究表明, 基于 GF 的治疗方法对于几种疾病的病人护理是有益的。

事实上, 一些研究表明, 自体人类诱导多潜能干细胞 (iPSC) 可以代表一个细胞源的移植, 目的是视网膜色素...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blunt cannula, 3 mm.	Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.	RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge	RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0	IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope	Nidek Inc, Fremont, CA	Nidek F10
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography	Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany	SD-OCT
Maia 100809 Microperimetry	CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system,	C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy		Retimax for ERG